软肝宁对大鼠肝纤维化的保护作用研究

・药物研究・　Ｄｒｕｇ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃｅｔｉｏｎ　

中目茄　

Ｃｈｉｎａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　２０１３年２月２０日第２２卷第４期　

Ｖｏ１．２２，Ｎｏ．４，Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０，２０１３　

软肝宁对大鼠肝纤维化的保护作用研究木　闫冰，周晓辉，王曙东　（中国人民解放军南京军区南京总医院，江苏南京　２１０００２）　摘要：目的探讨软肝宁对肝纤维化大鼠的影响，为临床适应证提供实验依据。方法将６０只大鼠随机分为６组。正常对照组给予生理　盐水；模型组给予２０％四氯化碳花生油溶液按１０　ｍＬ／ｋｇ皮下注射，首剂加倍，每５　ｄ注射１次，首次注射后，用生理盐水按１０　ｍＬ／ｋｇ　灌胃，１次／天，连续６周；秋水仙碱组配成Ｏ．０１　ｇ／Ｌ；软肝宁高、中、低剂量组（０．１２，０．０６，０．０３　ｇ／ｋｇ）按损伤模型组同法给予ＣＣ１　造　模，然后给予软肝宁给药，１次／天。给药６周后检测大鼠血清中的丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、天门冬酸氨基转移酶（ＡＳＴ）、超氧化物歧　化酶（ｓｏｏ）、丙二醛（ＭＤＡ）、血清透明质酸（ＨＡ）、层粘连蛋白（ＬＮ）、／１Ｉ型前胶原（ＰｃⅢ）和羟辅氨酸（ＨＹＰ），并观察大鼠肝组织常规病理　改变。结果软肝宁能改善肝纤维化大鼠的肝功能，高、中剂量可显著降低ＣＣＩ　致大鼠肝损伤血清ＡＬＴ，ＡＳＴ，ＭＤＡ，ＨＡ，ＬＮ，ＰＣＩＵ水平和　肝组织中过高的ＨＹＰ（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．Ｏ１），并能升高血清中ＳＯＤ含量。常规病理显示，中、高剂量软肝宁可明显减轻ＣＣ１　所致的大　鼠肝细胞变性、坏死及肝组织损害程度。结论软肝宁具有延缓ＣＣＩ　所致肝纤维化进程的作用。　关键词：软肝宁；肝纤维化；四氯化碳；大鼠　中图分类号：Ｒ２８５．５；Ｒ２８６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—４９３１（２０１３）０４—００１２—０３　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｒｕａｎｇａｎｎｉｎｇ　Ｏｉｌ　Ｒａｔ　Ｌｉｖｅｒ　Ｆｉｂｒｏｓｉｓ　Ｙａｎ　Ｂｉｎｇ，Ｚｈｏｕ　Ｘｉａｏｈｕｉ，Ｗａｎｇ　Ｓｈｕｄｏｎｇ　（Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　０，’Ｎａｎｊｉｎｇ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｒｅｇｉｏｎ，Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｊｉａａｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ　２１０００２）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｒｕａｎｇａｎｎｉｎｇ　ｏｎ　ｒａｔｓ　ｌｉｖｅｒ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｉｔｓ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　６０　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　６　ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ　ｎｏｒｍａｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｇｉｖｅｎ　ｗｉｔｈ　ｎｏｒｍａｌ　ｓａｌｉｎｅ：ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｉｔｈ　２０％ｃａｒｂｏｎ　ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ　ｐｅａｎｕｔ　ｏｉｌ　１　０　ｍＬ／ｋｇ　ｓｃ，ｔｈｅ　ｉｎｉｔｉａｌ　ｄｏｓｅ　ｗａｓ　ｄｏｕｂｌｅｄ，ｏｎｃｅ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｐｅｒ　５　ｄ，ａｆｔｅｒ　ｉｎｉｔｉａｌ　ｄｏｓｅ，ｕｓｉｎｇ　ｎｏｒｌＴｌａｌ　ｓａｌｉｎｅ　１０　ｍＬ／ｇ　ｉｇ，ｏｎｃｅ　ｄａｉｌｙ　ｆｏｒ　ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ　６　ｗｅｅｋｓ；ｔｈｅ　ｅｏｌｃｈｉｃｉｎｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗｉｔｈ　ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ　０．０１　ｇ／Ｌ；ｔｈｅ　ｈｉｇｈ，ｍｉｄｄｌｅ　ａｎｄ　ｌｏｗ　Ｒｕａｎｇａｎｎｉｎｇ　ｇｒｏｕｐｓ（０．１２，０．０６，０．０３　ｇ／ｋｇ）ｗｅｒｅ　ｇｉｖｅｎ　ＣＣ１４　ｆｏｒ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｓａｍｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｌｅｓｉｏｎ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｇｉｖｅｎ　Ｒｕａｎｇａｎｎｉｎｇ，ｏｎｃｅ　ｄａｉｌｙ．Ａｆｔｅｒ　６一ｗｅｅｋ　ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ，ｓｅｒｕｍ　ＡＬＴ，ＡＳＴ，ＳＯＤ，ＭＤＡ，ＬＮ，ＰＣ　ｌｌＩ，ＨＡ，ＨＹＰ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｏｕｔｉｎｅ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｒａｔ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｒｕａｎｇａｎｎｉｎｇ　ｃｏｕｌｄ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｔ　ｌｉｖｅ￣’　ｆｉｂｒｏｓｉｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ａｎｄ　ｍｉｄｄｌｅ　ｄｏｓｅｓ　ｃｏｕｌｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＡＩＪＴ，ＡＳＴ，ＭＤＡ，ＨＡ，ＬＮ，ＰＣ　１１Ｉ　ｉｎ　ＣＣＩ４～　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｌｉｖｅｒ　ｄａｍａｇｅ　ｒａｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｏｒｂｉｔａｎｔ　ＨＹＰ　ｉｎ　ｌｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｐ＜０．０５　ｏｒ　Ｐ＜０．０１）．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ．ｔｈｅ　ｒｏｕｔｉｎｅ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｘ—　ａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍｉｄｄｌｅ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅｓ　ｏｆ　Ｒｕａｎｇａｎｎｉｎｇ　ｃｏｕｌｄ　ａｌｌｅｖｉａｔｅ　ＣＣ１４一ｉｎｄｕｃｅｄ　ｌｉｖｅｒ　ｃｅｌｌ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｖｅｒｉｔｙ　ｏｆ　ｆｉｖｅｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｄａｍａｇｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｒｕａｎｇａｎｎｉｎｇ　ｉｓ　ｃａｐａｂｌｅ　ｏｆ　ｄｅｌａｙｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｏｆ　ＣＣｈ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｈｅｐａｔｏｆｉｂｒｏｓｉｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｒｕａｎｇａｎｎｉｎｇ；ｈｅｐａｔｉｃ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ；ｃａｒｂｏｎ　ｔｅｔｒａｅｈｌｏｒｉｄｅ（ＣＣ１４）；ｒａｔ　

肝纤维化是一切慢性肝病的病理学基础，是形成肝硬化的必　经阶段”１。因此，抗肝纤维化已成为慢性肝病的重要治疗环节　］。　软肝宁选用党参、姜黄、枸杞子、郁金、山芋肉等９味中药组方，长　期应用于临床。为探讨其作用机制，本研究中通过四氯化碳致肝　纤维化大鼠的影响”１，探讨软肝宁对肝纤维化大鼠的作用机制。　１　材料与方法　１　１　材料　药物及试剂：四氯化碳（ＣＣｈ，分析纯，上海凌峰化学试剂有限公　司，批号为１　１０５２４）；秋水仙碱（昆明制药集团股份有限公司，批号为　２０１　１０３１８）；花生油采用普通食用花生油，试验时配成２０％四氯化碳　花生油；软肝宁（选用党参、姜黄、枸杞子、郁金、山芋肉等９味中药组　成）按人临床剂量用体表面积法换算成大鼠用量后，分别研磨配制成　实验浓度，按每１０ｇ体重０．１　ｍＬ灌胃，１次／天，用时摇匀。ＡＳＴ试剂　盒（批号为２０１１０３１２）、Ａ　试剂盒（批号为２０１１０４２６）、ＨＡ试剂盒　（批号为２０１１０４０９）、ＬＮ试剂盒（批号为２０１１０５１７）、ＰＣⅢ试剂盒（批　号为２０１　１０３２２）、ＨＹＰ试剂盒（批号为２０１　１０６１　８ｊ及ＡＬＢ试剂盒（批　号为２０１　１０３２２），均购自南京建成生物工程研究所。　动物：清洁级Ｗｉｓｔｅｒ雄性大鼠６０只，体重２１０～２３０　ｇ，由南　・南京军区南京总医院课题，项目编号：２０１０Ｍ００６。　京江宁县汤山青龙山动物繁殖场提供，实验动物生产许可证为　ＳＣＸＫ（苏）２０１０—２０１１。　１．２　方法　动物分组和造模方法：将６０只大鼠随机分为６组，每组１０只。　正常对照组（Ａ组）给予生理盐水。模型组（Ｂ组）给予２０％四氯化碳　花生油溶液按每１０　ｇ体重０．１　ｍＬ皮下注射，首剂加倍，每５天注射　１次，首次注射后，用生理盐水按每１０　ｇ体重０．１　ｍＬ灌胃，１次／天，　连续６周。软肝宁高、中、低剂量组（Ｃ　，Ｃ　，Ｃ，组）（０．１２，０．０６，　０．０３　ｇ／ｋｇ）按损伤模型组同法给予ＣＣＩ　造模，然后给予软肝宁给　药，１次／天，连续给药６周。秋水仙碱组（Ｄ组）配成０．０１　ｇ／Ｌ按　６０　ｋｇ体重１０ｍｇ给药，１次／天，连续给药６周。　标本取材及预处理：各组动物在造模或给药后，以１０％水　合氯醛麻醉，打开腹腔，颈总动脉取血６　ｍＬ，３　０００　ｒ／ｍｉｎ　４　ｃＩＣ　离心１５　ｍｉｎ后，分离血清，一２Ｏ℃保存待检。取肝脏，切取左侧　肝脏组织约５　ｍｍ　ｘ　５　ｍｕｌ　ｘ　３　ｍｍ大小投入１０％甲醛固定用作　光镜观察。　１．３　观察指标　肝纤维化指标：用放射免疫法分别测定血清透明质酸（ＨＡ）、　・药物研究・　Ｄｒｕｇ／ｄｅｎｔ／ｆ／ｃｏ＃ｏｎ　

中目荔　

Ｃｈｉｎａ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　２０１３年２月２０日第２２卷第４期　

Ｖｏ１．２２，Ｎｏ．４，Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０，２０１　３　

不同处方注射用甘草酸二铵的稳定性考察　陈爽，谢升谷，郑国钢　（浙江省食品药品检验所，浙江杭州　３１０００４）　摘要：目的考察不同处方的注射用甘草酸二铵的稳定性。方法按２０１０年版《中国药典（二部）》附录《原料药与药物制剂稳定性试验指　导原则》进行影响因素试验，重点考察性状、溶液的颜色、ｐＨ、有关物质等评价指标。结果稳定性试验数据表明，不同处方的样品稳定性　存在较大差异。样品中有关物质随放置时间的变化因处方不同而呈现不同趋势。结论不同处方影响注射用甘草酸二铵的稳定性。　关键词：注射用甘草酸二铵；稳定性；影响因素试验　中图分类号：Ｒ９２７．１１；Ｒ９７５　．５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—４９３１（２０１３）０４—００１４—０２　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｄｉａｍｍｏｎｉｕｍ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｔｅ　ｆｏｒ　Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ｄｉｆｅｒｅｎｔ　Ｆｏｒｍｕｌａｓ　Ｃｈｅｎ　Ｓｈｕａｎｇ，Ｘｉｅ　Ｓｈｅｎｇｇｕ，Ｚｈｅｎｇ　Ｇｕｏｇａｎｇ　（Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｄｏｒ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ，Ｚｈｅｆｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ　３１０００４）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｄｉａｍｍｏｎｉｕｒｎ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｔｅ　ｆｏｒ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｏｒｍｕｌａｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｇｕｉｄｉｎｇ　ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｐｐｅｎｄｉｘ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ（ｅｄｉｔｉｏｎ　２０１０，Ｖｏ１．ＩＩ），ｔｈｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｔｅｓｔ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍａｊｏｒ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ｏｆ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ，ｃｏｌｏｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｐＨ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｄａｔａ　ｏｆ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｔｅｓｔ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｉｇｇｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｅｘｉｓｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｄｉａｍｍｏｎｉｕｒｎ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｔｅ　ｆｏｒ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｏｒｍｕｌａｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｆ　ｄｉａｍｍｏｎｉｕｒｎ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｔｅ　ｆｏｒ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｏｒｍｕｌａｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｒｅｎｄｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｔｉｍｅ　ｄｕｅ　ｔｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｏｒｍｕｌａｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｏｒｍｕｌａｓ　ａｆｆｅｃｔ　ｔｈｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｄｉａｍｍｏｎｉｕｒｎ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｔｅ　ｆｏｒ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｄｉａｍｍｏｎｉｕｍ　ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｔｅ　ｆｏｒ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｓｔａｂｉｌｉｔｙ；ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒ　ｔｅｓｔ