基因工程习题及答案
基因工程习题+答案
第一章绪论名词解释：1.基因操作：将在细胞外产生的核酸（物质）分子插入到病毒，质粒或其它载体系统中，再整合到特定的宿主中，从而形成一种新的可连续繁殖的有机体。
2.间断基因：序列中间插入有与氨基酸编码无关的DNA间隔区，使一个基因分隔成不连续的若干区段。
我们称这种编码序列不连续的基因为间断基因。
3.启动子：DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。
4.亚克隆：当初始克隆中的外源DNA片段较长，含有许多目的基因以外的DNA片段时，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，将目的基因所对应的一小段DNA找出来，这个过程叫“亚克隆”。
填空题：1.基因操作的核心部分是基因克隆，基因克隆的基本要点有（克隆基因的类型），（受体的选择）和（载体的选择）。
2.（基因）是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。
它可以是连续的，也可以是（不连续的）；可以是（DNA），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（存在于染色体之外如质粒、噬菌体）。
3.基因操作并不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（表达）、（调控）、（检测）和（改造）等与基因研究相关的内容。
4.启动子是指（基因转录过程中控制起始的部位）。
通常一个基因是否表达，（转录起始）是关键的一步，是起决定作用的。
在转录过程中，启动子还是（RNA聚合酶）的结合位点。
5.原核生物的RNA聚合酶主要由两部分组成：（核心酶）和（σ因子），其中σ-因子并不参与RNA的合成，它的作用主要是（识别要转录的起始位点）。
6.从（启动区）到（终止区）的这一段距离称为一个转录单位，或者一个转录产物，其中可包括一个或者多个基因。
7.转录终止子主要有两种，一种是（依赖ρ因子），另一种是（不依赖ρ因子）。
8.基因的书写方式，通常是写出的DNA序列总是与（mRNA）相同的那条链，方向是从（5'）到（3'）。
对于碱基的位置，一般自转录起始点向两个方向编号，其中转录起始点定为（+1），（在起始点上游第一个碱基）定为-1。
高中生物《基因工程》练习题(含答案解析)
高中生物《基因工程》练习题(含答案解析)XXX《基因工程》练题题号得分一一、单选题（本大题共20小题，共20.0分）1.如图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次为（）二总分A.解旋酶、限制酶、DNA连接酶C.限制酶、DNA连接酶、解旋酶B.限制酶、解旋酶、DNA连接酶D.DNA连接酶、限制酶、解旋酶2.下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（）A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C.选用细菌为重组质粒受体细胞是因为质粒易进入细菌细胞且繁殖快D.只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达3.如图为基因表达载体的模式图。
以下有关基因工程的说法错误的是（）A.基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建B.任何基因表达载体的构建都是一样的，没有差别C.图中启动子和终止子分歧与起始暗码子和终止暗码子D.抗生素抗性基因的作用是作为标记基因，用于鉴别受体细胞中是否导入了载体4.一些细菌能借助限制性核酸内切酶抵御外来入侵者，而其自身的基因组DNA经预先修饰能躲避限定酶的降解。
以下在动物体内发生的过程当中，与上述细菌行为相似的是（）A.巨噬细胞内溶酶体杀灭病原体B.T细胞受抗原刺激分泌淋巴因子C.组织液中抗体与抗原的特异性结合D.疫苗诱导机体发生对病原体的免疫5.某目的基因两侧的DNA序列所含的限制性核酸内切酶位点如图所示，最好应选用下列哪种质粒作为载体（）XXX.C.D.6.下图是研究人员使用供体生物DNA中无限增殖调控基因制备单克隆抗体的思路流程。
以下相关叙述精确的是（）A.酶a、酶b作用位点分别为氢键和磷酸二酯键B.Ⅰ是经免疫的记忆细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞C.筛选出既能无限增殖又能产生专一抗体的Ⅱ必须通过分子检测D.上述制备单克隆抗体的方法涉及转基因技术和动物细胞核移植技术7.下列关于基因工程技术的说法，正确的是（）A.切割质粒的限制酶均只能特异性地识别3-6个核苷酸序列B.PCR反应中两种引物的碱基间应互补以保证与模板链的正常结合C.载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为标记基因D.目的基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制8.在其他条件具备的情况下，在试管中进入物质X和物质Z，可得到相应产物Y．下列叙述正确的是（）A.若X是DNA，Y是RNA，则Z是逆转录酶B.若X是DNA，Y是mRNA，则Z是脱氧核苷酸C.若X是RNA，Y是DNA，则Z是限制性内切酶D.若X是mRNA，Y是核糖体上合成的大分子，则Z是氨基酸9.下图透露表现的是三种黏性末端，以下说法精确的是A.甲、乙、丙黏性末端是由两种限制酶作用产生的B.若甲中的G处发生突变，限制酶可能无法识别该切割位点C.乙中的酶切位点在A与G之间D.目前常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等几类原核生物10.如图是利用基因工程技术生产可使用疫苗的部分过程，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性核酸内切酶。
基因工程期末试题及答案
基因工程期末试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 基因工程是指利用现代生物技术手段对DNA进行操作和控制的一种技术。
2. 基因工程的主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
3. DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
4. 在基因工程中，限制性内切酶用于切割DNA分子，产生特定片段。
5. 基因工程可以产生转基因生物，通过对生物基因进行改造，使其具有特定的特性。
6. CRISPR/Cas9是一种常用的基因编辑工具，可以精确地修改基因组中的特定片段。
7. 基因工程在医学领域可以用于基因治疗，通过修复或替换异常基因，治疗遗传性疾病。
8. 在农业领域，基因工程可以用于改良作物，提高产量和抗病虫害能力。
9. PCR是一种常用的基因扩增技术，可以通过复制DNA片段来放大特定基因。
10. DNA梯度离心是基因工程中常用的分离DNA片段的方法。
二、问答题（每题10分，共30分）1. 请简要介绍基因工程的基本原理和主要方法。
基因工程的基本原理是通过对DNA进行操作和控制来改变生物的遗传性状。
其主要方法包括基因克隆、PCR、DNA测序等。
基因克隆是通过将特定DNA片段放入载体中，然后转化到宿主细胞中，使重组DNA在宿主细胞中大量复制。
PCR是一种基因扩增技术，通过在DNA复制过程中加入特定引物，使特定基因片段在体外大量扩增。
DNA测序是通过测定DNA序列来确定一个基因的具体结构。
2. 什么是转基因生物？请举例说明。
转基因生物是指经过基因工程改造，将外源基因导入到目标生物体中，使其具有新的遗传性状的生物。
例如，将耐旱基因导入水稻，使其具有抗旱能力；将Bt毒素基因导入棉花，使其具有抗虫能力。
3. 基因工程在医学领域有哪些应用？举例说明。
基因工程在医学领域可以用于基因治疗、疫苗研发等。
例如，利用基因工程技术可以修复或替换患者体内异常基因，治疗遗传性疾病。
另外，基因工程也可以用于疫苗研发，通过基因工程技术将病原体的基因导入宿主细胞，产生病原体的抗原蛋白，从而刺激免疫系统产生抗体，用于预防传染病。
基因工程课后习题答案
2．质粒DNA和病毒（噬菌体）DNA作为载体的主要特征是什么为外源基因提供进入受体细胞的转移能力；为外源基因提供在受体细胞中的复制能力或整合能力；为外源基因提供在受体细胞中的扩增和表达能力；具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点，具有合适的选择标记3．如何理解质粒的不相容性及其在DNA重组克隆过程中的运用意义质粒的不相容性：具有相同或相似复制子结构及调控模式的两种不同的质粒不能稳定存在于同一受体细胞内.4．列举表达质粒、穿梭质粒、探针质粒和cos质粒的不同用途表达质粒:在多克隆位点的上下游分别装有两套转录效率较高的启动子、合适的核糖体结合位点序列（SD）序列以及强有力的终止子结构，使得克隆在合适位点上的任何外源基因均能在受体细胞中高效表达。
穿梭质粒：质粒分子上含有两个亲缘关系不同的复制子以及相应的选择性标记，能在两种不同的受体细胞中复制并检测。
探针质粒：用来筛选克隆基因的表达调控元件。
通常含有报告基因，但缺少相应的调控序列（如启动子或终止子），只有含有启动子或终止子的调控序列被克隆进入载体后，报告基因才能别表达，表达量的大小直接反应了克隆进入的调控元件的强弱。
cos质粒：人工构建的含有λDNA的cos位点序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体。
具有大的装载量，可以用于构建基因组文库。
5． II类限制性核酸内切酶的主要酶学特征是什么分子量较小的单体蛋白，双链识别和切割活性仅需Mg2+，识别位点为4-6个bp的回文序列，切割位点在识别序列中或靠近识别序列7． KLenow酶与大肠杆菌DNA聚合酶I在结构和功能上的主要区别DNA聚合酶I包括大片段(klenow片段)和小片段功能上：DNA聚合酶I比klenow酶多了5’→3’核酸外切酶活性，两者都具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性。
8．影响限制性核酸内切酶活性的主要因素有哪些？温度、盐度等物理因素，DNA样品纯度，DNA甲基化程度，限制性核酸内切酶的缓冲液性质，甘油和微量的金属离子会抑制限制性内切酶的活性9.如何理解粘性末端比平头末端更容易连接在退火条件下，粘性末端的连接为分子内反应，平头末端是分子间反应，平头末端的连接反应更加复杂，速度也慢。
基因工程原理习题与答案
基因工程原理习题集1、DNA分子克隆技术：克隆，指含有单一的DNA重组体的无性繁殖系,或指将DNA重组体引入宿主细胞建立无性繁殖系的过程。
DNA分子克隆技术也称基因克隆技术，是在体外将DNA分子片段与载体DNA 片段连接,转入细胞获得大量拷贝的过程。
其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接,制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达.载体在细胞内自我复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的DNA分子片段.主要目的是获得某一基因或DNA片段的大量拷贝,有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆，就可以深入分析基因的结构与功能，随着引入的DNA片段不同，有两种DNA库,一种是基因组文库，另一种是cDNA库。
2、分子杂交：两条不同来源的DNA(或RNA）链或DNA与RNA之间存在互补顺序时，在一定条件下可以发生互补配对形成双螺旋分子,这种分子称为杂交分子。
形成杂交分子的过程称为分子杂交。
3、限制性片段长度多态性：从不同个体制备的DNA，使用同一种限制性内切酶酶切，切得的片段长度各不相同。
酶切片段的长度可以作为物理图谱或者连接图谱中的标记子。
通常是在酶切位点处发生突变而引发的。
4、报告基因：一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个表达产物非常容易被鉴定的基因、5、多聚酶链式反应（PCR）:一种体外扩增DNA的方法.PCR使用一种耐热的多聚酶,以及两个单链引物。
以过高温变性将模板DNA分离成两条链。
低温退火使得引物和一条模板单链结合，然后是中温延伸，反应液的游离核苷酸紧接着引物从5/端到3/端合成一条互补的新链。
而新合成的DNA又可以继续进行上述循环,因此DNA的数目不断倍增。
6、核酸的凝胶电泳：将某种分子放到特定的电场中，它就会以一定的速度向适当的电极移动.某物质在电场作用下的迁移速度叫做电泳的迁移率，它与电场强度成正比，与该分子所携带的净电荷数成正比，而与分子的摩擦系数成反比（分子大小、极性、介质的粘度系数等）。
基因工程习题
基因工程习题及参考答案02工具酶部分——限制性内切核酸酶一、填空题1．严格地说限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)是指已被证明是的酶。
基因工程中把那些具有识别的内切核酸酶统称为限制性内切核酸酶。
2．年Luria 和Human 在T 偶数噬菌体对大肠杆菌感染实验中首次发现了细菌的现象。
3．1970 年，Smith 和Wilcox 从流感嗜血杆菌中分离到一种限制酶，能够特异性的切割DNA，这个酶后来被命名为，这是第一个分离到的Ⅱ类限制性内切核酸酶。
4．通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的。
5．Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小．一般在20~40kDa，通常由亚基所组成。
它们的作用底物为双链DNA，极少数Ⅱ类酶也可作用于单链DNA，或DNA／RNA 杂合双链。
这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有要求，因此，Ⅱ类酶既具有专一性，也具有专一性，一般在识别序列内切割。
切割的方式有，产生末端的DNA 片段或的DNA片段。
作用时需要作辅助因子，但不需要和。
6．完全的回文序列具有两个基本的特点，就是：(1)(2) 。
7．Ⅱ类限制性内切核酸酶一般识别个碱基，也有识别多序列的限制性内切核酸酶。
根据对限制性内切核酸酶识别序列的分析，限制性内切核酸酶识别序列具有倾向，即它们在识别序列中含量较高。
8．EcoK 是I 类限制性内切核酸酶，分子组成是α2 β2 γ，分子量300kDa。
在这些亚基中，α亚基具有作用；β亚基具有的活性；γ亚基的作用则是。
9．个体之间DNA 限制性片段长度的差异叫。
10．限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自，第二、第三两个字母取自，第四个字母则用表示。
11．限制性内切核酸酶Acy I 识别的序列是5’—GRCGYG-3’，其中R ，Y 。
基因工程练习题带答案
基因工程练习题一、单项选择题1．在基因工程中，切割载体和含有目的基因的DNA片段中，一般需使用A.同种限制酶B.两种限制酶C.同种连接酶D.两种连接酶2．基因工程常用的受体有①大肠杆菌②枯草杆菌③结核杆菌④动植物细胞A.①②③④B.①②③C.②③④D.①②④3．有关基因工程的叙述正确的是A.限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成是在细胞内完成的C.质粒都可作为载体D.蛋白质的结构成分为合成目的基因提供资料4．下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体A.细菌质粒B.噬菌体C.动植物病毒D.细菌核区的DNA5．基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。
在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是A.人工合成目的基因B.目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测表达6．不是基因工程方法生产的药物是A.干扰素B.白细胞介素C.青霉素D.乙肝疫苗7．在基因工程中用来修饰改造基因的工具是A.限制酶和连接酶B.限制酶和水解酶C.限制酶和运载酶D.连接酶和运载酶8．下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件A.具有某些标记基因B.决定宿主细胞的生存C.能够在宿主细胞中复制D.有一个或多个限制酶切点9．水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中有三种氨基酸构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。
在转基因技术中，这种蛋白质的作用A.促使目的基因导入宿主细胞中B.促使目的基因在宿主细胞中复制C.使目的基因容易被检测和选择D.使目的基因容易成功表达10．应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。
这里的基因探针是指A.用于检测疾病的医疗器械B.用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C.合成β—球蛋白的DNAD.合成苯丙氨酸羟化酶的DNA片段11．基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来，这要利用限制性内切酶。
一种限制性内切酶能识别DNA子中的GAATTC顺序，切点在G 和A之间，这是应用了酶的A．高效性 B.专一性 C．多样性D.催化活性受外界条件影响12．上海医学遗传研究所成功培育出第一头携带白蛋白的转基因牛，还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍，转基因动物是指A.提供基因的动物B.基因组中增加外源基因的动物C.能产生白蛋白的动物D.能表达基因信息的动物13．作为基因的运输工具——运载体，必须具备的条件之一及理由是A.能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因B.具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达C.具有某些标记基因，以使目的基因能够与其结合D.对宿主细胞无伤害，以便于重组DNA的鉴定和选择14．下列黏性末端属于同一种限制酶切割而成的是：A．①②B．①③ C．①④ D．②③15．下列平末端属于同一种限制酶切割而成的是A.①③B.①④C.②③D.②④16．下列有关基因工程的叙述中，不正确的是A.DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B.基因探针是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C.基因治疗主要是对有基因缺陷的细胞进行替换D.蛋白质中氨基酸序列可为合成目的基因提供资料17．下列属于PCR技术的条件的是[来源:学科网]①单链的脱氧核苷酸序列引物②目的基因所在的DNA片段③脱氧核苷酸④核糖核苷酸⑤DNA连接酶⑥DNA聚合酶⑦DNA限制性内切酶A.①②③⑤B.①②③⑥C.①②③⑤⑦D.①②④⑤⑦18．下列有关PCR技术的叙述正确的是A.作为模板的DNA序列必须不断的加进每一次的扩增当中B.作为引物的脱氧核苷酸序列必须不断的加进每一次的扩增当中C.反应需要的DNA聚合酶必须不断的加进反应当中D.反应需要的DNA连接酶必须不断的加进反应当中19．蛋白质工程中，直接需要进行操作的对象是A.氨基酸结构B.蛋白质的空间结构C.肽链结构D.基因结构20．有关基因与酶关系的叙述正确的是A.每个基因都控制合成一种酶B.酶的遗传信息编码在内含子的碱基序列中C.基因的转录、翻译都需要酶D.同一生物体不同细胞的基因和酶是相同的21．某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶（Amy）基因a,通过基因工程的方法，将a转到马铃薯植株中，经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。
基因工程复习题及答案
基因工程复习题及答案一、选择题1. 基因工程是指：A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然进化答案：B2. 基因工程中常用的载体是：A. 噬菌体B. 质粒C. 病毒D. 所有以上选项答案：D3. 以下哪个不是基因工程中常用的受体细胞？A. 细菌B. 酵母C. 植物D. 动物答案：C4. 基因枪法属于哪种基因转移技术？A. 化学介导法B. 电穿孔法C. 微注射法D. 粒子轰击法答案：D5. 基因编辑技术CRISPR-Cas9中，Cas9蛋白的主要作用是：A. 识别目标DNA序列B. 切割目标DNA序列C. 连接DNA片段D. 转录mRNA答案：B二、填空题6. 基因工程的基本操作步骤包括：目的基因的________、________、检测与表达。
答案：提取、重组7. 基因工程在医学领域的应用包括________、________和基因治疗。
答案：基因诊断、基因疫苗8. 在基因工程中，________技术可以用于快速繁殖转基因植物。
答案：组织培养9. 基因工程中，________是将目的基因导入植物细胞的常用方法。
答案：农杆菌介导法10. 基因工程在农业上的应用包括提高作物的________、________和改良品质。
答案：抗病性、抗虫性三、简答题11. 简述基因工程在环境保护方面的应用。
答案：基因工程在环境保护方面的应用主要包括：- 利用基因工程改造微生物，以降解环境中的有毒物质，如石油污染物。
- 通过基因工程改良植物，使其能够耐受重金属污染，从而净化土壤。
- 利用基因工程改造的微生物处理工业废水，减少水体污染。
12. 阐述基因工程在生物制药领域的主要应用。
答案：基因工程在生物制药领域的主要应用包括：- 生产重组蛋白质药物，如胰岛素、干扰素等。
- 利用转基因动物生产药物，如转基因羊产生的抗凝血酶。
- 利用基因工程改造的微生物生产抗生素等药物。
- 开发基因治疗药物，用于治疗遗传性疾病。
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第二章习题一、单选题1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ）A．I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶E. RNAase2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B )A. 是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。
B. 它们的识别序列完全相同。
C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。
D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。
E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。
3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是（ A ）A. 37℃B.30℃C.25℃D.16℃E.33℃4. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B )A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。
B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。
C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。
D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。
E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。
5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D )A. 1/44B. 1/66C. 1/64D.1/46E. 1/1066. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C )A. PH:2-4B. PH:4-6C. PH:6-8D. PH:8-10E. PH:4-107. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D )A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。
B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。
C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。
E. BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。
8. II类限制酶反应中必须的阳离子是（ C ）A. Na +B. Ca2+C. Mg2+D. Zn2+E. Mn2+9. RFLP形成的原因是（ A ）A. 由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。
B. 使用不同的限制性内切酶进行切割。
C. 杂交时使用不同的探针。
D. 每种染色体存在两条。
E. 提取不同的染色体DNA酶切。
10. 下列关于限制酶命名的表示方法，正确的是（ E ）A. Sau.3A IB. B.amH IC. pst ID. Ecor IE. Hind III11. 需进行DNA部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（ D ）A. 反应时间B. 反应体积C. PHD. 限制酶量E.反应温度12. 下列酶在反应中不需要ATP的是( D )A. E coKB. T4DNA连接酶C. BamH ID. EcoBE. DNA pol I13. 限制性内切酶可特异性识别 ( B )A. 双链DNA的特定碱基对B. 双链DNA的特定碱基序列C. 单链RNA的特定碱基序列D. 单链DNA的特定碱基序列E 双链RNA的特定碱基对14. 下列与RFLP相关的一条是( D )A. 不同限制酶在单个染色体DNA上的限制性图谱。
B. 两种物种个体间的限制性图谱。
C. 同一个体等位基因的限制性图谱。
D. 同一物种不同个体的限制性图谱。
E. 非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。
15．限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（ A ）A. 识别和切割序列发生变化。
B. 切割活性大大提高。
C. 识别和切割序列与原来完全不同。
D.可以任意切割DNA。
E. 只能部分切割DNA。
二、多选题1. 下列因素中影响限制酶切割的有( A,B,C,D,E)A. EDTA浓度B. 甘油浓度C. DNA纯度D. 酶的自身活性E. 盐浓度2. 限制酶反应中出现星活性的可能原因是（A B D E）A．酶浓度太高 B 低盐 C 盐浓度过高 D 高PH E 甘油浓度>5%（V/V）3．限制酶切割后的DNA电泳得到的电泳条带有些扩散，可能原因是（B，C，D，E）A．酶失活 B 有蛋白质与DNA结合 C 酶切条件不合适D 有外切核酸酶污染E 星号活性4．下列有关回文序列的描述正确的是（A，B，C）A．是II类限制酶的识别序列 B 是某些蛋白的识别序列 C 是基因的旁侧序列 D 是高度重复序列E 是卫星序列5．下列有关回文序列的一般特征正确的是（B，C，D，E）A．可增强基因表达 B 有对称轴 C 是自我互补的序列D．两条链从5‘ 3‘方向的序列一致 E 是II类限制酶的识别序列6．关于II类限制酶说法正确的是（B，D）A．具内切核酸酶和甲基化酶活性B．仅有内切核酸酶活性C．只识别非甲基化的DNA序列D． II类限制酶反应条件只需要Mg2+E． II类限制酶反应需要Mg2+,ATP7．通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（B，C）A．限制酶只切割两个变异等位基因中的一个B．限制酶位点可作为遗传标记C．它不依赖变异的等位基因的产物的功能D．不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异E．同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同8. 下列关于II类限制酶的叙述正确的是（B，C，D，E）A．它既有内切酶的活性，也有外切酶活性B．在特异位点对DNA进行切割C．同一限制酶切割双链DNA时产生相同的末端序列D．有些限制酶切割双链DNA产生粘末端E．有些限制酶切割双链DNA产生平末端9．限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（A，B，C，D，E）A．限制酶无活性 B 存在抑制剂如SDS，EDTA C DNA不纯D．缓冲液组成不合适 E DNA甲基化10．下列关于限制酶的叙述正确的是（B，C，D）A．在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。
B．限制酶在DNA中的识别/切割位点的二、三级结构影响酶切效率。
C．如果限制酶的识别位点位于DNA分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。
D．已知某限制酶在一环状DNA上有3个切点，因此该酶切割这一环状DNA，可得到3个片段。
E．能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。
11．酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（A，B，C，E）A．储存温度不合适 B 稀释后储存 C 储存缓冲液不合适D．分装后储存 E 储存缓冲液中蛋白浓度低12．限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（A，B，C，D，E）A．限制酶失活 B 有抑制剂如SDS，EDTA等存在 C 反应条件不合适D DNA不纯E DNA结构（线形或超螺旋）的影响13．如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多，可能原因是（B，C，E）A．限制酶失活 B 限制酶的星号活性 C 有其他限制酶污染D 有抑制剂存在E 测试DNA中有其他DNA污染14．限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（A，B，C，E）A．限制酶去除不完全 B 平端连接 C 核酸外切酶污染D．连接反应温度低于16℃E．从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类15．下列限制酶属同裂酶的是（A，B，D，E）A．BamHI G↓GATCC Sau3AI ↓GATCCCTAG↑G CTAG↑B． Sal I G↓TCGAC Xho I C↓TCGAGCAGCT↓G GAGCT↓CC． BamH I G↓GATCC EcoR I G↓AATTCCCTAG↓G CTTAA↓GD. Hpa II G↓CGC Msp I C↓CGGCGC↓G GGC↓CE. Xba I T↓CTAGA Nhe I G↓CTAGCAGATC↓T CGATC↓G三．填空题1．限制酶是一类专门切割 DNA 的酶，它能特异性识别切割双链（单、双）DNA。
2．II型限制酶识别位点一般长度为 4~6 个核苷酸对。
3．个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性（RFLP）。
4．限制酶命名采用Smith和A thens提议的方案，第一个字母大写取自来源细菌的属名；第二、三个字母取自来源细菌的种名；第四个字母（如果有）取自来源菌的株系。
5．需要部分酶切时可采取的方法有（1）减少酶的用量（2）缩短反应时间（3）增大反应体积。
6．限制酶识别序列为n个碱基，则其切割频率的理论值应是 4n。
7．限制性内切酶通常保存在 50% 浓度的甘油溶液中。
8．甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在 5% 以下。
9．限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰来实现的。
10．II型限制酶既具有识别位点的专一性，也具有切割位点的专一性。
它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。
四．简答题1．在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（BSA）的目的与机理是什么？答：目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止内切酶失活。
2．如果用EcoR I酶切DNA时出现星活性，试分析原因？答：主要原因有：酶浓度太高；高PH；低盐；含Mn2+、Cu2+等非Mg2+金属离子；甘油浓度高于5%；存在某些有机溶剂。
3．下列序列中哪些可能是II类限制酶的识别序列？ATATCG CCCGGG GATATC AGCCGA GAGTC答：CCCGGG GATATC GAGTC4．用Klenow酶可将5‘粘末端填补成平末端，而导致某些限制位点消失，下列酶切后用klenow处理再连接不会丢失识别位点的是哪些？XmaI C↓CCGGG BssH II G↓CGCGC PstI CTGCA↓GHhaI GCG↓C HpaII G↓CGC答：BssH II, HpaII5．当两种限制酶反应条件不同时，若要用双酶切，应采取什么措施？为什么？答：要避免星活性及部分酶切。
（1）先用低盐缓冲液中活性最高的酶切，再补盐和第二种酶；（2）用一种酶消化后，以酚：氯仿：异戊醇抽提，再经乙醇沉淀，将DNA重新溶解与适合第二种酶的缓冲液，加第二种酶消化；（3）先低温酶，后高温酶；（4）使用通用缓冲液。
6．试计算下列三种限制酶各自在某染色体DNA序列上的切割概率Sau3A I GATC Pst I CTGCAG Hinf I GANTCAcy I GPuCGPyC答： 1/44；1/46；1/44；（1/44）x(1/22)7．一长为4.2kb的DNA片段，分别用EcoRI、PstI及EcoRI+PstI消化，电泳结果如下图所示，请根据结果绘出该片段限制性图谱0.7kb0.7kb 0.8kb1.5kb 1.4kb2.0kb2.0kb 2.8kbEcoRI Pst I EcoRI + Pst I答： EcoRI PstI EcoRI0.7kb 0.7kb 0.8kb 2.0kb回收与连接一．单选题1．用DEAE膜片法回收电泳分离的DNA片段时，在紧靠目的DNA片段前方的凝胶切一裂缝，以插入DEAE纤维素膜，该裂缝长度与DNA条带相比应（C）A．略短 B. 等长 C. 略长 D. A或B都可 E . A、B、C都可2．用透析膜插片凝胶电泳法回收DNA片段时，再区带前挖一小槽，将透析膜置于槽中，这时应注意（B）A．透析膜要接触DNA区带一侧的胶缘。