最新高效液相色谱法测定维生素C
液相色谱提取维生素C
图2火龙果样品的HPLC谱图
图3猕猴桃的HPLC谱图
图4鸭梨的HPLC谱图
3.3样品相关数据及Vc含量的计算
实验测得的样品相关数据如表2所示。
表2样品的液相色谱数据与样品质量
样品名称
保留时间/min
峰面积
质量/g
火龙果
2.931
57115
5.0177
猕猴桃
2.964
462889
2.2实验步骤
2.2.1仪器准备
按操作说明开启液相色谱仪，设定方法参数。
2.2.2样品准备
准确称取切碎的蔬果样品5.0g，以1mol/L乙酸50 mL为萃取溶剂，微波功率设为自动，萃取时间为10 min，萃取温度设定为50℃，平行萃取两次（本次实验只萃取1次）。萃取液过滤后用1mol/L乙酸溶液定容至100 mL，制成供试品溶液。
2.2.3定性分析
分别取10μL 50 mg/L的Vc标准溶液和供试品溶液，进HPLC分析。根据保留时间定性分析蔬果中的Vc。
2.2.4校准曲线绘制
分别配制5，20，50，80，100 mg/L的Vc样品溶液，待液相色谱稳定后进样分析，平行测定3次。以Vc色谱峰高对浓度作图，绘制校准曲线。
2.2.5定量分析
液相色谱法中常用的定性方法有用已知纯物质对照定性、用文献值进行定性分析、根据相对保留值定性、与其他方法联用定性（如与质谱联用）等方法。可根据峰面积或峰高进行定量分析，具体计算方法有归一化法、标准曲线法、内标法、标准加入法。
2、如何快速建立未知物的液相色谱方法？一般应考虑哪些主要因素？
答：建立未知物的液相色谱方法应该考虑两个方面的因素，一方面是选择合适的色谱柱，色谱柱是液相色谱分析的核心组件，应根据分析对象的性质选取合适的色谱柱，如正向色谱、反向色谱和离子交换色谱等等；另一方面是流动相的选择，溶剂的极性是选择的重要依据，应该使用高纯度试剂做流动相，防止微量杂质长期积累和损坏色谱柱和使检测器噪声增加，同时应避免流动相与固定相发生作用使柱效下降或者损坏柱子，试样在流动相中应有适宜的溶解度防止沉淀在柱中积累还有流动相要满足检测器需求。
高效液相色谱法分析(维生素C)原始记录
V-试样最后定容体积，（mL）；m--实际检测试样质量，（g）；1000--换算系数（由μg/ml换算成mg/ml的换算因子）；F--稀释倍数（若使用6.3还原步骤时，即为2.5）K-若使用6.3中甲醇沉淀步骤时，即为1.25
浓度（μg/mL）
抗坏血酸峰面积（A）
回归方程
抗坏血酸Y=aX+b a=b=r=
定量限
固体样品取样量为2g时，抗坏血酸的定量限均为2.0mg/100g；液体样品取样量为10g（或10mL）时，抗坏血酸的定量限均为0.4mg/100g（或0.4mg/100mL）。
样品空白值
计算公式：X=
式中：X--试样中抗坏血酸的含量，（mg/100g）;
标准物质名称及浓度
抗坏血酸标准浓度：
仪器
检测条件
检测器：PDA检测器
色谱柱：C18反相柱
检测波长：245 nm
柱温：25℃
流速：0.7mL/min
进样量：μL
流动相：A:6.8g磷酸二氢钾和0.91g十六烷基三甲基溴化铵（pH2.5—2.8）；B:100%甲醇；A:B=98:2
标准曲线
序号
1
2
3
4
5
100--换算系数(由mg/g换算成mg/100g的换算因子）。计算结果保留三位有效数字。
质控（自控）
情况
样品总数
平行样个数
质控样个数
仪器使用情况使用前：使用后：
检验人：复核人：审核人：
高效液相色谱法分析（ 维生素C）原始记录第页，共页
样品编号
试样质量(g)
组分名称
定容体积
（ml）
样品浓度
HPLC法测定维生素C注射液中维生素C的含量
H P L C法测定维生素C注射液中维生素C的含量王奇年（江苏省泰州市第四人民医院药剂科 泰州 225300）【摘 要】摘要：目的:考察高效液相色谱法测定维生素C注射液中维生素C的含量的优点。
方法:高效液相色谱法测定维生素C注射液中维生素C的含量（色谱柱：Boston BosChrom Amino 5μm，柱长250mm，柱径4.6mm），流动相：0.01mol·L-1磷酸二氢钾（用磷酸调节pH值至 2.4）-乙腈（30∶70），柱温：35℃，流速：1.0mL·min-1，波长为 246nm。
结果：维生素 C 在9.97～39.88μg·mL-1的浓度范围内有良好的线性关系（r=0.9997）；平均回收率为100.6%，RSD为0.8%。
结论:由于维生素C在波长246nm处有最大吸收峰，确定246nm为本实验的测定波长。
维生素C具有水解性及强还原性，但其在酸性介质中由于受空气中氧的氧化速度减慢及生成单钠盐所以不致发生水解，故本文选取流动相A[0.5%亚硫酸氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.4）]稀释配备维生素C溶液，维持其稳定性。
另外，由于维生素C对光不稳定，故在检验操作及储存中应注意避光处理。
实验表明，本法简便，快速，准确，灵敏度高，回收率高，适合作维生素C的含量测定方法。
【期刊名称】北方药学【年(卷),期】2015(000)009【总页数】2【关键词】高效液相色谱法 维生素C注射液 含量测定1 资料与方法1.1 临床资料：维生素C（vitamin C）在临床上不仅用于眼科、口腔科及外科系统疾病药物治疗而且在心血管系统、消化系统疾病的辅助治疗中十分常用[1]。
维生素C是一种水溶性维生素，不但具有防治坏血酸的功能，还是一种强还原剂，脱氢维生素C的形成是由于分子中2位及3位碳原子的两个烯醇式羟基易解离而释放H+氧化而成[2]。
脱氢维生素C和维生素C共同形成了可逆的氧化还原系统，在人体内发挥着重要的作用：参与了体内的氧化还原反应，保持着谷胱甘肽的还原状态和巯基酶的活性，起到了解毒的作用；还参与体内多种羟化反应，既可以促进胶原蛋白的合成，又可以促进胆固醇的代谢；刺激免疫系统，可抑制病毒的增生，防治感染，阻止致癌物质的生成。
高效液相色谱法测定化妆品中的维生素C及其衍生物
高效液相色谱法测定化妆品中的维生素C及其衍生物摘要：维生素C(VC)，又称L-抗坏血酸，是一种天然抗氧化剂，抑制皮肤中酪氨酸酶活性，阻断黑色素生成，达到美白效果。
维生素C虽然活性高，但在溶液中不稳定，容易受到光、热、氧等因素的破坏，失去还原能力，限制了其在化妆品中的有效利用率。
关键词：高效液相色谱；维生素Ｃ；抗坏血酸葡糖苷；抗坏血酸磷酸酯镁；抗坏血酸乙基醚；一、样品处理1. 水易分散的样品。
适合化妆水、水乳液等含油脂较少的样品。
准确称取约 0. 500 ｇ样品于 50 ｍＬ具塞比色管中，加入 30 ｍＬ 0. 02 ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ 3. 0），涡旋混合 2 ｍｉｎ，转移至 50 ｍＬ容量瓶中，用 0. 02ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ 3. 0）定容至刻度。
混匀后取 10 ｍＬ溶液于 15 ｍＬ离心管中，在10 ℃、12 000 ｒ／ｍｉｎ条件下离心 10 ｍｉｎ，上清液过0. 22μｍ滤膜，滤液待测。
2. 水不易分散的样品。
适合面膏等含油脂较高及凝胶类、啫喱类样品。
准确称取约 0. 250 ｇ样品于 50 ｍＬ具塞比色管中，加入 1. 0 ｍＬ二氯甲烷，涡旋混合至样品均匀分散后，准确加入 25 ｍＬ 0. 02 ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶液（ｐＨ 3. 0），涡旋混合 2 ｍｉｎ。
混匀后取 10 ｍＬ溶液于15 ｍＬ离心管中，在10 ℃、12 000 ｒ／ｍｉｎ条件下离心 10 ｍｉｎ，上清液过0. 22 μｍ滤膜，滤液待测。
被测物含量超过标准曲线的线性范围时可取适量试样滤液用提取溶剂稀释后再测定。
二、样品前处理条件的优化维生素Ｃ和抗坏血酸磷酸酯镁易溶于水，抗坏血酸葡糖苷和抗坏血酸乙基醚是亲油亲水两性物质；维生素Ｃ在碱性和中性条件下不稳定，因此考虑采用酸性溶液作为提取溶剂。
化妆品基本上分为不需要乳化的液体类及需要乳化的膏霜类两大类。
前者含水量高，在水溶剂中容易分散形成均匀体系；后者含有一定的油脂，密度较高，在水溶液中不易分散。
高效液相色谱法测定维生素C注射液含量
高效液相色谱法测定维生素C注射液含量刘国如;刘永锁;陈振玲;王伟;丰廷宗;周毓瑾【摘要】Objective: To develop a quantitative method for the determination of Vitamin C in Vitamin C Injection.Methods: Phenomenex luna- NH2 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was used as chromatographic column, a mixture of acetonitrile and dibasic potassium phosphate buffer solution (1 :1, v/v) was used as mobile phase, which was adjusted to pH 3.0 by phosphoric acid, and the detection wavelength was at 245 nm with a flow rate of 1.0 ml/min. Results: Theregression equation was Y=29 560X-21 310 (r=0.999 5), which was linear over a range from 5 μg/ml to 30 μg/ml. Theaverage recovery was 98.30％ (n=9, RSD=2.1％). Conclusion: This method is sensitive, rapid and accurate, which is can be used for determination of Vitamin C in Vitamin C Injection.%目的:建立高效液相色谱法测定维生素C注射液中维生素C含量的方法.方法:采用Phenomenex luna- NH2分析色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为磷酸二氢钾缓冲液-乙腈(1∶1,磷酸调至pH 3.0);流速:1.0 ml/min;检测波长:245 nm.结果:维生素C的线性回归方程为Y=29 560X-21 310(r=0.999 5),线性范围为5～30 μg/ml,平均回收率为98.30%(n=9,RSD为2.1%).结论:该方法操作简便,结果准确,可用于测定维生素C注射液中维生素C的含量.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2011(008)027【总页数】2页(P50-51)【关键词】高效液相色谱法;维生素C注射液;维生素C;含量测定【作者】刘国如;刘永锁;陈振玲;王伟;丰廷宗;周毓瑾【作者单位】中国民用航空局民用航空医学中心(民航总医院),北京,100023;中国民用航空局民用航空医学中心(民航总医院),北京,100023;中国民用航空局民用航空医学中心(民航总医院),北京,100023;中国民用航空局民用航空医学中心(民航总医院),北京,100023;中国民用航空局民用航空医学中心(民航总医院),北京,100023;中国民用航空局民用航空医学中心(民航总医院),北京,100023【正文语种】中文【中图分类】R917维生素C 在临床上不仅用于心血管系统、消化系统疾病的辅助治疗，而且在眼科、口腔科和外科系统疾病的药物治疗中也十分常用[1]。
高效液相色谱法测定果珍中维生素C含量_金黎明
高效液相色谱法测定果珍中维生素C 含量 金黎明 姜 波 郝 苗 (大连民族学院生命科学学院,大连 116600) (大连市产品质量监督检验所,大连 116021) 摘要 用0.1%的草酸作为流动相,高效液相色谱法测定了果珍中维生素C 的含量。
维生素C 的浓度c 在0～300μg /m L 范围内与色谱峰面积A 呈正比关系,线性相关系数为0.9993。
方法的回收率为96.2%～103.2%,测定结果的相对标准偏差为0.6%(n =8)。
利用高效液相色谱法测定果珍中的维生素C 的含量,具有试剂用量少、操作简单、结果准确等特点,采用弱酸性的草酸为流动相,避免了维生素C 的分解。
关键词 维生素C 果珍 高效液相色谱 维生素C 是一种水溶性维生素,又被称为抗坏血酸,它是维持人体正常生理代谢的一种重要化合物,若严重缺乏会引起坏血病,维生素C 还可参与体内氧化还原反应,具有解毒作用。
近年的研究表明,维生素C 可预防癌症,具有抗氧化、抗衰老的作用,并对肝炎、肝硬化有疗效。
但是人体自身不能合成维生素C ,必须由食物中摄取,维生素C 广泛存在于新鲜水果、蔬菜中[1]。
维生素C 测定的方法一般有碘量法[2]、比色法[3]、荧光法[4]等,这些方法操作繁琐,近年来普遍采用高效液相色谱法测定维生素C[5,6]。
笔者利用高效液相色谱法,通过采用低浓度的草酸流动相,分析了果珍中的维生素C 含量,本方法所用试剂较少,操作简单,且通过采用弱酸性的草酸流动相,避免了维生素C 的分解,测定结果较为理想。
1 实验部分1.1 主要仪器与试剂 高效液相色谱仪:L C-10A 型,日本岛津公司; 二极管阵列检测器:S P D-M 10A 型,日本岛津公司; 高压输液泵:L C -10A 型,日本岛津公司; 自动进样器:S I L -10A 型,日本岛津公司; 维生素C 标准对照品:维生素C 含量99.7%。
中国医药上海化学试剂公司; 草酸:分析纯,沈阳医药有限公司; 甲醇:H P L C 级,使用前经0.45μm 滤膜过滤,美国T c d i a 公司; 草酸溶液:0.1%。
高效液相色谱法测定维生素C
高效液相色谱法测定维生素C的含量【摘要】高效液相色谱法已经成为解决生命科学、医药学发展中各种难题的重要手段，在实验室中也广泛应用于物质的定性定量分析。
本实验中利用高效液相色谱法对维生素C进行定量分析，所采用的定量分析方法为外标法，通过做出标准溶液浓度与峰面积的标准曲线进而对样品中的维生素C进行定量检测。
【关键词】高效液相色谱法、维生素C、含量1、引言维生素 C（Vitamin C, Vc）又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。
Vc 在体内参与多种反应，如氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。
人体内缺乏 Vc 时容易导致坏血病。
同时，由于 Vc 是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成，它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。
Vc 在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔类水果中含量较高。
樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中 Vc 含量在 50-300 mg/100 g。
溶于流动相（mobile phase）中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationary phase）发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
高效液相色谱法（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在经典液相色谱法的基础上，于 60 年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC）。
HPLC 系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。
其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。
有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代 HPLC 仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。
维生素C含量的测定(高效液相色谱法)
维生素C含量的测定(高效液相色谱法)1．原理试样中的抗坏血酸用溶解超声提取后，以离子对试剂为流淌相，经反相色谱柱分别，其中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸挺直用配有紫外检测器的液相色谱仪(波长245nm)测定；试样中的L(+)-脱氢抗坏血酸经L-半胱氨酸溶液举行还原后，用紫外检测器(波长245nm)测定L(+)-抗坏血酸总量，或减去原样品中测得的L(+)-抗坏血酸含量而获得L(+)-脱氢抗坏血酸的含量。
以色谱峰的保留时光定性，外标法定量。
2．试剂与设备 (1)试剂偏磷酸(HPO3)n：含量(以HPO3计)≥38% ,(Na3PO4·12H2O),(KH2PO4) ,(H3PO4) ; 85%, (C3H7NO2S)：优级纯，(C19H42BrN)：色谱纯，(CH3OH)：色谱纯。
(2)试剂配制偏磷酸溶液(200g/L)：称取2008(精确至0.1g)偏磷酸，溶于水并稀释至1L，此溶液于4℃的环境下可保存一个月；偏磷酸溶液(20g/L)：量取50mL 200g/L偏磷酸溶液，用水稀释至500mL; 溶液(100g/L)：称取100g(精确至0.1g)，溶于水并稀释至1L, 溶液(40g/L)：称取4g ，溶于水并稀释至100mL，临用时配制。
(3)标准品L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6)：纯度≥99%, D(+)-抗坏血酸(异抗坏血酸)标准品(C6H8O6)：纯度≥99%。
(4)标准溶液配制L(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000mg/mL)：精确称取L(+)-抗坏血酸标准品0.0lg(精确至0.01mg)，用20g/L的偏磷酸溶液定容至10mL。
该贮备液在2～8℃避光条件下可保存一周。
D(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000mg/mL )：精确称取D(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至0.01mg)，用20g/L的偏磷酸溶液定容至10mL。
该贮备液在2～8℃避光条件下可保存一周。
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高效液相色谱法测定维生素C的含量
【摘要】高效液相色谱法已经成为解决生命科学、医药学发展中各种难题的重要手段，在实验室中也广泛应用于物质的定性定量分析。
本实验中利用高效液相色谱法对维生素C进行定量分析，所采用的定量分析方法为外标法，通过做出标准溶液浓度与峰面积的标准曲线进而对样品中的维生素C进行定量检测。
【关键词】高效液相色谱法、维生素C、含量
1、引言
维生素 C（Vitamin C, Vc）又叫抗坏血酸，是一种水溶性维生素。
Vc 在体内参与多种反应，如氧化还原过程，在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。
人体内缺乏 Vc 时容易导致坏血病。
同时，由于 Vc 是一种水溶性的强有力抗氧化剂并参与胶原蛋白的合成，它同时还具有防癌、预防动脉硬化、治疗贫血、抗氧化和提高人体免疫力等功效。
Vc 在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔类水果中含量较高。
樱桃、番石榴、辣椒、猕猴桃等水果中 Vc 含量在 50-300 mg/100 g。
溶于流动相（mobile phase）中的各组分经过固定相时，由于与固定相（stationary phase）发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
高效液相色谱法（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在经典液相色谱法的基础上，于 60 年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC）。
HPLC 系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。
其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。
有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代 HPLC 仪还有微机控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。
制备型 HPLC 仪还备有自动馏分收集装置。
2、HPLC测定维生素C的含量
2.1、仪器试剂
2.1.1、仪器
高效液相色谱仪（Agilent1260），色谱柱：C18 柱 (250 mm×4.6 mm, I.D.5 µm)；平头进样器。
2.1.2、试剂
乙腈（色谱纯），冰乙酸，维生素 C，磷酸二氢钾等均为分析纯，实验用水为超纯水。
Vc 标准溶液：快速准确称取 0.025 g Vc，用 1 mol/L 乙酸溶液溶解，定量转移至250 mL 容量瓶中，用 1 mol/L 乙酸溶液定容，得到 100 mg/L 标准溶液备用，现用现配。
2.1.3、色谱条件
流动相： 3%的乙腈-0.05 mol/L水溶液（v/v）；流速 1 mL/min；柱温 30℃，紫外检测波长 265 nm；进样量10 µL。
2.2、实验步骤
2.2.1、样品处理
1、按操作说明开启液相色谱仪，设定方法参数。
2、样品准备：取 10 片维生素 C 片，研匀。
准确称取 0.02g，用 1 mol/L 乙酸溶液溶解，定量转移至 50 mL 容量瓶中，用 1 mol/L 乙酸溶液定容，用0.45µm滤膜过滤。
3、标准曲线绘制：分别配制 5，20，50，80，100 mg/L 的 Vc 样品溶液，待液相色谱稳定后进样分析，平行测定 3 次。
以 Vc 色谱峰面积对浓度作图，绘制标准曲线。
4、定量分析：供试品溶液经0.45 µm 微孔滤膜过滤后进行 HPLC 分析。
平行测定 2
次，记录其 Vc 的色谱峰面积，根据校准曲线计算维生素片中 Vc 的含量。
5、实验结束后，按要求清理好仪器。
3、数据处理
不同Vc 浓度对应色谱峰面积图表
浓度mg/L 5 20 50 80 100
峰面积mAU*S 146.73135 592.21143 1509.60181 2428.49390 3050.15918
y=30.58x-14.146
y(sample)=1892.33813
代入上式有x=62.34mg/L
4、实验结果讨论
本实验中所采用的定量分析方法为外标法，即标准校正法。
该法直接，易于操作，计算简单。
但是标样与测定组分为统一化合物，分离、检测条件的稳定性对定量结果影响较大。
除此方法外，常用的定量分析方法还有内标法、峰面积归一化法。
至于定性分析，常用的方法为保留值定性，与已知物对照定性，还有安保柳枝经验规律定性。
此外还有选择性检测响应定性，色谱-结构分析仪器联用等方法。
在分析未知物时，首先要知道这个化合物化学物理常数，然后选择合适的样品处理方法，使样品有较好的萃提回收率和较少的干扰成分存在；而对于分离分析，如果使用紫外检测器，在这之前应先做个化合物的吸收波长扫描，以找出其最大吸收波长，流动相先用纯水和乙腈或甲醇在不同比例时进行调节，保证出峰时无干扰和一定的分离度，然后依据峰形和化合物的pKa值进行水相的pH值调节，以找到最佳的流动相体系。
气相色谱仪具有分离选择性好、柱效高、速度快、检测灵敏度高、试样用量少、应用广泛等特点。
但气相色谱仪也具有一点局限性，在没有纯标样的条件下，对试样中未知物的定性定量较为困难，往往需要与红外光谱、质谱等结构分析仪器联用，对于飞沸点高、热稳定性差、腐蚀性和反应活性强的物质，气相色谱仪分析比较困难。
高效液相色谱法与气象色谱法相似，具有高速、高效、高选择性、高灵敏度的特点，但仪器设备相对复杂，成本较高。
高效液相色谱法尚缺少灵敏度高的通用型检测器，而且使用有机溶剂作为流动相容易污染环境，梯度洗脱操作复杂。