动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型
肿瘤动物模型构建实验技术
肿瘤动物模型的建立可以：（1）评价抗肿瘤免疫治疗的疗效；（2）作为抗肿瘤药物筛选模型；（3）为肿瘤转移研究提供更好的研究平台；（4）为研发抗肿瘤转移性药物提供良好的实验工具。
实验方法：诱发性肿瘤动物模型实验方法原理：诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。
实验材料：肿瘤细胞小鼠试剂、试剂盒、无血清培养基质、3%中性甲醇石腊仪器、耗材、低温离心机、血球计数器、游标卡尺实验步骤一、肝癌1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌（1）取体重250 g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘；（2）按性别分笼饲养。
除给普通食物外，饲以致癌物，即用0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用；（3）共约4个月可诱发成肝癌；（4）也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。
2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌（1）用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2不应超过1.5～2 mg/kg；（2）4～6月就有大量的肝癌诱发成功。
3．2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌（1）给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料；（2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。
4．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌：（1）用剂量为每日0.3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予；（2）6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。
5．亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌（1）用1%OAAF苯溶液（约0.1 ml含1 mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。
（2）实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。
（3）或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。
肿瘤动物模型构建实验技术
肿瘤动物模型得建立可以：（1）评价抗肿瘤免疫治疗得疗效；（2）作为抗肿瘤药物筛选模型；（3）为肿瘤转移研究提供更好得研究平台；（4）为研发抗肿瘤转移性药物提供良好得实验工具。
实验方法：诱发性肿瘤动物模型实验方法原理：诱发性肿瘤动物模型就是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物得肿瘤等。
实验材料：肿瘤细胞小鼠试剂、试剂盒、无血清培养基质、3%中性甲醇石腊仪器、耗材、低温离心机、血球计数器、游标卡尺实验步骤一、肝癌1．二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌（1）取体重250 g左右得封闭群大白鼠，雌雄不拘；（2）按性别分笼饲养。
除给普通食物外，饲以致癌物，即用0、25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0、025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用；（3）共约4个月可诱发成肝癌；（4）也可以单用0、005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。
2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌（1）用含0、06%DBA得饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2不应超过1、5～2 mg/kg；（2）4～6月就有大量得肝癌诱发成功。
3．2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌（1）给成年大鼠含0、03% 2AAF标准饲料；（2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。
4．二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌：（1）用剂量为每日0、3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予；（2）6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。
5．亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌（1）用1%OAAF苯溶液（约0、1 ml含1 mg）涂在动物得两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。
（2）实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。
（3）或用2、5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。
肿瘤动物模型介绍
肿瘤动物模型介绍
细胞株移植瘤模型（cell derived xenograft, CDX)，即将体外传代培养的肿瘤细胞接种至免疫缺陷小鼠，过去常用的免疫缺陷鼠是裸鼠。
一般在小鼠皮下、静脉或原位注入肿瘤细胞，观察肿瘤的形成、发展及抗肿瘤药物的效果。
CDX肿瘤模型包括：乳腺癌、胶质瘤、骨肉瘤、胰腺癌。
服务内容：各类细胞系肿瘤模型，包括皮下模型和原位模型的建立。
动物的选择：可以选择4-6周龄Nude裸鼠或其他免疫缺陷小鼠。
也提供有自主产权的NSFG小鼠，NOD-SCID，IL2rg基因敲除的小鼠，是目前免疫缺陷程度最高，最适合肿瘤移植的工具小鼠。
接种部位与接种细胞量：接种部位常为皮下，静脉或原位；细胞量一般是5*106个/100ul-200ul，但是不同的细胞系的接种量略有差别。
成瘤时间：皮下接种的细胞一般会在1-2周成瘤，一般不会超过1个月；尾静脉和腹腔接种的细胞一般也是1周左右，会密切观察动物的体重与状态。
人源肿瘤组织来源移植瘤模型（patient derived xenograft，
PDX）,将肿瘤组织以小组织块的形式移植至缺陷程度较高的免疫缺陷小鼠体内，能够保持了肿瘤的异质性、其生物学特性保持的更加完整、与临床相似度更高，是现阶段最优秀的肿瘤动物模型。
PDX肿瘤模型包括：乳腺癌、骨肉瘤、白血病模型。
上图为PDX白血病模型。
胸腔原位种植与经左心室注射建立肺癌脑转移动物模型的比较
胸腔原位种植与经左心室注射建立肺癌脑转移动物模型的比较陈愉生;涂洵崴;俞梅娥;林献;李鸿茹【摘要】Objective To establish an appropriate animal model of brain metastases from lung cancer in nude mice by thoracic orthotopic implantation in the chest or left ventricular injection , and to serve further studies on the mechanisms of lung cancer brain metastasis .Methods PC-9 cells (1 ×106/0.1 mL) in logarithmic phase were respectively injected into 18 nude mice by orthotopic implantation in the chest or left ventricular injection ( n=9 each group ) .The statuses of nude mice were observed after implantation .Animals showing clear signs of dyscrasia were killed .At autopsy, the lung, brain, liver and kidney were removed and histological sections were stained with H /E to detect the presence of tumor cells . Results In the thoracic orthotopic implantation group , three weeks after implantation , the number 4, 6, 9 mice showed tumor nodules in the chest wall , they began to lose weight in the fourth to sixth week differently , showing signs of dyscrasia gradually , and were sacrificed at the fifth to seventh week .The thoracotomy revealed that the whole thorax was occupied by many large lung cancer masses , spreading into bilateral ribs , pleura and spinal vertebra , with scarce eroded , compressed , pale and distorted lung tissues left .Histological examination with HE staining showed the presence of neoplasms in their lung tissues but only the number 6 mouse showed metastatic lesions in the brain tissue .In the left ventricular injection group, the mice almost began to lose weight in thethird week simultaneously and became moribund slowly , which were all sacrificed at the fourth week .After thoracotomy , the thoraxes were clear except the number 11 and 18 mice which appeared 2-3 tiny tumor foci in the chest wall , with normal lung tissues .Histological examination with HE staining showed the pres-ence of brain metastases in all the nine mice .The rate of brain metastases from lung cancer in the left ventricular injection group was 100%, compared with 11.1% in the thoracic orthotopic implantation group .Conclusions The establishment method of mouse model by left ventricular injection shows significantly higher rate of lung cancer brain metastases than that by thoracic orthotopic implantation .%目的为研究肺癌脑转移机制提供一种可靠的造模方法. 方法 18只BALB/c nude裸鼠随机分为2组,分别经胸腔原位种植与经左心室注射的方法,接种处于对数期生长的人肺腺癌PC-9细胞(1 ×106/0.1 mL),接种后观察裸鼠状态,在裸鼠出现严重恶液质时处死. 解剖裸鼠,观察肺、脑、肝、肾转移情况;病理取材、HE染色观察. 结果胸腔原位种植组:3周后,第4、6、9号裸鼠可见胸壁瘤结凸起形成,渐增大;裸鼠于第4~6周开始出现体重减轻,并逐渐出现恶液质,分别于第5~7周处死. 开胸后见:胸腔广泛灰白色肿瘤结节、团块形成,双侧肋骨、胸膜、脊柱多发种植灶,双肺被侵蚀压缩,颜色苍白,形态改变. HE染色见:肺表面广泛种植瘤形成,与正常肺组织分界清楚;仅6号裸鼠出现脑转移.经左心室注射组:裸鼠于第3周开始出现体重下降,并逐渐出现恶液质,全部裸鼠于第4周处死. 开胸后:除11、18号裸鼠胸壁见2~3个散在瘤结分布(直径约1~3 mm) ,其余胸腔视野正常;肺组织轮廓清楚,未见瘤结生成. HE染色见:9只裸鼠均出现大小不一的多发脑转移灶. 胸腔原位种植组:脑转移率为11.1%;经左心室注射组:脑转移率为100%. 结论经左心室注射建立肺癌脑转移动物模型的方法,较胸腔原位种植的方法保证了更高的脑转移率.【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2015(023)005【总页数】5页(P490-494)【关键词】肺癌脑转移;左心室注射;胸腔种植;动物模型【作者】陈愉生;涂洵崴;俞梅娥;林献;李鸿茹【作者单位】福建医科大学省立临床医学院,福州 350001;福建医科大学省立临床医学院,福州 350001;福建医科大学省立临床医学院,福州 350001;福建医科大学省立临床医学院,福州 350001;福建医科大学省立临床医学院,福州 350001【正文语种】中文【中图分类】Q95-33肺癌作为一种常见的恶性肿瘤，其死亡率占癌症死亡率之首［1］。
小鼠裸鼠肿瘤动物模型ppt课件
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小鼠肿瘤动物模型和抗肿瘤药物的研究方法
汇报日期
20171214JXD
Mouse model：Powerful research tool
TumorMetabolic diseaseDrug evaluation
四种肿瘤模型
人体肿瘤异种移植性肿瘤模型
移植性肿瘤动物模型
03
二、诱发性肿瘤动物模型
定义：使用致癌因素(Carcinogens)在实验条件下诱发动物发生肿瘤的动物模型。原理：利用外源性致癌因素引起细胞遗传特性异常而呈现出异常生长和高增殖活性，形成肿瘤。
诱发性肿瘤动物模型建立方法
原位诱发致癌物直接与动物靶组织或靶器官接触而诱发该组织或器官发生肿瘤。异位诱发将与致癌物接触后的动物组织或器官埋置于该动物或另一正常动物皮下而 产生的该组织或器官的肿瘤。致癌物致癌物
注射给药
皮内注射：将药液注入表皮与真皮之间。此法多用于免疫、接种、过敏试验等皮下注射：将药液注入真皮之下。
肌内注射：又称肌肉注射，当给动物注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时，常采用此种方法。
腹腔注射：腹膜面积大，药物进入腹腔后容易扩散和吸收。
静脉注射：不同动物类型应选择不同的静脉血管。
自发性肿瘤动物模型的缺点
单击此处添加正文，文字是您思想的提炼，请尽量言简意赅地阐述观点。
肿瘤发生情况参差不齐。
01
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难以短时间内获得大量肿瘤材料，耗时长，耗资大。
02
因此，自发性肿瘤很少在抗肿瘤药物的常规筛选中应用。
发生肿瘤的动物肿瘤生长速度差异大，难以评价。
裸小鼠作为移植宿主
【专题】肿瘤模型专区9-12
【专题】肿瘤模型专区（9-12页）多发肿瘤模型medsky1982：我的实验要求经脾脏注射大鼠肝癌细胞,建立肝内多发肿瘤模型,查看国内的大鼠肝癌细胞株有：CBRH-7919,RH-35,Walker256,但是他们在经脾脏注射建模中的特性不清楚，最好是能有高的转移成瘤能力，又不易产生腹水。
Swordzjsh不知道你们的试验目的是什么，但是我们一般不会考虑去建立直接多发的肿瘤模型，除非是转移模型，因为多发的肿瘤不好进行评价，单个的肿瘤灶可以量大小，可以剥出来称重，而且在造模的时候也比较好控制，所以很少去留意多发肿瘤模型的资料。
开腹手术medsky19821.另外想请教一下你们在做大鼠开腹手术（时间2小时左右）时，一般要不要经颈外静脉生理盐水补液？2.你们开腹肝内原位种植肿瘤手术后的护理应该注意什么，比方饮食，抗感染之类？Swordzjsh1.不知道，我从来没有构建原位模型开腹这么久的。
开腹后几分钟就关腹了2.没有什么特别需要注意的，就是小心缝线打结要结实，否则第二天你会发现几只线破肠流的尸体。
裸鼠造模周龄Futingtingftt我得实验是准备造乙型肝炎动物模型，用HepG2.2.15细胞皮下或者腹腔接种裸鼠成瘤，大家都说裸鼠最好是5－6周龄的，可是我想问问各位高手，有没有4周龄接种成功的呢？4周造模成功率怎么样？我想买4周龄的裸鼠，如果细胞很好的话就可以直接接种，不好的话就是裸鼠再长2周也可以用Swordzjsh一般建议用5~7周龄的，4周龄太小，至少4周半吧。
其实有时候8周龄也凑活能用。
复苏瘤块接种：Tumin我做兔vx2肿瘤模型.现在只有冻存的vx2瘤块,问是否可以直接复苏后注射到兔肌肉内制成荷瘤兔?Swordzjsh可以的，但是建议也要在体内穿三代，而且接种的时候要几块组织接到一个位点，因为刚复苏的瘤块活力比较差。
nude_mice:按照我们平时的经验，总是说肿瘤细胞要先在动物体内传几代，才能正式实验。
小鼠裸鼠肿瘤动物模型课件
小鼠裸鼠模型在体内肿瘤药理学研究中的 应用
药物代谢
研究小鼠裸鼠对药物的代谢 和转化，为药物治裸鼠对不同药物治 疗的反应和耐药性。
肿瘤生长及转移
研究小鼠裸鼠肿瘤生长和转 移机制，探索抑制肿瘤发展 的方法。
1 易于培养和繁殖
小鼠裸鼠繁殖速度快，能够满足大规模实验的需求。
2 易于操控
小鼠裸鼠对基因编辑和药物处理的反应性高，便于研究者进行实验操作。
3 相似的生理特征
小鼠裸鼠与人类有许多相似的生理特征，有助于预测药物疗效。
小鼠裸鼠模型的建立方法
1
移植裸鼠
将人体肿瘤细胞或肿瘤组织移植到小鼠裸鼠体内。
2
基因编辑技术
小鼠裸鼠肿瘤动物模型
肿瘤研究中的重要工具，通过建立小鼠裸鼠模型，我们可以深入了解肿瘤的 发展和治疗方法。
常用的实验动物模型
小鼠
被广泛用于基础生物学、药 物研发和疾病模型研究。
裸鼠
因其缺乏皮肤毛发而成为理 想的肿瘤研究动物。
其他动物
包括大鼠、猪、犬等，具有 特定的研究目的和应用场景。
小鼠裸鼠作为肿瘤模型的优点
小鼠裸鼠模型在肿瘤研究中的 局限性
小鼠裸鼠模型无法完全模拟人体内的复杂环境，其它动物模型和体外实验仍 然具有重要意义。
小鼠裸鼠模型未来的发展及前 景
未来，借助基因编辑和体外模型技术的发展，小鼠裸鼠模型将更加准确和可 靠，为肿瘤研究带来更多突破。
利用CRISPR-Cas9等方法改变小鼠裸鼠的基因表达，模拟人类肿瘤。
3
毛发缺失技术
通过遗传或激素处理使小鼠裸鼠丧失毛发，便于观察肿瘤生长。
小鼠裸鼠模型在体外药物筛选中的应用
用于活体成像的人肺腺癌自发骨转移小鼠模型
用于活体成像的人肺腺癌自发骨转移小鼠模型韩帅;杨兴海;万宗淼;周旺;姜东杰;尹华斌;王霆;肖建如【摘要】Objective To establish mouse models of lung adenocarcinoma spontaneous bone metastasis and perform a preliminary study on isolating the epithelial‐mesenchymal transition(EM T ) cells from the mouse models . Methods We injected different concentration bone‐seeking PC‐9 cells with Luciferase and GFP gene expression into the lung of the BALB/c nude mice .The survival time ,bodyweight ,tumor formation rate in the lung and metastasis rate to other organs were observed .Then we analyzed the EMT cells of the mouse models by in vitro bioluminescence imaging and flow cytometry analysis .Results Compared with the normal group ,the bodyweight and daily food intake of the mouse‐model groups decreased from day 21 after the injection of tumor cells .Bone metastasis occurred on day 20 and death on day 27 after the injection of tumor cells in high‐concentration group .The bone metastasis rate of the high‐concentration ,mid‐concentration and low‐concentration group wer e 60% (6/10) ,25% (2/8) and 0%(0/5) respectively ,which were higher in the EMT cells positive mice .Conclusion Spontaneous bone metastasis mouse models of human lung adenocarcinoma for in vivo imaging were successfully established ,from which EMT cells can be isolated .Such models could be used for studies on the mechanisms of lung cancer and the development of anticancer drugs .%目的建立小鼠人肺腺癌PC‐9细胞株骨转移模型，初步探讨由模型动物中分离上皮‐间质细胞转化（EM T ）癌细胞的可行性。
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动物模型：裸鼠PC-9细胞肿瘤模型
一、嘉美实验裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建方法
采用腋窝皮下接种PC-9人肺癌细胞，建立PC-9人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤模型并给与药物进
行干预，观察药物对肿瘤的作用。
二、裸鼠PC-9细胞肿瘤模型的构建及后续实验操作
1、25只BALB c裸鼠，适应性饲养一周后，调整制备好的PC-9人肺腺癌细胞单细胞悬液浓度，用1m 1l无菌注射器吸取细胞悬液，于每裸鼠右侧腋下皮下注射0.2mL细胞悬液(接种细丹包量约为1×x102/ml)，细胞悬液接种于裸鼠的右侧腋下7-10d后，观察成瘤情况，肿瘤仁
本积大于100m3后，选取肿瘤大小相近的小鼠按肿瘤体积随机分为4组:(1)对照组，5只；(2)高剂量组，7只:(3)中剂量组，7 )顺铂组，6只。
当天高剂量组、中剂量组、顺铂组开始给药其中，高剂量组连续21天每天灌胃给药，顺铂组每三天腹腔注射给药，齐量5m/e次。
每两天测量荷瘤裸鼠体重和冲瘤体积。
于第22天停止给药病禁食2h，第再次测量肿瘤体积，计算相对肿瘤体积(RTV)，绘制肿瘤生长曲线，毛材当天称量最后一次体重和瘤重计算肿瘤
指数完整剥离瘤块，其中一半瘤块组织于 10%福尔马林中固定，备用；另半肿瘤组织存放
于液氮中冻存。
血样用109 mmol/L枸櫞酸钠19抗凝，分离血浆。
2、小鼠接种PC-9人肺腺癌细胞后 9天左右，可观察到裸鼠右侧腋下均现黄豆大小瘤块，于
当天开始测量肿瘤体积并称重。
于接种第11天时，测量肿瘤生长指数和体重时发现，各组
荷瘤裸鼠肿瘤体积均值达到100mm3，于当天开始分组给药在给药过程中发现，顺铂组荷瘤裸鼠的体重下阳夆明显，与对照组相比具有极显著性差异루(P<0.01)高剂量组荷瘤裸鼠的体
重于d7、dI 3、d19天时有显著性差异(P~0.05)，其他各组体重与对照组相比均无明显差异。
顺铂组肿瘤体积于d13、d17、dl9、d21 d23时与对照组相比明显减小，并有显著性
差 :(P<0.05)，在d15天时有极显著性差쿠(P<0.01)。
高剂量组和中剂量组肿瘤体积也明显小
于对照组，但无显著性差异。
血浆中APTT、PT检测结果发现，高剂量组和中剂量组小鼠
血浆中APTT指标明显低于对照组，顺铂组小鼠血浆中APPT指标高于对照组但各组小鼠血浆中APPT变化均无显著性差异。
中剂量组和顺铂组小鼠血浆中PT 肯标明显低于对照组，
并具有极显著性差异。
实验过程中，各组未见小鼠死亡。