高效液相色谱法测定单糖组成
薄层色谱和高效液相色谱用于矮地茶多糖的单糖组成分析
薄层色谱和高效液相色谱用于矮地茶多糖的单糖组成分析目的分析矮地茶多糖中的单糖组成及摩尔比值。
方法采用硫酸水解多糖，1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化高效液相色谱法和薄层色谱法同时分析矮地茶多糖的单糖组成和摩尔比，Agilent TC-C18色谱柱，流动相：乙腈-pH 为7.0的磷酸缓冲液（20∶80，0.1%），检测波长：250 nm，流速：1 mL/min；柱温：25℃。
结果薄层色谱法和高效液相色谱法结果皆表明矮地茶多糖由葡萄糖（Glu）和半乳糖（Gal）组成，高效液相色谱法显示矮地茶多糖中Glu和Gal 的摩尔比值约为1∶2.36。
结论薄层色谱法可用于矮地茶多糖的单糖组成的快速鉴别，方法快速、准确；高效液相色谱法可用于矮地茶多糖中单糖组成的鉴别和摩尔比值测量，方法简单、灵敏、分离效率高。
[Abstract] Objective To analyze the monosaccharide composition and the molar ratio of Ardisia japonica Polysaccharide （AJP）. Methods Sulfuric acid was used to hydrolyze AJP. Pre-column 1-Phenyl-3-methyl-5-pyrazalone （PMP）derivation HPLC and TLC method were developed to determine the monosaccharide compositions and the molar ratio of AJP. The mobile phase was acetonitrile-pH 7.0 phosphate buffer （20∶80，0.1%）with Agilent TC-C18 column. The detection wavelength was 250 nm，the flow rate was 1 mL/min，and the column temperature was 25 ℃. Results The results of TLC and HPLC analysis showed that AJP were consisted of glucose （Glu）and galactose （Gal）. Meanwhile，HPLC analysis showed that the molar ratio of AJP was 1∶2.36. Conclusion TLC which is fast and accurate，can be used for the rapid identification the monosaccharide composition in AJP. HPLC which is simple，sensitive and high separation efficiency，can be used for the quantitative analysis of the monosaccharide composition in AJP.[Key words] Ardisia Japonica；Polysaccharide；HPLC；TLC；Monosaccharide Composition矮地茶是紫金牛科植物Ardisia japonica（Thumb.）Blume的干燥全草，收錄于《中国药典》2015年版[1]，具有止咳平喘、清利湿热、活血化瘀的功效。
柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成
图 3 当归 多糖 经 TFA 水 解的 时 间对 各组成单糖的测定影响
F ig. 3 The e ffects of com ponent m onosacchar ides o f A ngelica polysaccha rides fo r different trifluoacetic ac id ( T FA ) hydro lysis tim e 1. 葡萄糖醛酸 ( glu cu ron ic acid) ; 2. 甘露糖 ( m annose) ; 3. 鼠李糖 ( rhamn ose); 4. 半乳糖 醛酸 ( ga laduron ic acid ) ; 5. 半 乳 糖 ( galactose); 6. 葡 萄 糖 ( g lucose) ; 7. 阿 拉 伯 糖 ( arabonose) 。
3 结果与讨论
3. 1 单糖对照品 PM P衍生物的 HPLC 分离 为实现当归多糖各组成单糖的高效分离, 本实验对当归多糖可能包含的 G lc、A ra、M an、G al、Rha、
Xyl、G lcUA、GalUA 及内标 Fuc等 9种标准单糖 PMP 衍生物的高效液相色谱分离条件进行了优化。结 果表明, 磷 酸缓 冲液 ( KH2 PO4-N aOH ) 的 pH 6. 9, 时 间梯 度 为 0→ 10→ 30 m in 和 相 应浓 度 梯度 为 0→ 8% → 20% 溶剂 B的梯度洗脱模式是分离此 9种单糖衍生物的较理想色谱分离条件。
1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 ( PM P) 柱前衍生化 H PLC 测定单糖含量的方法经过了不断地发展和完 善 [ 3~ 7] , 并成功地用于毛细管电泳分析。 PMP 是还原性糖的最好衍生化试剂之一, 如 PM P 衍生物不易 裂解, 分析时不产生异构峰, 且在 250 nm 处有强烈的紫外吸收。本研究采用 PMP 衍生化方法, 用常规 的紫外检测器和 C18烷基键合柱, 建立适于当归多糖单糖组成测定的 HPLC 新方法, 达到灵敏、快速、准 确、方便和可在线大批量分析的目标。
柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成
柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远 陈 君 李 萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘 要 报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。
采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。
对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。
关键词 单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱 2001207204收稿;2002201209接受1 引 言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。
已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。
由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。
12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1～3。
Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。
本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。
2 实验部分2.1 仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。
衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。
色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。
单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。
高效液相色谱法测定木糖结晶母液中单糖
ｍｏ ｎ ｏ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｉ ｒ ｄ ｅ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｔ ｈ ｅ ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｈ ｙ ｄ ｒ ａ ｔ ｅ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍ ｎ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ Ｖ（ ａ ｅ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｌ ｅ ） ： Ｖ（ ｗ ａ ｔ ｅ ｒ ） ＝ ７ ０ ： ３ ０ ａ ｔ ａ ｌ ｆ ｏ ｗ ｒ ａ ｔ ｅ ｆ ｏ １ ． ０ ｍ Ｌ ・ ｍｉ ｎ 一 ，
Ｆｅ ｂ．２ ０１ ３
２月
文章编号 ： １ ０ ０ ２ — ２ ０ ９ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ０ １ — ０ ０ ４ １ — ０ ４
高效液相色谱法测定木糖结晶母液 中单糖
孙蕊 ， 贾鹏 禹 ， 靳革 。 崔新宇
（ １ ． 黑龙 江八一农垦大学动物科技学院 ， 大庆 １ ６ ３ ３ １ ９ ； ２ ． 黑龙江八一农垦大学黑龙江省农产 品加工工程技术研究中心；
Ｓ ｕ ｎ Ｒｕ ｉ ， Ｊ ｉ ａ Ｐ ｅ ｎ ｇ ｙ ｕ ２ ， Ｊ ｉ ｎ Ｇｅ ３ ，Ｃｕ ｉ Ｘｉ ｎ ｙ ｕ ３
（ １ ． Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ａ ｎ ｉ ｍ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ＆ Ｖ ｅ ｔ ｅ ｉ ｒ ｎ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｈ ｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ｂ ａ ｙ ｉ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｓ ｒ ｉ ｔ ｙ ． Ｄ ａ ｑ ｉ ｎ ｇ １ ６ ３ ３ １ ９ ；
ｗ ａ ｓ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ．Ｔ ｈ ｅ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｗ ａ ｓ ｐ ｒ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｓ ｏ ｌ ｉ ｄ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ （ Ｓ Ｐ Ｅ ）ｗ ｉ ｔ ｈ Ｅ Ｎ Ｖ Ｉ － Ｃ ａ ｒ ｂ （ Ｓ ｕ ｐ ｅ ｌ ｃ ｏ ） ．Ｔ ｈ ｅ
柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成
柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成王媛媛;张晖;杨俊松;宗智慧【摘要】Objective To establish a precolumnderivatization procedure with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone ( PMP )-high performance liquid chromatography ( HPLC ) method for the determination of the monosaccharide composition of nine polysaccharides.Methods The nine polysaccharides were hydrolyzed, derivatized by PMP and analyzed by HPLC with the Inertsil ODS-SP C18 column(260mm ×4.6mm,5μm).The mobile phase was the 20%triethylamine-buffer solution withKH2PO4(pH=6.9),and the flow rate was 1.0 ml/min.The UV absorbance was detected at a wavelength of 254 nm,and the injection volume was 10μl with the column temperature 30℃.Results The method was successful in the separation of the mixture monosac-charide standards.The calibration line of each monosaccharide had a good relationship.And the precision, stability and reproducibility were also good.The nine polysaccharides were composed of different monosac-charide and the contents had some difference.Conclusion The method was accurate and stable for the deter-mination of the monosaccharide composition and content of nine polysaccharides.%目的：建立1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（ PMP）柱前衍生化-高效液相色谱法（ HPLC）对甘草多糖等9种多糖的单糖组成成分进行分析。
枸杞多糖组成及含量测定方法的改进
枸杞多糖组成及含量测定方法的改进1. 方法原理该研究旨在改进枸杞多糖组成及含量的测定方法。
将枸杞多糖进行水解衍生化处理，然后利用气相色谱法（GC）和高效液相色谱法（HPLC）测定单糖组成。
通过分析单糖组成结果，可以判断枸杞多糖的真伪。
在此基础上，根据各单糖组成物质的量比，配制单糖混合溶液，并使用苯酚硫酸比色法绘制标准曲线，从而建立枸杞多糖含量的测定方法。
通过该方法测定的枸杞多糖含量为30，而仅以葡萄糖作为标准溶液，使用硫酸苯酚法绘制标准曲线时，枸杞多糖含量仅为14。
这种改进的方法可以更准确地测定枸杞多糖的含量，并区分真伪枸杞多糖。
2. 实验材料和仪器枸杞样本：选用宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）为实验材料，购买自当地市场，经鉴定为优质品种。
试剂：包括但不限于葡萄糖、硫酸、苯酚、盐酸、乙醇等，均为分析纯。
高效液相色谱仪（HPLC）：配备示差折光检测器，用于枸杞多糖的定性和定量分析。
多糖纯化：通过Sevage法去除蛋白质，然后用透析法去除小分子杂质。
多糖含量测定：采用改进的苯酚硫酸法，通过紫外可见分光光度计测定多糖含量。
这个段落详细列出了实验所需的材料和仪器，并简要介绍了实验方法，为后续实验结果的准确性和可靠性提供了基础。
3. 实验步骤本实验选用宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）为原料。
将枸杞样品在40下烘干至恒重，粉碎后过80目筛。
准确称取0g枸杞粉末，置于圆底烧瓶中。
采用改进的超声波辅助水提法提取枸杞多糖。
将枸杞粉末加入100mL去离子水中，在功率为200W、频率为40kHz的超声波辅助下提取30分钟。
提取完成后，离心（4000 rpm, 10 min）取上清液，残渣重复提取两次，合并上清液。
在上清液中加入Sevage试剂（三氯甲烷正丁醇 51，vv），剧烈振荡后静置分层，重复此步骤至无蛋白层出现，收集上清液。
将上清液减压浓缩至原体积的15，加入4倍体积的无水乙醇，置于4冰箱中醇沉过夜。
高效液相色谱_蒸发光散射检测法同时测定单糖_双糖及低聚果糖
0 . 4 5μm 滤膜过滤，备用。
1.4 标准曲线绘制 取配制好的系列标准溶液稀释至不同浓度，按 1.2
节的色谱条件分别进样，以峰面积的自然对数为纵坐标 ( y ) ，以进样量的自然对数为横坐标( x ) ，进行线性回归 计算，得标准曲线回归方程。 1.5 方法学考察
在 1.2 节的色谱条件下，将配制好的系列标准溶液分别 进样并计算，得标准曲线回归方程和最小检出限，见表 1。
表 １ 标准曲线、线性范围及检出限 Table 1 Linear regression equations, linear ranges and detection
limits of glucose, fructose, sucrose, GF2, GF3, and GF4
由于单、双糖、低聚糖类物质没有紫外吸收，对 其含量测定通常采用高效液相色谱 - 示差折光检测器 (HPLC-RID)的方法和纸层析色谱分析法。目前的报道[8-11] 中，多以示差检测器测定，但此方法灵敏度低，系统 平衡时间长，对工作环境要求苛刻，要求恒温、恒流 速、且无法采用梯度洗脱。蒸发光散射检测器( E L S D ) 作为新一代通用型质量检测器，它对有质量的物质都能 进行检测，而不需其分子结构中具有发光基团。这在 一定程度上弥补了其他 HPLC 检测器的不足，特别是检 测无电子和分子吸收光谱信号的化合物时，显示出一定 的优越性。其原理是将样品与流动相的混合物通过喷射
the carrying gas was air. Under the above conditions, all glucose, fructose, sucrose, GF2, GF3 and GF4 could be well separated, and the spiked recoveries were 97.62% – 99.55% with a RSD less than 3% (n = 5). This method is accurate, rapid, simple and
高效液相色谱法测定龙眼肉多糖的单糖组成
龙 眼又 名桂 圆 ， 智 ， 益 属无 患子 科龙 眼属植 物果 实 ， 我 国南 方特 产水果 ， 是广西 特产 。龙 眼 肉是 是 亦
Байду номын сангаас
文献标识码 ： Ａ
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓ ｒ ｃ ：Ｔｈ ｍｏ ｏ ａ ｃ ｒｄｅ ｏ ｐ ｓｔｏ ｏ ｐ ｌ ｓ ｃ ｈ ｒｄｅ ｆ ｏ ｅ ｎ ｓ ｃ ｈａ ｉ ｃ ｍ ｏ ｉｉｎ ｆ ｏ ｙ ａ ｃ ａ ｉ ｓ ｒ ｍ Ａｒｌ Ｌｏ ａ ｗａ ｉｕｓ ｌ ｎｇ ｎ ｓ Ａｎａｙ ｅ ． ｅ ｐ ｌ ｓ ｃ ｈａ ｉ ｅ ｓ ｅ ｔ ａ ｔ ｄ ｂ ｏ ｓ ｉ ｅ ｔ ｒ ｐｒ ｃｐ ｔ ｔｄ ｂ ｌｏ ｏ ， ｎｄ ｌ ｚ ｄ Ｔｈ ｏｙ ａ ｃ ｒｄ ｓｗａ ｘ ｒ ｃ ｅ ｙ ｈ ｔｄｉｔｌ ｄ ｗａ ｅ ， ｅ ｉ ｉａ ｅ ｙ ａｃ ｈ ｌ ａ ｌ ｆｒ ｄ ｏ ｍｅ ｍ ｏ ｓ ｃ ｈ ｒｄ ｄ ｓ ｎｏ ａ ｃ ａ ｉｅ ｅ ｂｙ ＴＦＡ ｈ ｒ ｙ ａ ｉｎ． ｅ ｙｄ ｏｙｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｄ ｙｄ ｄ ｚ ｔｏ Ｔｈ ｈ ｒ ｌ ａ ｅ ｅ ｃｅ ｗｉｈ － ｅ ｙ 一 一 ｔ １ ｐｈ ｎ ｌ３ ｍｅ ｈ ｌ ５ ｐｙ ａ ｏ ｏ ｅ （ ｔ ｙ 一 一 ｒ ｚ ｌ ｎ ＰＭ Ｐ）ｔ ｒ ｄ ｃ ｈｅ ＰＭ Ｐ ｒｖ ｔｖ ｓｔ ａ ｒ ｎ ｌｚ ｄ ｂ ｏ ｐ ｏ ｕ ｅｔ ｄｅ ｉａ ｉｅ ｈ ｔｗｅ ｅ ａ ａｙ ｅ ｙ ＨＰＬＣ． Ｔｈｅ Ｐｏｙ ａ ｃ ｒｄ ｓ ｒ ｍ Ａｒｌｕ Ｌｏ ａ ｗａ ｃ ｍ ｐ ｉｅ ｍａ ｌｓ ｃ ｈａ ｉｅ ｆｏ ｉ ｓ ｌ ｎｇ ｎ ｓ ｏ ｒｓ ｄ ｎｎｏ ｅ，ｒ ｍｎ ｓ ｓ ｈａ ｏ ｅ，ｇ １ｃ ｕ ｏ ｉａｃ ａ ａ ｔ ｒ ｎ ｃ ｉｄ，