糖果中6种合成色素液相色谱检测方法的改进
高效液相色谱-串联质谱法同时检测化妆品中6种禁用着色剂
高效液相色谱-串联质谱法同时检测化妆品中6种禁用着色剂林维宣;孙兴权;赵雪蓉;徐伟;郭桂媛【摘要】A method of high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) has been established for the simultaneous determination of six forbidden colorants including Sudan IV, Acid Violet 49, Sudan Blue 2, Solvent Red 49, Basic Violet 1 and Pigment Orange 5 in cream and powdery matrix cosmetics. The samples were extracted with ethanol-acetonitrile (3:2, v/v) solution by ultrasonic technique for 20 min, then centrifuged for purification and enriched by nitrogen blowing sequentially. The analytes were isolated on a Luna C18 column (150 mm x2. 1 mm, 5μm) by gradient elution with methanol and 10 mmol/L ammonium acetate as the mobile phases, and detected by MS/MS in the multiple reaction monitoring (MRM) mode. The qualitative analysis was based on the retention time and the relative abundance ratio of the characteristic ions, and the quantitative analysis on calibration curve method. The results showed that the limits of quantification (LOQ, S/N = 10) of the six colorants ranged from 0. 1 to 10μg/kg and the average recoveries were from 86. 67% to 98. 22% with the relative standard deviations (RSDs) from 4. 01% to 7. 01%. The method is simple and rapid with high sensitivity and good reproducibility, and suitable for the determination of the six forbidden colorants in cosmetics.%建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时测定膏状和粉状化妆品中苏丹红Ⅳ、酸性紫49、苏丹蓝2、溶剂红49、碱性紫l和颜料橙5等6种禁用着色剂的检测方法.样品经乙醇-乙腈(3:2,v/v)超声振荡提取20min、离心净化及氮吹浓缩后,在LunaC18色谱柱(150mm×2.1mm,5μm)上进行反相液相色谱分离,以甲醇和10 mmol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱采用多反应监测(MRM)模式进行质谱测定.根据保留时间及质谱图上特征离子的相对丰度比进行定性,外标法定量.结果表明:6种着色剂的定量限(信噪比为10计)为0.1～10μg/kg,回收率为86.67％～98.22％,相对标准偏差(RSD)为4.01％～7.01％.该方法简便、快速、灵敏度高且重现性好,适合于化妆品中禁用着色剂的定性与定量.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2012(030)005【总页数】6页(P527-532)【关键词】高效液相色谱-串联质谱;禁用着色剂;化妆品【作者】林维宣;孙兴权;赵雪蓉;徐伟;郭桂媛【作者单位】辽宁出入境检验检疫局技术中心,辽宁大连 116001;辽宁出入境检验检疫局技术中心,辽宁大连 116001;辽宁出入境检验检疫局技术中心,辽宁大连116001;辽宁出入境检验检疫局技术中心,辽宁大连 116001;大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连 116034【正文语种】中文【中图分类】O658着色剂在化妆品中的作用主要是从美容色彩学和心理学的角度评价，除此之外，尚未发现对人体有任何其他的好处。
液相色谱法检测糕点中五种合成着色剂的条件优化
萃取柱（dikma，150 mg/6 mL）。 1.4 仪器条件
检 测 波 长 430、483、510 nm， 流速 1 mL/min，进样量 20 μL，梯度 洗脱程序见表 1。
表 1 梯度洗脱程序表
时间（min）
1 4 8 10 15
乙腈（%）
5 12 20 5 5
0.02 mol/L 乙酸铵 （%）
0.0
2.5
3.3 流动相的选择 本次研究采用了（a）0.02 mol/L 乙
酸 铵 - 甲 醇、（b）0.05 mol/L 磷 酸 氢 二 铵 - 甲 醇、（c）0.05 mol/L 磷 酸 氢 二铵 - 乙腈、（d）0.02 mol/L 乙酸铵 乙腈流动相体系。结果表明，b、c 体 系中柠檬黄、苋菜红、胭脂红不能出 峰，日落黄、诱惑红出峰但响应很低。 a、d 体系中 5 种目标物均能完全出峰， 响应值良好。但是在 a 体系中胭脂红、 日落黄、诱惑红响应时间间隔较近， 易受到杂峰干扰。对于极性物质乙腈 的溶解洗脱能力比甲醇强，且实际 进样过程中乙腈体系柱压比甲醇体系 小 15%，对色谱柱损耗较小，因此采 用 0.02 mol/L 乙酸铵 - 乙腈体系进行 洗脱。 3.4 流动相梯度选择
水浴条件下氮吹近干，加入 3 mL 甲醇
溶解待用。 2.2 过柱步骤
活 化： 依 次 用 5 mL 甲 醇、5 mL 10% 甲酸水活化；上样：加入待净化 液，弃去流出液；淋洗：加入 5 mL 甲 醇，弃去流出液；洗脱：加入 15% 氨 水甲醇溶液，收集流出液，在 40 ℃条 件下氮吹至干，用初始流动相定容至 1 mL，供分析。 3 结果与分析 3.1 标准曲线与检出限
95 88 80 95 95
2 试验方法
2.1 前处理方法
糖果安全报告人工色素在糖果中的含量
糖果安全报告人工色素在糖果中的含量糖果安全报告：人工色素在糖果中的含量糖果一直以来都是大家喜爱的零食之一，然而，随着人们对食品安全的日益关注，人工色素在糖果中的使用引起了广泛的争议。
本报告将详细分析人工色素在糖果中的含量，并探讨其对人体健康的影响。
一、人工色素在糖果中的种类及含量目前市面上常见的人工色素包括红色、黄色、蓝色、绿色等多种颜色。
这些色素主要由化学合成而成，用于增加糖果的色彩吸引力，吸引消费者的注意。
然而，其是否对人体健康造成危害仍有争议。
根据相关研究，研究人员通过对市售糖果的检测发现，部分糖果中的人工色素含量超出了国家食品安全标准的限制，存在潜在的食品安全隐患。
然而，并非所有的糖果都存在这个问题，有些品牌通过采用更为安全的天然色素来代替人工色素，以确保糖果的安全。
二、人工色素对人体健康的影响1. 潜在致敏风险研究表明，部分人工色素可能引发过敏反应，特别是对某些易敏感的个体。
这些过敏反应可能表现为皮肤瘙痒、食物过敏等症状，给个体的健康带来风险。
2. 潜在致癌风险一些人工色素被怀疑可能与某些癌症的发生有关。
尽管目前科学研究尚未给出明确的结论，但某些人工色素被列为潜在致癌物质，并已在一些国家或地区禁止使用。
三、糖果行业应该采取的措施为了确保糖果的安全，糖果行业应该采取以下措施：1. 加强自我监管糖果生产企业应该严格遵守国家食品安全标准，规范生产流程，确保人工色素的使用量符合标准要求，并提高对糖果加工过程的监控，防止人工色素超标使用。
2. 开展技术研发糖果行业应该加大对天然色素的研发和应用，寻找更为安全的替代品。
天然色素不仅可以提供糖果所需的色彩，而且对人体健康风险较低。
3. 加强消费者教育糖果企业应该积极开展消费者教育，向消费者介绍糖果的生产过程和成分，增强消费者对糖果质量和安全的了解，引导消费者选择健康安全的糖果。
四、消费者应该如何选择糖果作为消费者，在购买糖果时，应该注意以下几点：1. 选择知名品牌知名品牌通常更加注重产品质量和安全，其研发实力和生产工艺都会更为严格，所选糖果的质量和安全性更有保障。
食品中人工合成色素检测方法的改进
科技文苑食品中人工合成色素检测方法的改进□ 高晶晶 内蒙古商贸职业学院摘 要：食用色素添加在食品中可以有效的改善食品色泽，针对近年来市场上滥用人工合成色素的现象，本文对目前食品中人工合成色素的检测方法及在前处理、液相色谱检测条件等方面的改进和研究进展进行了综述。
关键词：人工合成色素 检测 进展1.前言食用色素添加在食品中可以有效的改善食品色泽，从而增加人们的食欲，因此，食用色素在食品加工中具有非常重要的地位。
根据其来源和性质不同，食用色素可分为天然色素和合成色素两种，天然色素是直接从动植物组织中提取的色素，如红曲、叶绿素、姜黄素、胡萝卜素、苋菜和糖色等[1]。
天然色素使用起来比较安全，一般来说对人体无害，其来源比较丰富、色调色彩自然，且对环境无污染，但是天然色素的稳定性差是其最大缺点。
合成色素经有机反应合成制得，因此稳定性较好，能够弥补天然色素稳定性差的缺陷。
除此之外，合成色素还具有成本低廉、着色力强等优点，故而在食品加工中的应用越来越广泛。
合成色素往往是以化工有毒物质如苯、甲苯、萘、蒽等为原料，经硝化、酰化、磺化、偶氮化、还原、重氮化等有机反应合成制得，如合成苋菜红、胭脂红及柠檬黄等等[2]。
因中间体和有害物质的存在，人工合成色素具有一定的毒性，易诱发中毒、泻泄甚至癌症，对人体健康造成危害，故不能多用或尽量不用。
食品中允许使用的合成色素及其使用范围在我国GB 2760-1996《食品添加剂使用卫生标准》中有明确规定，其使用范围限于饮料、配制酒、糖果、糕点和青梅等食品,禁止用于鱼类、乳类、水果、肉类及其制品（红肠肠衣除外）[3]。
然而，为了在节省成本的同时为食品增色，仍有许多不法分子滥用合成色素,如肉禽制品制作过程中为了追求色泽添加人工合成色素等，对人民身体健康和社会稳定造成极大危害。
目前，对于食品中禁用、限用合成色素的检测研究，化学方法主要有:聚酰胺吸附法、碱液直接提取法、碱性醇液直接提取法、饱和硼砂沸水浴提取法、海砂研磨法等[4]；仪器法有薄层色谱法、示波极谱法、高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用法等，其中以高效液相色谱及液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）为主。
高效液相色谱法同时测定糖果中的6种合成色素
高效液相色谱法同时测定糖果中的6种合成色素王淑惠;刘印平;胡平;解彦平;何燕【摘要】高效液相色谱法测定糖果中人工合成色素.采用C18色谱柱,以甲醇和乙酸铵为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,多通道多波长,柱温25℃.结果表明,方法各组分检出限为0.020 7～0.036 1 mg/kg,线性范围为0.005～0.05 mg/mL,加标回收率为88.27％～109.6％,相对标准偏差RSD低于1.82％.该方法操作简便、准确、快速,提高了检出限,能够同时检测6种合成色素的含量,对国标检测方法起到了补充和完善的作用.【期刊名称】《应用化工》【年(卷),期】2013(042)009【总页数】4页(P1723-1725,1728)【关键词】糖果;合成色素;高效液相色谱法;多通道多波长【作者】王淑惠;刘印平;胡平;解彦平;何燕【作者单位】石家庄市疾病预防控制中心,河北石家庄050019;河北省疾病预防控制中心,河北石家庄050021;石家庄市疾病预防控制中心,河北石家庄050019;石家庄市疾病预防控制中心,河北石家庄050019;石家庄市疾病预防控制中心,河北石家庄050019【正文语种】中文【中图分类】TQ414.1;TQ420.6+6;O657.7食用色素基本分为两大类，即食用天然色素和食用合成色素。
食用天然色素直接来自动植物组织，能促进人的食欲，利于消化吸收。
但添加天然色素成本很高，且易褪色，被很多食品生产企业弃之不用。
食用合成色素常以苯、甲醛等化工产品为原料，经磺化，卤化等化合而成，工艺过程复杂，易混入有毒有害物质，具有一定的毒性和致癌性。
但合成色素有成本低廉、色泽鲜艳、着色力强等优点，故仍被广泛应用。
人工合成色素会对人体健康产生极大的危害，许多食用合成色素在生产过程中还可能混入重金属砷和铅，对于生长发育期的少年儿童，若过多长期地食用色素浓的食品，会影响神经系统，容易引起好动、注意力不集中、食欲减退等不良症状［1-3］。
高效液相色谱法同时测定糖果中6种合成着色剂及其铝色淀
４ １ ７ ４・
现代预 防医学 ２ ０ １ ６ 年第 ４ ３ 卷第 ２ ２ 期 Ｍ ｏ ｄ ｅ ｍ Ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， ２ ０ １ ６， Ｖ ｏ １ ． ４ ３，应用 ・
高效液相色谱法同时测定糖果 中 ６ 种合成着色剂 及其铝色淀
３ ６ ３ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ 。结论 该方法简便快速 ， 灵敏度高 ， 适合于糖果 中 ６种合 成着色剂 的测定。 关键 词： 合成着色剂 ； 铝色淀 ； 糖果 ； 高效液相色谱法
中 图分 类号 ： Ｒ １ ５ ５ ． ５ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ３—８ ５ ｏ ７ （ ２ ０ １ ６ ） ２ ２—４ １ ７ ４—０ ５
关 系， 相关系数（ ｒ 值） 大于 ０ ． ９ ９ ９ ， ３ 个浓度水平加标 回收率 为 ７ ０ ． ３ ％ 一１ １ ０ ％， 相对标准偏差 （ Ｒ Ｓ Ｄ） 为０ ． ０ ７ ％ 一１ １ ． ４ ％， 检
出限为 １ ． ０ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ 。应用该方法检测 了 １ Ｏ 件市售糖果样品 ， 检出柠檬 黄、 日 落黄 、 胭脂红 、 诱惑红和亮蓝 ， 其含量为 １ ． ５ ～
ｓ ｏ ｎ ｉ ｃ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ Ｎａ ＯＨ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｅ ｎ ｔ ｉ ｒ ｆ ｕ ｇ ｅ ｄ ． Ｔ ｈ ｅ ｓ ｕ ｐ ｅ ｒ ｎ ａ ｔ ａ ｎ ｔ ｗｅ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｒ ｃ ｈ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｐ ｕ ｉ ｒ ｉ ｆ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｐ Ｗ ＡＸ ｓ ｏ ｌ ｉ ｄ— ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ
ｃ ｏ ｌ ｕ ｍ ｎ ． Ｂ ｙ ａ ｄ ｏ ｐ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｉ ｎ ｅ ￣ ｓ ｉ ｌ ＠Ｏ Ｄ Ｓ 一 ３ Ｃ １ ８ ａ ｓ ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍ ｎ ａ ｎ ｄ ａ ｍｍ ｏ ｎ ｉ ｕ ｍ ａ ｃ ｅ ｔ ａ ｔ ｅ （ ０ ． ０ ２ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ） － ａ ｅ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｌ ｅ ａ ｓ ｔ ｈ ｅ
HPLC法测定五味子中6种合成色素
Strait PUdrmu/utW—10X1—Vol32No.042620HPLC法测定五味子中4种合成色素邱慧珍（南平市食品药品检验检测中心，福建南平373700）摘要：目的高效液相色谱法测定五味子中4种合成色素（新红、苋菜红、胭脂红、诱惑红、酸性红、赤藓红）。
方法比较按24项样品前处理方法（方法：I）、五味子检验国家补充批件检验方法（2007014,方法：I）、GB5909.450010聚酰胺吸附法（方法：皿）和过合成着色剂专用检测小柱法（方法：IV）4种不同的前处理方法，通过高效液相色谱法测定合成色素的含量。
结果文中方法I和方法W回收率均较好，平行样品的相对标准偏差（RSD）值更小，明显优于其他2种前处理方法。
结论实验中按照文中方法I进行前处理，回收高，成本低。
关键词：五味子;合成色素;HPLC；检测中图分类号:R927文献标识码:B文章编号:14000765（2020）02000905Detarmi natian of Sio Synthetic Pigments in Schisandra chisensis by HPLC QIN Hui-chen(Nanping Food and dreg Contral Center,Nanping373700,China)ABSTRACT：OBJECTIVE To determina six syythetle pigments in ScUisandry cUinensis by Uigd peyormmco Pp-uid/nm—0X1130-(HPLC-:METHODS According tv item 1.0sampla pretreatwent methoh(methoh:I-, schisantra inspection national siippUmwitwy batch inspection methoh(2207714,methoh:I-,GB5909.87-9214 polyamiba msorution methoh(methoh:H-ant over-syythetle colorant special test Column methoh(methoh:JV-9 di/went pretreatwent methohs,four di/went pretreatwent methohs were compared,2nd the content of syythetle pigments wus dWwmitwl by HPLC.RESULTS The recaveUes of methoh I ant methoh V were better,pii U the nlu-hva standarU deviation(RSD)v/1ues of parallel samples were smaller,which wus signiq/kly better thun the other two pretreatmenl methohs.CONCLUSION The pretreatwent in the expeUment uccorUing tv the methoh I in the ur-ticle hus Uigd recaven md low cost.KEY WORDS：8cVisatdrn；Sypthetic pigment；HPLC；DeWrmiua/oo传统中医认为五味子具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心等功效。
高效液相色谱法同时测定饮料中6种合成着色剂
高效液相色谱法同时测定饮料中6种合成着色剂作者：张卉来源：《现代食品》 2018年第2期摘要：本文建立了同时检测饮料中6 种合成着色剂（新红、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝）的高效液相色谱测定方法。
采用高效液相色谱法，紫外检测器，WondaSil C185 μm 4.6 mm×250 mm 色谱柱，乙酸铵（0.02 mol/L，pH=4）- 甲醇溶液作为流动相梯度洗脱，变波长程序。
通过对样品前处理方法聚酰胺吸附法的改进，饮料中6 种合成着色剂的加标回收率在84.7% ～ 99.2%，RSD 为1.1% ～ 2.6%。
该方法分离度好，灵敏度高，可用于饮料中6种合成着色剂的同时检测。
关键词：高效液相色谱法；合成着色剂；聚酰胺吸附法；变波长Abstract：This paper established a HPLC method for simultaneous detection with six kinds of syntheticcolorants, include new red,tartrazine, amaranth, ponceau 4R, sunset yellow FCF, brilliant blue FCF. Theconditions are as follows: WondaSil C18 5 μm 4.6 mm×250 mm; ammonium acetate (0.02 mol/L, pH=4) -methanol as the mobile phase gradient elution procedure; variable wavelength program by UV detector ofHPLC. Through the improvement of sample pretreatment method and polyamide adsorption method, therecovery rate of six synthetic colorants in beverages is between84.7% ～ 99.2%, and RSD is 1.1% ～ 2.6%.This method has good separation and high sensitivity and can be used for the simultaneous determination ofsix kinds of synthetic colorants in beverages.Key words：HPLC; Synthetic colorants; Polyamide adsorption; Variable wavelength中图分类号：TS27同时检测饮料6 种合成着色剂的高效液相色谱方法。
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[作者简介] 王红青(1979-),硕士,工程师,主要从事食品检验工作。
【化学测定方法】糖果中6种合成色素液相色谱检测方法的改进王红青,潘向荣,姜荷,黄建萍(杭州质量技术监督检测院,杭州 310019)[摘要] 目的:对糖果中6种合成色素(柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝)的高效液相色谱检测方法进行改进。
方法:样液经聚酰胺粉吸附,用氨水-乙醇溶液解吸附,用乙酸中和后浓缩,定容过滤。
以甲醇和乙酸胺为流动相,在C18色谱柱上分离,梯度洗脱,VWD和DAD检测器串联,紫外254n m及可见600n m检测,外标法定量。
结果:改进样品前处理方法,改变亮蓝的检测波长,亮蓝的响应值显著增加,加标回收实验中,6种混合色素的平均回收率在90%以上。
结论:检测过程中控制每个步骤的实验条件,梯度洗脱,变波长检测,亮蓝的灵敏度显著提高,各色素的分离度良好,回收率满意。
[关键词] 糖果;合成色素;高效液相色谱;检测器串联[中图分类号] O65717+2 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8685(2010)02-0297-03 HPLC determ i n a ti on for6syn theti c food colors i n sweetsWAN G Hong2qing,PAN X iang2rong,J I AN G He,HUAN G J ian2ping(Hangzhou I nstitute of Test and Calibrati on for Quality and Technol ogy Supervisi on,Hangzhou310019,China)[Abstract] O bjecti ve:To i m p r ove the use of HP LC method t o check f or6synthetic food col ors(tartrazine yell ow,a maranth, car m ine,sunset yell ow,allura red,brilliant blue)in s weets1M ethods:Speci m en was abs orbed by polya m ide and disengaged by a mmonia-ethanol-water liquor,on water bath concentrated after neutralized by acetic acid,diluted t o volu me and filtrated1The analytes were separated on ODS-C18colu mn,and a mmoniu m acetate and methanol as mobile phase and separated by gradient e2 luti on,checked by ultravi olet radiati on254n m and visible light600n m1External standard quantificati on1Results:I m p r ove the p reparative p r ocedure,alter the wavelength of brilliant blue and the res ponse value was increased clearly,Standards were added in s weets,and the average coefficient of recoveries was beyond90%1Conclusi on:By contr olling experi m ent conditi on,gradient eluti on,altering wavelength,sensitivity has been increased,and received good separati on and satisfying coefficient of recoveries1 [Key words] S weets;Synthetic col ors;H igh perf or mance liquid chr omat ography;Connecting detect ors 目前,市面上糖果的种类越来越多,它特殊的甜味和鲜艳的色彩深受消费者青睐。
五颜六色的糖果中添加了多种人工合成色素,这些色素具有色泽鲜艳、着色力强、性质稳定和价格便宜等优点,但色素是偶氮类染料,是以煤焦油中分离出来的苯胺染料为原料制成的,长期食用人工合成色素,将会在体内畜积,对肾脏、肝脏产生一定的伤害,因此必须对其加以检测[1]。
国标G B/T5009135-2003[2]中第一法为高效液相色谱法,由于具有灵敏度高,分离好,快速的特点,已被广泛使用。
但在具体操作中,存在不少问题,文献对实验条件的优化已有报道[3～9]。
本文对该法的条件加以探讨和改进,对于检测含糖量高的样品,取得很好的效果。
1 材料与方法111 仪器与试剂Agilent1200高效液相色谱仪(由四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、VWD和DAD检测器组成),真空泵,抽滤器,G3垂融漏斗,0145μm针式滤膜,高速离心机。
甲醇为HP LC级,乙酸铵为分析纯,实验用水为超纯水,色素标准品(国家标准物质中心),甲酸-甲醇混合溶液(4+6),无水乙醇-2%氨水-纯水混合溶液(7+2+1),聚酰胺粉(200目),乙酸为分析纯(36%),柠檬酸溶液(20%),pH6的水(柠檬酸溶液调pH到6),pH4的水(柠檬酸溶液调pH到4)。
112 标准溶液11211 标准储备液的配制 准确称取适量上述各标准物质用pH值为6的水溶解定容。
4℃避光条件下保存。
11212 混合标准过渡液的配制 临用时用水将标准储备液稀释,配成01050g/L的色素水溶液。
113 前处理将糖果敲碎,混合均匀后,称10g到烧杯中,加20m l水,温热溶解,用柠檬酸溶液调pH到6,加热至60℃,在样品溶液中加入聚酰胺粉,搅拌均匀,调成糊状,以G3垂融漏斗抽滤,用60℃pH为4的水洗涤3～5次,然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3～5次,再用水洗到中性,用约30m l的无水乙醇-2%氨水-纯水混合溶液解吸3～5次,洗至无色,收集解吸液于高脚烧杯中,用乙酸中和,加玻璃珠,在沸水浴上浓缩至5%,加水定容至5m l,经0145μm 滤膜过滤,待测。
114 色谱条件色谱柱:ODS -C 18柱(150×416mm,5μm ),C 18预柱,柱温30℃,流动相A 为甲醇,B 为乙酸铵溶液(0102mol/L ),梯度洗脱(见表1),流速110m l/m in,进样量10μl 。
VWD 检测器波长设置时间表见表1;DAD 检测器设置6个检测通道,波长分别为6种色素的最大吸收波长,采集光谱图。
表1 流动相及波长设置流动相时间A%B%波长时间nm 0100109001002542100109091502546100406091516001310095512100600131101090121012541510010902 结果与讨论211 样品前处理方法21111 含糖量高的样品检测时对糖分的处理 糖果含糖量高,按国标方法处理时过滤膜的步骤特别难。
前处理中,甲醇-甲酸溶液洗涤后,用水多冲洗几次,糖分会明显减少。
对于杂质较多的样品(如奶糖),定容后放置冰箱冷藏10m in,6000r pm 离心5m in,上清液经0145μm 滤膜过滤,杂质会明显减少。
21112 聚酰胺粉的使用量 聚酰胺粉的使用量根据样品中色素的含量而改变。
一般样品,聚酰胺粉能调成糊状即可,色素含量高的样品,可以减少样品量或增加聚酰胺粉的使用量。
21113 色素的吸附与解吸附 样品中6种色素在60℃,微酸环境下被聚酰胺粉吸附,经过甲醇-甲酸混合溶液洗滤,主要起除去样品中的天然色素、沉淀蛋白质类物质的作用,对合成色素的影响不大,不像文献[9]中说的会严重降低亮蓝的回收率。
21114 解吸液的浓缩 色素解吸液采用高脚烧杯在沸水浴上浓缩,加玻璃珠,既节省时间,又防止液体溅出。
浓缩至5%为宜,剩余体积多,乙醇挥发不全,会造成干扰,并且会减少冲洗烧杯壁的溶剂,而影响定容。
若蒸干,既浪费时间,又影响回收率。
212 VWD 和DAD 的串联可变波长紫外检测器VWD 比DAD 检测器灵敏度高,但DAD 能采集光谱从而进行辅助定性,故采用VWD 和DAD 的串联的方式,DAD 光谱定性,VWD 定量,提高灵敏度的同时增加定性的可靠性。
213 波长的选择取01050g/L 的6种色素的混标10μl 注入液相色谱仪,采集光谱图,在可见光区有各自的最大吸收波长λmax :柠檬黄428n m,苋菜红520n m,胭脂红510n m,日落黄482n m,诱惑红507n m,亮蓝627n m 。
同样,按上述步骤,按照G B /T5009135-2003第一法选择254n m 波长检测,干扰大,亮蓝的灵敏度很低。
实验表明,除亮蓝在最大吸收波长下测定的谱图峰面积比254n m 条件下的灵敏度有明显提高外,其他色素并没有很大的差别。
文献[9]也证实了这一点。
因为Agilent1200的VWD 检测器最大波长为600nm,也考虑到方法设置的便利性,故亮蓝选用600n m,而其他色素选择254n m 。
214 色谱柱的选择考虑到方法的通用性,既满足多种色素的分离,抗干扰能力强,又节省时间和试剂,选择150×416mm 、5μm 的色谱柱,15m in 即完成6种色素的检测。
215 方法的精密度与回收率实验在已知不含色素的糖果制成的样品溶液中,加入一定量的标准混合溶液(各色素均为011mg ),按上述方法进行处理和检测,以峰面积来计算6种色素的添加回收率和相对标准偏差(见表2)。
各色素平均回收率均在90%以上。
标准品谱图见图1。
表2 回收率实验和精密度(n =3)名称平均回收率(%)相对标准偏差(%)柠檬黄951011025苋菜红941201875胭脂红951701765日落黄941201925诱惑红931611256亮蓝 941021354图1 标准品谱图216 方法的线性范围和检出限准确吸取一定量上述的混合标准过渡液,配制标准系列溶液。
在上述色谱条件下,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线,方法的线性范围、线性回归方程、相关系数和检出限见表3。
表3 方法的线性范围、线性回归方程、相关系数和检出限名称线性范围(ppm )线性方程相关系数r 2检出限(ppm )柠檬黄1～50Y =30900X -11120199990130苋菜红1～50Y =23843X -61120199980140胭脂红1～50Y =23103X -11250199990140日落黄1～50Y =21281X -21750199990140诱惑红1～50Y =16898X -01410199960150亮蓝 1～50Y =40887X -21870199970125最低检出限的信噪比为5:1。