微生物检验手册(中文)
微生物计数检查法USP61中英对照版
非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法61中英对照版<61> :非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法导言.以下所描述的这些检测将使得对在有氧的条件下生长的嗜温性细菌和真菌进行定量计数成为可能。
a . , , , .这些检测主要设计用于测定一种物质或制备品是否符合已确立的微生物质量标准。
当用于此类目的时，需遵照以下所给的说明，包括待取样品的数量，并且按照下面所述解释结果。
.这些方法不适用于以活菌作为活性成分的产品。
, , , .可以使用替代的微生物规程，包括自动化方法，只要已经证明它们与药典方法具同等作用。
通用规程12 . .在经过设计可避免外来微生物污染供试产品的条件下，进行此项测定。
用于避免污染的这些预防措施是必须做到，它们不会影响任何试图在此项检验中揭示的微生物。
, , , . , .如果供试产品具有抗菌活性，则此活性需在尽可能的范围内去除或中和。
如果将灭活剂用于这个目的，则必须证实它们的功效和对微生物不具毒性。
, .如果表面活性物质用于样品制备，则必须证实它们对微生物不具毒性以及与所使用的任何灭活剂的兼容性。
计数法, . () ; , , .按规定，使用膜过滤法或多个平板计数法中的一种。
液体稀释法（）通常对微生物计数而言是最不准确的方法；然而，对具备非常低生物载荷的特定产品类型，它可能是最合适的方法。
a . a . .方法的选择基于某些因素，例如产品的性质和微生物的要求限度。
所选的方法必须能够对充足的样本量进行检测，以判断与质量标准的符合性。
所选方法的适用性必须被建立。
1.表1. 供试微生物的制备和使用生长促进在产品存在的情况下计数方法的适用性微生物供试菌株的制备总好氧微生物计数总酵母菌和霉菌计数总好氧微生物计数总酵母菌和霉菌计数6538, 9518, 4.83, 13276金黄色葡萄球菌如： 6538, 9518, 4.83, 或 13276300-350 18-24大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-350 18-24 小时≤100 300-350≤3大豆酪蛋白消化物培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 300-350 ≤3 天≤100 300-350≤3大豆酪蛋白消化物培养基（最大几率数）大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 300-350 ≤3 天9027, 8626 82.118, 13275绿脓杆菌如 9027, 8626 82.118, 或 13275300-350 18-24大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-350 18-24 小时≤100 300-350≤3大豆酪蛋白消化物琼脂培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 300-350≤3 天≤100 300-350≤3大豆酪蛋白消化物琼脂培养基（最大几率数）大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 300-350≤3 天6633, 8054, 52.62, 3134枯草芽孢杆菌如 6633, 8054, 52.62, 或 3134300-350 18-24大豆酪蛋白消化物琼脂培养基或大豆酪蛋白消化物肉汤培养基300-350 18-24 小时≤100 300-350≤3大豆酪蛋白消化物琼脂培养基和大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 300-350≤3 天≤100 300-350≤3大豆酪蛋白消化物琼脂培养基（最大几率数）大豆酪蛋白消化物肉汤培养基≤100 300-350≤3 天10231, 3179, 48.72, 1594白色念珠菌如 10231, 3179, 48.72, 或 1594200-250 2-3（沙氏）葡萄糖琼脂培养基或（沙氏）葡萄糖肉汤培养基≤100 300-350≤5 大豆酪蛋白消化物琼脂培养基≤100 300-350≤5 天≤100 200-250≤5（沙氏）葡萄糖琼脂培养基≤100 200-250≤5 天≤100 300-350≤5 :大豆酪蛋白消化物琼脂培养基≤100 300-350≤5 天 (最大几率数)：不适用≤100 200-250≤5（沙氏）葡萄糖琼脂培养基≤100 200-250≤5 天16404, 149007, 1431.83, 9455黑曲霉如 16404, 149007, 1431.83, 或 9455200-250 5-7 ,（沙氏）葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基200-250 5-7天,或直到实现良好的产孢≤100 300-350≤5大豆酪蛋白消化物琼脂培养基≤100 300-350≤5 天≤100 200-250≤5（沙氏）葡萄糖琼脂培养基≤100 200-250≤5 天≤100 300-350≤5 :大豆酪蛋白消化物琼脂培养基≤100 300-350≤5 天(最大几率数)：不适用≤100 200-250≤5（沙氏）葡萄糖琼脂培养基≤100 200-250≤5 天生长促进试验和计数方法的适用性通用考虑因素.在供试产品存在的情况下，必须确立检测微生物的试验能力。
微生物实验技术手册
微生物实验技术手册引言微生物实验技术手册是为了指导从事微生物实验和研究的人员，提供标准的实验程序、技术、注意事项以及数据处理方法。
微生物实验技术是一项复杂的工作，需要掌握一定的基础理论和实验技能。
对于科研工作者来说，正确操作是保障实验结果准确和科研成果可靠性的前提。
培养基的制备培养基是微生物繁殖和生长必需的养分来源。
其制备需要注意以下要点：1.一定要按比例称取各种物质，并充分混合，避免出现不均匀的情况。
2.要注意防止细菌污染，经常消毒器具，操作台和手部，确保制备出无细菌污染的培养基。
3.注意控制pH值，合适的pH对于微生物的生长发育起到极其重要的作用。
无菌操作技术微生物实验必须进行无菌操作以防止细菌污染，下面介绍一些基本无菌操作技术：1.消毒工具与操作台面：使用75%的乙醇或70%的福尔马林涂抹器具和操作台面。
2.经验动作：操作者需在无菌条件下进行试验操作。
3.消毒皮肤：操作者也需要在进行实验前对双手和手腕消毒。
4.操作操作器具：使用无菌前冲洗，避免细菌污染。
微生物染色技术微生物染色技术是进行微生物形态和数量分析的必要手段。
下面以革兰氏染色法为例进行介绍：1.将菌液涂抹在玻片上，用火灼烧定着。
2.用碘酒将菌液浸泡5秒钟，清洗10秒钟，用酒精水洗涤10秒钟，用水冲洗。
3.用鲜了的碘酒染色1分钟。
4.用水洗涤。
5.用碱性颜料涂抹菌液，持续30秒钟。
6.用水冲洗，晾干，镜下观察。
微生物实验数据处理技巧微生物实验数据处理是微生物实验中不可缺少的一部分，下面介绍一些常用数据处理技巧：1.平均值：将一组数据求和并除以数据数量，得到平均值。
2.标准差：用来衡量数据在平均值附近的变化程度。
3.置信区间：通过统计学方法，对信赖区间进行规定，使得该区间包含真实值的概率达到一个预定水平。
结论微生物实验技术手册的编制需要严谨的实验态度和精准的实验技术。
严格按照实验要求进行实验，精心的数据处理，才能获得科研成果的成功和可靠性。
USP微生物限度检查 中文
USP微生物限度检查中文61）微生物限度检测（MICROBIAL LIMIT TESTS）此章提供方法来检测可能存在的好氧微生物其他制药过程中可能出现的微生物的数量，包括原材料和成品中的。
如果经过验证确认可以得到相同或更好的检测结论，也允许采用自动化的检测方法。
在样品检测过程中须进行无菌操作。
若无特别说明，则“培养（incubate）”一词指在30—35℃的培养箱内培养24至48小时；“生长（growth）”一词用于专门的判定，说明“存在和可能存在活的微生物”。
准备实验 (Preparatory Testing)本章涉及实验结果的有效性取决于：提供的被检测样品本身在实验条件下，被充分证明不会抑制可能存在的微生物的生长。
因此，在准备样品时，需要正规的实验操作和符合要求的实验条件，接种稀释样品到含有以下（微生物）培养物的培养基：金黄色（奥里斯）葡萄球菌（Staphylococcus aureus）,大肠埃希氏菌（Escherichia coli）, 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa), 和沙门氏菌（Salmonella）。
方法如下：将用肉汤培养基培养24小时后的（微生物）不小于10-3稀释的微生物培养物，加1 ml（微生物）培养液到磷酸(盐)缓冲液(pH 7.2)，液体大豆酪蛋白消化物培养基（Fluid Soybean-Casein Digest Medium），或者液体乳糖培养基（Fluid Lactose Medium）。
相应培养基培养失败则需要采取以下方法更改检测程序：（1）增加稀释液体积，检测样品加入量仍维持不变；或者（2）中和一定数量的干扰因子；或者（3）结合（1）、（2）得出适当条件，使接种物得以生长。
以下是一些物质的成分和浓度，该物质及浓度可用于加入培养基、阻止物质发挥抑菌作用：大豆卵磷脂（soy lecithin, 0.5%）或者聚山梨醇酯20（polysorbate 20, 4.0%）。
临床微生物检验采集手册
微生物标本采集第一章微生物样本采集及要求1.患者准备（采集前）1.1.采集标本前,采样人员根据检验申请单检验项目的要求，确认采样计划并进行适当的准备工作，包括核对医嘱、打印条形码、选择合适的标本容器、粘贴条形码及指导患者做好采样前的准备工作等。
1.2.样本采集依检验项目的申请，检验申请单提供的信息包括：●a) 患者姓名；●b) 患者性别；●c) 患者年龄或出生日期；●d) 患者唯一性标识，如病历号；●e) 就诊病区和病房；●f) 检验申请者姓名；●g) 检验申请者科室；●h) 标本类型；●i) 标本采集部位；●j) 检验项目；●k) 标本采集日期和时间；●l) 临床诊断和主要临床表现；●n) 患者和检验申请者的联系电话。
1.3.认真核对患者、标本容器和检验申请是否一致，严防出现差错。
1.4.住院患者1.4.1.申请单开具：分泌物、脓液、关节液、痰液等开“细菌涂片+培养”，尿液标本开“尿培养及菌落计数”，血培养开“无菌体液细菌培养”（血培养需要开一对，也就是两个医嘱），怀疑厌氧菌开“厌氧菌涂片+培养”。
1.4.2.检验人员接种标本后，当日报告涂片结果（尿液标本不涂片），以接收标本之日起3-5天报告培养结果，如有特殊情况需要延长检测时间，将与临床沟通。
1.4.3.如样本培养阳性，需要后续检测，则由检验人员开具“细菌鉴定+药敏”并扣除相应费用。
1.5.门诊患者1.5.1.申请单开具：分泌物、脓液、关节液、痰液等开“细菌涂片+培养”，尿液标本开“尿培养及菌落计数”，血培养开“无菌体液细菌培养”（血培养需要开一对，也就是两个医嘱），怀疑厌氧菌开“厌氧菌涂片+培养”。
1.5.2.门诊标本在送达医学检验中心时应留下患者或家属的常用联系方式，检验人员接种标本后，当日报告涂片结果（尿液标本不涂片），以接收标本之日起3-5天报告培养结果，如有特殊情况需要延长检测时间，将与临床沟通。
1.5.3.如样本培养阳性，需要后续检测，则由检验人员通知主治大夫后，联系患者前往医学检验中心开具“细菌鉴定+药敏”并扣除相应费用。
微生物鉴定与检测技术手册
微生物鉴定与检测技术手册随着全球化和社会发展，人们对食品、医疗、生态等方面的安全性和质量要求也越来越高。
而微生物是影响人类健康和生产的重要因素之一，因此，微生物检测和鉴定技术的准确性和可靠性显得尤为重要。
本手册旨在介绍微生物鉴定和检测技术的基本原理、样品采集和处理方法、常见微生物检测方法及应用等内容，帮助读者快速了解微生物检测相关知识并提高检测准确性。
一、微生物检测的基本原理微生物检测的基本原理是利用生长培养和分离方法，通过对微生物的形态、生理和生化特性进行鉴定和分类。
在生物学中，微生物不仅包括细菌，还包括真菌、病毒、寄生虫、藻类等生物。
这些微生物的特性差异很大，需要根据不同的特性选择合适的检测方法。
微生物检测的流程一般包括样品采集、处理、分离、鉴定、计数等环节。
其中，样品的采集和处理直接影响到后续的检测结果，因此非常重要。
二、样品采集和处理方法微生物检测的样品种类很多，包括食品、环境、医疗用品、农业产品等。
各种样品的采集和处理方法也有所不同。
以下是常见样品的采集和处理方法：1.食品样品食品样品的采集应该尽量避免污染，采集时应使用无菌器具和方法进行。
不同种类的食品需要使用不同的样品采集方法，例如：肉类、水产等，应当用器皿采集，而蔬菜水果等可以直接取表面样品。
通常情况下，可将样品剪碎后在无菌条件下制成悬浮液，然后进行稀释、分装、处理等环节。
2.环境样品环境样品的采集需要选择合适抽样器材和方法。
例如，对于空气样品，通常使用普通和可降落粒子采样器采集，对于水体，可以使用多孔吸附体进行采集。
环境样品的处理可以根据具体情况进行处理，例如：对于土壤样品，可使用盐水、生理盐水等溶液，在高速搅拌后进行悬浮液制备。
3.医疗用品样品医疗用品的采集需要根据具体情况选择不同的方法。
例如，对于手套、口罩等医疗用品，可使用生理盐水或无菌蒸馏水进行擦拭。
对于药液和生物制品等样品，可使用无菌试管采集，然后进行处理。
三、常见的微生物检测方法微生物检测方法很多，包括传统的培养技术、生物分子技术等。
微生物实验技术操作手册
微生物实验技术操作手册一、实验介绍微生物实验技术操作手册旨在为研究人员提供详细的实验步骤和操作指南，以确保实验的准确性和可重复性。
本手册涵盖了微生物实验的基本原理、实验材料和设备的准备、实验步骤以及结果分析等内容。
通过遵循本手册的操作指南，研究人员可以顺利进行微生物实验，并获得可靠的实验结果。
二、实验材料和设备准备1. 实验材料：- 微生物培养基：根据实验需要选择适当的培养基，如LB培养基、TSB培养基等。
- 微生物菌种：根据实验目的选择所需的微生物菌种。
- 试剂：如抗生素、染料等。
- 培养皿、试管、移液器等实验器材。
2. 实验设备：- 培养箱：用于控制培养温度。
- 离心机：用于离心培养物。
- 恒温振荡器：用于培养物的摇床培养。
- 显微镜：用于观察微生物的形态和结构。
三、实验步骤1. 准备工作：- 消毒操作台和实验器材：使用适当的消毒剂对操作台和实验器材进行消毒处理，以确保实验环境的无菌。
- 培养基制备：按照培养基配方准备培养基，并进行高压灭菌处理。
- 微生物菌种制备：选择适当的菌种进行预培养，以获得足够的菌量。
2. 培养操作：- 接种：将预培养的菌种接种到含有适当培养基的培养皿或试管中。
- 培养条件控制：根据菌种的生长要求，设置适当的培养温度、pH值和培养时间。
- 培养物观察：使用显微镜观察培养物的生长情况，并记录相关数据。
3. 实验操作：- 抗生素敏感性实验：将不同浓度的抗生素添加到含菌培养基中，观察菌落的生长情况，以确定菌株对抗生素的敏感性。
- 染色实验：使用适当的染料对微生物进行染色，观察染色后的微生物形态和结构。
四、结果分析根据实验操作所获得的结果，进行相应的数据分析和结果解读。
通过比较不同实验组的结果，可以得出结论并提出相应的讨论。
五、注意事项- 操作前需仔细阅读实验操作手册，并按照操作指南进行实验。
- 严格遵守实验室的安全操作规程，佩戴适当的个人防护装备。
- 实验过程中保持实验环境的无菌和洁净。
药品微生物学检验手册
药品微生物学检验手册
对于药品微生物学检验，应当严格按照以下指南进行：
一、抽样
1.使用清洁的，无明显异味的样品容器，建议使用无菌容器。
2.样品抽取程序应遵守衛生規定，应使用清洁的器械进行采样，避免物质污染。
3.抽取的样品应在适当的温度下迅速送检，尽量避免发霉变质。
二、检测方法的选择
1.根据不同的检测目的，采用不同的检测方法，例如有害微生物的检测一般采用传统
的培养裂解法，耐药性微生物的检测一般采用APTEST等测试系统。
2.根据不同种类的药品所含成分多少，可采用抗性指数评估或者分子生物学检测法，
检测药品中可能存在的耐药性型微生物或者毒力增强的菌株。
3.根据抽样结果、药品添加剂类型及添加剂含量等，可根据《药典》中规定的极限值
或安全限值，筛选有可能存在的有害微生物，而后进行产品质量检查，保证药品的质量安全。
三、确定检测指标
1.根据实际情况，确定包括常见有害微生物，尤其是抗药性菌在内的相应检测指标，
以便检查是否符合药典要求或产品规格。
2.根据药典要求或产品规格，确定需要检测的菌株特性，耐药性特性，毒力相关指标，以及检测方法所要求的指标等。
四、验证检测方法
1.根据检测需要的特性，对检测方法进行验证，检测效果要求明确，把控灵活，满足
正确性、精确性、特异性以及重复性等要求。
2.检测方法的验证要完整，保证检测数据的可信度。
采用不同的抗性菌种，耐药性菌株，有害微生物，测试不同检测系统所得结果，进行比较分析，对所选方法进行评价。
微生物检验手册(中文)
1、实验材料2、试剂氯化钠(Sigma)平板计数琼脂PCA(DIFCO)3次超纯水3、试剂配制方法（1）0.85%NaCl (250 ㎖)(2)Plate Count Agar （100 ㎖）Plate Count Agar(DIFCO) 2.35 g3次超纯水100 ㎖，121 ℃15分钟灭菌。
(3) 0.85% NaCl (100 ㎖)4、实验步骤所有微生物实验中，除均质在无菌室进行，其余的操作都要在超净工作台内。
（1）无菌操作取25g或25ml样品，加入225 ㎖灭菌生理盐水；均质2分钟。
（2）取1㎖样液加入到9 ㎖生理盐水试管中。
（3）依次做10倍梯度稀释。
（4）从合适的梯度中取1 ㎖加到无菌平板中（做2个平板），加入20 ㎖平板计数琼脂，混匀。
（5）冷凝后放到35±1℃培养箱中培养24~48h。
（6）菌落计数★菌落总数试验方法↓↓4．菌落计数(所有菌落定量实验都采取这种方法)韩国方法中要求每个平板中30－300内的计数参照GB/T 4789.2-2003 食品卫生微生物学检验菌落总数测定定性实验：1. 实验材料2. 试剂3. 试剂配制方法(1) 0.85% NaCl (250 ㎖)(2) Brilliant Green Lactose Broth (100㎖)(3) EMB Agar (DIFCO) (100㎖ ) NaCl Brilliant Green Lactose Broth (DIFCO) EMB Agar (DIFCO) 营养琼脂 (DIFCO) 3次超纯水革兰氏染色试剂条 (MERCK)(4) Nutrient Agar (DIFCO) (100㎖ )4. 实验步骤(1) 无菌操作取 25 g 样品，加入225ml 灭菌生理盐水,均质 2 分钟。
(2) 取 1ml 样液加到 10ml BGLB (2 管，带小导管) 中。
（3）把试管放到35±1℃ 中培养 24~48h ；取产酸产气的试管在 EMB 平板上划线。
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1、实验材料
2、试剂
氯化钠(Sigma)
平板计数琼脂PCA(DIFCO)
3次超纯水
3、试剂配制方法
（1）0.85%NaCl (250 ㎖)
(2)Plate Count Agar （100 ㎖）
Plate Count Agar(DIFCO) 2.35 g3次超纯水100 ㎖，121 ℃15分钟灭菌。
(3) 0.85% NaCl (100 ㎖)
4、实验步骤
所有微生物实验中，除均质在无菌室进行，其余的操作都要在超净工作台内。
（1）无菌操作取25g或25ml样品，加入225 ㎖灭菌生理盐水；均质2分钟。
（2）取1㎖样液加入到9 ㎖生理盐水试管中。
（3）依次做10倍梯度稀释。
（4）从合适的梯度中取1 ㎖加到无菌平板中（做2个平板），加入20 ㎖平板计数琼脂，混匀。
（5）冷凝后放到35±1℃培养箱中培养24~48h。
（6）菌落计数
★菌落总数试验方法
↓
↓
4．菌落计数(所有菌落定量实验都采取这种方法)
韩国方法中要求每个平板中30－300内的计数
参照GB/T 4789.2-2003 食品卫生微生物学检验菌落总数测定
定性实验：
1. 实验材料
2. 试剂
3. 试剂配制方法
(1) 0.85% NaCl (250 ㎖)
(2) Brilliant Green Lactose Broth (100㎖
)
(3) EMB Agar (DIFCO) (100㎖ ) NaCl Brilliant Green Lactose Broth (DIFCO) EMB Agar (DIFCO) 营养琼脂 (DIFCO) 3次超纯水
革兰氏染色试剂条 (MERCK)
(4) Nutrient Agar (DIFCO) (100㎖ )
4. 实验步骤
(1) 无菌操作取 25 g 样品，加入225ml 灭菌生理盐水,均质 2 分钟。
(2) 取 1ml 样液加到 10ml BGLB (2 管，带小导管) 中。
（3）把试管放到35±1℃ 中培养 24~48h ；取产酸产气的试管在 EMB 平板上划线。
（4）把EMB 平板放到 35±1 ℃培养箱中培养 24±2h 。
（5）挑取有金属光泽的菌落划线到营养琼脂上, 35±1 ℃培养 24h 。
（6）将菌落革兰氏染色并镜检；用API 20E 做生化鉴定。
大肠菌群定性实验：
↓
↓35±1 ℃, 24~48h
↓35±1
℃, 24±2 h
↓35±1 ℃, 24 h
定量实验
★3M 方法测大肠菌群总数
↓
(6) 分析方法
①试剂及培养基
②培养基配制方法
1) 磷酸缓冲液(800㎖配制)
2) Mannitol-Egg Yolk-Polymyxin agar (1L 配制)
3) Polymyxin B stock配制方法( 200㎖配制)
③实验法
-定性分析法
↓
↓30℃, 24 小时培养
↓
↓
- 定量分析法
↓
↓
↓30℃, 24 小时培养
↓
↓
↓。