高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
高效液相色谱法测定复方甲硝唑擦剂中成分含量分析
高效液相色谱法测定复方甲硝唑擦剂中成分含量分析【摘要】目的：主要是采用高效液相色谱法测定复方甲硝唑擦剂中甲硝唑和氯霉素的含量。
方法：填充剂为：十八烷基硅烷健合硅胶；流动相以醋酸、甲醇、水为主；波长为289nm；并且评价其回收率、RSD以及稳定性等。
结果：甲硝唑在（39.74～397.40)μg／mL范围内，和氯霉素在(49.82～498.20)μg／mL 范围内的时候起线性关系较为良好；甲硝唑和氯霉素的品均回收率为97.52%和97.23%，RSD为0.80%和0.91%。
结论：该方法适合于测定复方甲硝唑制剂的质量控制。
【关键词】甲硝唑；氯霉素；含量测定；高效液相色谱法我院自制的复方甲硝唑擦剂是一种外用的药物制剂，该药的主要成分包括1%的氯霉素、0.5%的硫酸锌以及2%的甲硝唑。
该药主要是治疗脂溢性皮炎、痤疮等，其治疗的效果是比较理想的，并且不良反应较小。
该药物的制作质量对治疗的效果、患者的健康等有着重要的影响，然而该药物的质量标准主要是对药物中的硫酸锌含量进行测定，在以往的测定法中主要是采用容量法以及紫外吸收光谱法，该方法操作起来比较繁琐，其影响的因素也是比较多的，严重的影响了该药物的质量的有效控制。
本文主要是采用高效液相色谱法对该药中的甲硝唑、氯霉素含量等进行测定，从而有效的控制其制剂的质量。
1 仪器和试药笔者对该药的测定主要是采取Agilent1 100的高校液相色谱仪。
试药：其对照品主要包括甲硝唑、氯霉素对照品；某院自制的复方甲硝唑擦剂（生产批号为：20050304,20050305,20050306）。
2 测定的方法和结果本组的测定主要是采用高效液相色谱法对复方甲硝唑中的甲硝唑、氯霉素的含量等进行测定。
2.1 色谱的条件以及系统实用性实验在试验中所采用的填充剂为：十八烷基硅烷健合硅胶；流动相以醋酸、甲醇、水为主；其流速控制在1.0mL／min，色谱柱的温度要控制在20℃，其进样量控制在10μL。
高效液相色谱法测定甲硝唑芬布芬胶囊的含量
高效液相色谱法测定甲硝唑芬布芬胶囊的含量张军【摘要】目的:建立了甲硝唑芬布芬胶囊的含量测定方法,确立的色谱条件可同时检测出两种主要成分.方法:通过检测波长的确定、柱温的确定以及对流动相比例的调整等实验,对检测方法不断优化,最终色谱条件为:以Agilent SB-C18(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,以甲醇-乙腈-水(25:55:20)(用磷酸调节pH值至3.0)为流动相,流速1.0mL·min-1,检测波长:280nm,柱温:30℃,进样量:20μl.结果:经方法学验证实验,本法精密度好,在0.1～1.0mg·mL-1范围内甲硝唑和芬布芬均呈良好的线性关系,且供试品在10h内稳定.结论:本研究为准确测定甲硝唑芬布芬胶囊的含量提供了方法依据.【期刊名称】《黑龙江医药》【年(卷),期】2019(032)004【总页数】5页(P759-763)【关键词】甲硝唑芬布芬胶囊;甲硝唑;芬布芬;高效液相色谱法;色谱条件【作者】张军【作者单位】黑龙江省食品药品监督管理干部学校,哈尔滨150076【正文语种】中文【中图分类】R927.2甲硝唑芬布芬胶囊为复方制剂，它的主要组分包含甲硝唑100mg，芬布芬75mg，用于治疗侵袭性牙周炎、口腔炎等疾患。
甲硝唑对于大多数厌氧菌如消化链球菌、溶组织梭菌等敏感性强，具有较强的灭活性,可治疗腹膜炎等疾病，在短时间内则是治疗阿米巴症状和滴虫病的首选药物。
芬布芬临床主要用于痛风性关节炎、盆腔腹膜炎、神经脊髓炎等，也可用于牙痛以及痛经的治疗。
联合用药的目的是为了防止过小的剂量达不到治疗的效果，超过正常用量会引起损伤内脏等毒性及不良反应。
芬布芬的加入不仅能使总的疗效提高，而且可以使副作用和不良反应降低，治疗范围更广[1]。
本文建立的方法能为甲硝唑芬布芬胶囊含量测定以及质量控制提供方法依据。
本法作为一个科学、准确、高效的质量分析手段，可以更好的保证用药的安全性和有效性。
高效液相色谱法测定甲硝唑片中甲硝唑的含量_李桂锋
色 谱 柱 ：Ａｇｉｌｅｎｔ － Ｃ１８ （５μｍ １５０ × ４．６ｍｍ）柱；流动相：以甲醇－ 水（２０：８０）用 冰醋酸调 ｐＨ 值 ３．５；流速：１．０ｍｌ ／ ｍｉｎ； 检 测 波 长 ：２７７ｎｍ；柱 温 ：室 温 ；进 样 量 ： ２０μｌ；甲硝唑在上述色谱条件下的保留
时间约为 ４．１ｍｉｎ，理论塔板数以甲硝唑 峰计约为 ９２１５２。
（２００７０６１５ 收稿）
２００７．８ ５２
４．方法与结果
４．１ 线性关系试验 精 密 称 定 甲 硝 唑 约 １４ｍｇ 于 １００ｍｌ 容 量 瓶 中 ， 加 盐 酸 溶 液 （９ →１０００）约 ３０ｍｌ，微温使甲硝唑溶解，加流动相稀释 至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密移 取 贮 备 液 １．０ｍｌ，２．０ｍｌ，５．０ｍｌ，８．０ｍｌ， １０．０ｍｌ 于 ５０ｍｌ 容量瓶中，均用流动相稀 释 至 刻 度 ，摇 匀 ，各 取 ２０μｇ 进 样 ，在 ２７７ｎｍ 波长处检测。以进样量（Ｘ）对峰面 积（Ｙ）进行线性回归，得回归方程。试验 结果表明，甲硝唑在 ２．８～２８μｇ ／ ｍｌ 范围 内呈良好线性关系，回归方程为 ｙ＝ ３．１４３７ｘ＋８．６９５×１０４，ｒ＝０．９９９６。 ４．２ 精密度试验 在上述色谱条件下，取 １３μｇ ／ ｍｌ 的 甲硝唑对照品溶液重复进样，测定峰面 积的 ＲＳＤ＝０．９１％（ｎ＝６）。
关键词 高效液相色普法 甲硝唑 含量测定
《中国药典》对甲硝唑的测定采用了 紫外分光光度法［１］，也有人采用荧光猝灭 法和双波长分光光度法进行测定。但三 方法精密度、灵敏度较差，自动化程度也 较低。该实验建立以高效液相色谱法测 定甲硝唑的含量，方法简捷，易于控制。
１．仪器与试药
安捷伦公司的 Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ 全自动高 效液相色谱仪，二极管阵列检测器。甲硝 唑对照品（中检所提供的甲硝唑对照 品），甲硝唑片由某制药厂提供（批号： ０６０６０６，０６０８１２，０６０９１１；规格 ０．２ｇ），甲醇 为国产色普纯试剂，冰醋酸、盐酸为国产 分析纯试剂，水为去离子经 Ｍｉｌｌｉ－ Ｑｐｌｕｓ 超纯水器处理。
高效液相法测药品中甲硝唑的含量
高效液相法测药品中甲硝唑的含量作者：张巍等来源：《黑龙江水产》 2013年第2期张巍1 刘万学2 李宁1 彭玮1（1.哈尔滨市兽药饲料监察所黑龙江哈尔滨 150070）(2.黑龙江省水产技术推广总站黑龙江哈尔滨 150018）摘要：采用高效液相色谱法（HPLC）测定甲硝唑片的含量，本法具有简便、快速、准确等优点，可用于甲硝唑片含量的测定。
关键词：高效液相色谱法、甲硝唑片、含量测定、注意事项1 引言甲硝唑（Metronidazole Tablets）（化学名称：2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇）甲硝唑在水产养殖生产上常被用于治疗鱼类的几种滴虫感染。
但甲硝唑存在致癌性和致遗传变异等毒副作用，因此，许多国家禁止其在动物源性食品中使用，规定在所有食品动物可食性组织中最高残留限量（MRL）为零。
我国农业部（2002年农业部第227号公告）也有同样规定。
建立针对这种违禁兽药的简单、便捷、灵敏的检测方法非常必要。
甲硝唑片的常规检测方法为高效液相色谱法，参照标准《中国药典》2010年版二部。
2 实验部分2.1 仪器与试剂高效液相色谱仪，泵1525，紫外检测器2487，自动进样器（Waters公司）；AB265-S电子天平（Mettler公司）；AR2140D电子天平（赛多利斯公司）；101A-0S电热恒温鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；甲醇（Fisher公司）和水（由Millipore公司超纯水器制得）为色谱试剂；甲硝唑标准品（含量100%，购自中国药品生物制品检定所）。
2.2 色谱条件及测定法用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（20:80）为流动相；检测波长320nm。
取甲硝唑片20片，精密称定，研细，精密称定细粉约0.3425g（约相当于甲硝唑0.25g），置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使溶解，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀虑过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取甲硝唑对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.25mg的溶液，同法测定。
高效液相色谱法测定胃液中甲硝唑浓度
高效液相色谱法测定胃液中甲硝唑浓度Ξ何光耀 谭定定 钟春宁中山医科大学分子医学研究中心实验室 广州提 要 介绍了反相高效液相色谱法测定人的胃液中甲硝唑含量的方法∀服药后插管抽取胃液 试样用无水乙醇沉淀蛋白 离心 过滤 进样测定∀方法的线性范围为 ∗ Ù 最小检知量为 Ù平均回收率为 变异系数为 ∀关键词 高效液相色谱法 甲硝唑 胃液分类号前言甲硝唑 灭滴灵 是世界卫生组织推荐的抗厌氧菌感染的首选药物 ∀与厌氧菌有关的胃溃疡病 经甲硝唑治疗后能显著改善症状 ∀由于药物直接作用于患部 所以测定胃液中甲硝唑的浓度比测定血液或唾液中甲硝唑的浓度更有实际意义∀用紫外分光法测定胃液中甲硝唑的浓度 常受其它因素影响 方法特异性差 ∀本文建立的测定胃液中甲硝唑浓度的高效液相色谱法能指导临床用药和开展临床药理学研究∀实验与结果仪器和试剂仪器 型高效液相色谱仪 配置梯度系统 泵 进样器色谱工作站 可编程可变波长紫外检测器∀试剂 甲硝唑标准对照品 由广东省药物研究所提供 甲醇 无水乙醇 磷酸二氢钾均为分析纯∀所有试剂均用重蒸水配制∀方法和结果色谱条件 色谱柱 Λ≅ 中国科学院大连化物所 流动相 甲醇 磷酸二氢钾缓冲液 ÙÚ 经 Λ 滤膜过滤 超声脱气后使用 流速 Ù 检测波长 进样体积 Λ ∀ 胃液试样的采集及预处理 位志愿受试者 男女各 人 年龄 ∗ 岁 空腹状态肌注胃泌素增加胃液分泌 然后口服一定剂量的甲硝唑片 用水送服 在服药后的 分别用插管抽取胃液 加无水乙醇 用旋涡混合器混合 再以 Ù 离心 沉淀蛋白 取上清液经 Λ 滤膜过滤 取滤液进样∀色谱图见图 测定结果见表 ∀图 一次口服 γΜΤΖ的胃液药物浓度曲线 人平均值Φιγ ΧονχεντρατιονχυρϖεοφτηεΜΤΖινγαστριχϕυιχεωιτηονχεοραλαδ ινιστρατιονοφ γδρυγ εανδαταφορ ϖολυντεερσ甲硝唑标准液的制备 甲硝唑标准对照品在称量前经 ε干燥至恒重 精确称取 用第 卷第 期色 谱年 月Ξ本文收稿日期 修回日期无水乙醇定容至 配成浓度为 Ù 的贮备液∀分别吸取此液 Λ 用不含药物的正常人之胃液分别加至 配成浓度分别为 空白 Ù 的甲硝唑标准液 用与胃液试样相同的预处理方法去除蛋白 过滤备用∀表 胃液中ΜΤΖ浓度测定结果Ταβλε ΧονχεντρατιονοφΜΤΖινγαστριχϕυιχε ν时间 浓度Ù标准曲线 用以上包括 空白 在内的 种浓度的标准液作 分析 甲硝唑峰保留时间为 ∀将所得的 色谱峰面积Ψ Ø 与相应的进样浓度Ξ Ù 作直线回归分析 求得直线回归方程为Ψ Ξ 直线相关系数ρ ∀回收率及精密度试验 用无水乙醇配制不含 空白 的 种与标准液浓度相同的甲硝唑对照液 过滤后直接进样 与经试样预处理方法处理的 种浓度 每种浓度 个 的胃液甲硝唑标准液作对照∀精密度和回收率结果见表 ∀表 精密度和回收率试验结果Ταβλε Τεστρεσυλτσοφαχχυραχψανδρεχοϖερψ ν加入Ù实测Ù变异系数Χς回收率讨论胃液中ΜΤΖ浓度与疗效的相关性人服药后 药物在胃液中 崩解 当胃液中 达到一定浓度时 就能有效地抑制胃部的幽门螺杆菌 消化性溃疡的主要致病菌 ∀口服 是针对胃溃疡患部的局部用药 但也会通过消化吸收而产生一些副反应∀虽然在胃中的甲硝唑浓度越高 抑制 的作用越强 但副反应也随之加重 造成病人用药的依从性差 反而影响疗效∀因此 检测胃液中 的浓度是为了寻找最佳的用药方案∀临床研究的初步结果证明 减少 每次服药量 由 改为 增加每日的服药次数 由 次改为 次 能使胃中 浓度保持在有效浓度范围内 还可使通过消化吸收在血中形成的药物浓度减少∀这样 既可减轻副反应又能保持疗效∀血清 唾液和胃液三者浓度的相关性口服 后 在血清和唾液中的药物浓度显著相关 多数受试者在口服 后 这两种被检液的药物浓度基本相等 见图 ∀胃液与这两种被检液的药物浓度均与服药量有关 但它们对照差异却很显著 见图 ∀实验表明 针对胃溃疡的治疗 口服用药是直接作用于患部 在胃液中的浓度较高 能在胃中长时间发挥良好的抑菌作用 与肌注用药比较 具有疗效好 副反应小等优点∀图 口服ΜΤΖ一次后三种被检液的药物浓度曲线 人平均值Φιγ ΧονχεντρατιονχυρϖεσοφΜΤΖιντηετηρεετεστεδφλυιδσωιτηονχεοραλαδ ινιστρατιονεανδαταφορ ϖολυντεερσ胃液 血清 唾液 ∀参考文献唐爱国 周 霞 中国医院药学杂志 胡文淑 药理 北京 人民卫生出版社张锦坤 夏华向 中华消化杂志 增刊杨毓章 肖树楷 中华医学杂志期 何光耀等 高效液相色谱法测定胃液中甲硝唑浓度∆ετερ ινατιονοφΜετρονιδαζολεινΓαστριχϑυιχεβψΗιγηΠερφορ ανχεΛιθυιδΧηρο ατογρα ηψΤηεΛαβορατορψοφΜολεχυλαρΜεδιχινε ΣυνΨατ σενΥνιϖερσιτψοφΜεδιχαλΣχιενχεσ Γυανγζηου Αβστραχτ ≅ Ú Ù Ú Ù Ψ Ξ ρ ν Ù ÙΚεψωορδσ色 谱卷。
高效液相色谱法测定甲硝唑片中甲硝唑含量的不确定度分析
Ｃｉ ） ｈｎ ａ
［ ｂ ｔａ ｔ ０ｂｅ ｔ ｅ Ｔ ｖｌａｅｔｅｍ ａｕｅ ｅ ｔ ｎ ｅｔｉｔ ｉ ｔｅａｓｙｏ ｔ ｎｄｚｌ ｔ ｌ ｓｗｔ ｃ ｒ－ Ａ ｓｒ ｃ］ ｊｃｉ ｏｅａｕ ｔ ｈ ｅ ｓｒｍ ｎ ｕ ｃｒ ｎｙ ｎ ｈ ｓａ ｆ ｒ ｉａｏ ｂｅ ｉ ｈｏ ｖ ａ Ｍｅ ｏ ｅａ ｔ ｈ
ｄ ｒ ｆｄ ｔ ｒ ｎ ｎ ｔｏ ｉ ａ ｏ ｅ ｉ ａ ｌｔ ． Ｒｅ ｕ ｔ Ｅ ｃ ｏ ｏ ｅ ｔｏ ｎ ｅ ｔ ｉ ｔ ｓ ｃ ｌｕ ａ ｅ ｍｏ ｇ ｔ ｅ ｐ ｏ ｅ ｕ ｅ ｏ ｅ ｅ ｍｉ ｉ ｇ ｍｅ ｒ ｎ ｄ ｚ ｌ ｎ ｔｂ ｅｓ ｓｌ ｓ ａ ｈ ｃ ｍｐ ｎ ｎ ｆ ｕ ｃ ｒ ｎ ｙ ｗａ ａｃ ｌ ｔｄ ａ ｎ ｈ ｒ ｃ － ａ
甲硝 唑片 属硝 基 咪 唑 类 药 物 ， 床 用 于 厌 氧 菌 临
感 染 、 道 和 肠 外 阿 米 巴 病 、 道 滴 虫 病 的 治 肠 阴
０ ２ ） ５ ｌ 瓶 中 ， ５ ％ 甲醇 适 量 ， 摇 使 ．５ｇ 置 ０ ｍ 量 加 ０ 振
甲硝唑溶 解 ， ５ ％ 甲醇 稀 释 至 刻 度 ， 匀 ， 过 ， 加 ０ 摇 滤
［ 要 ］ 目的 摘 对 高 效 液 相 色 谱 （ Ｐ Ｃ 法 测 定 甲硝 唑 片 中 甲硝 唑 含 量 的测 量 不 确 定 度 进 行 分 析 和 评 价 。方 法 ＨＬ）
高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
实验二高效液相色谱法测定甲硝唑的含量一、实验目的1.熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能。
2.了解反相色谱法的原理、优点和应用。
3.了解流动相的选择依据及配制方法。
4.掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基本方法。
二、实验原理高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。
本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来分离检测未知样中甲硝唑的含量。
以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。
三、实验内容（一）实验仪器与材料1.实验仪器：高效液相色谱仪、精密天平、50mL烧杯、玻璃棒、称量纸、10mL容量瓶、50mL 容量瓶、注射器、洗瓶。
2.实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、HCl（0.1mol/L）、乙腈、三氟乙酸、超纯水。
（二）实验内容1、色谱操作条件的制定：色谱柱：C18柱（250×4.6mm,5μm）；流动相：乙腈：0.02%三氟乙酸水溶液（20：80）流速：1mL/min检测波长：277nm柱温：35℃进样量：20μL2、标准溶液配制精密称取在105℃条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品10mg，置于50mL容量瓶中，用0.1mol/L的HCl溶液溶解并定容至刻度，即得浓度为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备用。
3、标准曲线的建立（1）精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3mL、0.5 mL、0.7 mL、0.9 mL、1.1 mL置于10 mL的容量瓶中，然后用0.1mol/L的HCl溶液定容至刻度，得到浓度梯度为6μg/mL、10μg/mL、14μg/mL、18μg/mL和22μg/mL的标准溶液，分别过0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液置于1.5mL的EP管中并标号，各进样20μL检测，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归。
高效液相色谱法测定复方甲硝唑乳膏中甲硝唑含量
表 １ 供 试 品含 量 测 定 结 果 （ ｎ ＝ ３）
１ ． ２试药 、试 剂 。复方 甲硝 唑乳 膏 （ Ａ厂 家 ，批号 ： １ ３ ０ ３ １ ２ 、 １ ３ ０ ３ ２ ６ 、 １ ３ ０ ９ ０ ４ ） ； 甲硝 唑对 照品 （ 中国药 品生物 制 品检定所 ， 批 号 １ ０ ０ １ ９ １ — ２ ０ ０ ３ ０ ５ ） ； 甲醇为色谱 醇； 水为纯化水 。
・
８ ４・
科技论 坛
高效液相色谱法测定复方甲硝唑乳膏中甲硝唑含量
杨 鲲
（ 江 苏省 淮 安 市食 品 药 品检 验 所 ， 江苏 淮安 ２ ２ ３ ０ ０ １ ） 摘 要： 目的 ： 建 立 复 方 甲硝 唑 乳 膏 中 甲硝 唑 的 含 量 测 定 方 法 。方 法 ： 用 高效 液 相 色谱 法 测 定样 品 中 甲硝 唑 的含 量 。填 充 剂 ： 十八 烷 基 硅烷键 合硅胶 ； 流动 相： 甲醇一 ￣（ ２ ０ ： ８ ０ ） ； 检测波 长 ： ３ ２ ０ ｎ ｍ； 流速 ： １ ． ２ ｍ ｌ ／ ｍｉ ｎ 。结果： 甲硝 唑 在 ０ ． ０ ５ ～ ０ ． ４ ５ ｍ ￣ｍ ｌ 的 范 围 内线 性 关 系 良好 ， ｒ ＝ ０ ． ９ ９ ９ ９ ， 平 均 回收 率 为 ９ ８ ． ７ ０ ％（ Ｒ Ｓ Ｄ ＝ ０ ． ８ ％） 。结论 ： 所 建 立 的 测 定 方 法 准确 、 重复性好、 实 用。 关键词 ： 复 方 甲硝 唑 乳 膏 ； 甲硝 唑 ； 含量测定 ； 高 效液 相 色谱 法
２ 方 法与 结果
样 品含量
＜ ｍ２）
ｌ ２ ３ ２
１ ２ ２ ｏ Βιβλιοθήκη 柏 八量 （ ｍｅ）
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2. 标准溶液配制
精密称取在105℃条件下干燥至恒重的 甲硝唑对照品10mg，置于50mL容量瓶中，用
0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度，即得浓度
为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备用。
3、标准曲线的建立
精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3ml、 0.5ml、0.7ml、0.9ml、1.1ml置于10ml的容量 瓶中，然后用0.1M HCl溶液定容至刻度，得到 浓度梯度为6μg/mL、10μg/mL、14μg/mL、 18μg/mL和22μg/mL的标准溶液，分别过 0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液置于1.5ml的EP 管中并标号，各进样20μL检测，以浓度为横 坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归。
高效液相色谱的主要分离方法
液相色谱根据固定相性质可分为以下几种：
● 吸附色谱
(Adsorption Chromatography)
● 键合相色谱（Bonded phase chromatography）
● 离子交换色谱（Ion Exchanger Chromatogr.）
● 空间排阻色谱（Size Exclusion Chromatogr.）
相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。 注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被 分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱 信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来分 离检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列溶 液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品
中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。
实验步骤
色谱操作条件;
标准溶液配制；
标准曲线的建立；
样品溶液的配制；
甲硝唑样品含量Байду номын сангаас定。
1.色谱操作条件：
色谱柱：C18柱（150×4.6mm,5μm）； 流动相：乙腈：0.02%三氟乙酸水溶液（20：80） 流速：1mL/min 检测波长：277nm 柱温：35℃ 进样量：20μL
3．实验时严肃认真，根据实验指导要求进行操作，仔细观 察和记录，并进行独立思考，按时完成实验内容和实验报 告。 4．保持实验室安静，实验时不得随意走动和谈笑。室内严 禁吸烟、不允许在实验室内接听手机.
5．保持实验室清洁整齐，书包、衣帽等应放在指定位置，
不能置于实验台上；一切实验用具用完后擦洗干净，放回
partisil5-ODS、Zorbax-ODS、Shim-pack CLCODS，国产的YWG-C18等。
实验目的
熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能；
了解反相色谱法的原理、优点和应用。
了解流动相的选择依据及配制方法； 掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基
本方法。
实验原理
高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动
(2) 高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，C18柱标准内径及柱长为
4.6*150mm或4.6*250mm，填料颗粒粒度5μm。
色谱柱pH值范围不同：酸性柱、碱性柱、中性柱。
安装方向
柱温箱：保持温度稳定。
(3) 液相色谱检测器
a.紫外检测器 b.光电二极管阵列检测器 c.示差折光检测器
d.荧光检测器
药剂综合实验须知
实验项目
一 高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
二
三 四 五 六 七 八
氨茶碱加样回收率实验
氨茶碱溶液稳定性实验 紫外分光光度计法测定氨茶碱含量 氨茶碱原料药稳定性实验 五味子散剂的制备 SOD的含量测定 芦丁的提取和鉴别
实验要求
1．课前认真预习，明确本次实验的目的、要求、内容、方 法及步骤 2．提前5-10min进入实验室，检查实验所需物品是否齐全， 做好实验准备工作。
e.电导检测器
紫外检测器
紫外检测器对占物质总数约80%的物质（有机和部分 无机物质）均可检测，既可测190--350 nm范围的光吸收 变化，也可向可见光范围350---700 nm 延伸。 优点：应用最广，灵敏度高，线性范围宽。是高效液 相色谱仪的标准配置。它的最重要特征是对流动相的流速 （脉冲）和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱。 缺点：对无紫外吸收的组分不响应，而对紫外吸收较 大的溶剂如苯不能作流动相使用。
● 亲合色谱（Affinity Chromatography）
在以上五种分离方式中，反相键合相色谱应 用最广，因为它采用醇—水或腈—水体系作流动
相。纯水易得廉价，它的紫外吸收极小。在纯水
中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广 的反相键合相是十八烷基键合相，即让十八烷基 （C18H37—）键合到硅胶表面。这种键合相又称 ODS（Octadecylsilyl）键合相，如国外的
原处。 6．爱护实验室一切仪器设备，珍惜药品及一切消耗用品(如 纱布、拭镜纸、载玻片等)，节约水、电。按操作规程使 用显微镜、解剖镜等，使用前要检查，使用后要擦拭整理，
如发现损坏或故障应及时报告指导教师。
7．实验完毕后，值日生值日。值日工作范围包括：关闭水、 电、门、窗；检查仪器，显微镜是否完好；查看水池，实 验台，桌椅，地面是否干净整齐；最后在值日生记录本上 登记值日情况，再交于老师签字后方可离开。
线性要求：
色谱峰分离度大于1.5，浓度点n＝5。用浓度c
对峰面积A作线性回归处理，得一直线方程，r
应大于0.999，方程的截距应近于零。
4. 样品溶液的配制
精密称取甲硝唑原料药10mg，置于50ml容
量瓶中，用0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度， 摇匀，再从中取出0.7ml定容至10ml，即得甲 硝唑样品溶液。
2.甲硝唑样品含量
5.甲硝唑样品含量测定
用注射器吸取已配制好的甲硝唑样品溶液 适量，过0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液置于 1.5ml的EP管中并标号，再从中吸取20μL注入 液相色谱仪，采用高效液相色谱法在277nm波 长处测定溶液中甲硝唑峰面积，最后通过标准 曲线计算样品中甲硝唑的含量。
实验结果
1.标准曲线方程及绘制
考核办法
实验习惯10％： 迟到1次扣1分，旷课一次扣3分，值日生必须最后走，早走者扣1分。 预习报告10%： 不能简单抄书，要学会总结归纳。 实验报告20％： 当堂绘图，当堂交报告，迟交报告者要扣分。 实验操作30%： 要能独立完成实验；实验结果必须交老师检查；出现重大失误者要扣分
实验器材与材料
实验器材：高效液相色谱仪、精密天平、50ml 烧杯、玻璃棒、称量纸、10ml容量瓶、50ml容 量瓶、注射器、洗瓶、EP管、滤膜。
实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、HCl、乙腈、 三氟乙酸、超纯水。
0.1M HCl溶液配制：准确量取HCl溶液 8.3ml, 用蒸馏水定容至1000ml，即得。
实验考试成绩30％：
操作10%，笔试20%
迟到、早退、缺一次实验以上者或考试不及格者均不能得优秀，缺两次
实验的不能得良好，缺该课程1/3以上者或不参加实验考试者，均没有实 验成绩。
实验报告的书写格式：
（1）实验名称
（2）实验目的
（3）实验内容及步骤
（4）实验结果
实验一
高效液相色谱法测定 甲硝唑的含量
高效液相色谱仪的主要结构及功能简介
1.高压输液泵
2.进样器
3.高效分离柱
4.液相色谱检测器
5.记录仪
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。
注意排气泡：purge 流速设置
（2）进样器
样品液吸取方法：上下反复抽取液体，速 度稍快，直到肉眼看不见气泡为止，水平 持进样针（液体吸取数量可多余20μL）， 注入进样器。 进样器存在的两个位置：load（右上）和 inject。