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高中生物选修一生物技术实践 知识点总结专题一 传统发酵技术的应用 课题一 果酒和果醋的制作1、发酵:通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。
2、有氧发酵:醋酸发酵 谷氨酸发酵 无氧发酵:酒精发酵 乳酸发酵3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌 酵母菌的生殖方式:出芽生殖(主要) 分裂生殖 孢子生殖4、在有氧条件下,酵母菌进行有氧呼吸,大量繁殖。
C 6H 12O 6+6O 2→6CO 2+6H 2O5、在无氧条件下,酵母菌能进行酒精发酵。
C 6H 12O 6→2C 2H 5OH +2CO 26、20℃左右最适宜酵母菌繁殖 酒精发酵时一般将温度控制在18℃-25℃7、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌。
在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色。
在缺氧呈酸性的发酵液中,酵母菌可以生长繁殖,而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。
8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂9、当氧气、糖源都充足时,醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸;当缺少糖源时,醋酸菌将乙醇变为乙醛,再将乙醛变为醋酸。
2C 2H 5OH +4O 2→CH 3COOH +6H 2O10、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感,当进行深层发酵时,即使只是短时间中断通入氧气,也会引起醋酸菌死亡。
②醋酸菌最适生长温度为30~35℃,控制好发酵温度,使发酵时间缩短,又减少杂菌污染的机会。
③有两条途径生成醋酸:直接氧化和以酒精为底物的氧化。
11、实验流程:挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒(→醋酸发酵→果醋)12、酒精检验:果汁发酵后是否有酒精产生,可以用重铬酸钾来检验。
在酸性条件下,重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。
先在试管中加入发酵液2mL ,再滴入物质的量浓度为3mol/L 的H 2SO 43滴,振荡混匀,最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴,振荡试管,观察颜色13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的;排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的;出料口是用来取样的。
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选修1《生物技术实践》知识点归纳实验1 大肠杆菌的培养和分离 1.微生物是指结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物,包括病毒、原核生物、原生生物和某些真菌。
细菌是单细胞的原核生物,有细胞壁(肽聚糖)、细胞膜、细胞质,无成型的细胞核,只有一环状DMA分子(拟核)。
以分裂(二分裂)的方式繁殖,分裂速度很快。
用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌(革兰氏染液染色后,再脱色处理,细菌仍保留染色液的颜色)和革兰氏阴性菌两大类,区别在细胞壁的成分不同。
大肠杆菌是革兰氏阴性(细胞壁薄,有荚膜)、兼性厌氧的肠道杆菌。
2.细菌的分离方法有两种:划线分离法和涂布分离法。
是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
划线分离就是用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线,在划线的过程中菌液逐渐减少,细菌也逐渐减少,。
划线最后,可使细菌间的距离加大。
将接种后的固体培养基培养10~20小时后,一个细菌细胞就会繁殖成许多细菌细胞,形成菌落,不会重叠。
在斜面上划线,则每个斜面的菌群就是有一个细菌产生的后代。
用于基因工程的大肠杆菌的工程菌,可以用划线分离法获得产物表达能力高的菌株。
由于工程菌的质粒中通常有抗性基因(如抗氨苄青霉素基因),如在培养基中加入一定量的氨苄青霉素,由于非工程菌的其他杂菌都没有抗性基因,所以在划线后只有存在抗性基因的工程菌能生存下来。
涂布分离时,需要先将培养的菌液稀释,通常稀释10-5~10-7倍之间,然后取0.1mL不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养,在适当的稀释度下,可产生相互分开的菌落,每个培养基里有20个以内的单菌落为最合适。
优点:划线分离法,方法简单;涂布分离法,单菌落更易分开,但操作复杂。
在培养微生物时,必须进行无菌操作。
其首要条件是各种器皿必须是无菌的,各种培养基也必须是无菌的,转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都要做到无菌(防止杂菌污染)。
高中生物选修一知识点小总结

高中生物选修一知识点小总结高中生物选修一主要包括以下几个知识点:细胞基本单位、遗传与变异、维持稳态和适应环境、生态环境中的物质循环和能量流动。
下面我将对这些知识点进行详细总结。
一、细胞基本单位细胞是生命的基本单位,是生物体内部结构和功能的基本组成单元。
细胞有基本的结构和功能:细胞膜包裹细胞质,细胞质包含细胞器,其中核是细胞的控制中心。
细胞内进行的重要化学反应有原核细胞和真核细胞之分。
细胞在进化中出现多样性,有单细胞、多细胞和细胞的形态多样性。
二、遗传与变异遗传是生物繁殖和进化的基础,遗传物质是DNA。
DNA通过复制、转录和翻译等过程保证遗传信息的传递与表达。
遗传信息决定了生物体的种属、个体性状和生命活动方式等。
变异是指生物个体在繁殖过程中产生的遗传性差异,包括突变和性状的组合变异。
变异是进化的基础,它为种群的适应环境变化提供了物质基础。
三、维持稳态和适应环境生命体在内部环境相对稳定的状态下才能正常生活,内环境的稳态维持受到神经、内分泌和免疫等系统的调节。
生物体对环境的变化有一定的调节能力,可以通过控制体温、代谢过程和离子平衡等维持内部稳态。
环境适应是生物在进化过程中形成的生理和行为上的适应能力,它使生物能够在不同的环境条件下生存和繁殖。
四、生态环境中的物质循环和能量流动生态环境中的物质循环主要包括碳循环、氮循环和水循环等。
碳循环是指碳在生物圈和地球大气圈之间的循环,包括植物的光合作用和动物的呼吸作用。
氮循环是指土壤、植物和动物之间氮素的转化和循环,包括氮的固定、硝化和反硝化等过程。
水循环是指水在大气、地表和地下的循环过程,包括蒸发、降雨和地下水的补给等。
能量流动是生物在食物链和食物网中通过摄食、呼吸和代谢等过程将能量传递的过程。
细胞基本单位、遗传与变异、维持稳态和适应环境、生态环境中的物质循环和能量流动是高中生物选修一的重要知识点。
通过深入学习这些知识点,我们可以更好地理解生物的结构和功能,了解生物在进化和适应环境过程中的变化,以及生态环境中物质的循环和能量的传递。
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知识点总结高中生物选修一生物技术实践传统发酵技术的应用专题一果酒和果醋的制作课题一、果酒菌种:附在葡萄皮上的野生型酵母菌(真菌,兼性厌氧,主要出芽生殖还有1 孢子生殖)2、在有氧条件下,酵母菌进行有氧呼吸,大量繁殖。
在无氧条件下,酵母菌能进行酒精发酵。
呈酸性(酵母菌可以生长繁殖,而25~℃),发酵液缺氧 3、制酒条件:温度(18 其他微生物无法适应这一环境)。
4、葡萄酒呈现深红色的原因:红葡萄皮的色素进入发酵液。
5、果醋菌种:醋酸菌(原核生物),代谢类型异养需氧型。
都充足时,醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋、有两条途径生成醋酸:当氧气、糖源6→O酸;当缺少糖源时,醋酸菌将乙醇变为乙醛,再将乙醛变为醋酸。
CHOH+225 CHCOOH+HO23℃。
30~35、制醋条件:①深层发酵时,短时间不通氧,醋酸菌死亡。
②温度:7 8、流程:挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→醋酸发酵果醋果酒、装置:充气口制酒时关闭;制醋时,连续输入氧气。
9排气口长而弯曲的胶管目的是防止空气中微生物的污染;开口向下的目的是排出酒精发酵时产生的二氧化碳。
出料口是用来取样检测。
空间的目的是让酵母菌先有氧呼葡萄汁只装2/31/3,留吸进行繁殖。
次,目的是排二氧化碳;制醋、若用瓶子做装置:制酒时,要每天拧松瓶盖1024~时,将瓶口打开,盖上纱布。
.11、所有用具清洗后晾干或清洗后用70%的酒精消毒。
先冲洗葡萄再除去枝梗,以避免除去枝梗时引起葡萄破损,增加被杂菌污染的机会。
12、酒精检验:酸性(3mol/L的HSO)重铬酸钾→灰绿色。
醋酸检验:嗅味和品尝42(比较pH)13、从哪些方面防止发酵液被污染?榨汁机要清洗干净,并晾干。
发酵瓶要清洗干净,用体积分数70%的酒精消毒,或用洗洁精洗涤。
装入葡萄汁后,封闭充气口。
课题二腐乳的制作1、菌种:多种微生物如青霉、酵母、曲霉、毛霉等,主要是毛霉(真菌,代谢类型是异养需氧型。
孢子生殖。
)传统制作毛霉来自空气;现代生产将优质毛霉菌种直接接种在豆腐上。
高中生物选修一必会知识点总结

高中生物选修一必会知识点总结高中生物选修一知识1传统发酵技术1.果酒制作:1)原理:酵母菌的无氧呼吸反应式:C6H12O6 2C2H5OH+2CO2+能量。
2)菌种来源:附着在葡萄皮上的野生酵母菌或人工培养的酵母菌。
3)条件:18-25℃,密封,每隔一段时间放气(CO2)4)检测:在酸性条件下,重铬酸钾与酒精反应呈灰绿色。
2、果醋制作:1)原理:醋酸菌的有氧呼吸。
O2,糖源充足时,将糖分解成醋酸O2充足,缺少糖源时,将乙醇变为乙醛,再变为醋酸。
C2H5OH+O2CH3COOH+H2O2)条件:30-35℃,适时通入无菌空气。
3、腐乳制作:1)菌种:青霉、酵母、曲霉、毛霉等,主要是毛霉(都是真菌)。
2)原理:毛霉产生的蛋白酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和aa ;脂肪酶将脂肪水解为甘油和脂肪酸。
3)条件:15-18℃,保持一定的湿度。
4)菌种来源:空气中的毛霉孢子或优良毛霉菌种直接接种。
5)加盐腌制时要逐层加盐,随层数加高而增加盐量,盐能抑制微生物的生长,避免豆腐块腐败变质。
4、泡菜制作:1)原理:乳酸菌的无氧呼吸,反应式:C6H12O6 2C3H6O3+能量2)制作过程:①将清水与盐按质量比4:1配制成盐水,将盐水煮沸冷却。
煮沸是为了杀灭杂菌,冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响。
②将新鲜蔬菜放入盐水中后,盖好坛盖。
向坛盖边沿的水槽中注满水,以保证乳酸菌发酵的无氧环境。
3)亚硝酸盐含量的测定:①方法:比色法;②原理:在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。
高中生物选修一知识2酶的研究与应用1、果胶酶作用:分解果胶,瓦解植物的细胞壁及胞间层,提高水果的出汁率,并使果汁变得澄清。
2、果胶酶并不特指某一种酶,包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等。
3、酶的活性可用单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量来表示。
高考生物选修一知识归纳总结

高考生物选修一知识归纳总结生物选修一是高中生物学科的一门重要选修课程,主要围绕着生物的发展、生物多样性、生物进化以及生态环境等内容展开。
本文将对该门课程的主要知识进行归纳总结,以帮助高中生对该门课程有一个全面的了解。
一、生物的发展1. 生物的起源:生物起源于地球上早期的无机化合物,通过化学进化逐渐形成了有机分子并产生了一系列的生命现象。
2. 原核细胞和真核细胞:原核细胞是最早出现的细胞类型,其内部没有细胞核;真核细胞则具有细胞核,有更为复杂的细胞结构。
二、生物的多样性1. 动物界的分类:动物界根据动物体对称性、体腔、某些特定器官的有无等特征进行分类,包括无脊椎动物和脊椎动物两个亚界,同时在每个亚界内还有不同的门、纲、目、科等分类单位。
2. 植物界的分类:植物界主要根据植物的营养方式、体细胞结构等特征进行分类,分为绿藻植物、蘑菇植物、藻藻植物等不同门。
三、生物的进化1. 进化的证据:进化的证据主要包括化石记录、生物地理分布和生物化学等方面的数据,这些数据显示了物种在演化过程中的变化和适应。
2. 进化的机制:进化的机制主要包括自然选择、遗传漂变、基因流动和突变等,这些机制共同促使物种在演化过程中适应环境和获取生存优势。
四、生态环境1. 生态系统:生态系统包括生物群落和其所处的非生物环境,如森林、湿地、海洋等,生物通过与非生物因素之间的相互作用维持着生态系统的稳定。
2. 生态位:生态位是指物种在生态系统中所占据的一种特定的生活方式,包括物种的营养方式、生活史和与其他物种的竞争关系等。
3. 生物多样性的保护:生物多样性的保护是保护生物种类的多样性和物种的栖息地,包括建立自然保护区、推广节能减排和限制非法捕猎等。
以上是对生物选修一主要知识的归纳总结,这些知识涉及了生物的发展、生物多样性、生物进化和生态环境等方面的内容。
通过学习这些知识,可以让我们更好地了解生物的起源和进化过程,同时也可以增加我们对生物多样性和生态环境的保护意识。
(完整word版)生物选修1知识点总结

第1讲传统发酵技术在食品加工中的应用2020备考·最新考纲考点一果酒和果醋的制作1.发酵菌种(1)图中A可表示酒精发酵菌种的细胞模式图,该菌种主要来自附着在葡萄皮上的野生型酵母菌。
(2)图中B可表示醋酸发酵菌种的细胞模式图,该菌种可从变酸的酒的表面的菌膜获取。
2.果酒、果醋的制作原理及发酵条件比较项目果酒制作果醋制作制作原理菌种酵母菌醋酸菌反应有氧条件下,大量繁殖:C6H12O6+6O2――→酶6CO2+6H2O;无氧条件下,酒精发酵:C6H12O6――→酶2C2H5OH+2CO2氧气、糖源充足时:C6H12O6+O2――→酶CH3COOH;缺少糖源、氧气充足时:C2H5OH+O2――→酶CH3COOH+H2O发酵条件温度一般18~25 ℃,最适为20℃左右最适为30~35 ℃空气前期:需氧后期:不需氧需要充足氧气时间10~12 d 7~8 d3.完善制作流程挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→醋酸发酵↓↓果酒果醋4.葡萄酒呈现深红色的原因是红葡萄皮的色素进入发酵液。
5.现在工厂生产果酒,为提高果酒的品质,更好地抑制其他微生物的生长,采取的措施是直接在果汁中加入人工培养的酵母菌。
[深度思考]1.如图所示为制作果酒和果醋的发酵装置,请思考。
(1)装置图中a 、b 、c 分别指什么?其作用是什么?(2)b 需长而弯曲,其目的是什么? (3)进行醋酸发酵和酒精发酵时,对图中哪一处操作有差异?请具体指明。
(4)图中发酵瓶中葡萄汁的量是否恰当?为什么?提示 (1)a 为通气口,用于向装置内通气;b 为排气口,用于排出CO 2;c 为出料口,用于取样检测。
(2)b 长而弯曲,其目的是防止空气中微生物的污染。
(3)使用该装置制果酒时,应该关闭充气口;制醋时,应将充气口连接气泵,输入氧气。
(4)不恰当,因为葡萄汁的量不能超过发酵瓶体积的2/3,而且排气管口离发酵液应有一段距离。
2.果酒和果醋的制作成功的关键点项目 说明材料的选择与处理选择新鲜的葡萄,榨汁前先将葡萄进行冲洗,再除去枝梗,以防葡萄汁流失及污染防止发酵液被污染①榨汁机和发酵瓶等都需清洗干净,且发酵瓶要进行消毒②清洗葡萄时要先清洗后除枝梗 ③发酵瓶排气管用曲颈管不用直管3.果酒、果醋发酵条件的控制(1)葡萄汁装入发酵瓶时,要留约1/3空间,目的是先让酵母菌进行有氧呼吸快速繁殖,耗尽O 2后再进行酒精发酵,防止发酵过程中产生的CO 2造成发酵液溢出。
选修一生物考试知识点总结

选修一生物考试知识点总结第一章细胞的结构和功能1.1 细胞的发现在17世纪,安东·范·莱文虎克首次观察到了细胞,揭开了细胞的神秘面纱。
1.2 细胞的结构细胞包括细胞膜、细胞质、细胞核等部分。
其中,细胞膜是细胞的保护膜,细胞质包括细胞器和胞质基质。
1.3 细胞的功能细胞通过各种细胞器来进行代谢、分裂、合成物质等。
第二章遗传的本质2.1 遗传物质的分子结构DNA是细胞遗传的物质基础,它是由若干个核苷酸单元组成的双螺旋结构。
2.2 DNA的复制DNA在细胞分裂的过程中会进行复制,确保每个新生的细胞都有完整的遗传信息。
2.3 遗传信息的表达DNA经过转录和翻译过程,最终在蛋白质的合成过程中表达出来。
第三章生物调节与体内环境稳态3.1 神经调节神经元接收到刺激后,会产生兴奋,传递神经冲动,使得机体进行相应的反应。
3.2 内分泌调节内分泌腺通过分泌激素来调节机体内部的平衡。
3.3 气体交换气体交换包括外呼吸和内呼吸,通过呼吸系统来实现。
第四章生物进化和分类4.1 进化论生物通过自然选择和遗传变异来适应环境,进化为适应环境的形态。
4.2 生物分类生物通过形态特征、解剖结构、生物化学特性等来进行分类。
4.3 生物多样性地球上有数百万种生物,构成了生物多样性。
第五章植物的营养5.1 光合作用叶绿体中的叶绿素能够吸收阳光的能量,进行光合作用,生成葡萄糖。
5.2 植物的矿物质营养植物通过根部吸收土壤中的水分和无机物质,进行生长和代谢。
5.3 植物的有机质营养植物通过营养器官来进行有机物质的合成和储存。
第六章植物体内物质的运输6.1 植物的根系结构根系通过根毛和细根来吸收水分和无机物质。
6.2 植物的茎叶结构茎和叶通过维管束来进行水分和无机物质的运输和合成。
6.3 植物的光合产物的运输植物通过韧皮部来进行光合产物的运输。
第七章动物的营养7.1 消化系统消化系统通过口腔、食道、胃、肠等器官来进行物质的分解和吸收。
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抄记背果胶酶在果汁生产中的作用1.基础知识1.1果胶是植物细胞壁和胞间层的主要组成成分之一。
1.2在果汁加工中,果胶的存在易导致果汁出汁率低,果汁浑浊。
1.3果胶酶分解果胶的作用是:①瓦解植物的细胞壁及胞间层,使榨取果汁更容易,②把果胶分解为可溶性的半乳糖醛酸,使浑浊的果汁变得澄清,因此可以解决果汁加工中出现的问题。
1.4果胶酶是一类酶的总称,包括:多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶。
在植物细胞工程中果胶酶的作用是与纤维素酶一起除去植物细胞的细胞壁。
1.5酶的活性是指:酶催化一定化学反应的能力。
1.6酶的活性高低可用一定条件下的酶促反应速度来表示,即单位时间、单位体积内反应物消耗量或产物生成量来表示。
1.7影响酶活性的因素有:温度、 PH 、激活剂和抑制剂等。
1.8食品工业生产中最常用的果胶酶是通过霉菌发酵产生。
1.9根据影响酶活性的因素,在实际生产中通过确定果胶酶的最适温度、最适PH等条件获得果胶酶的最高活性。
2.实验设计2.1实验目的:定量测定温度或pH对果胶酶活性的影响。
该实验与必修I中探究“影响酶活性的条件”实验有何不同?前者属于是定量分析实验,后者属于定性分析实验。
2.2实验原理:果胶酶瓦解细胞壁和胞间层增大果汁产量;果胶酶催化分解果胶增大果汁澄清度。
2.3变量设计与控制:①你确定的温度梯度(或pH梯度)为 10℃或5℃(或0.5、1.0)。
②实验的自变量是温度(或pH),控制自变量的方法是利用恒温水浴锅(或滴加酸碱等)。
③实验的因变量是酶的活性,检测因变量的方法是测定果汁的产出量或澄清度。
果汁与果胶酶在混合之前,分装在不同试管中用同一恒温处理的目的是保证果汁与果胶酶混合前后的温度相同,避免因混合导致温度变化而影响果胶酶活性。
该实验中不同的温度设置之间相互对照。
控制PH和其他因素相同,保证只有温度一个变量对果胶酶的活性产生影响。
3.操作提示3.1制备果泥:用榨汁机榨制果泥。
在榨制橙子汁时不必去橙皮3.2在探究不同PH对果胶酶活性的影响时,可以用 0.1%的NaOH溶液和盐酸调节pH。
3.3在果胶酶处理果泥时,为了果胶酶能充分地催化反应,用玻璃棒不时搅拌。
4.结果分析与评价将以下某同学实验数据转换成曲线图。
将实验数据转换成曲线图的方法①以自变量为横坐标、以因变量为纵坐标建立直角坐标系。
②注明坐标轴名的名称、单位、坐标原点以及曲线名称。
③每个坐标轴上的取值单位要相等。
④将实验数据标在坐标系中,并用各种线型连接起来。
温度℃101520253035404550果汁量/ml124654321探讨加酶洗衣粉的洗涤效果一、基础知识1.加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉,目前常用的酶制剂有四类:蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶。
其中,应用最广泛、效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。
碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有的大分子蛋白质水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽,使污迹从衣物上脱落。
同样道理,其他酶也是将大分子物质分解为小分子物质,从而使洗衣粉具有更好的去污能力。
2、使用加酶洗衣粉时,影响酶活性的因素有温度、酸碱度、表面活性剂等,为此,科学家通过基因工程生产出了特殊的酶,并制成酶制剂,解决了这个问题。
3、加酶洗衣粉可以降低表面活性剂和三聚磷酸钠的用量,使洗涤剂朝低磷无磷的方向发展,减少对环境的污染。
二、实验设计实例1.探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉对衣物污渍的洗涤效果实验原理:加酶洗衣粉中含有一种或多种酶,可以将相应的大分子物质分解为小分子物质,从而使污迹容易从衣物上脱落,这是普通洗衣粉难以做到的。
实验思路:自变量:加酶洗衣粉、普通洗衣粉;因变量:相同时间污迹残留量或洗去污迹所需的时间。
除自变量不同外,其它因素要完全相同。
实例2.探讨温度对加酶洗衣粉洗涤的影响实验原理:酶的活性受温度影响,在最适温度时,酶的活性最高,高于或低于最适温度时,酶的活性下降。
实验思路:自变量:不同温度;因变量:相同时间污迹残留量或洗去污迹所需的时间。
除自变量不同外,其它因素要完全相同。
实例3.不同种类的加酶洗衣粉对同一污渍的洗涤效果实验原理:不同种类的加酶洗衣粉所加的酶不同,而酶具有专一性,所以对不同污渍的洗涤效果不同。
设计不同类型洗衣粉对不同污渍的洗涤效果记录表格(自己在草稿纸上列表)。
酵母细胞的固定化一、基础知识(一)固定化酶的应用实例1、高果糖浆是指果糖含量为42%左右的糖浆,能将葡萄糖转化为果糖的酶是葡萄糖异构酶。
2、使用固定化酶技术,将这种酶固定在一种颗粒状的载体上,再将这些酶颗粒装到一个反应柱内,柱子底端装上分布着许多小孔的筛板。
酶颗粒无法通过筛板的小孔,而反应溶液却可以自由出入。
生产过程中,将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入,使葡萄糖溶液流过反应柱,与固定化葡萄糖异构酶接触,转化成果糖,从反应柱的下端流出。
反应柱能连续使用半年,大大降低了生产成本,提高了果糖的产量和质量。
(二)固定化细胞技术1、固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术,包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。
2、一般来说,酶更适合采用化学结合法和物理吸附法固定,而细胞多采用包埋法固定化。
这是因为细胞体积比酶分子的体积大;体积大的细胞难以被吸附或结合,而个小的酶容易从包埋材料中漏出。
3、包埋法法固定化细胞,即将微生物细胞均匀地包埋在不溶于水的载体中。
常用的载体有明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。
二、实验操作(一)制备固定化酵母细胞:1.酵母细胞的活化:休眠状态恢复正常生活状态。
2.配制物质的量的浓度为0.05mol/L的CaCl2溶液3.配制海藻酸钠溶液:操作中最重要...的一环。
加热溶化海藻酸钠时要注意小火间断加热,重复几次,并不断搅拌,直到海藻酸钠融化为止。
如果加热太快,海藻酸钠会发生焦糊。
4.海藻酸钠溶液与酵母菌细胞混合:将海藻酸钠溶液冷却至室温,加入已活化的海藻酸钠溶液,进行充分搅拌,使其混合均匀,在转移至注射器中。
5.固定化酵母细胞:以恒定的速度缓慢地将注射器中溶液滴加到刚配制好CaCl2溶液中,浸泡30min左右。
(二)用固定化酵母细胞发酵:酵母细胞凝胶珠蒸馏水冲洗→25℃下发酵24h三、结果分析与评价(一)制作凝胶珠过浅、呈白色,说明海藻酸钠浓度浓度偏低,包埋的酵母细胞数目少,影响实验效果;如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形,则说明海藻酸钠浓度浓度偏高,制作失败,需要再作尝试。
(二)固定的酵母细胞发酵产生酒精,可以看到产生了很多气泡,同时会闻到酒味。
工业生产中,细胞的固定化技术是在严格无菌的条件下进行的。
一、基础知识(一)凝胶色谱法1、凝胶色谱法也称做分配色谱法,是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法。
2、凝胶实际上是一些微小的多孔球体,这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的,如葡聚糖或琼脂糖。
3、在小球体内部有许多贯穿的通道,相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同,相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程较长,移动速度较慢;而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快。
相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
(二)缓冲溶液1、缓冲溶液的作用是能够抵制外界酸或碱对溶液PH的影响,维持PH基本不变。
2、缓冲溶液通常由1~2种缓冲剂溶解于水中配制而成的。
3、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的,为了能够在实验条件下准确模拟生物体内的过程,必须保持体外的pH与体内的基本一致。
(三)电泳1、电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
2、许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有可解离的基团,在一定的pH下,这些基团会带上正电或负电。
在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。
电泳利用了待分离样品中各分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。
3、两种常用的电泳方法是琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳,在凝胶中加入SDS,电泳速率完全取决于分子大小,因此,在测定蛋白质分子量时通常使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳。
二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步:样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。
(一)样品处理1、红细胞的洗涤:洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白,采集的血样要及时分离红细胞,分离时采用低速短时间离心(500r/min),然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆,将下层暗红色的红细胞倒入烧杯,再加入五倍体积的生理盐水(质量分数为0.9%),缓慢搅拌10min,低速短时间离心,如此重复洗涤三次,直至上清液中没有黄色,表明红细胞已洗涤干净。
2、血红蛋白的释放:在蒸馏水和甲苯作用下,红细胞破裂释放出血红蛋白。
3、分离血红蛋白溶液:将搅拌好的混合溶液离心(2000r/min)后,试管中的溶液分为4层。
第一层为无色透明的甲苯层,第2层为白色薄层固体,是脂溶性物质的沉淀层,第3层是红色透明液体,这是血红蛋白的水溶液,第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。
将试管中的液体用滤纸过滤,除去脂溶性沉淀层,于分液漏斗中静置片刻后,分出下层的红色透明液体。
(二)粗分离:透析取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中,将透析袋放入盛有300mL的物质的量的浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液(PH7.0)中,透析12h。
透析可以去除样品中分子量较小的杂质,或用于更换样品的缓冲液。
(三)纯化:凝胶色谱操作:制作凝胶色谱柱→装填凝胶色谱柱→样品的加入和洗脱→纯度鉴定。