掌叶半夏凝集素基因的克隆与分析农学院SRT(2010-10-8)2
草鱼凝集素分子的基因克隆与进化分析
米亚双 程传波 河南师范大学草鱼凝集素分子的基因克隆与进化分析分子质量为２９８６８．１，等电点为５．０３，４６￣６８ａａ为跨膜区，１２５￣２５６ａａ为ＣＲＤ。
氨基酸序列上的第１２５、１３６、１５３、２３２、２４７、２５５位置上含有６个高度保守的半胱氨酸残基（三角内），并且该凝集素只有一个ＣＲＤ（下划线部分）。
氨基酸序列还含有一个结合甘露糖的糖识别结合位点即ＥＰＮ基序（椭圆内）和一个作为Ｃ型凝集素重要标志的ＷＩＧＬ序列（矩形内）。
草鱼凝集素的系统进化分析。
用生物信息学ＭＥＧＡ４．０以邻接法（ＮＪ法）构建草鱼，斑马鱼，鲫鱼，雀鳝，原鸡，家鼠，牛，人等Ｃ型凝集素蛋白的系统进化树。
从图２可以看出系统进化树分为三大支，草鱼同斑马鱼，鲫鱼，雀鳝，白斑狗鱼，虹鳟，大西洋鲑进化关系较近，处于一支，说明Ｃ型凝集素在进化过程中，草鱼同硬骨鱼的亲缘关系较近，其中与斑马鱼的关系最近。
草鱼凝集素基因的同源性分析。
用ＤＮＡＭＡＮ对所选物种凝集素的ＣＲＤ进行多序列比对发现，草鱼凝集素ＣＲＤ与斑马鱼凝集素ＣＲＤ的相似度达到９０％，同鲫鱼、雀鳝、大西洋鲑和虹鳟的相似度分别达到８３％、６３％、５３％和５１％。
序列比对结果鱼是我国重要的养殖淡水鱼，其产量以及产值居于鱼类养殖业的前列。
凝集素是一类具有糖结合专一性，并与之非共价可逆结合的非酶、非免疫来源的蛋白质，其中把活性依赖于Ｃａ２＋者称为Ｃ型凝集素。
Ｃ型凝集素都具有一个或多个糖结构识别域（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ－ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ，ＣＲＤ）。
鱼类中所存在的天然凝集素分子在其非特异性免疫中占据重要地位，是鱼类抵御异己物质入侵的一道防线。
材料与方法材料。
在超市购买健康的草鱼，体长大约为３０ｃｍ，体重为１．４７ｋｇ。
方法。
（１）草鱼凝集素基因的克隆：从草鱼组织中提取草鱼ＲＮＡ，并通过ＲＴ－ＰＣＲ技术克隆获得草鱼凝集素基因。
采用反转录试剂盒合成ｃＤＮＡ。
以草鱼的ｃＤＮＡ为模板，根据已设计好的引物，运用ＰＣＲ技术获得草鱼凝集素基因。
半夏凝集素基因的克隆及转基因烟草对蚜虫的抑制作用
关键词 同源克隆； 半夏凝集素基 因（ ｔ） 表达载体构建 ； 蚜 虫抗 性 ｐａ ；
中 图 分 类 号 ： Ｓ４ ５ ７ ３ ． ２ 文献 标 识 码 ： Ａ Ｄ ： １． ９ ９ ｊｉ ｒ ０ ２ —１４ ． ０ ０ ０ ． ０ ＯＩ ０ ３ ６ ／． ｓｕ ５ ９ ５ ２ ２ １ ． ６ ０ ５ ｓ
Ｚ ａ ｇＺ ｅ ｇ ｉｇ ， Ｌｎ ｉ ｎ 。 Ｗａ ｇＨｏ ｇ ｉ， Ｌ ｈ ｊ 。 Ｌ ｉｇ ｅ ｈ ｎ ｈ ｎ ｙｎ ｉｇＬｊ ｕ ｎ ｎ ｍｅ ｉ ｕｉ ， ｉ ｎ ｗ ｎ Ｓ ｅ Ｊ
（ ．Ｒｅ ａｃ ｎ ｎ ｇｍｅ ｔ ｅ ａｔ ｎ ，Ｇａ ｓ ａ ｅ ｆ ｒ ｕｔｒｌ ｃ ｎ ｅ ， ａ ｚ ｏ ７ ０ ７ ，Ｃ ｉ １ ｓ ｒｈａ ｄＭａ ａ ｅ ｎ ｐ ｒｍｅ ｔ ｅ Ｄ ｎｕＡｃｄ ｍｙｏ ｉ ｌ ａ ｉ ｃｓ Ｌ ｎｈ ｕ ３ ０ ０ ｈｎ Ａｇ ｃ ｕ Ｓ ｅ ａ；
Ｇ ＵＳ基 因， 正向插入 ３Ｓ启动子之 下， ５ 构建 了植物表达载体 ｐ Ｉ ｔ。通过农杆 菌介导 法转化烟草 ， ２ 株 Ｋａ Ｂ— ａ ｐ 从 Ｏ ｎ抗
性 植 株 中得 到 Ｐ Ｒ检 测 阳性 植 株 ｌ Ｃ ４株 ， 明 ｐａ 已整合 到 烟 草基 因组 中 。 对 随 机 挑 取 的 ７株 Ｐ Ｒ 阳性 植 株 进 行 证 ｔ ｅ 了抗 蚜 虫 （ ｙ ｕ ｐ ｒｉＪ） Ｍ ｚ ｓ ｅｓ （ 筛选 试 验 ， 果 表 明 ： 同株 系蚜 口 密 度 抑 制 率 在 ２ ． ～ ８． ， 均 蚜 口 密度 抑 制 ｃｅ 结 不 ２５ ９４ 平
２ Ｉｓ ｔｔｏ ｉ ｅ ｎ ｌ ｙ Ｇ ｎｕ ｃｄｍ ｒ ｕｔｒ ｉ ｃ ， ａｚｏ ７０７ ， ｈｎ ） ． ｎｔｕ Ｂｏ ｃ ｏ ｇ ， ａｓ ａｅ ｙ ｆ ｇｉ ｌ ａＳ ｅ ｅ Ｌ ｎｈ ｕ ３００ Ｃ ｉ ｉ ｅ ｆ ｔｈ ｏ Ａ ｏＡ ｃ ｕ ｌｃｎ ｓ ａ
半夏的组织培养研究
半夏的组织培养研究马宗新（安徽省阜阳市农科所，安徽阜阳236065）摘 要：本文以半夏茎尖,叶片为材料进行组织培养研究,结果表明茎尖培养基为MS+BA1.0+NAA0.05mg/L,增殖培养基为BA1-1.5mg/L+NAA0.5-1.0mg/L,半夏的不同器官均能够进行培养出芽,本文还探讨了试管小球的形成条件,BA对试管小球的形成起关键作用,糖浓度在30-160g/L范围均有试管小球形成而以80g/L形成小球较多,在MS+BA1.0+NAA0.8mg/L+糖45g/L,无光照条件下形成小球较大。
关键词：半夏;组织培养;试管小球中图分类号Q949.99 文献标识码B 文章编号1007-7731(2009)08-040-02Study on The tissue culture of Pinellia ternate(Thunb) BreitMa ZongXin（FuYang Agriculture Institute of AnHui Province, FuYang 236065, China）Abstract: The blade and shoot tip of Pinellia ternate(Thunb) Breit as a material in vitro culture are studeid , the result indicate that the shoot tip culture medium is MS+BA 1.0+ NAA0.05 mg/l, the multipropagation culture medium is MS +BA1-1.5 mg/l+ NAA0.5-1.0 mg/l, the different organ of Pinellia ternate(Thunb) Breit all produced adverilitious buds earsily, the formulating condition of the tube bulb was studied in this article ,the result showed that the BA is the key to the tube bulb formulation. when the sugar oncentration was 30-160 g/l, the tube bulb occurred ,and the concertration was 80 g/l, the bulb grow smaller, and with MS+ BA 1.0+ NAA0.8mg/l+sugar 45 g/l as media, the bulb grow biggest.Key words: Pinellia ternate(Thunb) Breit; tissue culture; tube bulb半夏[Pinellia ternate（Thunb） Breit]，天南星科草本植物，有狗爪半夏[Pinella ternate（Thunb）Breit]，三叶半夏（Pinella，ternate），掌叶半夏（Picria，Pedatisecta）3个种。
掌叶半夏凝集素基因表达载体的构建与鉴定
[收稿日期] 2009 02 19;2009 04 22修回[基金项目] 贵州省科学技术基金项目 半夏蛋白的分离纯化及其基因的克隆表达研究 [黔科J 合字(2007)2040] [作者简介] 徐 陶(1984-),男,在读硕士,研究方向:动物分子生物学及生理学。
E m ail:xutao19841111@*通讯作者。
E mail:sw lii@[文章编号]1001 3601(2009)05 0271 0022 03掌叶半夏凝集素基因表达载体的构建与鉴定徐陶,杜娟,刘月锋,王金固,谢丽霞,李尚伟*(贵州大学贵州山地农业病虫害重点实验室,贵州贵阳550025)[摘 要]从掌叶半夏(P inellia p edatis ecta Scho tt)块茎中提取总R NA ,反转录合成cD NA 。
根据GenBank 中已报道的天南星科凝集素基因序列,设计带有酶切位点的表达引物,用RT PCR 方法扩增出掌叶半夏凝集素(Pinellia p ed atisecta agg lutinin,P PA )基因。
PPA 经双酶切后与表达载体pG EX 6P 3连接,构建pG EX PP A 重组表达载体。
通过PCR 、双酶切及测序鉴定,结果表明,重组载体pGEX P PA 构建成功,为进一步进行P PA 的原核表达及其功能研究奠定了基础。
[关键词]掌叶半夏;凝集素;载体构建[中图分类号]S567.23+9[文献标识码]ACon stru ction and Iden tification of Expression Vector ofPinellia peda tisecta Agglutinin (PPA)GeneXU T ao,DU Juan,LIU Yue feng,WANG Jin gu,XIE Li x ia,LI Shang w ei *(Guizhou Key Laboratory f or Plant Pest Management of Mountainous Region ,Guizhou U niversity ,Guiy ang,Guizhou 550025,China)Abstract:T otal RN A extr acted fr om tubers of Pinell ia p edatisecta w as rev ersely tr anscribed into cD NA and a pair o f specific primers w ith r estriction enzy me sites w ere desig ned accor ding t o the report ed sequences of agg lutinin g enes fro m Ar isaema.T he Pinellia p edatis ecta ag glut inin (PP A )gene was amplified by RT PCR using cDN A as the template.T he dig ested P PA w as inserted into pGEX 6P 3and the recombination v ect or pG EX PP A was established.T he r eco mbination vector pGEX P PA was identif ied by PCR,r estr ictio n enzy me dig estion and sequence analysis.T he recombinatio n vecto r pG EX PP A can pr ov ide the scientific basis to further study ex pression and funct ion of P PA.Key words:Pinellia p edatisecta Schott;agg lutinin;vector co nstr uction 掌叶半夏(P inellia p edatisecta Schott)又名虎掌,为天南星科多年生草本植物,主要分布于中国、朝鲜和日本。
掌叶半夏提取物PE联合顺铂对宫颈癌荷瘤裸鼠的体内毒性评价
掌叶半夏提取物PE联合顺铂对宫颈癌荷瘤裸鼠的体内毒性评价文海肖;张明星;李桂玲;徐丛剑【摘要】目的探索掌叶半夏提取物(extract from Pinellia pedatisecta Schott,PE)体内联合顺铂(Cisdichlorodiammine platinum-Ⅱ,CDDP)抑制宫颈癌时对裸鼠的毒性,评价PE作为宫颈癌顺铂化疗协同药物的安全性.方法取40只BALB/c雌性裸鼠,建立CaSki皮下移植瘤模型后,随机分为4组:(1)对照组;(2)PE组:每日20mg/kg(灌胃);(3) CDDP组:每周5 mg/kg(腹腔注射);(4) PE+ CDDP组:PE 每日20mg/kg(灌胃)+ CDDP每周5mg/kg(腹腔注射).连续给药3周,观察各组小鼠每日摄食和一般情况,每3天称体质量;第22天采血后处死裸鼠,获取裸鼠重要脏器,测量脏器质量,计算脏器系数;HE染色观察主要脏器组织形态学结构,ELISA检测血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血肌酐(creatinine,Cr)水平.结果给药3周后,各组裸鼠生长良好、饮食正常、皮毛光滑、日常活动活跃,无一只死亡.CDDP组小鼠体重逐渐下降,实验结束时PE+ CDDP组小鼠体重大于CDDP组,差异有统计学意义(P＜0.05).光镜下,各组小鼠心、肝脾、肺、肾、卵巢、子宫组织结构均未见明显异常.血清AST和Cr水平在4组间差异均无统计学意义(P＞0.05).而CDDP组ALT水平明显高于对照组、PE组和PE+ CDDP组小鼠,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 PE能改善CDDP引起的裸鼠体重下降及肝酶升高的作用,是一种安全的中药.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2016(043)006【总页数】6页(P657-662)【关键词】掌叶半夏提取物;CDDP;宫颈癌;体内;毒性;裸鼠【作者】文海肖;张明星;李桂玲;徐丛剑【作者单位】复旦大学附属妇产科医院-上海市女性生殖内分泌相关疾病重点实验室上海200011;复旦大学附属妇产科医院-上海市女性生殖内分泌相关疾病重点实验室上海200011;复旦大学附属妇产科医院-上海市女性生殖内分泌相关疾病重点实验室上海200011;复旦大学附属妇产科医院-上海市女性生殖内分泌相关疾病重点实验室上海200011;复旦大学生物医学研究院上海200032【正文语种】中文【中图分类】R737.33宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一,2012年全球约有52万新发病例和26万死亡病例[1]。
大蒜叶凝集素基因ASAL的克隆与表达载体的构建
大蒜叶凝集素基因ASAL的克隆与表达载体的构建陈德西;何忠全;向运佳;胡荣平【摘要】大蒜叶凝集素基因(Allium sativum leaf agglutinin,ASAL)是一种高活性的凝集素基因,且具显著的抗虫性.克隆大蒜ASAL基因将为其在转基因作物中抗虫特性研究奠定基础.本文以GenBank公布的ASAL基因序列设计特异引物,采用RT-PCR法从当地大蒜品种二水早和新都软叶的幼苗中克隆ASAL基因.结果表明,克隆的两个ASAL基因与已知基因的碱基序列相似性分别为98.7％和98.9％.氨基酸序列相似性为98.3％.将其亚克隆至表达载体中,经菌落PCR和酶切鉴定,成功构建了重组质粒.将该载体导入农杆菌EHA5a进行保存.【期刊名称】《西南农业学报》【年(卷),期】2016(029)010【总页数】5页(P2445-2449)【关键词】ASAL基因;刺吸式害虫;基因克隆;表达载体;构建【作者】陈德西;何忠全;向运佳;胡荣平【作者单位】四川省农业科学院植物保护研究所,农业部西南作物有害生物综合治理重点实验室,四川成都610066;四川省农业科学院植物保护研究所,农业部西南作物有害生物综合治理重点实验室,四川成都610066;四川省农业科学院植物保护研究所,农业部西南作物有害生物综合治理重点实验室,四川成都610066;四川省农业科学院植物保护研究所,农业部西南作物有害生物综合治理重点实验室,四川成都610066【正文语种】中文【中图分类】S633.4植物凝集素是来源于植物的一类能凝集细胞和沉淀单糖或多糖复合物的非免疫来源的非酶蛋白质。
其研究始1888年，距今已有120多年的历史。
1982年Hoffman等[1]克隆出了第一个凝集素基因为菜豆凝集素基因(pha)，目前已经分离出多种如豌豆凝集素 (Pea lectin,PL)、雪花莲凝集素 (Galanthus nivalis agglutinin,GNA)、麦胚凝集素 (Wheat germ agglutinin,WGA)、半夏凝集素(Pinellia ternata agglutinin，PTA) 等植物外源凝集素基因[2]。
掌叶覆盆子RcF3H基因克隆及表达分析
掌叶覆盆子RcF3H基因克隆及表达分析目录一、内容描述 (2)1. 研究背景与意义 (3)2. 目的和研究范围 (4)二、材料与方法 (5)1. 材料来源 (6)掌叶覆盆子样本采集 (7)核酸提取与纯化 (8)2. 实验设计与主要步骤 (9)RcF3H基因的克隆 (10)转化与阳性克隆筛选 (11)表达分析 (12)三、结果 (13)1. RcF3H基因的克隆结果 (14)基因序列比对与分析 (15)克隆效率评估 (16)2. 转化与阳性克隆筛选结果 (16)阳性克隆的PCR鉴定 (17)测序验证 (18)3. 表达分析结果 (19)不同组织中的表达差异 (20)受外界因素影响的表达变化 (20)四、讨论 (22)1. RcF3H基因的功能预测 (23)2. 表达分析结果的合理性探讨 (24)3. 与其他研究的比较与意义 (25)五、结论 (27)1. 研究成果总结 (27)2. 创新点与不足之处 (29)3. 未来研究方向与应用前景展望 (30)一、内容描述掌叶覆盆子（Rubus chingii）是一种具有重要药用价值的植物，广泛分布于我国各地。
随着对中药材品质及药效的深入研究，对掌叶覆盆子的基因克隆及表达分析成为了研究的热点之一。
RcF3H基因作为掌叶覆盆子中关键代谢途径上的基因，具有重要的生物学功能。
本论文的主要研究对象是RcF3H基因，研究内容包括RcF3H基因的克隆以及其在不同组织、不同生长阶段的表达分析。
旨在通过对RcF3H基因的深入研究，进一步了解掌叶覆盆子的生长发育规律、代谢途径调控机制，为中药材品质改良和新品种选育提供理论依据。
本论文首先对掌叶覆盆子的基因组进行深入研究，通过分子生物学技术克隆RcF3H基因。
通过设计特异性引物，利用PCR技术从掌叶覆盆子基因组中扩增出RcF3H基因序列。
利用生物信息学方法分析RcF3H基因的序列特征，如基因的开放阅读框、氨基酸序列等。
克隆获得的RcF3H基因序列为后续的表达分析提供了基础。
盾叶半夏凝集素基因的克隆及功能分析
盾叶半夏凝集素基因的克隆及功能分析杨在君;刘玲玲;彭正松【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2016(031)003【摘要】为克隆盾叶半夏凝集素基因，并对其功能进行分析。
采用 RACE 技术从盾叶半夏中克隆得到盾叶半夏凝集素基因的全长cDNA 序列，命名为ppl。
同时，构建了 ppl 基因的原核表达载体，并成功实现了33 kDa 重组蛋白在E．coliBL21中的表达。
纯化后的重组蛋白 PPL 用于凝血和体外抗癌试验。
该基因的全长cDNA 序列为1504 bp，其中开放性阅读框（ORF）813 bp，编码270个氨基酸，具有3个甘露糖结合识别位点。
PPL 具有凝血活性，这种凝血活性可受甘露糖抑制。
PPL 对人鼻咽癌细胞（CNE）、人宫颈癌细胞（Hela）及人乳腺癌细胞（Bcap-37）的生长均具有抑制作用，其中对 Hela 细胞的抑制效果最好。
为进一步研究 PPL 蛋白的功能奠定了理论基础。
【总页数】6页(P32-37)【作者】杨在君;刘玲玲;彭正松【作者单位】西华师范大学生命科学学院，西南野生动植物资源保护教育部重点实验室，四川南充 637009;西华师范大学生命科学学院，西南野生动植物资源保护教育部重点实验室，四川南充 637009; 重庆大学生物工程学院，生物流变科学与技术教育部重点实验室，重庆 400044;西华师范大学生命科学学院，西南野生动植物资源保护教育部重点实验室，四川南充 637009【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.掌叶半夏凝集素基因克隆及原核表达 [J], 王洪乐;齐连芬;杨超沙;吴志明;李亚栋2.掌叶半夏凝集素基因的克隆及亚细胞定位分析 [J], 赵欢3.掌叶半夏凝集素基因 PPA2抗蚜功能分析 [J], 刘玎;陈劲;刘志;朱生伟4.半夏凝集素基因的克隆及转基因烟草对蚜虫的抑制作用 [J], 张正英;令利军;王红梅;李淑洁;李静雯5.西和半夏凝集素抗虫基因克隆及对棉花的遗传转化 [J], 张正英;李淑洁;李静雯;王红梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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SRT计划项目申请书
项目名称：掌叶半夏凝集素基因的克隆与分析
课题负责人：
申报单位：
专业名称：
指导教师：职称：
申报日期：2010年10月8 日
贵州大学教务处
填写要求
1、填写申请书前，请认真查阅《贵州大学SRT计划项目管理办法》的要求及有关规定。
2、申请书按照要求，逐项认真填写，填写内容必须实事求是，表达明确严谨。
空缺项要填“无”。
3、格式要求：申报书中各项内容以Word文档格式填写；表格空间不足的，可以扩展或另附纸张；均用A4纸双面打印，于左侧装订成册。
4、凡选择性栏目，请在相应提示符A、B、C等之上画 。
5、联系单位：教务处实践科
6、联系电话：8292071、3621020
一、基本情况
二、立论依据
三、研究方案
四、项目的特色和创新点
五、研究基础
六、经费预算
注:开支范围详见《贵州大学SRT计划项目管理办法》文件的第十三条。
七、审查意见
八、申请者承诺
我保证上述填报内容的真实性。
如果获得资助，我与本项目组成员将严格遵守学校的有关规定，在不影响课程学习的同时，保证项目研究工作的时间，并按计划认真开展研究工作，在项目研究过程中或结束时，接受学校对本项目的中期检查和结题验收，并按时提交工作总结和结题报告。
申请者（签名）：
年月日
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注：此表由具有副高以上职称的教师（非指导教师）填写。