高效液相色谱法测定含量示例的方法再确证
高效液相色谱法测定苦参子中苦参碱的含量
2019 年第 6 卷第 89 期2019 Vol.6 No.89177临床医药文献电子杂志Electronic Journal of Clinical Medical Literature高效液相色谱法测定苦参子中苦参碱的含量殷 丹（通化市食品药品检验所抗生素室，吉林 通化 134100）【摘要】目的 为确保苦参子药材质量的稳定性、专属性及可控性，对苦参子中含有的有效成分苦参碱进行检测；方法 采用高效液相色谱法检测药材中苦参碱的含量，并进行方法学考察；结果 回归方程为Y=770.6655x-3436.2712，r=0.9999，苦参碱线性范围为26.0250～416.4000 ng ，平均回收率为94.63%，RSD=1.7%；结论:采用高效液相色谱法检测苦参子中苦参碱，该方法简便，准确，专属性强。
【关键词】高效液相色谱法；苦参子；苦参碱；方法学【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.89.177.021 方 法1.1 仪器与试药日本岛津LC-2010AHT 型高效液相色谱仪；苦参碱对照品（中国食品药品检定研究院）， 批号：110805-200508。
甲醇、乙腈、无水乙醇、磷酸为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
1.2 色谱条件色谱柱：迪马Platisil NH2（4.6×250 mm ，5 µm ）；以乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液（84：7：9）为流动相；检测波长为220 nm 。
1.3 对照试剂溶液的制备取苦参碱对照品适量，精密称定，加乙腈-无水乙醇（80:20）混合溶液制成每1 mL 含苦参碱10 µg 的溶液，即得。
1.4 供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）0.3 g ，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液0.5 mL ，精密加入三氯甲烷20 mL ，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W ，频率33 kHz ）30分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL ，加在中性氧化铝柱（内径1 cm ，5 g ，100～200目）上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（7：3）混合溶液各20 mL 洗脱，合并收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇适量使溶解，转移至10 mL 量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得[1]。
高效液相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷的含量
高效液相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷的含量目的：建立硫酸氢氯吡格雷的含量测定方法。
方法：采用HPLC法，色谱柱Sino Chrom ODS-BP（4.6 mm×200 mm，5 μm），流动相：1%三乙胺（pH=4.0）-乙腈（25∶75），检测波长：225 nm，流速：1.0 ml/min。
结果：硫酸氢氯吡格雷进样量在0.48～0.72 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9)。
结论：本法简便、准确，重复性好，可用于该产品的质量控制。
[Abstract] Objective: To establish a method for determination the content of Clopidogrel hydrogen sulfate．Methods: Sino Chrom ODS-BP column (4.6 mm×200 mm，5 μm) was used，mobile phase was 1％triethylamine (pH=4.0)-acetontrile (25:75)，detection wavelength was 225 nm．Results: Clopidogrel hydrogen sulfate sample size located 0.48-0.72 μg，and favourable linear correlation (r=0．999 9) was showed．The flow rate was 1.0 ml/min. Conclusion: The method is convenient and accurate. Meanwhile, it also has good reproducibility, may be used to quality control of Clopidogrel hydrogen sulfate．[Key words] HPLC; Clopidogrel hydrogen sulfate; Content determination硫酸氢氯吡格雷（Clopidogrel）是一种血小板聚集抑制剂，临床上用于预防和治疗因血小板高聚集状态引起的心、脑及其他动脉的循环障碍疾病[1-3]。
高效液相色谱法含量测定操作规程全文编辑修改
精选全文完整版可编辑修改高效液相色谱法含量测定1检验方法高效液相色谱法2检验原理高效液相色谱法系采用高压输液泵，将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对样品进行测定的色谱方法。
注入样品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依此进入检测器，由数据处理系统记录和处理色谱信号。
3检验试剂甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、纯水（高纯水）、磷酸等。
4供试品溶液制备取要测试的供试品适量，参照《药典》及《制剂规范》，用规定的溶剂适宜的提取精制方法，配制成一定浓度的供试品溶液。
供试品溶液注入色谱柱前要经适宜的0.45nm的滤膜滤过。
5对照品溶液制备根据供试品所要测定的成分取相应的对照品，用适宜的溶剂配制成相应浓度的对照品溶液。
6流动相配制用高纯度的试剂配制流动相，水应为新鲜配制的高纯水。
配制好的流动相通过适宜的0.45nm 的滤膜滤过，用前脱气。
7操作7.1打开自动进样器、检测器、泵、柱温箱，进入工作站。
7.2自动进样器排气自动进样器排气用50%甲醇（用前脱气），点击自动进样器界面上的purge键，自动排气25分钟。
7.3泵排气分析界面中，设置方法参数，下载方法参数。
用流动相冲洗吸滤头，再把吸滤头浸入流动相中，逆时针旋转排气阀90-180度，点击purge键，排气3-4分钟，顺时针旋转排气阀90-180度，激活仪器。
7.4进样操作7.4.1.将对照品溶液和供试品溶液分别置于样品瓶中，盖上带有垫片的瓶盖，顺时针旋紧，7.4.2将样品瓶按顺序放置于样品瓶架上。
7.4.3设置方法参数，选择波长、柱温、流速、结束时间等，下载并保存方法文件，待色谱系统充分稳定，基线平直。
7.4.4设置批处理分析表。
分析界面主项目中，点击批处理分析，依次设置样品瓶号、样品瓶架号、样品名、方法文件、数据文件、进样体积，保存批处理分析表，点击批处理分析开始，开始数据采集。
7.4.5不同浓度的对照品溶液和同一浓度的供试品溶液应分别进样不少于5针。
高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸含量
高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸含量一、本文概述本文旨在探讨高效液相色谱法（HPLC）在大豆中游离氨基酸含量测定中的应用。
作为一种重要的植物蛋白来源，大豆中的氨基酸组成对于其营养价值及食品工业应用具有重要意义。
游离氨基酸作为大豆蛋白质水解的产物，其含量直接反映了大豆的蛋白质质量和营养价值。
因此，准确测定大豆中游离氨基酸的含量对于评估大豆品质及开发高附加值产品至关重要。
高效液相色谱法作为一种高效、准确的分离分析技术，在氨基酸分析领域具有广泛应用。
本文将详细介绍高效液相色谱法的基本原理、样品处理方法、色谱条件优化以及结果计算与分析等方面的内容，并通过实验验证该方法的可行性和准确性。
本文还将讨论高效液相色谱法在大豆游离氨基酸含量测定中的优势及局限性，以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。
二、实验材料与方法（1）大豆样品：选择新鲜、无病虫害、无杂质的大豆作为实验材料，经过清洗、烘干、破碎后备用。
（2）试剂：实验所需试剂包括高效液相色谱仪用流动相（如乙腈、甲醇等）、衍生化试剂（如OPA、FMOC等）、标准品氨基酸等，均为分析纯或更高纯度。
（3）仪器：高效液相色谱仪（配备紫外检测器或荧光检测器）、离心机、涡旋混合器、水浴锅、移液枪等。
（1）样品处理：称取适量大豆样品，加入适量的水或缓冲液，进行匀浆处理。
然后，将匀浆液进行离心，取上清液作为游离氨基酸提取液。
（2）衍生化处理：取一定体积的游离氨基酸提取液，加入适量的衍生化试剂，进行衍生化反应。
衍生化反应的目的是将氨基酸转化为易于检测的衍生物，提高检测灵敏度和准确性。
（3）高效液相色谱分析：将衍生化后的样品进行高效液相色谱分析。
选择合适的流动相和色谱柱，设置合适的检测波长或激发/发射波长，记录色谱图和峰面积。
（4）数据处理：根据标准品氨基酸的色谱图和峰面积，绘制标准曲线。
然后，根据样品的色谱图和峰面积，结合标准曲线，计算样品中游离氨基酸的含量。
本实验采用高效液相色谱法测定大豆中游离氨基酸的含量，通过样品处理、衍生化处理、高效液相色谱分析和数据处理等步骤，实现对大豆中游离氨基酸的快速、准确测定。
高效液相法测定尼莫地平片剂的含量
高效液相法测定尼莫地平片剂的含量目的通过HPLC方法测定尼莫地平片剂的含量。
方法在色谱条件：选择Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，流动相：甲醇∶水（68∶32），检测波长238 nm，进样量10 μl，1.0 ml/min流速，柱温为室温（25℃）条件下进行检测。
结果尼莫地平在11.07～55.35 μg/ml范围内线性关系良好，线性方程为：Y=6921.2X-4311.6（r=0.9994），平均回收率為100.97%，RSD=1.5%。
结论采用高效液相色谱方法，可有效评估尼莫地平片剂中尼莫地平的含量，本法简单、灵敏度高、结果准确。
标签：HPLC法；尼莫地平；含量尼莫地平（Nimodipine，NMD）为1，4双氢吡啶类钙通道拮抗剂，主要用于扩张脑血管及改善脑功能[1]，该药难溶于水，属脂溶性药物[2]。
尼莫地平片剂测定多以紫外分光光度法为主，但因该法存在有关物质方面干扰，专属性较差[3]，本文由此出发考察高效液相法在其含量测定方面的应用效果。
1 资料与方法1.1仪器与试药岛津LC-2010CHT 型高效液相色谱仪；超声波清洗器；甲醇由霍尼韦尔贸易（上海）有限公司提供，为色谱醇；尼莫地平对照品（中国药品生物制品检定所，批号：160112-160223）；尼莫地平片（牡丹江灵泰药业股份有限公司，国药准字H23022380，规格：20 mg，批号：160123、160321、160628）。
1.2方法1.2.1高效液相色谱法1.2.1.1色谱条件①波长：选择以流动相做空白对照，于200～400 nm波长下对尼莫地平对照品溶液进行全波长扫描，结果显示在238 nm处尼莫地平有最大吸收；以空气为对照，对流动相进行全波段扫描显示，其在238 nm内基线平行，无干扰，故确定检测波长238 nm。
②色谱柱：选择Agilent C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇∶水（68∶32），检测波长238 nm，进样量10 μl，1.0 ml/min流速，柱温为室温（25℃）。
高效液相色谱法测定含量示例的方法再确证
高效液相色谱法测定含量示例的方法再确证目的：确证用反相高效液相色谱法测定头孢氨苄含量的方法有效性和准确性。
方法：以Diamonsil CLC-ODS（150mm x 6mm，10 lm）为色谱柱，水-甲醇- 3.89% 醋酸钠溶液- 4% 醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相，检测波长为254 nm，外标法定量。
结果：头孢氨苄浓度线性范围为0.02～0.20mg / ml，相关系数r= 0.9991，方法重复性试验RSD为1.42%。
结论：该方法可简单高效地完成，结果准确性好、稳定可靠，确证高效液相色谱依然为头孢氨苄制剂的质量控制中有效可靠的方法。
标签：头孢氨苄高效液相色谱法头孢氨芐（Cefalexin，又译先锋霉素Ⅳ、头孢力新等）是一种半合成的第一代口服头孢霉素类类抗生素药物，化学名（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸，化学式C16H17N3O4S，在临床上广为使用。
其含量测定在旧版的中国药典（1995年版）采用碘量法○1。
但此法不仅操作步骤繁多，费工费时，干扰因素多；然后人们发明采用高效液相色谱法内标法测定的方法，但内标物保留时间过长，依然存在问题。
最后人们又发现采用高效液相色谱法，用外标法测定其含量，方法操作简单方便、数据准确可靠，灵敏度较高，重复性好，最终获得了较为满意的结果○2。
现在本文对这个方法进行确证，以确定该方法的有效性和准确性。
1.仪器与试药分析天平（precisa instrument ltd switzer land xs 225a precisa ），高效液相色谱柱（diamonsic C18 250 * 46mm），检测器（UVD 170v），泵（P680 HPLC pump），头孢氨苄胶囊（广州白云山制药总厂批号：2110102）2. 色谱条件用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂：水-甲醇- 3.89% 醋酸钠溶液- 4% 醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相；检测波长为254nm；理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500。
高效液相色谱法测定三七伤药片中人参皂苷Rg1的含量
高效液相色谱法测定三七伤药片中人参皂苷Rg1的含量摘要】目的：利用高效液相色谱法测定三七伤药片中人参皂苷Rg1的含量。
方法：分别制备对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液用于研究分析。
其中对照品溶液为人参皂苷Rg1的甲醇溶液，供试品溶液为三七伤药片去糖衣后的甲醇溶液，阴性样品溶液为不含三七的阴性样品制备的溶液，运用高效液相色谱法测定三七伤药片中的人参皂苷Rg1含量，并对该方法的精确度和回收率进行测定。
结果：经测定，供试品溶液中的人参皂苷Rg1含量约为每片1.68毫克，回收率高达97.8%。
结论：使用高效液相色谱法测定三七伤药片中的人参皂苷Rg1含量具有很高的准确率，较《中华药典》有一定的先进性。
【关键词】高效液相色谱法；三七伤药片；人参皂苷Rg1 三七伤药片是专治跌打损伤的中成药，具有消肿化瘀、散瘀止痛的功效，其主要成分为中药材三七，辅以草乌、接骨木等，在现行的检验标准中，主要对其含有的柚皮苷含量进行了规定，而人参皂苷Rg1的含量的测定并没有说明，本次研究，拟用高效液相色谱法对三七伤药片中的人参皂苷Rg1含量进行测量，观察其测量效果，现做如下报道： 1 资料与方法 1.1一般资料本次实验中，需要用到的仪器、材料和药品如下：高校液相色谱仪一台，电子天平一台，超声波仪一台，人参皂苷Rg1纯乙腈、纯化水等。
在实验前，需要先制备实验所需的各种溶液，包括对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液。
对照品溶液是纯人参皂苷Rg1的甲醇溶液，供试品溶液是去掉糖衣的三七伤药片研磨后的甲醇水溶液。
阴性样品溶液是去掉三七成分的三七伤药片研磨后的甲醇水溶液。
1.2试验方法 1.2.1专属性实验专属性的实验目的是为了验证三七伤药片中的其他中药成分是否对人参皂苷Rg1的含量测定具有干扰作用，具体方法是取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10微升，在一定的色谱条件下，借助高效液相色谱仪进行检定。
经过测定可知，高效液相色谱法测量三七伤药片中的人参皂苷Rg1含量不受其他成分的影响[1]。
高效液相法进行含量测定的实施计划
高效液相法进行含量测定的实施计划
目标：建立并验证高效液相色谱法（HPLC）用于测定样品中特定成分含量的分析方法。
步骤：
1. 方法开发
选择合适的流动相、色谱柱和检测波长。
优化色谱分离条件，包括流速、梯度洗脱和柱温。
2. 方法验证
线性度：绘制已知浓度样品的峰面积与浓度的关系图，评估方法的线性范围。
精密度：重复分析相同样品，计算峰面积的相对标准偏差（RSD）。
准确度：分析已知浓度的样品，计算测定值与真实值的偏差。
选择性：评估方法是否能区分目标成分和样品中的其他成分。
稳定性：在不同的时间点分析同一批样品，评估方法的稳定性。
3. 样品制备
根据样品基质，选择合适的样品前处理方法，如萃取、过滤或衍生化。
优化样品制备条件，以最大程度地提取目标成分并减少基质干扰。
4. 仪器校准
使用已知浓度的标准溶液校准HPLC系统。
定期验证校准曲线，以确保方法的准确性。
5. 样品分析
根据验证后的方法，分析样品并计算目标成分的含量。
使用适当的定量方法，如峰面积法或外标法。
6. 数据分析
处理HPLC数据，包括峰积分、定量计算和统计分析。
根据验证结果，评估分析结果的可靠性和有效性。
7. 报告
生成分析报告，包括样品信息、分析条件、结果和任何相关的观察结果。
报告应符合相关法规和指南。
持续改进
定期审查和更新方法，以提高性能和适应新的发现。
接受持续的培训，以保持对HPLC技术的最新了解。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
高效液相色谱法测定含量示例的方法再确证作者：张建芝冯顺
来源：《维吾尔医药》2013年第07期
摘要：目的：确证用反相高效液相色谱法测定头孢氨苄含量的方法有效性和准确性。
方法：以Diamonsil CLC-ODS（150mm x 6mm，10 lm）为色谱柱，水-甲醇- 3.89% 醋酸钠溶液- 4% 醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相，检测波长为254 nm，外标法定量。
结果：头孢氨苄浓度线性范围为0.02～0.20mg / ml，相关系数r= 0.9991，方法重复性试验 RSD为
1.42%。
结论：该方法可简单高效地完成，结果准确性好、稳定可靠，确证高效液相色谱依然为头孢氨苄制剂的质量控制中有效可靠的方法。
关键词：头孢氨苄高效液相色谱法
头孢氨芐（Cefalexin，又译先锋霉素Ⅳ、头孢力新等）是一种半合成的第一代口服头孢霉素类类抗生素药物，化学名（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-氨基-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸，化学式C16H17N3O4S，在临床上广为使用。
其含量测定在旧版的中国药典（ 1995年版）采用碘量法○1。
但此法不仅操作步骤繁多，费工费时，干扰因素多；然后人们发明采用高效液相色谱法内标法测定的方法，但内标物保留时间过长，依然存在问题。
最后人们又发现采用高效液相色谱法，用外标法测定其含量，方法操作简单方便、数据准确可靠，灵敏度较高，重复性好，最终获得了较为满意的结果○2。
现在本文对这个方法进行确证，以确定该方法的有效性和准确性。
1.仪器与试药
分析天平（precisa instrument ltd switzer land xs 225a precisa ），高效液相色谱柱（diamonsic C18 250 * 46mm），检测器（UVD 170v），泵（P680 HPLC pump），头孢氨苄胶囊（广州白云山制药总厂批号：2110102）
2. 色谱条件
用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂：水-甲醇- 3.89% 醋酸钠溶液 - 4% 醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相；检测波长为254nm；理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500。
3. 实验试剂制备
3.1 对照品储备液的制备：对照品储备液的制备：取头孢氨苄对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，为对照品储备液。
3.2 供试品溶液的制备：去装量差异项下的内容物，混合均匀，精密量取适量（约相当于头孢氨苄0.1g），置于 100ml 容量瓶里，加流动相适量，充分振摇使溶解，再加流动相稀释至
刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml置10ml量瓶中。
用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
3.3 对照品溶液制备：精密量取对照品储备液1ml置10ml量瓶中。
用流动相稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。
3.4 平均内容物：取出20粒并求得平均内容物的量为 0.2539g。
3.5 标示量：0.125g。
4. 效能指标试验
4.1 线性关系（标准曲线的制备）：分别精密量取对照品储备液0.2 ml， 0.4 ml， 0.8 ml， 1.6 ml， 2.0 ml置 10 ml量瓶中。
用流动相稀释至刻度，摇匀，得梯度浓度对照品溶液
○3。
在上述色谱条件下进样测定峰面积。
以对照品浓度作横坐标（X），峰面积作为纵坐标（Y）得线性回归方程；y = 112.02x + 1.9543 r = 0.9991.表明头孢氨苄在 0.02 mg/ml～0.2 mg/ml 的范围内具有良好的线性关系○4图.1。
4.2专属性：按处方比例，取出除头孢氨苄的其他药味按照生产工艺制备阴性样品。
按照“供试品溶液的制备”项下制备，按前述色谱条件分别对对照品溶液，供试品溶液进样测定。
观察色谱图（图.2）。
4.3 方法重复性试验：重复取供试品六份，按“供试品溶液制备”项下制备供试品溶液。
分别进样测定。
计算头孢氨苄的含量（表2）。
结果：每粒平均含量为 0.126g。
RSD为 1.42% 。
该方法的精密度。
5. 供试品的测定
取供试品溶液3份，分别进样，测得3组标示量（%）分别为 96.4、100.4、108.5，平均值标示量（%）为107.7，属于合理范围。
6. 讨论
碘量法要经过复杂的操作，繁多的提取分离处理步骤，干扰会十分严重，而且比色时实验人为带入的误差很大。
本文进行确证研究的高效液相色谱法测定复方头孢氨苄胶囊中的头孢氨苄含量的方法，省去前方法的复杂前处理，缩短实验时间，具有简单方便、高效率、数据准确可靠等特点，更加合理优越，通过对专属性实验的色谱图分析，可以排除了干扰物质对头孢氨苄含量的测定不利影响，同时流动相配比相对简单，不需要添加缓冲盐类物质，方便清洗柱子。
因此可以得出结论，确证本法为测定头孢氨苄含量的准确有效的方法。
参考文献：
[1] State Pharmacopoeia Commission of the P. R. of China.Pharmac opoeia of the People’s Republic of China （中华人民共和国药典） [S]. 1995. 二部： 177.
[2] 王雁，孙晓翠，韩玉复. 高效液相色谱法测定复方头孢氨苄胶囊的含量[J]. 中国药事.2000年第14卷第4期.
[3] 罗楠，刘放南，万秀珍，谭力等. 反相高效液相色谱法测定大鼠头孢氨苄血药浓度[J]. 医学研究生学报. 2006年9月第19卷第9期.
[4] 马萼，刘燕湘，宋五四. 人血浆中头孢氨苄浓度高效液相色谱法测定[J]. 中国感染控制杂志2006年4月第5卷第2期.
[5] 赵明，孙炜欣，朱文军. 高效液相色谱法测定复方头孢氨苄片中头孢氨苄的含量[J]. 药品检测.2003年第12卷第10期.。