试剂性能验证方案
罗氏Cobas8000全自动生化分析仪配套试剂的性能验证
中图分类号：R446.1
文献标识码：A
文章编号：1004-2725（2019）1-0016-05
全自动生化分析仪是临床生化检验的主要设备，该 仪器和其配套试剂的性能直接影响我们日常标本的检 验质量。按照《医疗机构临床试验室管理方法》和《医学 实验室质量和能力认可准则》的规定咱1袁2暂，对临床实验室 的全自动生化分析仪进行安装后，首先应该根据安装和 使用环境的差异，对仪器进行性能验证，验证通过后对 其开展项目所使用的试剂进行性能分析评价，以保证检 验结果的可靠性咱3暂。生化检测项目所用试剂的性能评价 也是实验室认可的重要内容及要求咱4暂。结合本实验室的 情况，参照罗氏厂家提供的试剂性能验证方案，对该生 化分析仪检测的 36 个配套试剂的检验项目的正确度、 精密度、线性范围、最佳稀释倍数和参考区间进行性能 评价。现报告如下。
甘肃医药 2019 年 38 卷第 1 期 Gansu Medical Journal袁2019袁Vol.38袁No.1
窑17窑
偏倚作为该生化项目的正确度，评估平均偏倚与靶值之 间的偏离程度，完成正确度验证。每个水平样本检测 2次， 记录结果并取平均值，进而计算各项指标的偏倚程度，判 断其能否满足临床需求。若平均偏倚在合理偏倚范围内， 则可判断检测正确度良好。合理偏倚的判断依据为不超 过 NCCL 室间质量评价标准允许总误差的1/3。 1.6 线性范围验证 按照 CLSI EP6-A2 文件咱8暂要求，至 少检测 6 个浓度水平。选择高值浓度标本（H，高值标本 浓度尽量接近线性范围的上限）和低值浓度标本（L）各 1 份，浓度范围要覆盖仪器说明书给出的线性范围。将高 值浓度标本与低值浓度标本分别按 L、1H+4L、2H+3L、 3H+2L、4H+1L、H 的比例混合，配成 6 份不同浓度的标 本，随机排列，每份混合血清标本测定 2 次，记录结果。 将实测值与预期值进行回归分析。若所有实验点在坐标 纸上呈明显直线趋势，用直线回归对数据进行统计，得 直线回归方程 y越ax+b，同时计算相关系数 r。若 r2逸0.95，a 为 0.97耀1.03，则可判断其呈线性，同时需满足测定值与 理论值偏差约1/2 允许总误差。允许总误差参考美国 CLIA’88 能力验证计划和 NCCL 室间质量评价标准。 1.7 稀释倍数验证 取 1 个接近线性范围的高浓度样 本血清分装成两管，一管未稀释不做任何处理，一管进 行临床所需求的最佳倍数的稀释，稀释液为生理盐水， 随后分别测定两管样本的实际数值，同一水平重复测定 3 次后取平均值，并计算检测结果和理论结果的偏差值， 以约1/2 允许总误差为合格。允许总误差参考美国 CLIA’
体外诊断试剂工艺验证方案
检查是否按岗位标准操作规程 操作准确，符合工艺要求，
操作，并且做好相应记录
并且记录完整
肉眼观察胶体金颜色是否合格、 符合质量检验标准的要求
检验员对检测项目进行检测
标记铺金
加抗体包被液，肉眼观察
无凝集沉淀
包被
点膜 检查
检查是否按岗位标准操作规程 操作准确，符合工艺要求，
操作，并且做好相应记录
并且记录完整
检验方法正确、全面、可 是否按原辅料标准操作规程进
行，且原辅料质量符合工 行检验，方法是否可行
艺要求
质量标准是否准确齐全，满足 质量标准准确、全面，满足
工艺要求
工艺规定
是否按中间品检验标准操作规 程进行检验，方法是否可行
检验方法正确、全面、可 行，且中间品质量符合工 艺要求
质量标准是否准确齐全，满足 质量标准准确、全面，满足
种生产工艺变化因素，根据生产工艺要求制定本验证方案，对其整个生产过程进行
验证，以保证在正常的生产条件下，生产出质量合格、均一、稳定的 XXXXXX 诊断
试剂盒。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填
写验证方案变更申请及批准书（附件 1），报验证小组批准。
二、范围
本方案适用于 XXXXXX 诊断试剂盒生产工艺的验证。
3生产岗位要素评价系统要素评价方法判断标准称量配液试剂试液检查是否合格并且在有效期内应有标签标识或合格证操作检查是否按岗位标准操作规程操作并且做好相应记录称量数量应与主配方要求一致符合工艺要求并且记录完整金标胶体金制备检查是否按岗位标准操作规程操作并且做好相应记录操作准确符合工艺要求并且记录完整检查肉眼观察胶体金颜色是否合格检验员对检测项目进行检测符合质量检验标准的要求标记铺金加抗体包被液肉眼观察无凝集沉淀包被点膜检查是否按岗位标准操作规程操作并且做好相应记录操作准确符合工艺要求并且记录完整检查ct线距离是否合格是否连续均匀符合产品质量标准调试取样组装后进行半成品检测符合质量检验标准的要求组装贴膜检查是否按岗位标准操作规程操作并且做好相应记录操作准确符合工艺要求并且记录完整检查膜板是否粘贴合格符合产品质量标准北京易斯威特生物医学科技有限公司生产工艺验证方案共23页第9页切割切割检查是否按岗位标准操作规程操作并且做好相应记录操作准确符合工艺要求并且记录完整检查纸条表面以及宽度是否合格表面平整宽度均匀且合格内包装内包检查是否按岗位标准操作规程操作并且做好相应记录操作准确符合工艺要求并且记录完整检查装卡是否合格铝箔袋封口是否严密无缝隙纸条与卡紧扣铝箔袋封口完好无缝隙外包装外包检查是否按岗位标准操作规程操作并且做好相应记录操作准确符合工艺要求并且记录完整检查是否符合包装规格要求物料平衡是否合格做成品检测与批包装指令一致且无聊平衡合格结论
检验方法性能验证
判断标准：符合率为100%为可接受。
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二.精密度验证: 1.批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复
检测20次.然后计算均值,SD和CV. 2.批间精密度:同一份样本连续检测20天,每天平
实验的方法包括哪些？ 5、系统误差、随机误差、检测系统的概念。
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行检测双孔.然后计算均值,SD和CV. 注意:1.用S/CO比值进行统计计算.
2.最好选择临界值,或弱阳性样本.
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补充：自动加样针的携带污染率的验证
1、取强阳性样品和一阴性样品，按l（阳）、 2（阳）、3（阴）、4（阴）、5 （阴）的顺 序测定。
2、计算携带污染程度： 携带污染率=[ 3（阴）一5（阴）]/[2（阳）
教学目的与要求
教学要求： • 掌握：定性试验和定量试验方法学评价的主要指标，定量试验的性能验证方
法。 • 熟悉：定性试验评价的内容和方法 • 了解：检测系统评价的基本步骤
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复习基础知识
.随机误差：测量结果与在重复条件下，对同一被测 量进行无限多次测量所得结果的平均值之差。
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2 .样本的临床诊断未知（符合性）
同一项目不同检测方法或仪器的比对 适用范围:一个项目有两种以上的方法或者两
台以上的仪器(包括同一型号的仪器)同时 检测,需要进行一致性比对.
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选取40份（20份）样本,最好阴阳性各半 ↓
随机每8（4）份分成一组 ↓
氯化钠注射液,稳定性试验,验证方案
安徽捷众生物化学有限公司0．9%氯化钠注射液稳定性试验验证方案文件编号：QY.TS.01.001–00批准日期：年月日实施日期：年月安徽捷众生物化学有限公司0．9%氯化钠注射液稳定性试验验证方案目录1. 概述2. 验证的目的及原则2.1验证的目的2.2验证的原则3. 验证准备3.1验证涉及部门3.2验证人员及职责3.3验证试验前准备4. 验证的仪器设备5. 稳定性试验的基本要求5.1取样5.2基本要求6. 验证的项目6.1影响因素试验6.1.1高温试验6.1.2高湿度试验6.1.3强光照射试验6.2加速试验6.3长期试验7. 验证结果与总体评估7.1验证结果7.2验证总体评估1. 概述1.1药品的稳定性是指原料药及其制剂保持其物理、化学、生物学和微生物学性质的能力。
1.2稳定性研究是药品质量控制研究的内容之一，与药品质量研究和质量标准的建立紧密相关，其具有阶段性特点，贯穿原料药（API）制剂产品及中间产物的药品研究与开发的全过程，一般是与药品的临床研究，在药品临床研究期间和和上市后还应继续进行稳定性监测和研究。
2.验证的目的及原则2.1验证的目的2.1.1稳定性试验的目的是考察原料药，中间产品或制剂的性质在温度、湿度、光线等条件下随时间变化的规律，为药品的生产包装、贮存、运输条件和有效期的确定提供科学依据，以保证临床用药的安全。
2.1.2并通过持续稳定性考察可以检测在有效期内药品的质量，并确定药品可以或预期可以在标示的贮存条件下，符合质量标准的各项要求。
2.2验证的原则2.2.1上市前研发阶段应进行全面的稳定性试验，以得到注册所有数据。
在数据用于证明环境因素对产品特性的影响，已确定包装贮存条件、复验周期（API而言）和有效期。
2.2.2已上市阶段，产品上市后，应进行适当的持续稳定性考察。
监测已上市的药品的稳定性以发现市售包装药品与生产相关的任何稳定性问题（如杂质含量或溶出度特性的变化），也用于考察产品上市后包装、质控、使用条件等诸多方面重大的变更对产品稳定性的影响。
新型冠状病毒荧光定量PCR检测试剂盒性能验证
· 医学诊疗技术 ·1452020年 第24期自2019年底新型冠状病毒爆发以来，各地积极响应政府号召，在不断增强各地防护措施的同时，增加对于新型冠状病毒的认知[1]。
在临床检验诊断中实时荧光定量PCR 检测核酸更是目前已知的检测新型冠状病毒最为准确、广泛的方法[2]。
本实验室选用高灵敏度的湖南圣湘生物有限公司提供的检测试剂盒，在最低200拷贝浓度时即可检出病毒，因此对于检测试剂盒的性能质量，显得尤为重要。
1 材料和方法1.1检测样本：所有阳性样本和阴性样本均采用试剂盒配套的阳性对照和阴性对照（批号：2020129）1.1.1试剂：湖南圣湘生物生产的2019新型冠状病毒2019-nCoV 核酸检测试剂盒（荧光PCR 法），检测扩增试剂批号：2020129；仪器：扩增仪-ABI QuantStudio5；1.2操作程序：将PCR 反应管放入扩增仪样品槽。
荧光检测通道选择：选择FAM 和ROX 通道检测2019-nCoV 病毒核酸；选择HEX 通道检测内标。
推荐的循环参数设定如下表1：表1 推荐的循环参数设定步骤温度时间循环数1逆转录50℃30分钟12cDNA 预变性95℃1分钟13变性95℃15秒45退火，延伸及荧光采集60℃30秒4仪器冷却25℃10秒11.3结果曲线判定标准：（1）ORF 与N 基因为典型的S 型扩增曲线，且Ct ≤40的样本，报告为病毒阳性；（2）ORF 与N 基因未检测到典型的S 型扩增曲线，或Ct ＞40，内标有扩增曲线，且Ct ≤40的样本，报告为病毒阴性；（3）对于三通道均未检测到典型的S 型扩增曲线（No Ct），或Ct ＞40，该样本的检测结果无效。
1.4性能验证及提取仪适配性评估方法及指标1.4.1精密度：用模拟阳性样本和阴性样本。
分5天检测，每次4个复孔，计算每通道的符合率及CV 值，要求CV 值≤5%。
1.4.2最低检出限：用已知浓度的模拟阳性标本，通过倍比稀释的方法，复孔实验，直至无法检测出阳性基因为止，要求最低检测限满足200copies/ml。
非配套CRP试剂测定实验的分析性能验证
非配套CRP试剂测定实验的分析性能验证发表时间：2018-02-07T11:21:41.613Z 来源：《心理医生》2017年36期作者：张琛[导读] C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）是急性时相反应蛋白中变化最为显著和迅速的一种（简称CRP），在感染性疾病、动脉粥样硬化和肿瘤等疾病中均有表达。
（甘肃省张掖市甘州区医院甘肃张掖 734000）【摘要】目的：评价CRP非配套试剂代替配套试剂测定血清CRP浓度的可行性。
方法：用CRP非配套试剂和配套试剂在日立7180全自动生化分析仪检测待测样本CRP浓度, 通过评估非配套试剂检测CRP的批内重复性、批间检测变异、验证准确度、线性范围的评价、非配套试剂实验的抗干扰性和验证正常参考范围是否适用为分析性能验证的标准。
结果：非配套CRP试剂的精密度、准确度、线性范围、抗干扰性和正常参考范围均符合要求,与配套试剂的测定结果比较差异无统计学意义(P＞0.05)。
结论：非配套CRP试剂能代替配套试剂,适用全自动生化分析仪的检测。
【关键词】非配套试剂；精密度；准确度；线性范围；抗干扰性;参考范围【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）36-0311-02引言C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）是急性时相反应蛋白中变化最为显著和迅速的一种（简称CRP），在感染性疾病、动脉粥样硬化和肿瘤等疾病中均有表达。
国内最早采用半定量的沉淀试验，现在制备优质的抗血清，可以建立高灵敏度、高特异性、重复性好的定量测定方法。
根据《医疗机构临床实验室管理办法》和《医学实验室质量和能力的专用要求》，性能验证是临床实验室的基本要求[1]。
作者根据《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》这一行业标准和碳酸氢钠稀释液的特点，通过对非配套CRP定量试剂的精密度、准确度、线性范围、抗干扰性和正常参考范围五项分析性能指标进行验证，现报道如下。
核酸检测试剂性能验证及质检(新冠肺炎核酸检测学习专家课堂)
二 性能验证的5W1H
定量检验程序验证
WHY WHO WHEN WHAT WHERE HOW
重复性（精密度）
批内精密度和批间精密度
• 标本选择：选择低、中、高三个浓度或中、高两个浓度的新鲜标本/质控品； • 试验方法：连续重复测定20次（定性同批，定量每天1次测试，连续测试20天；
或每天4次测试，连续测定5天）；
• 验证方案 取一定浓度可能与待测病原体存在交叉反应的病原体 加入标本保存液或经确认为
阴 性的标本中，与常规标本一 样处理和检测，至少重复检测3次。
• 可接受标准 阴性
二 性能验证的5W1H
抗干扰能力
WHY WHO WHEN WHAT WHERE HOW
分析特异性
• 验证要求 应验证说明书中涉及的干扰物质对测定的影响。常见的干扰物质主要包括血红蛋白、
一 性能验证的概念
性能验证：特指使用某种检测方法的实验室按照所提供的试剂盒或检测系统说明书使 用时能复现生产厂家所宣称的检测性能。（CLIA uses the term “verification”： specifically to relate to confirmation that the laboratory using a test can replicate the manufacturer’s performance claims when the test is used according to the package insert）
二 性能验证的5W1H
WHY WHO WHEN WHAT WHERE HOW
PCR定性检验程序性能验证参数 方法符合率/正确度 重复性 检出限
抗干扰能力&交叉反应
化学发光法定量测定试剂盒检验方法学验证方案
化学发光生产线化学发光法定量测定试剂盒检验方法学验证方案目录1.概述 (3)2.目的 (3)3.职责划分 (3)4.法规和国家标准 (4)5.术语和定义 (4)7.验证过程 (5)7.1相关文件确认 (5)7.2仪器和器具确认 (5)7.3验证项目及质量可接受标准 (5)7.4验证的实施 (5)7.4.1溯源性 (5)7.4.2准确度 (6)7.4.3最低检测限 (6)7.4.4线性 (6)7.4.5重复性 (6)7.4.6批间差 (7)7.5验证结果 (7)8.验证周期 (8)9.偏差处理 (8)10.验证总结果的分析与评价 (8)一、验证方案1.概述化学发光生产线的生产的各定量测定试剂盒的检定内容主要包括：肉眼检查外观；溯源性，准确度，最低检测限，线性，重复性，批间差，稳定性，生物安全性和定标品的均一性。
检定的内容的确定参考了行标《肿瘤标志物定量测定试剂盒（盒）化学发光法》YY/T1175-2010。
在产品的研发过程中，行标中的各项标准构成了研发项目的主要输入输出内容，并经过反复确认（verification）。
按照化学发光生产线验证主计划的要求，在产品进行批量生产时，对产品质检的内容需要再进行一次全面的验证（validation），以建立稳定的产品质量控制体系。
2.目的对化学发光法测定试剂盒产品的检验方法学中各主要检验项目进行验证,包括溯源性，准确度，最低检测限，线性，重复性和批间差。
3.职责划分3.1生产部负责验证方案的制定和方案实施的日程安排，验证方案的具体实施、原始数据的采集和整理。
3.2研发部参与验证方案的编写，参与验证方案的审批及验证结果的评审。
3.3质控部抽调人员参加验证小组，参与验证方案的编写，负责验证过程中检测项目的检定，参与验证方案的审批及验证结果的评审。
3.4质保部抽调人员参加验证小组，参与验证方案的编写，监督验证方案的实施、核对数据、编制验证报告和验证档案的管理，参与验证方案的审批及验证结果的评审。
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试剂性能验证方案
-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
酶联试剂性能验证方案
验证试剂名称：
验证时间：
验证实验室负责人:
本方案根据ISO15189要求制定，适用于酶联试剂项目的性能验证，本方案从特
异性、敏感性、测定下限 、重复性（包括CUT－OFF值的重复性）、符合率5
个方面对各个试验项目进行评价。 实验准备：
1、质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和阳性。
2、样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必须保证一致性。
一、特异性
1、 特定病原体以外感染性疾病患者的样本。
2、 含有干扰性物质的样本：类风湿因子（RF）阳性、含异嗜性抗体、溶血、
脂血、高胆红素样本。
结果判断：非特定病原体感染患者样本均应为阴性。含一定浓度干扰物质的样
本检测应为阴性。
二、敏感性
20份不同强度阳性标本在同一批检测，20次检测全部为可测出的阳性结果，我
们认可该试剂灵敏度在可接受范围内。
三、检测下限
处于测定下限浓度（如临界点浓度+20%）的样本，重复检测20次，应至少有
18次以上为阳性反应。
四、重复性
1、批内精密性
高、中、低三个浓度的样本，在一批检测内，重复检测20次（孔），计算所得
S/CO值的均值和SD，计算批内CV%。
判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变异。ELISA的批内变异CV%应≤
15%。
2、批间精密性
高、中、低三个浓度的样本，在10天以上时间内单次（孔或管）重复进行20
批检测，计算所得S/CO值的均值和SD，计算批间CV%。
判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变异。ELISA的批内变异CV%应≤
15%。
3、 cutoff值验证
将阳性样本进行一系列稀释，然后将他们进行重复检测以确定能够获得50%阳
性和50%阴性结果的那个稀释度。这一稀释度的分析物浓度即为临界点。
五、符合率
20份已确诊为阳性和20份已确诊为阴性的标本在同一批检测，计算阳性符合
率和阴性符合率，阳性符合率和阴性符合率应≥95%以上。