生物实验室日常小技巧集锦
初中生物实验技巧汇总

初中生物实验技巧汇总生物实验在初中生物学教学中占据非常重要的地位,通过实验可以培养学生的实践能力和科学思维,加深对生物学知识的理解。
本文将为初中生物实验提供一些实用的技巧,帮助学生在实验中取得更好的成果。
1. 实验前的准备工作在进行生物实验之前,准备工作是非常关键的。
首先要认真阅读实验操作步骤,了解实验的目的和步骤,并做好相应的实验记录表。
其次,检查实验用具和试剂是否齐全,并确保实验器材的清洁和安全。
在实验室进行实验时,必须依照实验室的安全规定,佩戴安全眼镜、实验服和手套等防护装备。
2. 熟悉实验仪器的使用生物实验中常用的仪器有显微镜、恒温培养箱、酶标仪等。
在进行实验时,需要对这些仪器的使用方法有一定的了解。
熟悉仪器使用方法可以提高实验的效率,减少操作失误。
学生可以通过向老师请教、查阅相关的实验手册和使用说明书以及网上的视频教程等途径来学习仪器的使用。
3. 观察与记录观察和记录是生物实验中重要的环节。
学生应该以客观的态度观察实验现象,并将观察到的结果准确地记录下来。
观察要仔细,包括颜色、形状、大小等细节。
记录要准确,可以使用量表或专门设计的实验记录表格。
同时,还要注意实验条件的控制,例如温度、pH值等,这些因素对实验结果的影响也需要被记录下来。
4. 安全与环保生物实验中要注意安全和环保问题。
在实验过程中,要遵守实验室的规章制度,禁止随意触碰实验物品,避免发生意外事故。
当实验涉及到有毒或有害的物质时,要戴好口罩和手套,注意细节,避免吸入或接触这些有害物质。
此外,要注意对实验产生的废弃物进行分类和处理,确保实验室环境的整洁和安全。
5. 实验结果的分析和总结实验完成后,需要仔细分析实验结果,并正确总结实验的结论。
学生可以通过数据的比较和图表的绘制来展示实验结果。
同时,还要分析实验中存在的误差和不确定因素,并提出改进的建议。
总结实验过程中的收获和问题,加深对生物学知识的理解。
6. 团队合作与沟通在实验中,团队合作和良好的沟通是非常重要的。
生物实验注意事项与技巧

生物实验注意事项与技巧在进行生物实验时,我们需要严格遵守一系列的注意事项和技巧,以确保实验的准确性和安全性。
本文将介绍一些重要的生物实验注意事项和技巧,帮助读者更好地完成实验操作。
1. 实验室准备工作在开始生物实验之前,必须确保实验室准备工作已完成,以确保实验的顺利进行。
首先,确认所需试剂和材料齐全,并检查其保存条件和有效期。
其次,确保实验室仪器设备正常运行,并进行必要的校准和检修。
最后,清洁实验台面和实验器具,确保无杂物和污染。
2. 实验操作规范在进行生物实验时,必须遵守一系列的操作规范,以保证实验的准确性和可重复性。
首先,遵循实验流程和步骤,按照指定方法操作。
其次,注意实验操作的时间和温度控制,确保实验条件的一致性。
此外,注意实验操作的顺序和量度精确性,避免误差的产生。
3. 安全操作措施在进行生物实验时,必须时刻注意安全操作措施,以保障实验人员的安全。
首先,佩戴适当的实验室个人防护装备,如实验手套、安全眼镜和实验外套。
其次,注意有害物质的处理和储存,采取相应的防护措施,避免其对人体和环境的伤害。
此外,实验中遇到意外情况时,要立即采取相应的紧急处理措施,并及时报告相关人员。
4. 数据处理和分析在完成生物实验后,需要进行数据处理和分析,以得出准确的结论和科学的研究结果。
首先,对实验数据进行整理和归类,确保数据的完整性和一致性。
其次,采用合适的统计方法和软件,对数据进行分析和处理,以获得科学可信的结果。
此外,注意在实验报告中清晰而准确地描述数据处理和分析方法,以便他人能够理解和重复实验。
5. 实验结果和结论最后,在实验报告中清晰地展示实验结果和得出的结论,以便他人能够了解和评估实验的有效性和科学性。
首先,使用合适的图表和图像展示实验结果,确保可视化和直观性。
其次,用简洁清晰的语言描述实验结果,并对实验结果进行科学性和实用性的解读。
最后,根据实验结果得出结论,并提出相应的建议和展望。
总结起来,生物实验的成功进行需要严格遵守一系列的注意事项和技巧。
生物实验技巧分享

生物实验技巧分享实施生物实验是学习和研究生物学的重要环节,它能帮助我们理解生命的奥秘和发现新的科学知识。
然而,实验的成功与否往往取决于我们的技巧和操作经验。
本文将分享一些生物实验的技巧,希望能对大家的实验工作有所帮助。
1. 实验前的准备工作在进行任何实验之前,充分的准备工作是至关重要的。
首先,仔细阅读实验操作手册,了解实验的目的、步骤和所需材料。
同时,检查实验室的设备和试剂是否齐全,并确保它们的适用性和有效性。
此外,做好个人防护措施也是不可忽视的。
戴上实验手套、实验服和护目镜,避免直接接触有害化学品和微生物。
保持实验台面的清洁,准备好所需的实验用具,并将它们按照实验步骤的顺序排列好,以便于操作时的高效率。
2. 试剂和溶液的制备正确制备试剂和溶液对实验结果的准确性和可靠性有着重要影响。
首先,确保使用的试剂的纯度和新鲜度,避免使用过期或受污染的试剂。
其次,按照实验手册或指导书的要求,准确称取试剂和溶液的浓度和体积。
注意,在配制溶液时,应根据需要添加溶剂并充分搅拌,以确保试剂的均匀溶解。
此外,对于需要长时间保存的试剂和溶液,应按照规定的条件储存,以避免其变质和损失活性。
定期检查试剂库存,并及时更新和替换不合格的试剂,以保证实验的顺利进行。
3. 微生物培养技巧在进行微生物培养实验时,正确的操作和良好的培养技巧对于细胞生长和实验结果的准确性至关重要。
首先,确保培养基和平皿的消毒无菌。
使用无菌操作技术,将培养基倒入平皿中,并避免接触到非无菌物品和环境。
在接种菌液时,使用无菌的吸管或移液器,并根据实验要求进行适当的量取。
在培养箱中,保持适当的温度、湿度和氧气条件。
定期检查菌液的生长情况,并根据需要调整培养条件,以促进细胞的健康生长。
同时,避免频繁开启培养箱的门,以免对培养环境造成干扰和污染。
4. 数据记录和分析在实验过程中,准确记录实验数据和观察结果是至关重要的。
建议使用清晰可读的笔记本或电子记录系统,记录实验的日期、步骤、参数和观察结果,并及时进行数据分析。
生物实验操作技巧

生物实验操作技巧引言:生物实验是生物学研究中不可或缺的一环,通过实验可以进一步了解生物的结构、功能和互作关系。
而成功的实验操作技巧对于实验结果的准确性和稳定性至关重要。
本文将介绍一些常见的生物实验操作技巧,帮助读者在实验中做到操作规范和科学。
一、实验前准备1. 实验设计:在进行实验之前,首先应该明确实验的目的和设计实验方案。
合理的实验设计可以帮助减少实验的重复性和误差。
2. 手术器械清洁:手术器械的清洁是确保实验操作的重要环节。
在实验前需要使用清洁剂对器械进行彻底清洗,并在使用前消毒处理,以防止交叉感染。
二、实验操作技巧1. 高效分离技巧- 血液分离:在分离血液样本时,应用离心机进行离心,以获得血清、血浆等需要的样品,并注意避免样品在离心前后的混合。
- 细胞分离:细胞分离是一种常见的实验技巧,可以通过离心、温育、酶解等方法将不同类型的细胞分离开来,以便进一步的研究。
2. 操作规范- 操作卫生:在进行任何实验操作之前,都应该保持良好的卫生习惯,比如洗手、佩戴实验手套等。
这有助于防止实验室内的交叉感染。
- 佩戴防护设备:根据实验的具体要求,佩戴适当的防护设备,如眼镜、口罩、防护服等,以防止对人体造成损害。
3. 数据记录- 时间记录:在进行实验时,应该准确记录实验的进行时间,以便分析结果的准确性和重复性。
- 数据保存:将实验数据及时保存,并进行备份,以防止数据丢失和实验结果无法复现。
三、实验结果分析1. 数据处理技巧- 统计学处理:对于大量的实验数据,可以使用统计学方法进行处理,比如计算平均值、标准差、方差等,以获得更加有说服力的结果。
- 图表展示:使用合适的图表展示实验结果,如柱状图、折线图等,可以更清晰地展示实验结果的趋势和差异。
2. 结果讨论在讨论实验结果时,应该结合相关文献和理论背景,进行科学合理的解释和分析。
不能仅仅从表面现象来判断结果,需要考虑实验中可能存在的误差和其他影响因素。
结论:生物实验操作技巧对于实验结果的准确性和稳定性至关重要。
生物实验的实验室操作技巧

生物实验的实验室操作技巧实验室操作是生物学研究中至关重要的环节,它关系着实验结果的准确性和实验者的安全。
合理的实验室操作技巧不仅可以提高实验效率,还可以保证实验的可重复性。
本文将介绍一些生物实验中常用的实验室操作技巧,帮助实验者更好地开展实验工作。
一、试剂储存和取用技巧合理的试剂储存和取用是保证实验室工作顺利进行的重要环节。
首先,试剂的储存应遵循相应的规定,将试剂按照性质和危险程度进行分类存放。
同时,应将试剂放置在标有试剂名称、浓度、存放日期、有效期等信息的容器中,并妥善标记。
在取用试剂时,应先仔细阅读试剂瓶上的标签,确认试剂的名称和浓度是否符合实验需求。
取用试剂时,主要注意以下几点:避免将试剂直接倒入手中,避免试剂滴入其他试剂瓶中,避免触摸裸露的试剂瓶口。
另外,在实验结束后,应及时将剩余的试剂归位,避免试剂的浪费和损坏。
二、容器使用和清洗技巧在生物实验中,常常需要使用各种各样的容器,如试管、烧杯、培养皿等。
正确的容器使用和清洗技巧对于实验结果的准确性至关重要。
在使用容器时,应首先确认容器是否洁净且完好无损,避免使用破损或有污渍的容器。
在取用容器时,应避免直接用手触摸容器内部或外部,以免引入杂质。
在实验结束后,应立即将使用过的容器进行清洗。
清洗容器时,应使用中性洗涤剂和温水,并用刷子彻底清洗容器内外表面。
清洗完毕后,应充分冲洗容器,确保无残留的洗涤剂。
同时,对于特定的实验操作,应特别注意遵循相应的清洗和消毒程序,以防止交叉污染。
三、实验仪器的正确使用实验仪器在生物实验中起到关键作用,要正确使用实验仪器,需要熟悉操作步骤和注意事项。
在使用实验仪器前,应先仔细阅读相关的操作手册,并掌握仪器的使用原理和技巧。
在实验过程中,要注意保持仪器的正常运行状态,及时检查仪器是否存在故障或损坏。
另外,应定期对实验仪器进行维护和保养,保持仪器的良好状态。
在实验结束后,应及时清理和归位实验仪器,避免因未及时清理导致仪器的损坏或污染。
生物实验操作技巧

生物实验操作技巧在生物实验中,正确的操作技巧对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将介绍一些常见的生物实验操作技巧,以帮助读者提高实验的成功率和效果。
一、实验前的准备工作在开始进行任何生物实验之前,准备工作非常重要。
首先,确保所有实验所需的试剂和设备都已经准备齐全。
检查试剂的保质期和存储条件,避免使用过期或受损的试剂。
此外,确保实验室内的工作台面和仪器设备都已经清洁干净,并且处于良好的工作状态。
二、实验中的操作技巧1. 样品处理技巧在进行生物实验时,样品的处理是一个关键步骤。
首先,需要准确称量或分配样品,避免误差产生。
在进行溶液制备时,应该注意溶液的浓度和体积的准确计算。
此外,需要避免样品的污染,使用干净的试管、移液管和其他容器进行样品的处理。
2. 操作仪器的技巧在进行生物实验时,常常会使用一些仪器设备。
为了获得可靠的实验结果,正确的操作仪器是至关重要的。
在使用仪器之前,阅读并遵循使用说明书中的操作步骤。
确保仪器已经校准并处于良好的工作状态。
在进行实验时,注意仪器的使用技巧,避免产生误差或者损坏仪器。
3. 操作微生物的技巧在进行微生物实验时,操作技巧对于结果的准确性和可靠性至关重要。
首先,需要注意无菌操作的要求,使用无菌技术将微生物转移到培养基或其他容器中。
此外,需要掌握合适的培养条件,如温度、湿度和pH值等。
遵循实验方案中的操作步骤,避免交叉污染和结果的误差。
4. 数据记录和分析技巧在实验过程中,准确记录数据非常重要。
使用合适的记录表格或软件,将实验数据完整地记录下来。
此外,要善于分析数据,掌握适当的统计方法和软件,对实验结果进行合理的解释和分析。
三、安全注意事项在进行生物实验时,安全是至关重要的。
首先,要穿戴适当的实验室服装和个人防护装备,如实验手套、眼镜和实验服。
遵循实验室的安全要求和规定,将实验废弃物和有害物质正确处理。
在操作具有潜在危险的生物材料时,要采取适当的防护措施,如使用生物安全柜、消毒操作区域等。
生物实验的技巧与注意事项

生物实验的技巧与注意事项在进行生物实验时,正确的技巧和注意事项是确保实验结果准确和可靠的关键。
本文将介绍一些生物实验中常用的技巧和需要注意的事项,以帮助研究人员取得良好的实验结果。
一、实验前的准备工作在进行生物实验之前,必须做好充分的准备工作。
首先,确保实验室环境整洁,并且实验室台面和仪器设备都要进行清洁和消毒。
其次,检查所需试剂和材料的质量和数量是否符合实验要求,确保实验所需的试剂和材料充足。
同时,根据实验的需要,准备好所需的仪器设备,并进行检查和校准,确保其正常工作。
二、样本处理的技巧在进行生物实验时,样本的处理是一个非常重要的环节。
首先,要根据实验的需要,选择合适的样本处理方法。
例如,对于细胞实验,可以使用酶消化的方法来处理细胞,以获得单细胞悬液。
其次,在样本处理过程中,要注意避免样本的污染和损伤。
可以使用无菌技术来避免样本的污染,并且在处理样本时要轻柔操作,避免对样本造成不必要的损伤。
三、实验条件的控制在进行生物实验时,实验条件的控制是确保实验结果准确和可靠的关键。
首先,要控制实验室的温度和湿度,确保其稳定在适宜的范围内。
其次,要控制实验的时间,确保实验的持续时间符合实验要求。
同时,要控制实验的光照条件,避免光照对实验结果的影响。
另外,对于一些需要进行长时间观察的实验,可以使用恒温恒湿箱来控制实验条件。
四、数据记录和分析在进行生物实验时,正确的数据记录和分析是非常重要的。
首先,要及时记录实验过程中的关键数据,包括实验条件、操作步骤和观察结果等。
其次,要对实验数据进行准确的分析,使用合适的统计方法来评估实验结果的可靠性。
同时,要注意对实验数据进行合理的图表展示,以便更好地展示实验结果。
五、安全注意事项在进行生物实验时,安全是至关重要的。
首先,要佩戴适当的个人防护装备,如实验手套、实验眼镜等,以保护自己的安全。
其次,要正确使用实验室设备和试剂,遵循实验的操作规程,避免发生意外事故。
另外,要正确处理和处置实验废弃物,遵守实验室的环境保护规定。
生物实验技巧

生物实验技巧生物实验是一项关键的科学研究方法,它通过实验操作来研究生物体的结构、功能和相互关系。
为了确保实验结果的准确性和可重复性,科学家们在实验过程中需遵循一系列技巧。
本文将介绍一些生物实验的技巧,帮助读者在实验室中进行高质量的生物研究。
一、实验前准备在进行生物实验之前,准备工作是至关重要的。
首先,确保实验室设备和试剂的正常运转和储存,以免影响实验结果。
此外,检查实验材料是否足够充足和质量优良。
实验者还应熟悉实验室的安全操作规程,并正确穿戴个人防护装备,确保安全进行实验。
二、准确使用实验设备生物实验中常用的设备包括显微镜、离心机、温度控制仪等。
使用这些设备时,需要仔细阅读设备说明书,并遵循正确的操作方法。
确保仪器设备的准确性和稳定性,以获得可靠的实验结果。
三、选择合适的实验方法选择合适的实验方法是生物实验成功的关键。
根据实验目的和要求,选择适当的实验方法和操作步骤。
在实验设计中要充分考虑控制变量、重复试验和样本大小等因素,以减少实验误差,并提高实验结果的可靠性。
四、实验记录与数据分析在进行实验过程中,实验者应准确记录实验步骤、观察结果和数据。
清晰、完整的实验记录对于数据分析和结果验证至关重要。
实验者还需要掌握常用的数据统计和图表绘制方法,对实验结果进行科学的数据分析和解释。
五、注意实验室卫生和废物处理良好的实验室卫生和废物处理是每位实验者的责任。
在进行实验前,确保实验台面和器材的清洁,并妥善处理废弃物和化学品残余物。
遵循实验室卫生操作规程,可以降低实验污染风险,确保实验安全和环境保护。
结论生物实验技巧对于科学研究的质量和效果有着重要影响。
通过正确的实验前准备、准确使用实验设备、选择合适的实验方法、记录与数据分析以及注意实验室卫生和废物处理等技巧,能够提高生物实验的可靠性和有效性,为科学研究提供更可靠的依据。
在未来的实验中,我们应不断学习和掌握新的生物实验技巧,不断提升自己的实验水平,为科学研究的进步做出更大的贡献。
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平时在实验室最常听到的一句话就是“今天某某试验没做好是为什么?今天某某试验没出结果是什么原因?今天某某试验为什么会是这样的呢?”等等。
然后仔细一查找原因,往往是由于操作上面的不认真,或是一些小小的细节没有注意到。
以下是集各路朋友的一些经验,与大家分享:1跑page胶的时候,小电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形。
低电压泳道会比大电压泳道跑的直一些,且分离效果更高,有利于分子量相差不大的蛋白分离。
2. 提取质粒的时候,最后一步的酒精挥发很关键,基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。
所以这一步尽量挥发长一点时间,最好是空调吹热风,或是37度温箱放长一点的时间,我试过室温过夜,酶切很好。
3. 做WESTERN BLOT 的时候,大家往往会摸索一抗、二抗的浓度,封闭时间,曝光时间等等,而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜,甚至重新提蛋白,这样会浪费大量的时间。
其实完全没有必要这样。
一次转膜后,将PVDF膜晾干,裁减成小块,保存起来,用的时候取出一块,没有任何影响。
这对于摸索条件的战友来说,节约了大量的时间。
4. 有关缓冲液和培养基配置1)将缓冲液配方中的成分分别以10-100倍配成母液储存,需要的时候只需将相应的母液混合,补加水稀释即可2)配培养基时通常会忘记各成分的量,如配LB时的三个成分不记得到底哪个是5g,哪个要10个,因此可以在常用的试剂瓶的标签上注明所需的量,如配LB时,在NaCl瓶外注明10g/L, yeast 5 g/L, tryton 10 g/L 等,很方便,不需要每次配之前临时翻书5. 有关PCR主反应液配置:在做克隆鉴定的时候经常需要在酶切鉴定前进行PCR鉴定,每次配置PCR反应液很繁琐,可以将其配置类似kit的形式,按你需要的反应体系列表,然后放大100倍配置100×主反应液(100次反应),其中含buffer,Mg2+,dNTPs,但不含引物和Taq酶,然后可以10×分装或一管储存在-20度,在需要的时候拿出融开,然后按所需的PCR反应个数吸取相应的倍数,再补加相应反应倍数的Taq和引物,混匀后分装,这样做的好处如下:1)可极大的节省宝贵的时间,可早点收工,看球2)避免每次反应加样不均的可能3)大大减少PCR假阳性的产生6. 有关酶切反应液的配置:在做酶切时,也可以象PCR一样配置主反应液,每次反应前先列好反应的体系,算好需要的反应数,然后按所需反应的体系按所需反应数放大,加入buffer、酶、水,质粒栏空缺,然后混合后按除质粒DNA的体积分装,然后再在每管中加入相应体积的质粒DNA酶切,这样做的好处如下,特别是当同时有10几个阳性克隆需要鉴定时尤为明显:1)各反应成分均一2)可大大减少限制型内切酶的使用3)节省时间7. 有关SDS-PAGE:1)可将SDS-PAGE的积层胶,分离胶预先配好大体积如100ml储存在4度冰箱(注:10%AP,TEMED不加,切记!!!),每次配置时只需吸取相应体积的预制胶加入AP,TEMED即可,没必要每次制胶时候翻分子克隆,特别方便,而且,这样的预制胶可储存半年以上,不失为偷懒的绝佳方法;更关键的是可大大减少与丙稀酰胺的接触,因此大大减少中毒的机会。
2)电泳时虽然小电泳分离效果要好一些,但2小时以上的等待的时间实在是痛苦,因此可以提高电泳至150V,但需要将整个电泳槽放在放满冰水的脸盆里散热,这样跑出来的胶分离效果丝毫不比低电压来的差,关键是时间大大节省,不需1h即可看结果了8. 实验中小窍门我想能够分成两类:一类是“非常规”操作;一类是常规操作过程中一些省时省事手段。
前一类,我举个例子:有时候第一天涂的转化平板、次日早晨转化子可能长成的菌落比较大(1~2毫米以上,BL21就长得快),下一步转化子做质粒鉴定。
这个情况下可以直接挑取一块菌苔(勿带出培养基),50微升酚/氯仿悬浮菌体,放置两分钟,加40微升TE抽提,上层TE吸出后再氯仿抽提一次,吸取上层TE即是质粒提取液。
提取的质粒可以直接用于电泳和酶切。
这样操作,可以省去转接液体试管的培养步骤,至少节省6~8小时的时间。
但是,要在各步骤都控制得很好的情况下才能保证提取和酶切的效果,不同的实验室或者操作者未必能够很方便地重复----其实,其它的一些“小窍门”也是如此。
后一类的小窍门则在实验室中无处不在。
如:平行作不同样本的PCR,模板DNA加量一样,配置PCR体系可以一起配制后分装----这点做过试验的都知道,但是配制的时候配制量可以比预期分装量稍多一点(如用100微升则配110微升),这样可以避免有时候分装不够的尴尬,因为不同特别是大小不同的枪,会有误差。
再比如:楼上有站友说的sds-page胶预配(APS和TEMED、或者后者先不加)的问题,实际上时间放置过长肯定影响效果,如果要在一天内连续地跑两次板,何尝不可?又比如,配sds-page胶的时候,上层胶和下层胶可以只用一个大枪头:先取胶,次取水,取6.8的tris后再取8.8的tris,省时省料。
20021108站友开的这个帖子很好,在上上层楼的帖子说得也有道理。
但我想,“窍门”和“偷懒”不应该是因果关系。
其实,不管是那一类的小窍门,都是在充分地理解实验各步骤的原理、经过多次试验积累、再加上一点点思索然后尝试的结果。
知其然知其所以然和勤于思考敢于探索,是根本。
否则,别人的小窍门对你也未必能够有用。
才进实验室的新手,务必要先练好规范扎实的操作,然后才能弄“窍门”。
本末倒置,贻害无穷。
9. 我一直是把SDS-PAGE的积层胶,分离胶预先配成mixture,APS制胶时加入,半年内使用,绝对没有问题,我保证。
10. 做SDS-PAGE的时候,除了蛋白量上样一致,最好体积也一致,这样跑出来的胶各个泳道之间的band 能做到一样宽,方便后面的比较,特别是WB。
做法就是拿1X的上样缓冲补全要加的样做到体积一致,否则跑出来会有的宽有的窄,特别是上样体积相差较大的。
11. 在把蛋白胶做成干胶时,很多时候会因为有气泡使胶裂掉,我的经验是在做胶时加上层膜前在胶上多加些水就不容易进气泡了,还有就是高温烘胶,我喜欢放到60度烘箱里烘,这样水分蒸发速度快,即使有一些小的气泡也不会有影响,呵呵,这是经验之谈,我从来都没失手过,大家可以试试12. 做大肠表达时确定蛋白是否表达一般要煮样做诱前诱后检测,但很多时候煮出来的很黏影响跑胶效果.我发现如果现用8M Urea重悬细菌再煮效果会有极大改善.注:不能用Gu-HCl代替13. 我也推荐几个偷懒的方法1 做SDS-PAGE跑胶通常都是现配现用,但配胶要>1h,所以如果想第二天睡个懒觉而又不耽误跑胶可以于前一天晚上做好浓缩胶和分离胶,待凝聚后不要拔下梳子,把含胶玻璃板从制胶槽取下,用保鲜膜包上,注意玻璃板上下两边缘会有气体,所以需要加一点电泳缓冲液以避免胶内水分蒸发.然后放4度过夜.第二天直接拔下梳子行后续.国外好多公司出售脚既是如此,可以保存上星期.2 配置分离胶或者非变性胶时因胶凝时收缩可导致加样孔变浅.可以将加剩的胶放入4度以降低凝聚速度,而将凝胶放入37度促聚,并随时用4度加剩的胶补充下降的胶面.另外将胶横放与水平面成~10度角也可以减少收缩的影响.3 推荐一个节约抗体/时间的做法:同时跑2块胶,同时转膜,然后两块膜背靠背放入同一封口膜同时封闭,同时一抗二抗(最好是用转轮,这样效果好.如果是摇床,隔一段时间帮它们翻个身以保证两张膜的正面都有机会与液体充分接触.一起洗膜(可以稍微加强洗膜也可以不做.我最多一张盘子里放4张膜而没有影响洗膜).可分别或同时压片.这样就可以节约一半抗体和接近一半时间而不会影响结果.或者另外一个就是孵育后的抗体不要扔,好的抗体可以反复做好几张膜呢.但每次都会减弱,效果不如上面一种方法.14.做western blotting 转膜时,胶放在转膜缓冲液中一段时间,待胶在含有甲醇的缓冲夜中缩小的差不多后装好转膜装置,我的经验是把膜印在胶上直接在膜上画出预染maker条带,方便的很。
因为很多时候跑电泳时胶上的预染maker很清楚,等转膜后就不是分辨的很清楚了。
不过要注意画好预染maker后就不要使胶和膜发生对位移动了,以防maker失去参照价值。
15. 超滤最合适用于蛋白的浓缩,更换缓冲液和除盐,对于按照分子量进行初分离的效果不是很好,理论和现实是有很大差别的^_^16. 关于Western Blot1)器具的清洁非常重要,开始做前,为了安全,尤其是装胶的厚薄玻璃板,可以先用中性洗涤剂和自来水反复冲洗,确保无洗涤残液后用蒸馏水冲洗2-3遍,然后用去离子水冲洗一遍。
最后用95%酒精再擦一遍后晾干备用。
2)配胶最好现用现配,先配下层胶(分离胶),后配上层胶(浓缩胶或积层胶),而且在临灌胶前加APS 并迅速混匀,即用移液枪抽吸与注入1-2次即可。
17跑蛋白page的时候,一开始用加样针,太麻烦,发现用20ul枪+普通小白枪头点,非常省事。
另外,点样时有可能看不清孔在哪,看远离你的那面胶,孔有反光的。
点样也点你对面的那块胶,省的总低头,干咱这行的容易得颈椎呀,爱惜自己。
18. 垂直电泳时,可在电泳糟中放入青霉素小瓶等,可自然使液面提高而不影响电泳,又很节约电泳缓冲液。
19. 我们有时要沉淀东西时,由于沉淀量很少,离心完之后不知道到底有没沉淀下来东西,由于量很少,不好观察,所以离心时建议按特定的方向放置离心管,这样你就可以在离心之前确定沉淀该沉淀到管子的大致部位,这样离心后就可直接观察那有没有沉淀,避免满管子找,另外看沉淀时可以对光看,这样就是颗粒状的细小沉淀也能看见的。
20. 大家都知道PMSF有剧毒,以前都是知道浓度和要配的体积的基础上,算出要称多少毫克的PMSF,其实也可以先称PMSF,称多少算多少,再调整异丙醇的体积,到达你所要的浓度。
这样就避免了你长时间和它接触。
21. 跑好SDS-PAGE胶的一些体会。
1. 清洗好玻璃板,不要偷懒,很多时候跑完电泳撬胶时会因为玻璃板不干净胶粘在板上把胶撬破。
2. 配胶时不要反复用枪混,稍微摇混就可以了,用枪混多次会导致胶凝不好影响电泳图的分辨率。
3. AP分装成500微升一管保存放-20度,避免AP用太久失效。
4. 倒胶时把玻璃板中的水用滤纸尽量吸干,因为微量的水存在会影响配的胶浓度。
5. 尽量不用过夜放室温或者四度的胶,也回影响胶的分离效果。
6. 电泳完撬胶时根本不需要用撬胶板,在一平皿里装好水,把有胶一面的放在水中晃动几次胶很容易就脱落下来,一点没有问题,方便的很。
7. 点样时样品别忘了离心这步,因为上样含有固体沉淀会影响电泳图分辨效果。
8. 尽量在冰浴状态下跑。