桑黄鲨烯环氧酶基因克隆与序列分析

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秦巴山区桑黄18SrDNA的序列与亲缘关系分析

（ｈａｘｓｔｔｏｃｏｉｇ，ｉｎ７０４，ｈｎ）ＳａｎｉｎｔｕｅｆｒｂｌｙＸ１０３ＣｉａＩｉＭｉｏａ
ＡｓａｔＡｉｂｔｃ：ｍ３ｄｆｒｎｈｌｎｓｉｔｓｓａｓｃｌｃｄｆｍｔｅＱｎａＭｏｎａｒａａｅｕｅ，ｌｅｎｒｉｅｅｔｅｌｕｎｅｔｉｏｅｔｏｉＢｕｔｎａｅｒｓｄｃｏｄａｄｆＰｉｌｕｒｎｌｅｒｈｉｎ
ＰｅｌｕｉｔｕｎＱｉｂｏｎａｎｈｌｎｓｌｅｓｉｎａＭｕｔｉｓｉｎ
ＬＩｉｇＷＵＹ — ａ，ＨＡＧＷｅ－ｎＺＡｕ－ａＬ－ｉＥｎ，ａｚｏＺＮｎｊ，ＨＮＧＹｅｊｎ，ＩｘｎＰｈｕｕＹｅ
西北大学学报（自然科学版）２１０２年８月，４第２卷第４期，ｕ．２１，ｏ．２Ｎ．Ａｇ，０２Ｖ１４，ｏ４
ＪｕｎｌｆｏｈｅｔｎｖｒｔＮｔｒｃｎｅＥｉｏ）ｏｒａｏ￣ｗｓＵｉｓｙ（ａｕａＳｉｃｄｉＮｅｉｌｅｔｎ
ｔｗｏＰｌｉｕｉｔｕｔａｎｈｅｔｈｅｌｎｓｌｅｓｓｒｉｓ，ＳａｇＳａｕａｇｔｇｔｒｗｉｈｅＰｗｅｌＳｐｎ— ｏｅｆｇｎｎｔｓｂｕｉｎｎ — ｎｄＨａＳｎｏｅｈｅｔｔｏｌｉｈｌｕｎｕｓＩｏｏｕａｍｉ，ｈｓｍｉａｉｉｓｗｅｅ９．ｉｌｒｔｅｒ９８％ａｄ９．ｎ９９％．
其中２个桑黄菌株桑一和桦桑与鲍氏针层孔菌（ｎｎｔｓｂｕｉＳＩｏｏａｍｉｕ）

暴马桑黄ras基因启动子的克隆及序列分析

第46卷第2期2021年3月Vol.46No.2Mar.2021林业科技FORESTRY SCIENCE&TECHNOLOGYDOI:10.19750/ki.1001-9499.2021.02.007暴马桑黄ras基因启动子的克隆及序列分析乌木提•巴合提别克王淑婷唐玉倩邹莉*(东北林业大学林学曉，黑龙江哈尔滨150040)摘要：以暴马桑黄(Sanghuan卽orus baumii)菌丝体提取的DNA为模板，采用PCR扩增技术，克隆得到ras基因启动子片段，并采取在线软件对其功能元件进行分析，结果显示：克隆得到的ras基因启动子片段含有典型启动子所具备的作用元件TATA-box和CAAT-box,还有许多其他重要作用元件G-box、CAG-motif、GATA-motif、MBS、TC-rich repeats等；并预测786-836bp是核心启动子区概率最高(0.97),且认为在826bp处碱基T为转录起始位点；除此之外，在ms基因启动子片段中预测到多个转录因子结合位点和1个长588bp的CpG岛，初步判断克隆得到的ms基因启动子具备调控外源基因表达的能力。

关键词：暴马桑黄；ms基因启动子；克隆；序列分析中图分类号：S567.3文献标识码：A桑黄是一类名贵大型药用真菌的统称，目前已知14种⑴，主要用于治疗盗汗、血崩、血淋、痢疾、带下、闭经、脱肛泄血、脐腹涩痛等病症⑵。

现代研究显示，桑黄在消炎止痛⑶、保肝护肝⑷、治疗糖尿病⑸、抑制癌细胞增殖®"等方面也有显著效果。

桑黄良好的药用效果主要由于其富含三祜、多糖、黄酮等多种药用活性成分⑻。

但各活性成分含量相对较低，无法满足生产上的需求⑺U期望利用分子技术定向培育出所需的桑黄菌株。

遗传转化体系的建立是定向育种的基础，高效率的启动子则是高效遗传转化的关键工具。

此前，食用菌转化体系并不完善，常借用来自CaMV35S (花椰菜花叶病毒)的外源启动子,但会出现表达效率偏低的现象口。

人参鲨烯合成酶基因的克隆与初步表达研究的开题报告

人参鲨烯合成酶基因的克隆与初步表达研究的开题报告
题目：人参鲨烯合成酶基因的克隆与初步表达研究
一、研究背景和意义
人参是一种重要的中药材，具有补气养血、益精强身、提神醒脑等功效。

其中人参鲨烯是一种重要的成分，具有降血脂、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。

人参鲨烯的合成依赖于人参鲨烯合成酶，目前已经有多个鲨烯合成酶基因被克隆并进行研究，但对于人参鲨烯合成酶的研究还相对较少。

因此，克隆人参鲨烯合成酶基因并进行初步表达研究，有助于深入研究人参鲨烯的生物合成及其生物学功能，为人参的开发利用提供基础研究支持。

二、研究内容和方案
1. 利用PCR技术从人参中克隆鲨烯合成酶基因。

2. 构建真核表达载体，并进行初步表达研究。

3. 利用Western blot和蛋白质荧光染色等方法对表达的蛋白进行检测和定量分析。

4. 利用实时荧光定量PCR技术分析基因表达水平。

三、预期结果及成果分析
1. 成功克隆并鉴定人参鲨烯合成酶基因，并构建真核表达载体。

2. 成功实现基因的初步表达，并对表达的蛋白进行检测和定量分析。

3. 对人参鲨烯合成酶的基因表达水平进行分析和初步验证。

这项研究的成功完成将为深入研究人参鲨烯的生物合成及其生物学功能提供基础研究支持，并有助于推动人参的开发利用。

鲨烯环氧酶基因(SQEs)的克隆及其在温度胁迫下与枇杷悬浮培养细

ＬＩＨｕｉ — Ｈｕａ ’ ＸＵＪｉａｎＬＩＵＸｉａｏ－ＹｉｎｇＷＡＮＧＷｅｉＣＨＡＮＧＱｉａｎｇＳＵＭｉｎｇ — Ｈｕａ
ＦｕｊｉａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｕｂｔｒｏｐｉｃａｌＢｏｔａｎｙ，Ｘｉａｍｅｎ３６１００６，Ｃｈｉｎａ
调控机制的研究悬浮细胞，熊果酸（ｕＡ１，鲨烯环氧酶基因（ＳＱＥｓ），温度胁迫
ＣｌｏｎｉｎｇｏｆＳｑｕａｌｅｎｅＥｐｏｘｉｄａｓｅＧｅｎｅｓ（ＳＱＥｓ）ａｎｄＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓＢｅｔｗｅｅｎＴｈｅｉｒＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＵｒｓｏｌｉｃＡｃｉｄ（ＵＡ）ＣｏｎｔｅｎｔｉｎＳｕｓｐｅｎｓｉｏｎＣｅｌｌｓｏｆＬｏｑｕａｔ（ＥｒｉｏｂｏｔｒｙａｊａｐｏｎｉｃａＬ．）ＵｎｄｅｒＴｅｍｐｅｒａｔｕｒｅＳｔｒｅｓｓ
（１２ｄ）细胞生长与目标产物ＵＡ的相互关系。同时，采用同源克隆方法分离．ｓＱ，研究ｌ５℃处理中，两个
枇杷鲨烯环氧酶基因（ｅｊＳＱＥ１和ｅｊＳＱＥ２）的差异性表达。结果表明，ｅｊＳＱＥｌ（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＪＱ２９４０５３．２）

桑黄真菌分子鉴定及遗传多样性分析

Mycosystema
菌物学报 15 May 2010, 29(3): 347-356
jwxt@ ISSN1672-6472 CN11-5180Q ©2010 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.
桑黄真菌分子鉴定及遗传多样性分析
桑黄是担子菌亚门 Basidiomycota 、层菌纲 Hymenomycetes，非褶菌目 Aphyllophorales，锈革孔菌科 Hymenochaetaceae，针层孔菌属 Phellinus 的真菌（张小青和戴玉成 2005），具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌、消炎、增强免疫等药理活性（Kang et al. 2006；Cho et al. 2007；Zhu et al. 2008；宋爱荣等 2009），近年来其基础研究和应用开发成为热点。但何种确定的 Phellinus 属真菌可以作为药用真菌桑黄的基源，学界目前还没有达成共识，在研究及开发中多种 Phellinus 属真菌被当作桑黄入药使用（戴玉成 2003；张小青和戴玉成 2005；Kang et al. 2006；Zhu et al. 2008；曾念开等 2008），其中研究较多的为 Phellinus baumii Pilat（Dai & Xu 1998； Lim et al. 2003；Cho et al. 2007）、Phellinus linteus (Berkeley & Curtis) Teng（Lim et al. 2003；Jung et al. 2008）和 Phellinus igniarius (L. ex Fr.) Quél（宋爱荣等 2009）。
方法（Bruns et al. 1991）。其中位于 18S rDNA 及 28S rDNA 间的 rDNA 内转录间隔区（ internal transcribed spacer，ITS）序列，由于进化速率快、稳定性好和测序方便，已经被众多研究者应用于多种真菌种属水平的分类鉴定研究中（White et al. 1990；Bruns et al. 1991；李海波等 2008；Li et al. 2008；Geml et al. 2009；Alaei et al. 2009；Tedersoo et al. 2009）。

金铁锁ITS序列分析及其鲨烯合酶基因原位杂交的开题报告

金铁锁ITS序列分析及其鲨烯合酶基因原位杂交的开题报告一、研究背景和意义金铁锁（Carcharhinus plumbeus）是一种重要的海洋鱼类，广泛分布于世界各大洋。

其深受海产品市场的消费者所喜爱，同时也是许多捕鲨国家的重要渔业资源。

然而，随着过度捕捞、环境污染和气候变化等因素的影响，金铁锁种群数量不断下降，已经被列入濒危物种名录中。

因此，保护金铁锁的种群健康状况已成为当今迫切需要解决的问题。

在保护金铁锁种群健康状况的过程中，研究其基因表达特征和调控机制是非常重要的，特别是关注与脂质代谢相关的基因。

因为脂质代谢是维持鱼类生命活动不可或缺的生理过程，而鲨烯合酶是脂质合成途径中的重要酶催化剂，具有调节胆固醇和三酰甘油水平的作用。

因此，本研究采用金铁锁ITS序列分析和鲨烯合酶基因原位杂交技术，探究金铁锁脂质代谢相关基因的表达调控机制，从而为金铁锁种群健康管理提供理论和实践上的支持。

二、研究内容和方法本研究主要分为两个阶段：第一阶段，进行金铁锁ITS序列分析。

ITS序列是多个物种之间的DNA序列差异比较明显的区域，是研究分子系统学和物种遗传多样性的常用标记。

本研究将通过PCR扩增、克隆和测序等步骤得到金铁锁ITS 序列，进一步比对序列同源性，构建系统进化树，以此证实金铁锁物种的准确性和遗传多样性。

第二阶段，进行鲨烯合酶基因原位杂交实验。

原位杂交技术可用于检测转录水平和在特定细胞或组织中定位基因，在研究基因表达和调控机制方面具有广泛应用。

本研究将采用合成标记和探针标记两种方法对金铁锁组织切片进行原位杂交实验，以检测鲨烯合酶基因的转录水平和在组织结构中的分布规律。

同时，通过西方印迹和定量PCR检测鲨烯合酶基因在不同组织中的表达水平，以验证其原位杂交实验结果的可靠性和准确性。

三、预期结果本研究将从两个方面探究金铁锁脂质代谢相关基因的表达调控机制，预期结果如下：1、构建金铁锁ITS序列的系统进化树，验证金铁锁物种的准确性和遗传多样性。

人参SQS和SE酶基因的克隆及其表达载体的构建

人参SQS和SE酶基因的克隆及其表达载体的构建摘要鲨烯合酶(SQS)和鲨烯环氧酶(SE)是人参皂苷生物合成过程中的关键酶。

以五年生人参叶片为供试材料提取总RNA,根据GeneBank上已发布的SQS 和SE基因登录号(AB010148和AB122078),查找对应序列并设计特异性引物,运用RT-PCR方法,通过构建pMD18-T重组质粒、测序分析,成功克隆到大小分别为1440 bp的SQS基因和1780 bp的SE基因。

同时还构建了这2个基因的表达载体pCAMBIA1301-SQS和pCAMBIA1301-SE,从而为分子水平上探讨三萜皂苷生物合成机理及其在药用植物中的应用提供试验材料。

关键词人参;鲨烯合酶;鲨烯环氧酶;克隆;表达载体构建GeneCloningofSQSandSEEnzymeandConstructionofExpressionVectorinGinseng ZHANG Ming-zheWANG Zhen-huiZHANG Mei-pingWANG YiSUN Chun-yuJIANG Shi-cui(Cell Engineering Lab,College of Life Sciences,Jilin Agricultural University,Changchun Jilin 130118)AbstracSQS and SE are key enzymes of ginsenoside biosynthesis pathways. According to the SQS and SE accession number(AB010148 and AB122078)in GeneBank,which had been released,the corresponding sequences were researched and the specific primers were designed. Extracting total RNA from 5 years-old ginseng leaves,two genes of SQS and SE,which was about 1 440 bp and 1780 bp respectively,were successfully cloned using RT-PCR,by constructing of recombinant plasmid pMD18-T and sequencing analysis. At the same time,the expression vectors pCAMBIA1301-SQS andpCAMBIA1301-SE of these two genes were established,which would provide experimental materials for exploring the biosynthesis mechanism of triterpenoid saponins at the molecular level and the application of medicinal plants.Key wordsginseng;SQS;SE;clone;construction of expression vectors人参(Panax ginseng C.A.Mey.)为我国古老而名贵的药用植物,系五加科(Araliaceaae)人参属植物[1],是一种具有潜力的药用植物,在人类保健和医疗上应用广泛。

【国家自然科学基金】_克隆与序列分析_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140731

测序抗病基因实时定量pcr 多样顺式作用元件重组质粒酵母双杂交进化分析载体构建转染转化表达载体蓝氏贾第鞭毛虫萼花臂尾轮虫聚酮合酶绿色荧光蛋白线粒体dna 系统发育突变狂犬病毒牛瑟氏泰勒虫油茶条锈菌旋毛虫抑制性消减杂交序列分析,dna 平邑甜茶大肠杆菌大熊猫多态性分子进化分子克隆几丁质酶全序列分析免疫原性低传代二色补血草 trna基因 rnai rapd标记 rapd hsp70基因 cdna末端快速扩增 16s rdna 14-3-3蛋白黄瓜
科研热词序列分析克隆基因克隆原核表达表达 rt-pcr 生物信息学基因表纯化小麦聚合酶链反应组织表达同源性表达序列标签苎麻番茄电子克隆 rna干扰辣椒质粒绵羊系统发育分析真核表达载体生物信息学分析甘蓝型油菜杜氏盐藻日本血吸虫抗原性序列测定巴西橡胶树基因序列基因型同源性分析全长cdna 亚细胞定位麻疯树雄性不育鉴定融合蛋白芜菁细胞质雄性不育简并引物甜菜
科研热词克隆序列分析基因克隆原核表达基因表达 cdna克隆生物信息学分析 rna干扰转染表达分析电子克隆鉴定小麦质粒真核表达载体甘蔗抑制性消减杂交巴西橡胶树半定量rt-pcr 酵母双杂交进化载体构建表达模式茶树胁迫组织表达纯化系统发育分析白血病猪棉花差异表达基因山羊家蚕单核苷酸多态性 pcr cdna 锌指蛋白重组表达遗传距离进化树蛋白纯化脂肪酸去饱和酶羊驼
107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160

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ｗｉｔｈａｎｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｒｆａｍｅ（Ｏｅｄ￣）ｏｆ１４５２ｂｐ，ｅｎｃｏｄｉｎｇ４８３ａｍｉｎｏａｃｉｄｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ．ＳＥｇｅｎｅｃｏｎｔａｉｎｅｄｓｉｘｅｘｏｎｓａｎｄｉｆｖｅｉｎｔｒｏｎｓ．
１５００４０
东北林业大学，黑龙江哈尔滨
摘
要：目的对参与桑黄三萜合成途径的关键酶鲨烯环氧酶（ｓｑｕａｌｅｎｅｅｐｏｘｉｄａｓｅ，ＳＥ）进行基因全长克隆和生物信息学分序列分析表明，ｓＥ基因全长２１４５ｂｐ，包含６个外显子和５个内含子；首次克隆并获得桑黄鲨烯环氧酶基因全长序列，为进
关键词：桑黄；鲨烯环氧酶；ＲＡＣＥ；基因克隆；序列分析ＤｏＩ：１０．７５０１￣．ｉｓｓｎ．０２５３ — ２６７０．２０１５．１８．０１８
ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｑｕａｌｅｎｅｅｐｏｘｉｄａｓｅｇｅｎｅｆｒｏｍＩｎｏｎｏｔｕｓｂａｕｍｉｉ
析。方法以桑黄总ＲＮＡ为模板，采用ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＡＣＥ技术克隆桑黄ＳＥ基因的全长ｅＤＮＡ和ＤＮＡ序列，并通过ＥｘＰＡＳｙ
在线分析等方为１８５６ｂｐ，包含１个１４５２ｂｐ的开放阅读框，编码４８３个氨基酸的蛋白，命名为ＩｂＳＥ１，预测该蛋白
ＳＵＮＴｉｎｇ — ｔｉｎｇ，ＺＯＵＬｉ，ＺＨＡＮＧＬｉｎ — ｆａｎｇ，ＺＨＡＮＧＧｕｏ — ｑｕａｎ，ＹＡＮＧＹｕａｎ — ｙｉ，ＬＩＪｉｎｇ — ｙｉｎｇ
ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａ￣ｉｎ１５００４０，Ｃｈｉｎａ
的相对分子质量为５＿３ ×１０，等电点（ｐＤ为８．４１，无信号肽。结论
一
步阐明桑黄三萜代谢途径和改善中药材品质奠定基础。中图分类号：Ｒ２８２．１２文献标志码：Ａ文章编号：０２５３．２６７０（２０１５）１８— ２７６８．０６
ｌｅｎｇｔｈｅＤＮＡａｎｄＤＮＡｏｆＳＥｉｎｂａｕｍｉｉｗａｓｃｌｏｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈＲＴ－ＰＣＲａｎｄｔｈｅｒａｐｉｄａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎｏｆｃＤＮＡｅｎｄｓｒＡＣＲＥ）ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．
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中草焉ＣｈｉｎｅｓｅＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｎｄＨｅｒｂａｌＤｒｕｇｓ第４６卷第１８期２０１５年９月
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药材与资源 ●
桑黄鲨烯环氧酶基因克隆与序列分析
孙婷婷，邹莉，张林芳，张国权，杨苑艺，李晶莹
ＴｈｅｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｏｆＳＥｇｅｎｅｗｅｒｅｎａａｌｙｚｅｄｂｙＥｘＰＡＳｙｏｎｌｉｎｅ．ＲｅｓｕｌｔｓＳｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｉｔｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆ２１４５ｂｐ
ＴｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓｏｆＳＥｃａｌｃｕｌａｔｅｄｗａｓ５．３ｘ１０，ｔｈｅｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｐｏｉｎｔ（ｐＩ）ｗａｓ８．４１，ａｎｄｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅｉｎＳＥ．
ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｐａｔｈｗａｙｉｎＩｎｏｎｏｔｕｓｂａｕｍｉｉ，ａｎｄａｎａｌｙｚｅｉｔｓｂｉｏｉｎｏｒｆｍａｔｅｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴａｋｉｎｇｔｏｔａｌＲＮＡａｓｔｅｍｐｌａｔｅ，ｔｈｅｕｌｆｌ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｃｌｏｎｅｔｈｅｆｕｌｌ — ｌｅｎｇｔｈｅＤＮＡｅｎｃｏｄｉｎｇｓｑｕａｌｅｎｅｅｐｏｘｉｄａｓｅ（ＳＥ），ｗｈｉｃｈｉｓｔｈｅｋｅｙｅｎｚｙｍｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅ