实验一 高效液相色谱柱效能的评价
评价色谱柱效和分离效果的指标
评价色谱柱效和分离效果的指标色谱柱是色谱技术中最基本也是最重要的部分，它的质量直接影响着实验室中每一项物质分析的效果。
因此，确定色谱柱的性能指标并对其进行评价，对于实现检测精确、准确的色谱分析，具有重要的意义。
色谱柱的评价指标主要有四方面：精度、峰面积、保持时间和再生能力。
（一）精度精度是反映色谱柱试剂质量与稳定性、固定化效果和气体容量的综合指标，也可以作为定义样品静态和活性表征的有效参数。
可以从两个方面对柱的精度进行评价：一是重现率，二是有效容积。
重现率是色谱柱检测多次测量同样样品的峰面积和容量之间的差异，是表征柱精度的重要参数，通常它越大，表示柱的精度越高；而有效容积是指柱中所含有的分子大小的空间总容积，它是直接影响样品吸附能力和选择性的重要参数。
（二）峰面积峰面积是衡量色谱柱分离效果的重要参数，它可以反映柱体基体的层状结构，以及柱中吸附体的数量等，反映了柱中有效物质的容积与吸附性能。
峰面积越大，说明分离效果越好，可以获得更详细的信息；峰形越清晰，则说明色谱柱的分离能力越强。
（三）保持时间保持时间是指色谱柱的分离效果在用后保持不变的时间长度。
一般来说，柱的保持时间越长，其分离效果越好，说明其耐用性越强。
（四）再生能力再生能力是指色谱柱的回收率，它反映了柱在检测过程中色谱物质的经济性和有效性。
评价柱的再生能力需要进行多次测定，以确定柱体在检测过程中重复利用时，其各项指标的变化情况，。
一般来说，柱的再生率越高，其分离效果越好。
以上就是色谱柱的主要性能评价指标，其中精度、峰面积、保持时间和再生能力等四项指标是色谱柱性能评价的基础，是色谱柱性能检测中重要的参数。
正确评价色谱柱的这些指标，可以更好地提高色谱技术的实验精度及精确性，并最终获得更可靠、准确的检测结果。
高效液相色谱标准
高效液相色谱标准高效液相色谱标准的发展及其在分析化学中的重要性随着科技的不断进步，高效液相色谱法（HPLC）已经成为了现代分析化学中不可或缺的一部分。
这种方法以其极高的分离效能和灵敏度，广泛应用于各个领域，包括医药、环保、化工等。
然而，为了确保实验结果的准确性和可靠性，制定高效液相色谱标准显得尤为重要。
本文将深入探讨高效液相色谱法的原理、实验条件、标准制定原则与流程，以及其在实际应用中的案例分析，评估其优缺点并预测未来发展趋势。
一、高效液相色谱法的基本原理与概念高效液相色谱法是一种基于色谱分离技术的分析方法。
其基本原理是利用不同的物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，实现对不同物质的分离。
这种方法的分离效能高，分析速度快，且具有较高的灵敏度和较低的检测限。
柱效能和检测限是高效液相色谱法中的关键概念。
柱效能反映了色谱柱的分离效果，而检测限则代表了方法的灵敏度。
二、实验条件与方法在进行高效液相色谱实验时，选择合适的固定相、流动相以及实验条件是至关重要的。
固定相是色谱分离的基础，不同的固定相对于不同物质的吸附能力不同。
流动相则决定了物质在色谱柱中的移动速度，从而影响分离效果。
实验条件包括温度、压力、流速等，这些因素都会对实验结果产生影响。
三、标准制定原则与流程制定高效液相色谱标准需要遵循一定的原则和流程。
首先，标准制定应基于广泛认可的方法和规范，确保实验过程的科学性和合理性。
其次，标准制定应注重可重复性和可操作性。
这意味着标准的制定应考虑到不同实验室之间的差异，确保实验结果具有可比性。
此外，标准制定还应关注样品处理、色谱柱条件优化、重复试验等环节，以确保实验结果的准确性和可靠性。
四、实际应用案例分析在实际应用中，高效液相色谱法已经在多个领域取得了显著成果。
例如，在医药领域，高效液相色谱法被用于药物的分离和纯化，以确保药品的质量和安全性。
在环保领域，高效液相色谱法被用于对环境样品中的有害物质进行检测和分析。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告高效液相色谱法，基本原理为影响柱效的主要因素是涡流扩散和传质阻抗。
分为液固吸附色谱法，流动相为液体，固定相是固体吸附剂；液分配色谱法，固定相几乎全是化学键合硅胶，又称化学键合相色谱法等。
（二）塔板理论：塔板理论方程式（高斯方程式）：理论塔板式数：理论塔板高度：（三）速率理论： h=a+b/u+cu影响塔板高度的因素：1、涡流扩散 2、纵向扩散 3、传质阻抗二、气相色谱仪：（1）色谱柱：固定相与柱管组成。
填充柱、毛细管柱；分配柱、吸附柱（2）紧固液：低沸点的液体，操作方式下为液态。
甲基硅油、聚乙二醇等选择原则：按相似性、按主要差别、按麦氏差别选择。
（3）载体：化学惰性的多孔性微粒（4）毛细管色谱柱：开管型、填充型（5）检测器：1、浓度型检测器：热导检测器和电子捕捉检测器2、质量型检测器：氢焰离子化检测器中国药典对气相色谱规定：除检测器种类、紧固液品种及特定选定的色谱柱材料严禁任一修改外，其他均可适度发生改变，色谱图于30min内记录完。
第四节高效液相色谱法1、基本原理：影响柱效的主要因素就是涡流蔓延和传质电阻。
分类：1、液固吸附色谱法：流动相为液体，固定相是固体吸附剂。
2、液——液分配色谱法：紧固二者几乎全系列就是化学键再分硅胶，又称化学键再分相色谱法。
按固定相和流动相的极性2又分：正相色谱法和反相色谱法正相色谱法：流动二者极性大于紧固二者极性的色谱法。
用作拆分溶有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用作所含相同官能团物质的拆分。
极性强组分先流入反相色谱法：……………大于……………………… 用于分离非极性至中等极性的分子型化合物2、高效率液相色谱仪：1、高压输液泵2、色谱柱3、进样阀4、检测器：紫外稀释检测器、荧光检测器、热法折光检测器、电化学检测中国药典对高效液相色谱法规定：除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意更改外，其余均可适当改变，色谱图于20min内记录完毕。
第五节色谱系统适用性试验和定量分析方法一、系统适用性试验1、色谱柱的理论板数：2、分离度：应大于1.53、重复性3、拖尾声因子：0.95-1.05之间二、定量测定法：1、内标法加较正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量2、外标法测量供试品中某个杂质或主成分含量3、加较正因子的主成分自身对照法不加较正因子的主成分自身对照法。
高效液相色谱实验
高效液相色谱实验I. 色谱柱的评价请在实验前预习《基础分析化学实验（第二版）》137－140页。
【目的】(1) 了解高效液相色谱仪的工作原理；(2) 学习评价液相色谱反相柱的方法。
【原理】高效液相色谱是色谱法的一个重要分支。
它采用高压输液泵和小颗粒的填料，与经典的液相色谱相比，具有很高的柱效和分离能力。
色谱柱是色谱仪的心脏，也是需要经常更换和选用的部件，因此，评价色谱柱是十分重要的。
而且对色谱柱的评价也可以检查整个色谱仪的工作状况是否正常。
评价色谱柱的性能参数主要有：（1）柱效（理论塔板数）n式中t r 为测试物的保留时间，W 1/2为色谱峰的半峰宽。
（2）容量因子k’式中t 0为死时间，通常用已知在色谱柱上不保留的物质的出峰时间作死时间。
(3) 相对保留值（选择因子）α式中k 1’和k 2’分别为相邻两峰的容量因子，而且规定峰1的保留时间小于峰2的。
(4) 分离度R s式中t r1、t r2分别为相邻两峰的保留时间，W b1、W b2分别为两峰的底宽。
对于高斯峰来讲，W b =1.70W 1/2。
为达到好的分离，我们希望n 、α和R s 值尽可能大。
一般的分离（如α=1.2，R s =1.5），需n 达到2000。
柱压一般为104 kPa 或更小一些。
本实验采用多核芳烃作测试物，尿嘧啶为死时间标记物，评价反相色谱柱。
【仪器和试剂】Waters 510高效液相色谱仪（由Waters 510高压输液泵，Rheodyne 7725i 进样器，440检测器和记录仪组成）色谱柱：5 cm ×4.6 mm I.D., YWG-C 18H 37 (ODS)，10 μm流动相：甲醇－水(80+20)样品I ： 含尿嘧啶 (0.010 mg ·mL －1)、萘 (0.010 mg ·mL －1)、联苯 (0.010 mg ·mL －1)、菲（0.006 mg ·mL －1）的甲醇混合溶液；样品I I ：尿嘧啶的甲醇溶液；萘的甲醇溶液；联苯的甲醇溶液；菲的甲醇溶液。
中药色谱分析试验讲义试验一高效液相色谱操作及其参数的测定一
《中药色谱分析》实验讲义实验一高效液相色谱操作及其参数的测定一、目的要求：1．熟悉高效液相色谱仪的原理和基本方法2．熟悉使用高效液相色谱仪基本操作方法二、实验提要：以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。
其基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色信号或进行数据处理而得到分析结果。
由于高效液相色谱法具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）、色谱柱可反复使用的特点，在《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用该法，已成为中药制剂含量测定最常用的分析方法。
高效液相色谱法按固定相不同可分为液-液色谱法和液-固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液-液色谱）和吸附色谱法（液-固色谱）等。
目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。
将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，不易流失是其特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。
C18（ODS）为最常使用的化学键合相。
根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。
在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。
三、实验内容1.高效液相色谱系统组成：（一）高压输液系统由贮液罐、脱气装置、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。
1.贮液罐由玻璃、不锈钢或氟塑料等耐腐蚀材料制成。
贮液罐的放置位置要高于泵体，以保持输液静压差，使用过程应密闭，以防止因蒸发引起流动相组成改变，还可防止气体进入。
2.流动相流动相常用甲醇-水或乙腈－水为底剂的溶剂系统。
【仪器】高效液相色谱法实验结果分析
【仪器】高效液相色谱法实验结果分析现代色谱分析法是有效而快速的分离、分析手段，既可用于定性分析，又可用于定量分析。
高效液相色谱法与气相色谱法的定性分析和定量分析方法（包括测定方式和计算方法）相同。
在定性分析中，有用纯物质对照的色谱鉴定法，还有收集馏分与化学方法或其他仪器分析方法联用的非色谱鉴定法；在定量分析中，可以用峰高或峰面积以内标法、外标法或归一化法定量，并与微机联用作为现代化的分析工具。
定性分析色谱分析法定性分析的目的就是确定每个色谱峰代表什么组分，从而确定由这些组分所构成的混合物试样的组成。
常用的主要定性方法有色谱鉴定法和非色谱鉴定法两种。
1．色谱鉴定法定性色谱鉴定法就是用纯物质对照定性，这是气相和高效液相色谱法中最常用的最方便的一种定性方法，可以和定量测定操作同时进行。
(1)利用保留值定性在色谱条件一定的情况下（包括柱长、柱内径、固定相、柱温、流动相及流速等），每一种物质都有其一定的保留值（包括保留时间、保留体积、调整保留时间、调整保留体积等），一般不受其他组分的影响，可以作为定性的根据。
此法又称为纯物质对照定性。
在相同的色谱条件下，先测定未知物中每个色谱峰的保留时间或保留距离，再将要测的某纯物质注入色谱仪，对照比较两者的保留值，如果两者的保留值相同，就可判定该未知物与已知纯物质是同一种物质。
(2)利用加入纯物质增加峰高法定性在稳定的色谱条件下，为了区分两个保留值（保留时间或保留距离）非常接近的组分，可以将某纯物质直接加入到试样中，再注入色谱仪，如果某组分峰的峰高增加了，表明这个色谱峰就是加入的纯物质。
此法又称为纯物质追加法定性。
色谱鉴定法定性需要有纯物质对照，在没有纯物质时，可以用非色谱鉴定法定性。
2．非色谱鉴定法定性(1)利用文献或相关工具书查相对保留值定性任何一个实验室都不可能配备所有物质的纯品，没有纯物质将无法定性，所以可以利用国内外其他实验室的色谱工作者在《分析化学》或《色谱分析》刊物上发表的具有相对保留值和保留指数（Ix）数据的论文（文献）。
高效液相色谱柱效能的测定
1.检测器：紫外光度检测器，测试波长254nm 2.流动相：甲醇：水(83：17)，流量0.8 ml/min 3.色谱柱：长250mm，内径4.6mm，装填C-18烷基键合
相(粒度5μm) 4.进样量：20 μL
五、实验步骤：
1. 根据实验条件，将仪器调至可进样状态，待基线平 稳后，即可进样。 2. 吸取标准使用液（含甲苯、萘、联苯各10ug/ml的 正己烷溶液）20μL，注入高效液相色谱仪。 3. 记录下色谱图。 4. 从色谱图中测得甲苯、萘、联苯的保留时间tR，半 峰宽Y1/2，计算对应的理论塔板数n及分离度R。
敏度10-11g。
二、 高效液相色谱法主要类型及分离原理
根据分离原理，高效液相色谱法分为： 液-液色谱及化学键合相法 液-固色谱法 离子对色谱法 离子交换色谱法 空间排阻色谱法
反相键合相色谱法
固定相：极性较小的键合固定相，如硅胶一C18H37、 硅胶一苯基等；
流动相：极性较强的溶剂，如甲醇、乙睛、水和无机 盐的缓冲溶液等。
高效液相色谱图：
数据处理：
甲苯
萘
tR /min
Y1/2 /min
n/
块·m-1
R
n 5.54( tR )2
Y1/ 2
R
tR2 tR1
2 2.35
(Y1/ 2(1)
Y1/
2(2)
)
联苯
天美LC2130 HPLC操作规程
一、开机准备 1.实验室温度应保持在25～30℃之间，湿度小于65%。 2. 根据实验要求，选择合适的色谱柱并安装，准备相
标，混合物能否在色谱柱中得到分离，除取决于选择 合适的固定相外，还与色谱操作条件及色谱柱的装填 状况等因素有关。
高效液相色谱柱
高效液相色谱柱高效液相色谱柱是一种在分析化学领域中广泛使用的技术。
它的原理是通过溶液在色谱柱中的流动过程中，对溶质进行分离和纯化。
高效液相色谱柱的优点是分析速度快、分离效果好、操作简便等。
本文将介绍高效液相色谱柱的原理、种类、应用以及未来的发展趋势等内容。
高效液相色谱柱的原理主要包括固定相和移动相两个基本要素。
固定相负责分离溶质，常用的固定相有疏水相、离子相、亲合相等。
移动相则是将溶质带动在柱子中流动的溶剂，通常是有机溶剂和水的混合物。
这样，在溶液在色谱柱中流动过程中，不同溶质会在固定相的作用下发生分离，从而实现对混合物的分析和纯化。
高效液相色谱柱根据固定相的不同可以分为几种不同的类型。
例如，疏水相色谱柱广泛应用于有机物的分离和分析，它的固定相表面通常具有疏水性，可以对有机物进行选择性的吸附和分离。
离子相色谱柱则适用于进行离子化合物的分离和分析，例如酸和碱等。
亲合相色谱柱主要是基于生物大分子与其他化合物之间的生物亲和性进行分析。
高效液相色谱柱在实际应用中有着广泛的用途。
在生命科学研究领域，高效液相色谱柱可以用于对蛋白质、核酸等生物大分子的分离和纯化。
在药物分析领域，高效液相色谱柱经常被用于药物的纯化和质量控制。
在环境监测方面，高效液相色谱柱可以用于对环境污染物的检测和分析。
此外，高效液相色谱柱还被广泛应用于食品安全、农药残留检测、天然产物分析等领域。
随着科学技术的不断进步，高效液相色谱柱也在不断发展和完善。
目前，研究人员正在努力提高高效液相色谱柱的分离效率和分离速度，使其更加适用于复杂物质的分离和分析。
同时，也在研发新的固定相和移动相，以满足不同类型化合物的分析需求。
此外，一些新的检测技术和装置也被引入到高效液相色谱柱中，提高对溶质的灵敏度和准确性。
总之，高效液相色谱柱是一种重要的分析技术，具有广泛的应用前景和发展空间。
它在生命科学、药物分析、环境监测等领域都有着重要的作用。
随着科学技术的不断进步，相信高效液相色谱柱在未来会发展出更多的新技术和新应用，为我们的科研和生产提供更多的支持和帮助。
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高效液相色谱柱效能的评定
1. 实验目的和要求
1.1了解高效液相色谱仪的基本结构。
1.2初步掌握高效液相色谱仪的基本操作方法。
1.3学习高效液相色谱柱效能的评定及分离度的测定方法。
2. 实验原理
苯、萘、联苯分子非极性部分的总表面积不同，缔合能力不同，其保留时间也不同。
通过计算色谱峰的理论塔板数以及各个化学物质间的分离度评价色谱柱的效能。
3. 实验仪器与试剂
3.1 仪器
高效液相色谱仪（带自动进样器，或配置微量进样器）
分析天平
3.2 试剂
苯、萘、联苯（均为分析纯）
甲醇（色谱纯）
纯净水
4. 实验步骤
4.1 色谱条件
色谱柱：C18，4.6×150mm，5μm
流动相：甲醇-水（80：20，v/v）
流速：1mL·min-1
检测波长：254nm
柱温：30℃
进样量：10μL
4.2 操作步骤
分别精密配制含苯、萘、联苯浓度均为约1mg·mL-1的3份对照品溶液各10mL。
● 分别精密吸取上述对照品溶液各2mL 置于10mL 容量瓶中，加流动相稀
释，并定容至刻度，摇匀，得到含苯、萘、联苯的混合对照品溶液。
● 按照上述色谱条件操作，进样，记录色谱图。
● 计算各色谱峰的理论塔板数及各峰间分离度。
4.3 实验数据处理
● 记录实验条件，测试各试样后记录苯、萘、联苯的保留时间、峰宽、半
峰宽，计算出各物质对应的理论塔板数。
根据保留时间与峰宽信息，计算相邻物质对间的分离度。
● 柱效计算
式中：t R 为峰值保留时间（min ），W 1/2为半峰宽（min ），W 为峰宽（min ）
●
式中：t R1和t R2分别为相邻两组分的峰值保留时间（min ）
W 1和W 2分别为相邻两组分色谱峰的峰宽（min ）
5. 问题与讨论
2
2
1
2)
(54.5)(16W t W t n R R ==
5.1 如何用实验方法判别色谱图上苯、萘、联苯的色谱峰归属？
5.2 如何改变色谱条件，可以减小苯、萘、联苯的保留时间？
5.3若实验中的色谱峰无法完全分离，应如何改变实验条件以获得改善？。