临床常见细菌的鉴定程序和思路 (NXPOWERLITE)
临床常见细菌手工鉴定和结果判断
临床常见细菌的手工鉴定和结果判断一．细菌的鉴定步骤1、鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。
2、对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。
（我们这里一般都是预先纯化培养）+––+b）G，G，c，对待鉴定的菌种进行革兰染色，3、观察形态（Gc，Gb做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。
要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。
4、按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。
另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。
5、复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。
⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。
首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变细菌对染料的通透性）。
第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ）第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ）乙醇脱色（染色液Ⅲ）95%第三步：用．第四步：最后用稀释复红复染（染色液Ⅳ）⑵．触酶实验(HO实验)：22a.原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。
b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开，滴加3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性）。
要注意不能在血平板上进行实验，这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。
c.阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要避光置4℃冰箱保存。
d.应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实验阳性，链球菌属阴性。
临床常见细菌鉴定实验中我们一般用于区别葡萄球菌属（+），微球菌属（+），链球菌属（－）。
⑶．氧化酶实验（Kovac实验）：a. 原理：氧化酶又称细胞色素酶，是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程：取一环标本四区划线接种平板（如为粪便标本接种SS,MAC平板）培养18-24小时后取一区菌落革兰染色，报告为革兰阳性球菌/革兰阴性球菌/革兰阳性杆菌/革兰阴性杆菌，注意区分细菌和真菌一般情况下不会给你们做革兰阳性杆菌和革兰阴性球菌革兰阳性球菌鉴定流程：先做3%触酶试验：阳性的为葡萄球菌或微球菌，阴性为链球菌或肠球菌葡萄球菌和微球菌的区别：葡萄糖OF试验，葡萄球菌为F型，微球菌为O型所以如果做到一个触酶阳性的革兰阳性球菌都要做下葡萄糖OF试验，DNA酶试验，新生霉素试验，血浆凝固酶试验链球菌和肠球菌的区别：链球菌高盐和胆汁七叶苷试剂均为阴性，而肠球菌都为阳性。
链球菌属内区别：本来可以通过溶血来区分一些的，但是由于实验室的平板αβ溶血比较难区分所以如果做到一个触酶阴性的革兰阳性球菌都要做下高盐，胆汁七叶苷，杆菌肽，奥普托欣，CAMP如果做到一个奥普托欣敏感的革兰阳性球菌再加做胆汁溶菌试验和菊糖试验（阳性为变红）可判定为肺炎链球菌革兰阴性杆菌鉴定流程：先做氧化酶试验：氧化酶阴性的革兰阴性杆菌都要做下KIA，MIU，葡磷两支(做MR，VP)，苯丙，枸橼酸盐，硝还，蛋白胨水（做吲哚试验），赖氨酸，鸟氨酸，氨对如果KIA结果为A/A或者K/A的应为肠杆菌科细菌，如上面向个反应还不能区分细菌到种根据教科书307页加做试验。
一般情况下只会给你们做大肠埃希菌，志贺菌属（四种），沙门菌属（甲副，乙副，伤寒），弗劳地枸橼酸杆菌，肺炎克雷伯，产酸克雷伯，产气肠杆菌，阴沟肠杆菌，普通变形杆菌，奇异变形杆菌，沙雷菌属，摩根菌属，普罗威登斯菌属。
如果KIA结果为K/K应怀疑为不动杆菌属或者嗜麦芽窄食单胞菌：这两个菌区分可通过麦芽糖和赖氨酸试验区分，如为氧化酶阳性，要做葡萄糖的OF试验（用非发酵），硝还产气，精氨酸双水解酶，一般情况下只有两种菌给你们做一个是铜绿假单胞菌，一个是粪产碱杆菌，真菌给你们做的一般情况只有白色念珠菌和新生隐球菌，通过墨汁负染，芽管试验，厚膜孢子来区分。
细菌感染的一般检验流程
细菌感染的一般检验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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细菌鉴定的基本思路(全)
细菌鉴定一、标本的处理：1、先按标准操作规程（SOP）对标本进行接种（一般种普通血平板和选择性麦康凯平板；真菌-沙保弱；链球菌-巧克力平板，CO2温箱；结核菌-罗氏;粪-SS）。
一般细菌置于35℃培养24h；真菌置于30℃培养2、后将标本涂片，进行革兰染色，判断是革兰阴性或阳性，杆状，球状，短杆，球杆及弧状。
二、根据菌落形态，颜色，光滑与否，边缘，大小，是否有溶血环等初步判断所属菌属。
三、生化鉴定（最主要的依据）定向实验(最重要两实验)API微生物鉴定系统生理生化鉴定：根据微生物对各种生理条件（温度、pH、氧气、渗透压）、生化指标（唯一碳氮源、抗生素、酶、盐碱性）代谢反应进行分析，并将结果转化成软件可以识别的数据，进行聚类分析，与已知的参比菌株数据库进行比较，最终对未知菌进行鉴定的一种技术。
生物梅里埃API试剂类型•API 20E革兰氏阴性杆菌鉴定•API 20NE非发酵菌鉴定•API STAPH葡萄球菌及微球菌常用5种•API STREP链球菌鉴定•API CORYNE棒状杆菌•API 20C AUX酵母菌•API 20A厌氧菌•API LISTERIA李斯特菌•API CAMPY弯曲菌属•API CH芽胞杆菌/乳酸杆菌三、药敏试验（辅助鉴定及指导临床用药）最常用的纸片扩散法即K-B法。
原理：该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。
同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
结果分为敏感S、耐药R及中介I。
利用某些菌对某些药物天然耐药进而辅助鉴定结果正确与否,如嗜麦芽窄食单胞菌对亚胺培南(碳青霉烯类)天然耐药。
临床细菌常规检验方法
临床细菌常规检验方法1.样本收集：通常采用微生物标本采集套装，如采血培养瓶、骨髓培养瓶、尿培养瓶、分泌物培养瓶等。
不同类型的标本要按照不同的采集方法进行采集，以确保样本的纯度和无污染。
2.样本处理：在获得样本后，要进行适当的处理，如血液样本要进行离心分离，分离出红细胞和血浆/血清。
尿液样本要进行离心去除悬浊物等。
3.细菌培养：将已处理的样本分别接种到含有适当培养基的培养皿中，并在适当温度和湿度下培养一段时间。
通常常规培养采用的培养基包括血浆琼脂、麦康凯琼脂等。
培养时间通常为24-48小时，特殊细菌可能需要更长的培养时间。
4.细菌鉴定：对培养出的菌落进行初步的形态学鉴定，如观察菌落形状、大小、颜色等。
然后进行革兰染色，观察细菌的形态特征，如是否革兰阳性或革兰阴性。
根据初步鉴定的结果，可以选择进一步的生化试验或分子生物学检测，如氧化/发酵试验、羟基酸钠试验、目标序列扩增等。
最终确定细菌的种类和特征。
5.药敏试验：对已鉴定出的细菌进行药敏试验，以确定细菌对各类抗生素的敏感性。
药敏试验通常采用纸片扩散法或肉汤稀释法，通过观察菌落的生长抑制区域大小来判断细菌对抗生素的敏感程度。
6.结果分析和报告：根据细菌培养和鉴定的结果以及药敏试验的结果，进行结果分析和判断。
最后将结果整理成报告，提供给临床医生参考，帮助临床医生做出正确的诊断和治疗决策。
总的来说，临床细菌常规检验方法包括了样本收集、样本处理、细菌培养、细菌鉴定、药敏试验等步骤。
这些步骤的顺序和方法都有一定的规范和标准，以确保检验结果的准确性和可靠性。
临床细菌常规检验在临床诊断和治疗中起着重要的作用，可以帮助医生选择合适的抗生素治疗方案，提高治疗效果。
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程一般分为以下几个步骤：
1. 样品收集：根据需要鉴定的细菌类型和来源，选择适当的样品收集方式。
样品可以是细菌培养物、体液、食物等。
2. 培养：将样品接种到适当的培养基上进行培养。
根据细菌的生长条件需求，选择适当的培养基，如富含寡营养物的普通培养基、特殊选择性培养基等。
3. 盱衡生长：根据细菌类型和特性，观察细菌的生长状况，如菌落形状、颜色、大小等。
4. 形态学鉴定：使用显微镜观察细菌的形态学特征，包括细菌的形状（球形、杆状、螺旋形等）、大小、菌落或细胞的结构、芽生等。
5. 生化鉴定：进行一系列生化试验以确定细菌的生化特性，如氧需求、发酵产物、酶反应、代谢产物等。
6. 免疫学鉴定：通过免疫学方法，如血清学试验、酶联免疫吸附试验等，检测细菌对特定抗体的反应性，以确定细菌的免疫学特性。
7. 分子生物学鉴定：应用分子生物学技术，如PCR（聚合酶链反应）、序列分析
等，检测细菌的DNA或RNA序列，以确定细菌的基因特征和亲缘关系。
8. 数据分析和鉴定：根据样品收集、培养、观察、试验等结果，综合分析得到的数据，确定细菌的鉴定结果。
可以参考细菌鉴定手册或数据库，进行对照确认。
这些步骤都需要进行严格的实验操作和分析，以确保细菌鉴定的准确性和可靠性。
不同类型的细菌鉴定流程可能会有所不同，具体流程可以根据实际需要进行调整和优化。
静态混合器 (NXPowerLite)
1、概念静态混合器是一种新型先进的化工单元设备，自70年代开始应用后，迅速在国内外各个领域得到推广应用。
众所周知，对于二股流体的混合，一般用搅拌的方法。
这是一种动态的混合设备，设备中有运动部件。
而静态混合器内主要构件静态混合单元在混合过程中自身并不运动，而是凭借流体本身的能量并借助静态混合单元的作用使流体得到分散混合，设备内无一运动部件。
2、流体的混合机理对于层流和湍流等不同的场合，静态混合器内流体混合的机理差别很大。
层流时是“分割---位置移动---重新汇合”的三要素对流体进行有规则的反复作用，从而达到混合；湍流时，除以上三要素外，由于流体在流动的断面方向产生剧烈的涡流，有很强的剪切力作用于流体，使流体的细微部分进一步被分割而混合。
3、静态混合器的混合形态静态混合器在基本工艺流程中的组合方法见下图所示的两种类型。
在实际应用中往往将多种基本流程组合在一起使用。
两种液体汇合部位的结构，应根据液体的粘度、密度、混合比、互溶性等来确定。
尤其当两种液体一接触就反应或凝胶而相变时，更要注意汇合部位的结构、流速以及混合器的选择。
3.1层流的混合经静态混合器混合后的流体的混合形态，与经具有传动部件的混合机或搅拌机混合的混合形态有明显的差别。
图二表示采用静态混合器混合两种流体是产生的典型层流混合状态。
混合状态由条带状变为连续的或不连续的线状及粒子状，而状态的变化取决于流体混合时的雷诺数和韦伯数。
例如：当流速、粘度、混合器直径一定时，如果流体间表面张力大，流体的混合形态则从条带状转向线状，进而变化到粒子状。
混合器单元数、管径和流速的选定混合器的单元数和直径随流体的性质（粘度、互溶性、密度）、混合比、希望达到的混合状态、接触面上液体的结构变化等而不同，可通过试验和经验来确定。
通常基于雷诺数并经试验确定混合器的放大倍数。
但当雷诺数R e＜100（严格地说在1以下）时，混合程度、混合状态与雷诺数无关，只取决于混合器的单元数。
细菌鉴定的方法和步骤
细菌鉴定的方法和步骤
细菌鉴定是通过一系列方法和步骤来确定细菌菌种的过程。
以下是常用的细菌鉴定方法和步骤：
1. 收集样品：从目标环境或感染部位收集细菌样品，如血液、尿液、唾液、食物等，以便后续实验。
2. 培养：将细菌样品接种到适当的培养基上，提供足够的营养物质和环境来促进细菌的生长。
3. 纯化：将单个细菌菌落分离出来，并通过连续的传代培养使其得到纯化，以避免不同细菌种类的混杂。
4. 形态观察：观察细菌在固体培养基上的形态特征，如菌落的形状、颜色、大小等，以及在显微镜下的细胞形态，如形状、大小、结构等。
5. 染色：将细菌样品进行染色，如革兰氏染色、抗酸染色等，以便观察不同细菌的染色特征。
6. 生理生化试验：进行一系列生理生化试验，如代谢产物的产生、酶活性、氧需求等，以确定细菌的代谢特征。
7. 耐受性检测：测试细菌对温度、pH值、氧气和抗生素等环境因素的耐受性，以进一步确认鉴定结果。
8. 分子生物学分析：利用分子生物学技术，如PCR、序列分析等，通过对细菌的基因组或特定基因进行分析，来确定细菌的物种。
9. 鉴定结果：根据以上步骤的结果和参考文献，将细菌归类到已知的菌属或菌种中，最终得出细菌的鉴定结果。
需要注意的是，细菌鉴定是一个复杂的过程，通常需要准备鉴别试剂和设备，以及具备相关实验操作的技术和经验。
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基因阻遏子
B 内酰胺类抗生素
细菌D 细菌D A N
β - 内酰胺酶产生基因被抑制
β - 内酰胺酶产生基因被去抑制
稳定的突变
在产诱导酶的菌种中 *基因阻遏子的突变导致酶持续产生 基因阻遏子的突变 突变导致酶持续产生
突变 发生突 变的基 因阻遏 子 β - 内酰胺酶
β溶血等链球菌
①考虑A群乙型链球菌，作BAC试验或Latex分群 特别考虑标本来源…… ②考虑B群乙型链球菌，做CAMP试验或Latex分群 特别考虑标本来源…… ③根据染色特点、菌落在血平板上的溶血特点和菌 落大小等考虑——肠球菌 进一步作胆汁七叶苷、6.5%NaCL 要求掌握肠球菌的耐药性特点 ④其他特征不明显的链球菌就用板条或Latex分群作 系统试验鉴定
对培养出细菌的评价
1. 考虑是否有污染； 2. 结合标本的评价，评价细菌的临床价值； 3. 结合标本的采集部位； 4. 无菌部位标本所生长细菌，要排除污染的可
能性； 5. 考虑临床危急程度，掌握及时报告的尺度。
Gram染色 G+球菌
葡萄球菌 链球菌
观察溶血情况 观察菌落的大小、特点 Gram染色的形态特点 血平板的溶血特点 触酶阳性 触酶（-）、胆汁七叶苷、6.5%NaCL 按照葡萄球菌的进行进一步鉴定 学会使用胶乳试剂快速检测金黄色葡萄球菌 和MRSA 要求掌握葡萄球菌凝固酶的试管法测定实验 α溶血 掌握MRSA、MRSCoN及其筛选和确认试验 首先考虑肺炎链球菌 掌握MRS的耐药机理和耐药性特点 注意菌落形态和染色特点 做OPT试验等，注意PRP的问题
超广谱ß 内酰胺酶 超广谱 -内酰胺酶
(Estended-spectrum ß -latamases,ESBLs) ESBLs是质粒介导的，为TEM-1，TEM-2和SHV-1的 突变酶，包括TEM-3到TEM-26，SHV-2SHV-6共近 60种，与TEM-1，TEM-2和SHV-1相比，仅有1到4 个氨基酸的不同，由在分子质粒编码的，质粒分子 量大约在23Kbs到100Kbs之间，能够被酶抑制剂所 抑制，属于A类酶(分子生物学分类)。可以通过结合 试验转给敏感菌， ESBLs又分为他啶型和噻肟型，在我国主要为噻肟型。 现已在世界各地引起多次医院感染爆发流行。 产ESBLs代表菌株为大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌。
肠球菌（E.C）的耐药特性
注意VRE的检测，Van 6ug/ml,>1菌落=耐 药，通过MIC测定和动力试验产生的色素来 区别获得性耐药（VanA,VanB）和那些对 van中等水平耐药的E.C 握E.C的耐药特性以及充分了解氨基甙类高 耐筛选的意义。对其结果作出正确的临床评 价；Rx
① 了解AmpC酶的耐药特性；Rx ② 沙门氏菌和志贺氏菌 警告：不应报告 选用1、2代头孢及氨基甙类，因为体外活性 表现有活性，但临床无效。 ③ 利福平不能单独用于化疗。否则易产生 耐药性； ④ 了解一些细菌的特殊的耐药谱。如嗜麦 芽窄食单胞菌，屎肠球菌等等；
① 要具备药理学知识，充分了解抗生素， 以帮助我们对药敏结果作出正确的分析； ② c 2. G+杆菌 G-球菌 G-杆菌
① 了解AmpC酶的耐药特性；Rx ② 沙门氏菌和志贺氏菌 警告：不应报告 选用1、2代头孢及氨基甙类，因为体外活性 表现有活性，但临床无效。 ③ 利福平不能单独用于化疗。否则易产生 耐药性； ④ 了解一些细菌的特殊的耐药谱。如嗜麦 芽窄食单胞菌，屎肠球菌等等；
PRP的耐药特点：按照NCCLS的执行标准来筛 选和确证肺炎链球菌是否为PRP。 PRP的耐药机理。 PRP的耐药特性。对其结果作出临床评价。 Rx：对于青霉素中介或耐药的菌株，不推荐做氨 苄西林，氨苄西林/舒巴坦，头胞克罗，头胞他美， 头胞克肟，头胞唑肟，氯碳头胞和美罗培南的药 敏试验，因为目前尚无可靠的判定标准。应该告 诉医生PRP对这些药的敏感率较低。…
G-杆菌 杆菌
路标：O-F试验 OX
+ + -肠杆菌科
-- -- ±
非发酵菌
+++
弧菌科
板条系统鉴定
板条系统鉴定
板条系统鉴定
慨然法
G-杆菌的特殊耐药性
ESBLs AmpC酶 嗜麦芽
嗜血杆菌（ 嗜血杆菌（苛养菌） ）
分离培养基：流感嗜血杆菌分离平板（巧克 力）；菌落形态——无色或浅灰色似水滴； G-细小杆菌或初代分离时为G-细长杆菌。 作卫星试验，鉴定是否为流感嗜血杆菌；掌 握药敏试验方N
β- 内酰胺酶产生基因被稳定地去抑制
固有的突变株与诱导株产生β 固有的突变株与诱导株产生β - 内酰胺酶的对比
酶 的 水 平
诱导 固有突变株
野生型菌株
基线
+β -β
时间
筛选出有意义的细菌。对待与体表相通部位 的标本，排除常居菌和正常菌群的“背景噪 音”干扰，以便有效地进行下一步实验。对 于这一点，要求我们对致病菌、潜在病原菌、 正常菌群和条件致病菌以及正常菌群地分布 及临床价值要熟练掌握。没意义的细菌得出 的结果没有意义，会对临床产生误导作用。 浪费试验室的人力物力。有害而无利。
① 了解本地区、本医院的医院感染菌的分 布及耐药谱，以便对我们的每一份报告结果 作出充分综合评价； ② 对细菌室的报告结果不能象其他的报告 结果出了什么结果就报什么结果，而不加以 分析。要对每一份结果作综合评价——菌名 与药敏结果是否相符？药敏谱是否有矛盾之 处？等等
抗生素诱导的产酶
在产可诱导酶的菌种中 * 基因阻遏子的失活导致酶持续的产生 基因阻遏子的失活 失活导致酶持续的产生
临床常见细菌的鉴定程序和思路
包括药敏实验
没有好的标本就没有好的检验结果。 没有好的标本就没有好的检验结果。我们的工作都 是从接收到标本开始，那么保证标本质量为其首要。 所以对于标本的处理要严格按照标本处理手册来进 行。包括标本的质量审定（是否合格），接种合适 的培养基，选择适当的培养条件（如温度，气体环 境等等）。对于手册上要求作Gram染色的标本要 作染色，以对标本作出一个初步的评价。对于镜下 见有较多脓细胞的标本要尽量找出细菌，除了 Gram染色还可考虑吖啶橙、抗酸和Jimsa等染色。 对于这类细胞多的标本作Gram染色时最好用传统 的Gram染液 充分考虑标本的潜在病原菌，对照标本接种手册， 选择适合的培养基接种，选择适当的气体环境放入 孵箱内培养。
充分了解新版NCCLS 药敏试验执行标准， 将其贯彻于试验工作之中。 其中包含了抗生素药敏试验的纸片法和稀释 法执行标准。其中对细菌特殊耐药性作了明 确解释并对其耐药性的确认试验也做出了执 行标准。
特殊细菌耐药的特点
MRS的耐药特点：严格按照NCCLS的执行标准来 筛选和确证葡萄球菌是否为MRS。要能区分 MRSCoP和MRSCoN确证试验中的差别。了解 MRS的耐药机理是什么？它的耐药特点什么？对 其结果的评价；Rx ESBLs的耐药特点：严格按照NCCLS的执行标准 来筛选和确证肠杆菌科细菌是否为ESBLs。掌握 ESBLs的筛选和鉴定试验，了解其耐药机理，掌 握其耐药特性。对其结果作出临床评价；Rx：对 青霉素类、头胞类及氨曲南耐药，即使体外试验 为敏感 。
细菌的分析鉴定
观察培养基中生长的菌落特点： 菌落的大小，是否光滑，菌落边缘是否 整齐，菌落的颜色——如无色似水滴状、 白色、灰色、黄色、以及色泽的深浅， 是否透光及透光的强弱，菌落产生光泽， 等等；菌落产生的溶血环的情况——α溶 血、β溶血、水溶性溶血、脂溶性溶血和 其他的溶血特点；细菌产生的气味—— 如铜绿假单胞菌的“生姜”味，酵母菌 的酵母味，芳香黄杆菌的水果糖芳香味 等等；