高效液相色谱法测定有机化合物的含量
正相高效液相色谱法测定有机金属抗癌原料药二氯二茂钛的含量
- - 二氯二茂钛是一种新型结构的有机金属抗癌化 合物， 对实体瘤有很强的抑制作用， 且几乎没有肾脏 毒 性 和 骨 髓 毒 性， 该化合物已进入二期临床研 究
［)］
#" 结果与讨论
# ! !" 色谱柱的选择 - - 二氯二茂钛极性大， 溶解性特殊， 其在水或脂肪 烃中不溶， 在甲醇中极微溶， 在二氯甲烷或三氯甲烷 中微溶， 在二甲基亚砜或二甲基甲酰胺中溶解， 故在 非极性的 D>= 柱和硅胶柱上难以保留， 随流动相一 起出峰。受顺铂测 定 方 法 的 启 发， 根据二氯二茂钛 的分子结 构 以 及 它 特 殊 的 溶 解 行 为 与 顺 铂 的 相 似 性， 本研究选择用氰基键合色谱柱分离， 利用氰乙基 取代硅胶的羟基与化合物形成诱导极化作用力而在 色谱柱上保留。 # ! #" 流动相的选择 - - 本研究分别以正己烷与氯仿、 二氯甲烷、 乙醚等 配成二元溶剂作为流动相进行比较研究， 结果表明： 二氯甲烷和正己烷为流动相时峰形和分离度均符合 方 要求， 当 正 己 烷 + 二 氯 甲 烷 的 体 积 比 为 %" / %" 时， 法专属性强， 样品中降解产物对测定无干扰。 # ! $" 内标的选择 - - 选择了丹皮 酚、 厚 朴 酚、 甲 氧 苄 氨 嘧 啶、 邻苯二 甲醛、 二 茂 铁 以 及 !+ 溴 代 苯 乙 酮 等 不 同 的 内 标 物 质， 研究结果表明， ! + 溴代苯乙酮作为内标物可以 与 二氯二 茂 钛 主 峰 达 到 完 全 分 离 （ !6 2 ! ） ， 且保留时 间适宜 （ 见图 ) ） ， 故选其作内标。 # ! %" 线性关系 - - 精 密 称 取 干 燥 至 恒 重 的 二 氯 二 茂 钛 对 照 品 !% /5 ， 置于 )"" /8 量瓶中， 用流动相溶解并稀释至刻 度， 摇 匀， 即 得 质 量 浓 度 为 "0 !% 5 : 8 的 对 照 品 贮 备液。
高效液相色谱法同时测维生素a和维生素d的原理
高效液相色谱法同时测维生素a和维生素d的原理高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种分离技术，常用于分析和测定复杂的样品中目标化合物的含量。
在测量维生素A和维生素D时，HPLC可以提供高效、准确和灵敏的分析结果。
HPLC的基本原理是将一种混合物分离成为其组成部分。
它涉及到一个流动相（溶剂）和一个固定相（填充物）。
样品在流动相中通过固定相，根据不同化学性质的相互作用以及在两者之间的亲和力选择性地分离出来。
在测量维生素A和维生素D时，下面是HPLC的基本步骤：1.样品制备：对于维生素A和维生素D的测量，样品通常是食品、血液、营养补充剂等。
样品需要进行前处理步骤，如提取、稀释和过滤，以获得可测量的分析样品。
2.色谱条件设置：选择适当的色谱柱和填料，以确保目标化合物的高效分离。
维生素A和维生素D的分子结构不同，因此可能需要使用不同的填料和溶剂体系。
3.流动相选择：选择合适的溶剂系统以实现维生素A和维生素D的分离。
流动相通常是有机溶剂和缓冲溶液的混合物。
溶剂的选择应考虑到色谱柱类型、填料性质和化合物的亲和力。
4.柱温和流速控制：控制色谱柱的温度和流速以优化分析条件。
柱温度可以影响化合物的分离性能，而流速可以影响分析时间和色谱峰形。
5.峰检测：使用适当的检测器检测样品中维生素A和维生素D的峰。
常见的检测器包括紫外-可见吸收光谱仪（UV-VIS）、荧光检测器和质谱仪。
检测器的选择应根据目标化合物的特性和所需的灵敏度进行。
6.标准曲线与定量：根据一系列已知浓度的标准物质制备标准曲线，并根据样品中的峰面积与标准曲线进行定量。
通过比较样品峰的面积和标准曲线上对应峰的面积，可以确定维生素A和维生素D的浓度。
7.数据分析与结果解释：根据定量结果进行数据分析和结果解释。
可以计算样品中维生素A和维生素D的浓度，并进行统计比较或评估。
总结起来，HPLC同时测维生素A和维生素D的原理是通过将样品分离并进行检测来确定目标化合物的含量。
中药制剂有效成分含量测定中高效液相色谱法的应用分析
中药制剂有效成分含量测定中高效液相色谱法的应用分析中药类型包括中药成方制剂、中成药、单味制剂等，与西药相比，中药制剂不良反应小，用量少，且具有一定持久性和高效性。
但中药制剂所含成分较多，制备工艺复杂，在中药制剂质量控制上很难做到面面俱到，造成中药制剂质量良莠不齐。
为保证中药制剂质量，该研究采用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）对中药制剂有效成分含量测定中的应用与发展进行分析研究，并提出观点，以供参考。
标签：中药制剂；含量测定；高效液相；色谱法中药制剂质量检测中，一般将具有生理活性的化学成分作为控制标准与质量评价，以衡量产品是否稳定、质量是否达标等。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种具有分析速度快、检测灵敏度高、分离效率高、应用范围广、操作方便、重现性高等诸多特点的成分含量测定方法，可用于分析样品沸点、大分子量有效成分、热不稳定性等，已成为目前控制中药制剂有效成分的重要手段。
该研究对HPLC法在中药制剂中药苷类、萜类、黄酮类、生物碱类、醌类、木脂素类、香豆素类、有机酸类等8种有效成分含量测定应用进行介绍。
1 中药苷类成分含量测定苷类在是天然药物研究中不可忽视的一类成分，其广泛分布于中药界，生理活性多样，结构不一，国内外均有对采用HPLC法测定中药苷類成分含量的文献报道[1]。
高广慧等[2]采用HPLC法对中芍药苷含量进行测定，将提取与分离工艺优化，有效分离芍药苷成分，方法准确可靠，能够较好控制中成药、中药材中芍药苷质量。
苏晓楠等[3]通过HPLC法，快速、准确测定了芒果苷、新芒果苷及知母皂苷成分的含量，为中药材质量控制的全面性奠定了坚实基础。
陈华等[4]用HPLC法测定黄芩苷含量，通过精密度、稳定性、重复性、加样回收率试验及样品含量测定，结果显示样品分离度及重现性好，峰型佳，无杂质峰干扰，保留时间稳定，精密度、稳定性、重复性均符合标准。
高效液相色谱仪的定性、定量分析(未知样品中苯甲酸含量的测定)
高效液相色谱测定饮料中的苯甲酸
一. 实验目的：
1. 学习高效液相色谱法的测定原理； 2.掌握高效液相色谱仪（HP1100）的定性、定量 分析方法。
（2）定量分析（ESTD法）： 用高效液相色谱法测定未知样品中的苯甲酸含量，将 已配置浓度不同的苯甲酸标准溶液也进入色谱系统，绘制 浓度——峰面积的标准曲线。如流速和泵的压力在整个实 验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间 （ T0或保留距离）和峰面积A后，可直接用 T0 定性，用峰 面积作为定量测定的参数，注入未知样品后，得知未知样 品的峰面积，查标准曲线，求出未知样中的苯甲酸的含量 。
四．实验步骤：（ESTD法） 1． 标准储备液的配置：准确量取0.144克苯甲酸钠试剂 ， 用 纯 水 或 去 离 子 水 溶 解 ， 定 容 到 100 毫 升 ， 浓 度 为 1.44mg/ml. 分别取此标准液5 ml，2.5 ml，1 ml, 0.5 ml稀 释为10 ml，则浓度分别为0.72 mg/ml，0.36 mg/ml，0.144 mg/ml，0.072 mg/ml。 2． 打开计算机，开仪器，稳定后，打开桌面的ONLINE 工作站。 设定方法：设置泵的流速为1ml/min，柱温为室温（ 40度左右），停止时间为4min，流动相比例（甲醇：水 =60；40），当流动相通过色谱柱约5-10min，记录仪上基 线稳定后，开始进样。 3． 进样：进样阀放在装载的位置上，用注射器取25微升 浓度最低的标准样（比进样阀上的定量环多5-10微升以上 ），注入进样阀中。
高效液相色谱法测定多组分样品的实验教学探讨
高效液相色谱法测定多组分样品的实验教学探讨刘普;邓瑞雪;高嘉屿;孙鲜明;尹卫平【摘要】高效液相色谱法是天然有机化合物定性定量分析测试的重要手段.该文探讨建立一种采用RP-HPLC同时测定丹皮中几种单萜苷类化合物含量的方法.研究确定了HPLC法分离和测定的色谱条件,包括色谱柱、流动相、流速、检测波长等.该实验为课题组实际研究过程中多组分样品的分析,实验过程中采用流动相梯度洗脱和测试波长变换测试的方法,实验方案的设计涵盖了高效液相色谱法测试中的主要知识点.实践表明,通过实验提高了学生的学习兴趣,锻炼了动手能力.【期刊名称】《实验科学与技术》【年(卷),期】2017(015)003【总页数】6页(P37-42)【关键词】高效液相色谱;实验教学;波长变换;外标法【作者】刘普;邓瑞雪;高嘉屿;孙鲜明;尹卫平【作者单位】河南科技大学化工与制药学院,河南洛阳471023;河南科技大学化工与制药学院,河南洛阳471023;河南科技大学化工与制药学院,河南洛阳471023;河南科技大学化工与制药学院,河南洛阳471023;河南科技大学化工与制药学院,河南洛阳471023【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2;G642.423高效液相色谱法（high performance liquid chro matography，HPLC）是现代研究中一种重要的分离分析手段。
高效液相色谱是有机化合物快速高效分离分析的重要手段，具有其他方法所不具备的优点［1－5］。
目前，高效液相色谱已在食品检验、中药质量控制、环境监测、生物工业、制药工业等科学领域得到广泛应用，成为现代自然科学研究中必不可少的常规仪器［6－7］。
作为一种常见的分析测试手段，高效液相色谱法是仪器分析课程和现代分析测试技术课程中一个非常重要的教学内容，掌握高效液相色谱的仪器工作原理及基本操作方法是很多专业学生必须掌握的基本技能［8－9］。
高效液相色谱法测定多组分样品实验为我校化学工程与工艺专业、有机化学专业和药理学专业研究生课程现代分析测试技术中的一个综合设计性实验。
高效液相色谱法测定中药复方制剂中有效成分含量的研究
[实验原理]本实验采用HPLC法测定饮料中咖啡因的含量。实验材料包括饮料 样品、色谱纯甲醇、超纯水、咖啡因标准品等。实验步骤如下：
1、准备饮料样品，将其中的咖 啡因提取出来。
2、使用甲醇和水混合液进行稀 释，制备标准系列。
3、用HPLC仪进行色谱分析，测 定咖啡因的含量。
4、通过对标准系列进行色谱分析，确定咖啡因的保留时间和峰高。 5、根据样品溶液的峰高和标准系列的峰高，计算饮料中咖啡因的含量。
高效液相色谱法测定中药复方制剂中有 效成分含量的研究
01 引言
03 实验原理 05 实验步骤
目录
02 实验方法 04 实验材料 06 数据处理方法
07 实验结果
09 结论
目录
08 实验分析 010 参考内容
引言
随着中医药学的不断发展，中药复方制剂在临床上的应用日益广泛。为了确保 中药复方制剂的质量和疗效，准确测定其中有效成分的含量至关重要。高效液 相色谱法（HPLC）具有高分辨率、高灵敏度、快速分析等特点，为中药复方制 剂中有效成分含量的测定提供了有效手段。
展望未来，高效液相色谱法在中药复方制剂研究中的应用仍有广阔的发展空间。 未来研究可以进一步优化实验条件，提高分析方法的系统性和灵敏度。可以结 合其他现代分析技术，如质谱联用、核磁共振等手段，对中药复方制剂中的有 效成分进行深入研究和探讨。这将有助于更好地理解中药复方制剂的药效物质 基础及其作用机制，为中药复方制剂的质量控制和临床应用提供有力支持。
[实验结果分析]通过对10种不同品牌和类型的饮料进行测定，实验结果表明， 其中7种饮料中检测到咖啡因，含量范围为50-200mg/L，另外3种饮料中未检 测到咖啡因。实验数据的表格和图形如下：
（请在此处插入表格和图形）
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量一、引言三聚氰胺是一种有机化合物，化学式为C3H6N6，是一种白色结晶性固体，可溶于水和乙醇，主要用作工业生产中的原料，如氰酸酯树脂、氰酸脂和脲醛树脂等。
但由于其高氮含量，三聚氰胺还可以在一定条件下成为一种良好的氮肥料。
三聚氰胺在奶制品中的使用引起了广泛的争议。
2008年，中国发生了因三聚氰胺被加入奶粉中而导致大量儿童发生尿路结石的事件，震惊了全国。
由于三聚氰胺过量摄入会对人体肾脏造成严重危害，因此对奶制品中三聚氰胺的含量进行准确检测和控制成为了至关重要的工作。
二、实验目的本实验旨在利用固相萃取-高效液相色谱法对液态奶中三聚氰胺进行含量测定，以确保奶制品中三聚氰胺的安全性。
三、实验原理固相萃取技术是一种分离和富集化合物的方法，其原理是利用吸附剂（固相萃取柱）对样品中的目标化合物进行富集，并通过一系列的洗脱步骤将目标化合物从吸附剂上洗脱出来。
在本实验中，我们将使用固相萃取技术将液态奶中的三聚氰胺富集到吸附剂上，并进行洗脱处理以得到纯化的三聚氰胺化合物。
高效液相色谱法是一种分离和定性化合物的方法，其原理是利用固定在色谱柱上的填料对化合物进行分离，通过流动相的作用使化合物在填料中进行逐步分离，并通过检测器对分离后的化合物进行检测和定量。
在本实验中，我们将使用高效液相色谱法对洗脱后的三聚氰胺进行检测和定量分析。
四、实验步骤1. 样品准备：将液态奶样品装入适当的容器中，以备后续的固相萃取处理。
2. 固相萃取：将样品经过预处理后注入固相萃取柱中，利用固相萃取柱对三聚氰胺进行富集。
3. 洗脱处理：使用洗脱液将固相萃取柱中富集的三聚氰胺进行洗脱处理，得到纯化的三聚氰胺化合物。
4. 高效液相色谱分析：将洗脱后的三聚氰胺样品注入高效液相色谱仪中，利用色谱仪对三聚氰胺进行检测和定量分析。
5. 数据处理：根据高效液相色谱仪得到的检测结果，计算出液态奶中三聚氰胺的含量。
五、实验结果根据实验数据分析，我们得到了液态奶中三聚氰胺的含量为x mg/L。
高效液相实验报告
篇一：高效液相色谱实验报告高效液相色谱实验报告一、实验目的1了解液相色谱的发展历史及最新进展 2 学习液相色谱的基本构造及原理3 掌握液相色谱的操作方法和分析方法，能够通过hplc分离测定来对目标化合物的分析鉴定。
二、实验原理液相色谱法采用液体作为流动相，利用物质在两相中的吸附或分配系数的微小差异达到分离的目的。
当两相做相对移动时，被测物质在两相之间进行反复多次的质量交换，使溶质间微小的性质差异产生放大的效果，达到分离分析和测定的目的。
液相色谱与气相色谱相比，最大的优点是可以分离不可挥发而具有一定溶解性的物质或受热后不稳定的物质，这类物质在已知化合物中占有相当大的比例，这也确定了液相色谱在应用领域中的地位。
高效液相色谱可分析低分子量、低沸点的有机化合物，更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化合物。
80%的有机化合物都可以用高效液相色谱分析，目前以已经广泛应用于生物工程、制药工程、食品工业、环境检测、石油化工等行业。
三、高效液相色谱的分类吸附色谱法、分配色谱法、空间排阻色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、化学键合相色谱法四、高效液相色谱仪的基本构造高效液相色谱至少包括输液系统、进样器、分离柱、检测器和数据处理系统等几部分。
1 输液系统：包括贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。
贮液装置用于存贮足够量、符合hplc要求的流动相。
高效液相色谱柱填料颗粒比较小，通过柱子的流动相受到的流动阻力很大，因此需要高压泵输送流动相。
2 进样系统：将待测的样品引入到色谱柱的装置。
液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小、保证柱中心进样、进样时引起的流量波动小、便于实现自动化等多项要求。
进样系统包括取样、进样两项功能。
3 分离柱：色谱柱是色谱仪的心脏、柱效高、选择性好、分析速度快是对色谱柱的一般要求。
商品化的hplc微粒填料，如硅胶和以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包括离子交换树脂）等的粒度通常在3μm、5μm、7μm、以及10μm。
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实验四高效液相色谱法测定有机化合物的含量
[目的要求]
1、了解仪器各部分的构造及功能。
2、掌握样品、流动相的处理，仪器维护等基本知识。
3、学会简单样品的分析操作过程。
[基本原理]
高效液相色谱仪液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的主色谱分离技术，在基本理论方面与气相色谱没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质差别。
与气相色谱相比，高效液相色谱对样品的适用性强，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，可以弥补气相色谱法的不足。
液相色谱根据固定向的性质可分为吸附色谱、键合相色谱、离子交换色谱和大小排阻色谱。
其中反相键合相色谱应用最广，键合相色谱法是将类似于气相色谱中固定液的液体通过化学反应键合到硅胶表面，从而形成固定相。
若采用极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非极性键合相，极性流动相，则称为反相色谱。
这种分离的保留值大小，主要决定于组分分子与键合固定液分子间作用力的大小。
反相键合相色谱采用醇-水或腈-水体系作为流动相，纯水廉价易得，紫外吸收小，在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。
使用最广泛的反相键合相是十八烷基键合相，即让十八烷基（C18H37―）键合到硅胶表面，这也就是我们通常所说的碳十八柱。
[仪器试剂]
高效液相色谱仪（包括储液器、高压泵、自动进样器、色谱柱、柱温箱、检测器、工作站）、过滤装置
待测样品（浓度约100 ppm）、甲醇、二次水
[实验步骤]
1、仪器使用前的准备工作
（1）样品与流动相的处理
配好的溶液需要用0.45 μm的一次性过滤膜过滤。
纯有机相或含一定比便例有机相的就要用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的就要用水系滤膜。
水、甲醇等过滤后即可使用；水放置一天以上需重新过滤或换新鲜的水。
含稳定剂的流动相需经过特殊处理，或使用色谱纯的流动相。
（2）更换泵头里清洗瓶中的清洗液
流动相不同，清洗液也不同，如果流动相为甲醇-水体系，可以用50%的甲醇；如果流动相含有电解质，通常用95%去离子水甚至高纯水。
如果仪器经常使用建议每周更换两次，如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。
（3）更换托盘里洗针瓶中的洗液
洗液一般为：50%的甲醇。
2、排除泵内气泡
开关排气阀时泵一定要关掉。
具体操作如下：
（1）在泵关闭的情况下，打开排气阀。
（2）选择要排气泡的通道，打开泵。
（3）按下泵前面板右下方的“Purge”键，仪器将以6.0 mL/min的速度自动快速清洗泵内残留的气泡，5分钟将自动停止。
若想想手动停止，则再按再按“Purge”键，将停止清洗。
（4）换其他通道，排气泡。
注意：使用快速清洗阀时，只能一个一个通道的排气泡，不得将几个通道同时按比例排气泡，比例阀的快速切换易导致损坏。
（5）流路中没有气泡后，将泵关掉，再关排气阀。
注意：排气阀不能拧的过紧，也不能拧的过松，拧得过松流动相容易从清洗阀部位流进泵头中引起报警。
3、设置柱温箱的温度
按住柱温箱上的“+”或“-”键，直到数字开始闪烁时设定温度。
4、系统的准备
（1）分析样品前先用甲醇或乙腈冲洗流路约20分钟，平衡活化色谱柱，并赶走管路中的杂质和水分。
（2）若流动相为有机相与水相的混合物，则第1步完成后，按照分析样品的需要调节例阀的比例后冲洗流路约20分钟后，待基线走平后即可进样。
（3）若流相中含有缓冲盐溶液、有机/无机酸或其它电解质，则第1步完成后用95%的去离子水冲洗流路约20分钟后，再按照分析样品的需要调节比例阀的比例后冲洗流路约20分钟后，待基线走平后即可进样。
5、洗针
做样之前，按自动进样器面板上的“wash”键，洗针并排掉针中残留的气泡。
若针中气泡仍未清除，则再次按“wash”键直至的的气泡清除为止。
6、进样
（1）程序文件的建立
泵的流速、各通道的比例；自动进样器的进样体积；柱温箱的温度；检测器的波长、测每个样品需要的时间等等，都得在程序文件里指定。
（2）方法文件的建立
进样后，软件会自动采集到色谱图，需要一个方法文件对这些谱图进行处理。
如积分、定性、定量等等。
（3）样品序列的建立
标样有多少个、样品有多少个，分别要进多少体积等等，都得在序列文件里指定。
（4）进样
（5）数据处理与报告打印
[注意事项]
1、泵
（1）放置了一天或以上的水相或含水相的流动相如需再用，需用微孔滤膜重新过滤。
（2）流动相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亚甲基氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等，以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。
2、柱温箱
柱温箱一旦发生报警，一定要及时找到原因。
若实验室湿度太高，则需采取相应的除湿措实。
若柱温箱中发生漏液现象，则需及时拧紧色谱柱并擦干漏液，长时间的漏液极易损坏柱温箱中的传感器。
3、检测器
（1）检测器的紫外或可见灯在长期打开的情况下，一定要保证有溶液流经检测池。
若不需要做样，可设置一个较低的流速（如0.05mL/min）或关闭灯的电源。
（2）检测器的灯一般是在流通池有溶液连续流动几分钟后才开的。
如果流动池中有气泡，则会提示漂移过大无法通过自检和校正。
（3）检测器的氘灯或钨灯不要经常开关，每开关一次灯的寿命约损失30小时。
若仪器经常使用，可几天开关灯一次。
4、整个系统
（1）缓冲溶液的浓度不能高于0.5 mol/L，pH范围2～12，Cl-的浓度要小于0.1 mol/L（防止腐蚀流路）。
（2）仪器长时间不用，每个泵通道和整个流路一定要用甲醇冲洗后保存，以免结晶或造成污染。
（3）待测样品或标样在流动相中一定要易溶，否则进样后会结晶造成定量不准确或堵塞色谱柱。
5、软件
采集紫外信号时，若分析物质的最大波长已知，则尽量减少采集的通道个数，以免占用电脑的空间，特别是PDA-100检测器。
[思考题]
1、液相色谱仪是有哪几部分组成的？各起什么作用？
2、流动相的选择有哪些依据？
3、柱压不稳定的原因是什么？。