大鼠肾纤维化模型

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冬虫夏草在肾间质纤维化大鼠模型中的作用及其对TGF-β1、α-SMA的影响

ｍｅｓｅｙａｔｍａｅｍｍｕｏｓａ：ｒｅｓｔｅｍａｋｒａｕｄｂｕｏｔｉｒｄｎａｓｙａｍｏｅｓｎｉｖｒｅｉ
ｏｈｎｅｆｃａｇｓｉＧＦＲｔａｒＨｒａｉｉｅＫｉｎｙＩｔ１９４ｎｈｎｓｏ１ｃｅｔｎ．ｄｅｎ，９５，７ｅｎ
—ａａｓ．ｍＫｄｅｉ２０，０２：２ —２６ｎｌｉＡＪｉｙＩｓ０２４（）２１２．ｙｓｎ），
７．ｗｍａ，ａｋｒＨ，ｗａｄ，ｔａ．ＳｒｍｙｔｔＮｅｎＤＪＴｈｋａＥｄｒｓＲＧｅ１ｅｕｃｓａｉＣｎ
１９，７４：８９９３（）３９—３５９．
３ＦｉｎｙＨ，ｗｍａＪＧｒｂｒＷ，ｔａ．Ｉｉａｅａｕｔｎｏ．ｎｅＮｅｎＤ，ｕｅｅ１ｎｔｌｖｌａｉｆｉｏ
ｃｓａｉａｕｅｎｙｐｒｉｌ —ｅｈｎｅｍｍｕｏｅｈｙｔｔＣｍｅｓｒｍｅｔｂａｔｅ— ｎａｃｄｉｎｃｎｎｐ —
４黄萍，．李国贤，黄爱霞．测定血清胱抑素一Ｃ在评估肾功能中
的意义．床肾脏病杂志，０３３２：０—６．临２０，（）６３
５许讯辉，建洲，．邹丁小强，．等血清胱抑素一Ｃ一种简便测定：肾小球滤过率的标志物．中国临床医学，０１８３：４２０，（）２０—
２４】．

两种造模方法致大鼠慢性肾病模型的肾功能及病理变化比较

两种造模方法致大鼠慢性肾病模型的肾功能及病理变化比较李天祎杨扬杨素萍李嘉琦马逸群王家平摘要目的探究两种造模方法对大鼠慢性肾病模型的肾功能影响及病理改变°方法采用单侧肾切除+尾静脉重复注射阿霉素(ADR)法(A组)和二次尾静脉注射ADR法(B组)测定各组大鼠肾功能(血尿素氮、血肌酐)、血清白蛋白°光镜下观察各组大鼠肾脏的病理变化，并分别与正常对照组(N组)进行比较°结果在4、8、12周末，A、B组血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)值均有显著上升(P<0.05),白蛋白降低(P<0.05)，表现为低蛋白血症，部分大鼠合并腹腔积液°光镜下，A、B两组肾小球均有不同程度萎缩、硬化，肾小管受损不均，肾间质均出现炎性改变°单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR诱导的肾脏损伤更为严重°结论单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR诱导的慢性肾病模型与二次尾静脉注射ADR法,均可使大鼠成模，两种方法比较，单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR诱导的病理改变相对较为典型°关键词慢性肾病阿霉素肾功能中图分类号R3文献标识码A DOI10.11969/j.issn.1673-548X.2020.12.014Comparison of Renal Function and Pathological Changes in Rats with Chronic Nephropathy Induced by Two Methods.Li Tianyi,Yang Yang,Yang Suping,et al.The Second Affiliated Hospital of Kunming Medical University,Yunnan650101,China Abstract Objective To explore the renal function and pathological changes of chronic kidney disease model in rats by two methods.Methods The methods of unilateral nephrectomy and repeated injection of adriamycin(ADR)in to caudal vein(Group A)and second injection of ADR into caudal vein(Group B)were used.Under the light microscope,the renal pathological changes of rats in each group were observed and compared with the normal control group(Group N).Results At the end of4,8,12weeks,the blood urea nitrogen(BUN)and serum creatinine(CR)of group A and group B were significantly higher than those of group n(P<0.05),and the albumin of group A and group B was lower(P<0.05),showing hypoproteinemia.Some rats were complicated with ascites.Under the light microscope,the glomeruli of group A and group B were atrophic and sclerotic in varying degrees,the renal tubules were damaged unevenly,and the renal interstitium showed inflammatory changes.The renal injury induced by unilateral nephrectomy and repeated tail vein injection of ADR is more serious and typical.Conclusion The chronic nephropathy model induced by unilateral nephrectomy and repeated tail vein injection of adriamycin can change the renal function of pared with the two methods,the pathological changes induced by unilateral nephrectomy and repeated tail vein injection of adriamycin are more typical.Key words Chronic kidney disease；Adriamycin；Renal function慢性肾脏疾病(chronic kidney disease,CKD)是影响全球公共健康的主要疾病之一，全球发生率约为8%~16%[1]°临床多表现为蛋白尿、低蛋白血症、水肿以及高脂血症等°因CKD发生率逐渐增高,病程迁延，很难治愈，末期多发展为慢性肾衰竭，只能依靠透析、换肾等仅有的治疗方式缓解,已经逐渐成为威胁人类健康的一类慢性疾病°随着人们对慢性肾病基金项目：云南省卫生和计划生育委员会医学学科带头人培养计划项目(D-201647)作者单位：650101昆明医科大学第二附属医院放射科通讯作者：王家平，电子信箱：1603642110@ 发病机制和病理变化等研究的深入，建立慢性肾病动物模型对研究CKD的肾组织病理形态学变化以及探究治疗CKD的新方法有着重要的意义°目前，国内外公认的模拟慢性肾病效果较好的为阿霉素(adriamycin,ADR)大鼠模型°ADR在大鼠体内代谢较为缓慢,对心脏、肝脏、骨髓、胃肠等具有较强的不良反应，但经尾静脉注射后,其毒性可主要积累于肾脏[2]°因此，应用ADR造模时，应注意注射的方式、剂量等°近年来,应用较为广泛的方法主要有尾静脉注射法(单次或多次)、单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR和肾动脉注射法等°本研究比较单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR及二次尾静脉注射-53-ADR 这两种方法，旨在为更好地复制慢性肾病模型提供更加丰富的参考依据。

庆大霉素诱导大鼠肾小管间质纤维化模型的建立

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（．ｘｅｍｅｅｅｔｒｆＳｉｎｅａｄＴｃｎｌｇ，ＳａｇａｎｖｒｉｆｒｄｔｎｌＣｉｅｅＭｅｉｉｅｈｎｈｉ０２３，Ｃｉａ１ＥｐｆｎｅＣｎｅｃｅｃｎｅｈｏｏｙｈｎｈｉＵｉｅｓｙｏａｉｏａｈｎｓｄｃｎ，Ｓａｇａ１０ｉｏｔＴｉ２ｈｎ；２．ｏｅｅｏｕｓｇ，ＳａｇａＵｉｅｉｆＴａｉｏａＣｉｅｅＭｅｉｉｅｈｎｈｉ０２３，ＣｉａＣｌｇｆｒｉｌｎｎｈｎｈｉｎｖｒｔｏｒｄｔｎｌｈｎｓｄｃｎ，Ｓａｇａ１０ｓｙｉ２ｈｎ）
【键词】急性肾损伤；关间质纤维化；化应激氧
【中图分类号】Ｒ９．６２１
【文献标识码】Ａ
【文章编号】１７ —８６２０）９０６ —５６１５（０８０．０７００
ＥｓａｌｈｅｔｏｔＭｏｅｆＲｅａｂｌｉｔｒｔｔａｔｂｉｍｎｆａＲａｓｄｌｏｎｌＴｕｕｏｎｅｓｉｉｌ
细胞浸润，质明显增宽。电镜下可见模型组 Ⅱ大鼠肾小管上皮细胞核固缩、裂现象；质中有较多的胶原纤间碎间
维，纤维细胞增多。模型组 Ⅱ大鼠血肌酐、尿素氮、４ｈ尿蛋白总量明显高于正常组 Ⅱ（＜０Ｏ）结论氧成血２Ｐ．１。化应激引起的脂质过氧化损伤参与了庆大霉素所致的肾小管上皮细胞变性坏死，者导致了慢性炎症和修复的反后复进行，终导致肾间质纤维化。最

UUO模型大鼠肾间质纤维化动态进展及α-SMA、TGF-β1和VDR表达变化

UUO模型大鼠肾间质纤维化动态进展及α-SMA、TGF-β1和VDR表达变化谢盛彬;王伟铭;陈楠【摘要】目的观察单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾小管间质纤维化动态进展,研究该病理过程中肾脏纤维化相关蛋白表达的变化.方法 32只清洁级SD大鼠随机分为假手术组(n=16)和UUO模型组(模型组,n=16).两组大鼠分别于术后(模型组建模后)第2、5、9、14天分批(n=4)处死,留取手术侧(模型组梗阻侧)肾脏组织.分别采用HE和Masson染色、免疫组织化学染色及Western blotting等方法,评价肾小管间质纤维化损伤程度并检测肾脏组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、维生素D受体(VDR)及转化生长因子β1(TGF-β1)等相关蛋白的表达.结果肾脏组织形态学观察显示,随着输尿管梗阻时间的延长,肾小管间质纤维化程度逐步加重.免疫组织化学染色显示,模型组大鼠建模后各时间点肾间质α-SMA和FN 阳性面积百分比均显著高于假手术组(P＜0.05),且随着梗阻时间的延长逐渐升高,至建模后第14天时达到高峰.Western blotting分析表明,模型组大鼠建模后各时间点α-SMA和TGF-β1相对表达量均显著高于假手术组(P＜0.05),而VDR相对表达量显著低于假手术组(P＜0.05);建模后第2天,模型组大鼠肾脏组织α-SMA相对表达量已显著增加;建模后第14天,模型组α-SMA和TGF-β1相对表达量分别增高至假手术组的12.7倍和8.8倍,而VDR相对表达量下降至假手术组的3%.结论 UUO 模型大鼠建模后第14天可出现显著的肾间质纤维化;建模早期肾间质中α-SMA表达增加提示肾间质成纤维细胞的活化;VDR表达的进行性减少提示其与肾间质纤维化有关.【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(030)007【总页数】7页(P752-757,796)【关键词】肾小管间质纤维化;单侧输尿管梗阻;α平滑肌肌动蛋白;维生素D受体;转化生长因子β1【作者】谢盛彬;王伟铭;陈楠【作者单位】上海交通大学,医学院瑞金医院肾脏内科,上海,200025;上海交通大学,医学院瑞金医院肾脏内科,上海,200025;上海交通大学,医学院瑞金医院肾脏内科,上海,200025【正文语种】中文【中图分类】R692.6肾小管间质纤维化是多种病因所致慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)进展至终末期肾病的最后共同通路。

转化生长因子β1在肾间质纤维化大鼠模型中的表达及意义

免疫组化方法观察各组大鼠肾组织的Ｔ的表达部位、表达水平及平滑肌肌动蛋白（ｍｏｔｓｌａｔ，ＧＦ０ａｓｏｈｍｕｃｃｎｅｉ
ＱＳ —ＭＡ）的表达情况；ＨＥ及Ｍａｓｎ染色评定各组肾小管间质损害程度。结果模型组Ｔ－。 —ＭＡ的表达及ｓｏＧＦＩ、ＱＳ￣肾小管间质损伤指数明显高于假手术组（＜００）而科素亚治疗组、霉酚酸酯治疗组均明显低于模型组（Ｐ．５；Ｐ＜００）．５；科素亚治疗组与霉酚酸酯治疗组相比，各项指标差异均无统计学意义（Ｐ＞００）．５；ＴＧ一与肾小管间质Ｆ０损伤指数（一０７８＜ＯＯ）及ａＳｒ．８，Ｐ．１－ＭＡ（一０９０ｒ．４，Ｐ＜ＯＯ）呈正相关。结论．１
ｆｒｓｓａｄｔｅｅｆｃｓｏｏａｔｎｐｔｓｉｍａｌｔａｄｍｙｏｈｎｌｔｆｔｌｏｈｒｃｓｆｔｅｆｒｓｓＭｅｈｄＮｉｅｉｏｉｎｈｆｅｔｆｌｓｒａｏａｓｕｔｂｅｎｃｐｅｏａｅｍｏｅｉｎｔｅｐｏｅｓｏｈｉｏｉ．ｂｂｔｏｓｎｄｙｆｅｎｌｔｒｌｒｔｒｌｂｔｕｔｎ（ＵＯ）ａｉｌａｓａｔｒｉｅａｅｅａｓｒｃｉｕａｕｏｏＵｎｍａｄｌｗｅｅｍａｅｔｅｅｐｅｓｏｓｏｍｏｅｓｒｄ，ｈｘｒｓｉｎｆＴＧＦＢａｄＱｓｏｈｍｕｃｅａ — — 】ｎ — ｍｏｔｓｌｃｔｎｔｅｏｓｒｃｅｉｎｙｗｅｅｍｅｓｒｄｂｍｍｕｏｉｔｃｅｓｒｔｏｅｐｃｉｅｙＡｔｔｅｓｍｅｔｉｉｈｂｔｕｔｄｋｄｅｒａｕｅｙｉｎｎｈｓｏｈｍｉｔｙｍｅｈｄｒｓｅｔｌ．ｈａｉ，ｔｅｄｇｅｆｔｂ — ｖｍｅｈｅｒｅｏｕｕ

低氧在单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化中的作用初探

小管间质纤维化的程度逐渐加重，术后１０ｄ组纤维化程度约增加了１０倍。自术后４８ｈ组ＴＧＦ一１７１ｍＲＮＡ和蛋白水平均出现进行性上升，主要集中在小管上皮细胞。术后１２ｈ组，肾脏低氧的范围和程度有明显加重，免疫
ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ（ＵＵ０）ｒａｔｍｏｄｅｌａｎｄｉｔｓｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｔｕｂｕｌｏｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈ－
点及低氧与肾间质纤维化的关系。方法
组）、单侧输尿管结扎术后１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、３ｄ、５ｄ、７ｄ和１０ｄ组，每组４只。除Ｓｈａｍ组外，均结扎左侧输尿管
建立ＵＵＯ模型。各组大鼠处死前１．５ｈ腹腔麻醉后，经阴茎静脉注射低氧探针（Ｈｙｐｏｘｙｐｒｏｂｅ一１，Ｃｈｅｍｉｃｏｎ
Ｉｎ０ｍｇ／ｋｇ，然后开腹取左肾。对各组肾脏Ｍａｓｓｏｎ三色染色后，半定量分析肾小管间质纤维化程度；用ＲＴ — ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及免疫组织化学方法检测其转化生长因子（ＴＧＦ）一７１１表达，用免疫组织化学方

大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化动物模型的实验研究

ｏｅａｉｒｕ１ａｅａｄｍｏｅｇｏｐ（６ｒｔｓ．ｏｒｒｔｓｉｅｃｒｕｒｉｅｎｔｅ３ｄｌｔ，ｐｒｔｎｇｏｐ（６ｒｔｓ）ｎｄｌｒｕ１ａｅ）Ｆｕｅｎａｈｇｏｐｗｅｅｋｌｄｏｈｒ，Ｏｈｏａｌ
死时抽取其腹主动脉血测定血清肌酐、素氮水平；肾组织行ＨＥ染色，态观察肾病理学变化，尿左动
评定各组大鼠肾间质损害程度；疫组化方法测定肾间质ａＳ免 —ＭＡ，分析其与肾间质损伤指数的并
相关性。结果各组大鼠２蛋白无统计学意义（＞００）４ｈ尿Ｐ．５。各组大鼠血肌酐、素氮在第３尿天时无统计学意义（＞００）Ｐ．５。模型组血清肌酐、素氮在１尿０ｄ时高于假手术组（＜００）２Ｐ．１，０ｄ达到高峰，继之出现下降。模型组的肾间质损伤指数及ａＳ —ＭＡ的表达明显高于假手术组（＜Ｐ
验证ＵＵＯ制作ＲＩＦ动物模型的可行性。方法将３２只Ｗａｔｒ大鼠随机分为假手术组、型组，ｓｅ模
每组１６只。在术后３１、０３组各处死４只，、０２、０ｄ每处死前１ｄ测定各组大鼠２４ｈ尿蛋白定量，处
ｍｅｎｆｎｌｅａｕｅｒｌｂｔｃｏ（ａｓｉｔｒｌｒｔａｏｓｒｔｎＵＵＯ）Ｍｅｈｄ２ｗａｔｒａｅｅｅｒｎｏｙｄｖｄｄｉｔｅｓａｏｕａｅｕｉ．ｔｏｓ３ｓｔｓｒｄｍｌｉｅｏｔｈｍ— ａｒｗａｉｎｈ

ACEI类药物及MMP7在肾脏纤维化大鼠模型中的作用文献综述

ACEI类药物及MMP7在肾脏纤维化大鼠模型中的作用文献综述发表时间：2018-11-07T15:04:39.757Z 来源：《中国误诊学杂志》2018年第26期作者：杨舒贺康晓明杨松聂晶[导读] 探究是否ACEI类药物可作用于MMP7进而对肾纤维化进程产生影响。

佳木斯大学附属第一医院黑龙江佳木斯 154002 摘要：慢性肾病（CKD）是一个全球性问题。

全球疾病2013（GBD 2013）研究报告称，CKD是过去23年中死亡率最高的非传染性死因。

随着时间的推移，共计有15％至20％的CKD患者可能有逐渐丧失肾功能的风险，并且发展为终末期肾病（ESRD）。

肾脏纤维化是ESRD的主要病理生理基础，防治肾脏纤维化是延缓终末期肾病的重要方法。

本文就国内外对于ACEI类药物及MMP7因子的相关研究进行文献综述总结，探究是否ACEI类药物可作用于MMP7进而对肾纤维化进程产生影响。

关键词：ACEI类药物；肾功能衰竭；肾脏纤维化；MMP7 1.ACEI类药物肾素－血管紧张素－醛固酮系统（RAAS）广泛存在于局部组织，局部RAAS与组织纤维化关系密切。

ACEI类及血管紧张素受体阻滞剂（ARB类）两种药物均可产生阻断血管紧张素II的作用，但ACEI的特点是通过减少缓激肽降解，释放一氧化氮和前列腺素进而使血管舒张[1]。

1.1.ACEI类药物与纤维化有试验证实ACEI对大鼠背侧伤口的伤口愈合和瘢痕形成的影响，并且已经证明了ACEI和TGF-β1的相互作用。

ACEI类可通过经典和非经典TGF-β1途径的抑制进而调节SMAD2 / 3和TAK1的磷酸化。

当使用用TGF-β1刺激细胞时ACEI可降低小鼠成纤维细胞的增殖进而可以减少异常的伤口愈合和纤维化的发展。

2.ACEI类药物与肾脏纤维化 RAS阻滞被认为可以减慢慢性肾病（CKD）患者的肾脏进展。

无论CKD的潜在病因如何，注意力主要集中在控制血压（BP）和降低尿蛋白排泄，ACEI可引起肾脏出球小动脉的优先舒张，从而降低肾小球的滤过压力，进而发挥作用。

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大鼠肾纤维化模型
肾积水(hydronephrosis)是指尿液从肾盂排出受阻，蓄积后肾内压力增高，肾盂肾盏扩张，肾实质萎缩，导致肾功能减退。

梗阻性肾病其主要的病理生理改变是肾积水、肾盂及肾小管压力升高、肾间质水肿、炎性细胞浸润、肾间质内成纤维细胞增生、肾间质胶原蛋白聚集、肾间质增宽、肾小管萎缩，最终导致肾间质纤维化和肾单位减少，引起肾功能衰竭。

单侧输尿管梗阻是比较成熟的肾间质纤维化模型，结扎2周就可有成纤维细胞的增生和间质细胞外基质的生成。

但是由于输尿管的结扎使患侧肾盂中的尿液不能外排，加上对侧肾脏的代偿作用，所以一般情况模型组血肌酐、尿素氮、NAG以及24h尿蛋白仅明显高于正常组，但还处于正常范围之内，同时对侧肾一般也无明显改变，而患侧肾脏组织中大量炎症细胞浸润、肾小管和间质的结构严重破坏以及肾间质纤维化，最后肾间质呈现广泛的纤维化，而肾小球几乎没有病变。

因此单侧输尿管梗阻模型在研究肾间质纤维化方面使研究的靶点明确，有利于其病变机理及抗间质纤维化治疗的研究。

1.实验动物
SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g
2.实验分组
实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

3.实验周期
7d，14d，21d，28d
4.建模方法
1术前一晚禁食,自由饮水。

2称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（15%）350mg/kg麻醉，剃毛固定后用碘酒及酒精擦拭手术区域。

3在上腹中线偏左约3-4mm剪开腹壁，手术组分离出左肾输尿管。

4在靠近肾下极处结扎并分离输尿管，然后双结扎，在2个结扎中间剪断输尿管，逐层缝合肌层及腹壁，酒精清洁缝合处。

待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。

5置于加热垫至其苏醒。

假手术组不结扎输尿管，其余步骤相同。

6术后三天连续注射青霉素20万单位/天防止感染。

5.模型的评价
5.1 蛋白尿含量、尿NAG活性测定模型组术后2周、4周的24h尿蛋白含量以及尿酶NAG活性比正常组和假手术组明显上升。

5.2 血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量测定手术4周后，模型组血清Scr和BUN含量相对于正常组和假手术组有稳定的升高。

5.3 形态学观察：术后取左肾于4%多聚甲醛固定，依次脱水、透明、石蜡包埋、切片。

做HE染色及Mass on染色，光镜观察肾小球、肾小管-间质的病理变化及炎性细胞浸润情况。

可见模型组小鼠的肾间质出现炎症细胞浸润，肾小管上皮细胞萎缩、刷状缘消失、肾小管管腔扩张呈囊状，管腔塌陷，间质明显增宽，间质内可见大量炎性细胞浸润，伴有较多的成纤维细胞增生。

并随时间的延长炎症细胞浸润加重，小管上皮细胞扁平、脱落，肾小管萎缩、扩张加重，甚至塌陷、消失，胶原纤维增生，间质纤维化加重。

6.注意事项
1 分离输尿管时注意不要损伤肾脏
2 注意清理伤口，防止感染。

3.取下肾脏后要剥离肾表面的结缔组织薄膜。

图1 肾脏大体图（左边为未结扎侧肾，右边为输尿管结扎侧肾，肾盂积水，肾脏体积明显扩大，皮质变薄）
武汉云克隆诊断试剂研究所。