高效液相色谱法测定甲硝唑的含量
高效液相色谱法测定复方甲硝唑擦剂中成分含量分析
高效液相色谱法测定复方甲硝唑擦剂中成分含量分析【摘要】目的：主要是采用高效液相色谱法测定复方甲硝唑擦剂中甲硝唑和氯霉素的含量。
方法：填充剂为：十八烷基硅烷健合硅胶；流动相以醋酸、甲醇、水为主；波长为289nm；并且评价其回收率、RSD以及稳定性等。
结果：甲硝唑在（39.74～397.40)μg／mL范围内，和氯霉素在(49.82～498.20)μg／mL 范围内的时候起线性关系较为良好；甲硝唑和氯霉素的品均回收率为97.52%和97.23%，RSD为0.80%和0.91%。
结论：该方法适合于测定复方甲硝唑制剂的质量控制。
【关键词】甲硝唑；氯霉素；含量测定；高效液相色谱法我院自制的复方甲硝唑擦剂是一种外用的药物制剂，该药的主要成分包括1%的氯霉素、0.5%的硫酸锌以及2%的甲硝唑。
该药主要是治疗脂溢性皮炎、痤疮等，其治疗的效果是比较理想的，并且不良反应较小。
该药物的制作质量对治疗的效果、患者的健康等有着重要的影响，然而该药物的质量标准主要是对药物中的硫酸锌含量进行测定，在以往的测定法中主要是采用容量法以及紫外吸收光谱法，该方法操作起来比较繁琐，其影响的因素也是比较多的，严重的影响了该药物的质量的有效控制。
本文主要是采用高效液相色谱法对该药中的甲硝唑、氯霉素含量等进行测定，从而有效的控制其制剂的质量。
1 仪器和试药笔者对该药的测定主要是采取Agilent1 100的高校液相色谱仪。
试药：其对照品主要包括甲硝唑、氯霉素对照品；某院自制的复方甲硝唑擦剂（生产批号为：20050304,20050305,20050306）。
2 测定的方法和结果本组的测定主要是采用高效液相色谱法对复方甲硝唑中的甲硝唑、氯霉素的含量等进行测定。
2.1 色谱的条件以及系统实用性实验在试验中所采用的填充剂为：十八烷基硅烷健合硅胶；流动相以醋酸、甲醇、水为主；其流速控制在1.0mL／min，色谱柱的温度要控制在20℃，其进样量控制在10μL。
高效液相色谱法测定甲硝唑中甲硝唑含量的不确定度报告
高效液相色谱法测定甲硝唑中甲硝唑含量的不确定度报告1.依据的技术标准《中国药典》2015年版二部。
2.测量原理高效液相色谱法的基本原理是在高压下，利用不同组分与固定相和液体流动相作用力不同，实现分离的的色谱方法。
高压输液泵将流动相泵入装有固定相的色谱柱，对由进样器注入色谱柱的待分离组分进行分离，分离后的各组分依次进入检测器，检测信号通过积分仪或数据处理系统记录与处理，实验各组分定性与定量分析。
3.使用的仪器和试剂3.1岛津公司LC-20AT型高效液相色谱仪，经检定合格。
3.2甲硝唑对照品，由中国食品药品检定研究院提供，含量100%。
3.3经检验合格容量瓶100mL，A类，在20℃时，允差±0.1mL；容量瓶50mL，A类，在20℃时，允差±0.05mL；移液管5ml，A类，允差±0.015mL。
3.4电子天平最大允许误差为:±0.5mg，电子天平最小鉴别力为0.00001g。
4.测量程序4.1对照品溶液的制备：精密称取甲硝唑对照品①0.02602g ②0.02552g，分别置100mL容量瓶中，用流动相甲醇：水（20:80）稀释至刻度，摇匀。
4.2供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于甲硝唑0.25g），置50ml 量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使甲硝唑溶解，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
4.3 测定法：精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
5.数学模型和不确定度传播率甲硝唑片中甲硝唑的含量测定的数学模型(1)式中，C样——被测样品的浓度，mg/mL；C对——甲硝唑对照品浓度，mg/mL；A样——被测样品中甲硝唑的峰面积；A对——甲硝唑对照品的峰面积；将输入量C对、A样、A对和C样的重复性因素组合在一起，归入输出量含量（%）的重复性因素，因此不需分别评定各输入量重复性引入的不确定度分量，而是直接评定测量结果含量（%）的重复性引入的不确定度分量。
高效液相色谱法测定甲硝唑芬布芬胶囊的含量
高效液相色谱法测定甲硝唑芬布芬胶囊的含量张军【摘要】目的:建立了甲硝唑芬布芬胶囊的含量测定方法,确立的色谱条件可同时检测出两种主要成分.方法:通过检测波长的确定、柱温的确定以及对流动相比例的调整等实验,对检测方法不断优化,最终色谱条件为:以Agilent SB-C18(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,以甲醇-乙腈-水(25:55:20)(用磷酸调节pH值至3.0)为流动相,流速1.0mL·min-1,检测波长:280nm,柱温:30℃,进样量:20μl.结果:经方法学验证实验,本法精密度好,在0.1～1.0mg·mL-1范围内甲硝唑和芬布芬均呈良好的线性关系,且供试品在10h内稳定.结论:本研究为准确测定甲硝唑芬布芬胶囊的含量提供了方法依据.【期刊名称】《黑龙江医药》【年(卷),期】2019(032)004【总页数】5页(P759-763)【关键词】甲硝唑芬布芬胶囊;甲硝唑;芬布芬;高效液相色谱法;色谱条件【作者】张军【作者单位】黑龙江省食品药品监督管理干部学校,哈尔滨150076【正文语种】中文【中图分类】R927.2甲硝唑芬布芬胶囊为复方制剂，它的主要组分包含甲硝唑100mg，芬布芬75mg，用于治疗侵袭性牙周炎、口腔炎等疾患。
甲硝唑对于大多数厌氧菌如消化链球菌、溶组织梭菌等敏感性强，具有较强的灭活性,可治疗腹膜炎等疾病，在短时间内则是治疗阿米巴症状和滴虫病的首选药物。
芬布芬临床主要用于痛风性关节炎、盆腔腹膜炎、神经脊髓炎等，也可用于牙痛以及痛经的治疗。
联合用药的目的是为了防止过小的剂量达不到治疗的效果，超过正常用量会引起损伤内脏等毒性及不良反应。
芬布芬的加入不仅能使总的疗效提高，而且可以使副作用和不良反应降低，治疗范围更广[1]。
本文建立的方法能为甲硝唑芬布芬胶囊含量测定以及质量控制提供方法依据。
本法作为一个科学、准确、高效的质量分析手段，可以更好的保证用药的安全性和有效性。
高效液相法测药品中甲硝唑的含量
高 效液相 色谱仪 ， 泵 １ ５ ２ ５ ， 紫外 检测器 ２ ４ ８ ７ ， 自动 进样器 （ Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｓ 公司） ； Ａ Ｂ ２ ６ ５ 一 Ｓ电子 天平 （ Ｍｅ ｔ ｔ ｌ ｅ ｒ 公司 ） ； Ａ Ｒ ２ １ ４ ０ Ｄ电子天平 （ 赛 多利斯公 司） ； １ ０ １ Ａ 一 ０ Ｓ电热恒温鼓风 干燥箱 （ 天津市泰斯特仪器有 限公 司 ） ； 甲醇（ Ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ 公
我 国农业部 （ ２ ０ ０ ２年农业部第 ２ ２ ７号公告 ） 也有 同样规定 。建立针对这种违禁兽 药的简单 、 便捷 、 灵敏 的检测方法 非 常必要 。甲硝唑片的常规检测方 法为高效液相色谱法 ， 参照标 准《 中国药典） ２ Ｏ Ｌ Ｏ年版二部 。
２ 实 验 部 分
２ ． １ 仪 器 与试 剂
３ 分 析 与 讨 论
本试验研制 的渔用生物复合肥产 品是针对鱼苗培育过 程中所需 饵料生物的特点 ， 选 用易溶于水体 吸收 、 转化 的原料 ， 采用肥水与调水 相结合 的理论研制而成 。产 品既能快速培育鱼苗所需 的适合 的浮游动物饵料 ， 又能快速 、
持久地分解水体 中的有害物质 ， 减少水体污染 ， 从 而预防和减少鱼病的发生 ， 为鱼苗培育提供 良好 的水体环 境 ， 促 进鱼苗 鱼种健康生长 ， 提高了苗种 成活率。２ ０ １ ０—２ ０ １ １ 年两年 的对照试验表 明 ， 研制 的渔用生物复合肥可 以显著 提高鲤 鱼苗 培育成活率 ， 可有效解决传统 的鱼苗培育方式存在的不足。 目前 ， 黑龙江省鱼苗培育普遍采取传统 的鱼 苗培育 方式 ， 推广应用渔用生物复合肥前景看好 。
含 量 的测 定 。
关键词 ： 高效液相 色谱 法、 甲硝 唑片、 含量测定、 注意事项
QuEChERS-_超高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑药物残留量
QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法测定 鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑药物残留量王 易（广东省惠州市质量计量监督检测所，广东惠州 516000）摘 要：建立了QuEChERS结合超高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中甲硝唑和地美硝唑残留量的方法。
样品经乙腈提取，QuEChERS净化后，使用Agilent Eclipse Plus C18柱分离，以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相进行洗脱，多反应监测模式下检测，外标法定量。
结果表明，甲硝唑和地美硝唑的质量浓度在0～50 ng·mL-1时线性关系良好（r2＞0.999），检出限分别为0.002 μg·kg-1、0.007 μg·kg-1；在低、中、高3个添加水平下甲硝唑和地美硝唑的加标回收率分别为95.79%～97.80%、95.66%～100.10%。
该方法前处理简单、重现性好、灵敏度高，适用于鸡蛋中甲硝唑、地美硝唑的测定。
关键词：鸡蛋；甲硝唑；地美硝唑；QuEChERS；超高效液相色谱串联质谱法Determination of Metronidazole and Dimetridazole Residues in Eggs by QuEChERS Combined with Ultra-High Performance Liquid Chromatography Tandem-Mass SpectrometryWANG Yi(Guangdong Huizhou Quality and Measuring Supervision Testing Institute, Huizhou 516000, China) Abstract: A QuEChERS combined with ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry method was established to determine the residues of metronidazole and dimetridazole in eggs. The sample was extracted with acetonitrile, purified with QuEChERS, and separated using an Agilent Eclipse Plus C18 column. The mobile phase was eluted with acetonitrile and 0.1% formic acid aqueous solution, and detected under multiple reaction monitoring mode. The external standard method was used for quantification. The results showed that the mass concentrations of metronidazole and dimetridazole were linear in the range of 0～50 ng·mL-1 (r2＞0.999), and the detection limits were 0.002 μg·kg-1 and 0.007 μg·kg-1; under low, medium and high addition levels, the recoveries were 95.79%～97.80%, 95.66%～100.10% respectively. The method is simple, reproducible and sensitive, and is suitable for the determination of metronidazole and dimetridazole in eggs.Keywords: eggs; metronidazole; dimetridazole; QuEChERS; ultra-high performance liquid chromatography tandem-mass spectrometry鸡蛋含有非常丰富的卵磷脂、脂肪、蛋白质、微生物、矿物质、微量元素等营养成分，被誉为“全营养”食品[1]，现已成为日常饮食中的重要组成部分。
高效液相色谱法测定甲硝唑片中甲硝唑的含量_李桂锋
色 谱 柱 ：Ａｇｉｌｅｎｔ － Ｃ１８ （５μｍ １５０ × ４．６ｍｍ）柱；流动相：以甲醇－ 水（２０：８０）用 冰醋酸调 ｐＨ 值 ３．５；流速：１．０ｍｌ ／ ｍｉｎ； 检 测 波 长 ：２７７ｎｍ；柱 温 ：室 温 ；进 样 量 ： ２０μｌ；甲硝唑在上述色谱条件下的保留
时间约为 ４．１ｍｉｎ，理论塔板数以甲硝唑 峰计约为 ９２１５２。
（２００７０６１５ 收稿）
２００７．８ ５２
４．方法与结果
４．１ 线性关系试验 精 密 称 定 甲 硝 唑 约 １４ｍｇ 于 １００ｍｌ 容 量 瓶 中 ， 加 盐 酸 溶 液 （９ →１０００）约 ３０ｍｌ，微温使甲硝唑溶解，加流动相稀释 至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密移 取 贮 备 液 １．０ｍｌ，２．０ｍｌ，５．０ｍｌ，８．０ｍｌ， １０．０ｍｌ 于 ５０ｍｌ 容量瓶中，均用流动相稀 释 至 刻 度 ，摇 匀 ，各 取 ２０μｇ 进 样 ，在 ２７７ｎｍ 波长处检测。以进样量（Ｘ）对峰面 积（Ｙ）进行线性回归，得回归方程。试验 结果表明，甲硝唑在 ２．８～２８μｇ ／ ｍｌ 范围 内呈良好线性关系，回归方程为 ｙ＝ ３．１４３７ｘ＋８．６９５×１０４，ｒ＝０．９９９６。 ４．２ 精密度试验 在上述色谱条件下，取 １３μｇ ／ ｍｌ 的 甲硝唑对照品溶液重复进样，测定峰面 积的 ＲＳＤ＝０．９１％（ｎ＝６）。
关键词 高效液相色普法 甲硝唑 含量测定
《中国药典》对甲硝唑的测定采用了 紫外分光光度法［１］，也有人采用荧光猝灭 法和双波长分光光度法进行测定。但三 方法精密度、灵敏度较差，自动化程度也 较低。该实验建立以高效液相色谱法测 定甲硝唑的含量，方法简捷，易于控制。
１．仪器与试药
安捷伦公司的 Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ 全自动高 效液相色谱仪，二极管阵列检测器。甲硝 唑对照品（中检所提供的甲硝唑对照 品），甲硝唑片由某制药厂提供（批号： ０６０６０６，０６０８１２，０６０９１１；规格 ０．２ｇ），甲醇 为国产色普纯试剂，冰醋酸、盐酸为国产 分析纯试剂，水为去离子经 Ｍｉｌｌｉ－ Ｑｐｌｕｓ 超纯水器处理。
高效液相法测药品中甲硝唑的含量
高效液相法测药品中甲硝唑的含量作者：张巍等来源：《黑龙江水产》 2013年第2期张巍1 刘万学2 李宁1 彭玮1（1.哈尔滨市兽药饲料监察所黑龙江哈尔滨 150070）(2.黑龙江省水产技术推广总站黑龙江哈尔滨 150018）摘要：采用高效液相色谱法（HPLC）测定甲硝唑片的含量，本法具有简便、快速、准确等优点，可用于甲硝唑片含量的测定。
关键词：高效液相色谱法、甲硝唑片、含量测定、注意事项1 引言甲硝唑（Metronidazole Tablets）（化学名称：2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇）甲硝唑在水产养殖生产上常被用于治疗鱼类的几种滴虫感染。
但甲硝唑存在致癌性和致遗传变异等毒副作用，因此，许多国家禁止其在动物源性食品中使用，规定在所有食品动物可食性组织中最高残留限量（MRL）为零。
我国农业部（2002年农业部第227号公告）也有同样规定。
建立针对这种违禁兽药的简单、便捷、灵敏的检测方法非常必要。
甲硝唑片的常规检测方法为高效液相色谱法，参照标准《中国药典》2010年版二部。
2 实验部分2.1 仪器与试剂高效液相色谱仪，泵1525，紫外检测器2487，自动进样器（Waters公司）；AB265-S电子天平（Mettler公司）；AR2140D电子天平（赛多利斯公司）；101A-0S电热恒温鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；甲醇（Fisher公司）和水（由Millipore公司超纯水器制得）为色谱试剂；甲硝唑标准品（含量100%，购自中国药品生物制品检定所）。
2.2 色谱条件及测定法用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（20:80）为流动相；检测波长320nm。
取甲硝唑片20片，精密称定，研细，精密称定细粉约0.3425g（约相当于甲硝唑0.25g），置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使溶解，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀虑过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取甲硝唑对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.25mg的溶液，同法测定。
高效液相色谱法测定甲硝唑结肠定位缓释微丸的含量
【 ｓｒｃ】 Ｏ ｊｃｉｅ ｏｅｔｂｉ ｉｈｐｒ ｒ ｎｅｌ ｕｄｃ ｒｍ ｔ ｒｐ ｙｍ ｔｏ ｒ ｅ ｒ ｉ ｎ ｔ ｎ Ａｂｔａｔ ｂｅｔ Ｔ ｓ ｌ ｈａｈ ｅｆ ｍａｃ ｑｉ ｈｏ ａ ｇａｈ ｅｈｄｆ ｔ ｎ ｇｍｅ ｏ— ｖ ａ ｓ ｇ ｏ ｉ ｏ ｏｄｅ ｉ ｍ ｒ ｉａｏｅｉ ｃｌｎ ｓｅｉｃｓｓ ｉｅ －ｅ ａｅｐｌ ｔ Ｍｅｈ ｄ Ｈｇ ｅｆ ａｃ ｉ ｉ ｃｒｍ ｔｇ ｐｙ （ Ｐ Ｃ ｄｚｌ ｎ ｏ －ｐｃ ｉ ｕｔｎ ｄ ｒｌ ｓ ｅｌｓ ｏ ｆ ａ ｅ ｅ． ｔｏ ｓ ｉ ｐｒ ｒ ｎｅｌ ｕｄ ｈｏ ａｏ ａ ｈ Ｈ Ｌ ） ｈ ｏ ｍ ｑ ｒ
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ｒ０９ ９ ； － ９ ＝ ． ９ 日内、 日间标准偏差 均＜ ％； ２ 平均 回收率均 ９ ． １０１ 结论 该方法的精 密度 、 ８９ ０ ． ％～ ％。 准确度 、 重现性均符
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实验二高效液相色谱法测定甲硝唑的含
量
一、实验目的
1.熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能。
2.了解反相色谱法的原理、优点和应用。
3.了解流动相的选择依据及配制方法。
4.掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基本方法。
二、实验原理
高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。
本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来分离检测未知样中甲硝唑的含量。
以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。
三、实验内容
（一）实验仪器与材料
1.实验仪器：高效液相色谱仪、精密天平、50mL烧杯、玻璃棒、称量纸、10mL容量瓶、50mL 容量瓶、注射器、洗瓶。
2.实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、HCl（0.1mol/L）、乙腈、三氟乙酸、超纯水。
（二）实验内容
1、色谱操作条件的制定：
色谱柱：C18柱（250×4.6mm,5μm）；
流动相：乙腈：0.02%三氟乙酸水溶液（20：80）
流速：1mL/min
检测波长：277nm
柱温：35℃
进样量：20μL
2、标准溶液配制
精密称取在105℃条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品10mg，置于50mL容量瓶中，用0.1mol/L的HCl溶液溶解并定容至刻度，即得浓度为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备用。
3、标准曲线的建立
（1）精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3mL、0.5 mL、0.7 mL、0.9 mL、1.1 mL置于10 mL的容量瓶中，然后用0.1mol/L的HCl溶液定容至刻度，得到浓度梯度为6μg/mL、10μg/mL、14μg/mL、18μg/mL和22μg/mL的标准溶液，分别过0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液置于1.5mL的EP管中并标号，各进样20μL检测，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归。
（2）线性要求：色谱峰分离度大于1.5，浓度点n＝5。
用浓度c对峰面积A作线性回归处理，得一直线方程，r应大于0.999，方程的截距应近于零。
4. 样品溶液的配制
精密称取甲硝唑原料药10mg，置于50mL容量瓶中，用0.1mol/L的HCl溶液溶解并定容至刻度，摇匀，再从中取出0.7mL定容至10mL，即得甲硝唑样品溶液。
5.甲硝唑样品含量测定
用注射器吸取已配制好的甲硝唑样品溶液适量，过0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液置于1.5mL的EP管中并标号，再从中吸取20μL注入液相色谱仪，采用高效液相色谱法在277nm 波长处测定溶液中甲硝唑峰面积，最后通过标准曲线计算样品中甲硝唑的含量。
四、实验结果
1.标准曲线方程及绘制。
2.甲硝唑样品含量。
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