细菌学检验基本技术
细菌学检验基本技术共56页
在公共卫生及预防医学领域所涉及的细菌学检验样 本种类繁多，包括来自食品、化妆品、涉水产品、 消毒及卫生用品、环境及物品（水、土壤、空气， 各种物品）、正常人体及临床等的样本。
许欣
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一、临床样本的采集与送检
（一）血及骨髓样本的采集 1. 采样时间：发热期、用药之前、 病情发展 2. 采样部位及频率：多部位、高频率 3. 样本采集的量：成人血量10ml，婴儿1ml～2ml，儿
养基或pH7.0的甘油PBS 3. 注意事项：无菌操作、可能厌氧培养
许欣
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一、临床样本的采集与送检
（四）痰及上呼吸道样本的采集 1. 采样时间：晨痰、鼻咽拭子 2. 采样方法：自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰
法、气管穿刺法等 ；咽拭子 3. 注意事项：先漱口、结核分枝杆菌和真菌可4℃保存
许欣
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二、不染色检查
细菌的活体观察，主要用于观察动力 悬滴法——凹玻片
压滴法——平玻片
许欣
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三、染色检查
常用碱性染料（美蓝、孔雀绿、碱性复红、结晶紫、 沙黄等）
单染色法，复染色法，特殊结构染色法（鞭毛、芽孢、 荚膜等），负染色法、荧光染色法，革兰染色法（结 晶紫、碘液、95%酒精、碱性复红），抗酸染色法 （分枝杆菌、石炭酸复红、美蓝）
许欣
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第二节 细菌的形态结构检查法
了解标本中有无细菌及其大致的数量。 验证培养物是否为纯种。 形态检查结果可做初步诊断。 不染色检查法和染色检查法。 借助显微镜对形态、大小、排列、结构的直接观察。
许欣
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一、显微镜检查
1、普通光学显微镜(light microscope)：分辨率0.2μm， 用于细菌染色标本的观察。
微生物学--细菌检验基本技术
• 常用的指示剂：酚红、中性红、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫、 甲基红等
一、培养基
（二）培养基分类
1．按成分分类
• 合成培养基：是人工合成，组分明确，都是无机盐和化学 纯物质组成的培养基 • 天然培养基：也称复合培养基。是指含有化学成分不完全 明了或各批物质的成分很难一致的天然物质所组成的培养基， 如蛋白胨、牛肉膏、肉浸液、鸡蛋、马铃薯等。细菌检验常 用
一、培养基
6．灭菌 • 高压蒸汽灭菌
• 无糖：103．4kPa
121．3℃维持
15~20min
• 有糖： 68．95kPa 115℃ 维持
15min
• 间歇蒸汽灭菌法：血清、牛乳、鸡蛋 • 血清凝固器灭菌
一、培养基
7．质量检验 • 无菌试验：将制好的培养基在35℃温箱培养过夜，判定是否 灭菌合格 • 效果检查：按不同的培养要求，接种相应菌种，观察细菌的 生长、菌落形态、色素、溶血及生化反应等特征，判断培养基 是否符合要求
（2）结果 抗酸性细菌和非抗酸性细菌
三、细菌染色标本的检查-革兰染色
三、细菌染色标本的检查
•未脱色细菌呈红色为抗酸性细菌 •脱色经复染呈蓝色为非抗酸性细菌
三、细菌染色标本的检查
3．其他染色方法
（1）鞭毛染色 （2）荚膜染色
第二节 细菌的培养与分离技术
重点提示
• 培养基的主要成分及作用 • 培养基的种类 • 培养基制备的基本程序 • 细菌接种与培养方法 • 细菌在培养基中的生长现象
2020/2/28
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常用诊断流程
• 表解法 区别比较复杂细菌，将各种细菌及其多 种
特性列成矩阵表格，使相互区别点十分明显，便于分析 比较
•
肠杆菌科初步分属
人卫版《细菌学检验》大纲
《细菌学检验》教学大纲（供卫生检验专业使用）课程性质、目的和任务细菌学检验是卫生检验专业重要的专业课程之一，是卫生检验课程体系的重要组成部分，也是卫生检验专业学生必修的考试课程。
通过学习，使学生掌握细菌学检验的基本技术和常见重要致病细菌及分子生物学技术。
本课程通过课堂讲授、讨论、实验实习、自学等方式进行教学。
要求学生掌握细菌的分离培养方法、血清学实验及分子生物学技术在细菌学检验中的应用；掌握常见重要致病细菌的生物学性状、检验方法和预防医学意义。
为学生今后从事疾病预防控制、卫生监督、科学研究等方面的工作奠定必要的基础。
一、课程基本要求本课程分为掌握、熟悉、了解三种层次要求；“掌握”的内容要求理解透彻，能在本学科和相关学科的学习工作中熟练、灵活运用其基本理论和基本技能；“熟悉”的内容要求能熟知其相关内容的概念及有关理论，并能适当应用；“了解”的内容要求对其中的概念和相关内容有所了解。
通过本课程的学习，使学生掌握细菌的分离培养方法、血清学实验及分子生物学技术在细菌学检验中的应用；掌握常见重要致病细菌的生物学性状、检验方法和预防医学意义。
考试内容中“掌握”的内容约70%，“熟悉、了解”的内容约25%，有5%左右的大纲外内容。
二、教材及学时分配本大纲的配套使用教材是卫生部规划教材《细菌学检验》（张朝武主编，北京：人民卫生出版社，2006年）。
课程基本内容及学时分配细菌学检验教学总时数为63学时，其中理论为27学时，实验为36学时。
细菌学检验共分十七章，大体分为基本理论、基本技能和各论两个部分。
第一部分从第一章到七章，主要内容为细菌学实验的基本要求、细菌学检验基本技术、细菌的分子生物学检测、细菌的分型及其检测技术、细菌的分类与命名、化学物质致突变性的微生物检测方法、消毒学试验技术；第二部分从八章到十七章，主要内容为革兰氏阳性球菌、革兰氏阴性球菌、肠杆菌科、弧菌属、革兰氏阳性杆菌、与医学有关的其他细菌、螺旋体属、立克次体、衣原体和支原体等。
微生物检验的基本操作技术
微生物检验的基本操作技术一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。
2、内容无菌操作技术主要包括两方面：1）创造无菌的培养环境。
包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。
包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。
3、无菌操作原则1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；2）在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。
严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等；3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处；6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。
二、无菌操作的环境要求1、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；（2）无菌室的消毒和防污染•每日（使用前）紫外线照射（0.5~1小时）；•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒；•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时），特殊情况下可增加熏蒸频次。
（3）无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品；②无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响；③处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
细菌检验基本技术
组成和作用
---营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、 鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类
---水 ---凝固剂：琼脂、明胶 ---抑制剂 ---指示剂
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培养基的种类（按用途分类）
基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板。 营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板。 鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克
液体培养基接种法 半固体穿刺接种法 :用于观察细菌动力 斜面接种法 倾注培养法:用于细菌计数 涂布法
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
其他接种方法
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细菌培养法
一般培养（需氧培养）
---培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ---培养时间：18～24h
二氧化碳培养法：二氧化碳培养箱、烛缸法、化学法 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养
2017-10-11
细菌内毒素的检测
目的： 主要用于诊断病人是否发生革兰阴性细菌感染。 用于检测注射用液和生物制品有无内毒素污染。
检测方法： 家兔发热法 鲎试验
细菌外毒素的测定
体内毒力试验：细菌外毒素对机体的毒性作用，可被
相应抗毒素中和，若先给动物注射抗毒素，然后再注射外 毒素，则动物不产生中毒症状。
有动力 现象
无动力 现象
细菌的生物化学鉴定技术
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细菌的代谢产物检测与鉴定
碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验 酶类试验 抑菌试验
碳水化合物的代谢试验
糖类发酵试验 氧化－发酵试验 β－半乳糖苷酶试验（ONPG） 七叶苷水解试验 甲基红试验 VP试验
第一章 细菌检验基本技术
第一章细菌检验基本技术一、名词解释1.培养基2.Gram stain二、选择题【A1型题】1．做细菌培养时，采集标本的最佳时间是A、应用抗菌药物之前采集标本B、应用抗菌药物之后采集标本C、一边应用抗菌药物一边采集标本D、采集标本与是否应用抗菌药物没有关系E、应用抗菌药物一天后采集标本2．采集窦道标本进行细菌学检查，应选择A、坏死组织B、窦道底部取活组织C、窦道口取标本D、窦道流出的液体E、窦道中央的脓液3．盛装细菌学检查标本的容器A、用75%酒精浸泡24小时后直接应用B、用碘酒浸泡12小时后直接应用C、高压灭菌，煮沸或干热灭菌D、用浓H2SO4处理后，直接应用E、用水洗后直接应用4．尿液做厌氧菌培养时A、取消毒中段尿B、无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取C、自然导尿D、放入无菌试管送检E、盛装尿液的容器不必将标本与空气隔绝5．怀疑肠热病患者，应如何采集标本A、发病的第一周采集血液，第二周采集尿液，第三周采集粪便B、发病的第一周采集尿液，第二周采集血液，第三周采集粪便C、发病的第一周采集尿液，第二周采集粪便，第三周采集血液D、发病的第一周采集血液，第二周采集粪便，第三周采集尿液E、发病的第一周采集粪便，第二周采集血液，第三周采集粪便6.标本不需要保温送检的病原体是A、脑膜炎柰瑟菌B、淋病C、流感嗜血杆菌D、阿米巴滋养体E、大肠埃希菌7．采用运输拭子采集标本做细菌培养可延长保存时间，但一般不超过多长时间A、1天B、2天C、3天D、4天E、5天8．细菌不用染色直接镜检主要用于检查A、细菌的动力及运动状况B、细菌的排列．C、细菌的形态D、细菌的夹膜E、细菌的鞭毛9．常用的碱性染料是A、伊红B、刚果红C、结晶紫D、瑞氏染料E、姬姆萨染料10．常用的酸性染料是A、结晶紫B、美蓝C、瑞氏染料D、姬姆萨染料E、伊红11．细菌经革兰染色，结果是A、革兰阳性菌为红色，革兰阴性菌为紫色B、革兰阳性菌为紫色，革兰阴性菌为红色C、革兰阳性菌为紫色，革兰阴性菌为兰色D、革兰阳性菌为兰色，革兰阴性菌为红色E、革兰阳性菌为兰色，革兰阴性菌为紫色12．下列不是抗酸性细菌的是A、金黄色葡萄球菌B、人结核分枝杆菌C、牛结核分枝杆菌D、非结核分枝杆菌E、异染颗粒染色13．敏感性最强的染色方法是A、革兰染色B、抗酸染色C、鞭毛染色D、荧光染色E、异染颗粒染色14．为进一步观察白喉棒状杆菌的形态，应做下列哪种染色A、革兰染色B、抗酸染色C、鞭毛染色D、荧光染色E、异染颗粒染色15．为观察细菌的运动情况，常用下列哪种方法A、悬滴法B、革兰染色法C、抗酸染色法D、鞭毛染色法E、墨汁染色法16.下列不是细菌生长所需营养物质的是A、蛋白质B、肉浸液C、牛肉膏D、琼脂E、血液17．在制备培养基时，为有利于检出病原菌而抑制非病原菌，常加入一定量的抑制剂，下列属于抑制剂的是A、维生素B、氨基酸C、胆盐D、嘌呤E、嘧啶18．血琼脂平板培养基属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基19．SS琼脂平板培养基属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基20．克氏双糖铁琼脂（KIA）属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基21．糖发酵管属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基22．巧克力琼脂平板属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基23．疱肉培养基属于A、基础培养基B、营养培养基C、鉴别培养基D、选择培养基E、特殊培养基24．可用碱性琼脂或TCBC琼脂培养基分离的细菌是A、霍乱弧菌B、沙门菌C、志贺菌D、大肠埃希菌E、铜绿假单胞菌25．氧化-发酵试验（O/F试验）主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，其原因是A、肠杆菌科细菌与非发酵菌均为发酵型B、肠杆菌科细菌与非发酵菌均为氧化型C、肠杆菌科细菌为发酵型，非发酵菌为氧化型或产碱型D、肠杆菌科细菌为氧化型，非发酵菌为发酵型E、肠杆菌科细菌与非发酵菌均为产碱型26．七叶苷水解试验主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别，该试验阳性的细菌是A、肺炎链球菌B、无乳链球菌C、化脓链球菌D、肠球菌E、草绿色链球菌27．硫化氢试验主要用于肠杆菌科细菌属及种的鉴别，不产生硫化氢的细菌是A、沙门菌属B、肠杆菌属C、枸橼酸杆菌属D、变形杆菌属E、亚利桑那菌属28．氧化酶试验阴性的细菌是A、奈瑟菌属B、莫拉菌属C、葡萄球菌属D、铜绿假单胞菌E、弧菌29．过氧化氢酶试验（触酶试验）主要用于革兰阳性球菌的初步分群，下列正确的是A、葡萄球菌阴性，链球菌属阳性B、微球菌阴性，链球菌属阳性C、葡萄球菌与链球菌均阴性D、葡萄球菌阳性，链球菌阴性E、葡萄球菌与链球菌均阴性30．葡萄球菌可产生两种凝固酶，一种是结合凝固酶，另一种是分泌至菌体外的游离凝固酶，下列说法正确的是A、结合凝固酶可用玻片法检出，游离凝固酶可用试管法检出B、结合凝固酶可用试管法检出，游离凝固酶可用玻片法检出C、结合凝固酶和游离凝固酶均可用玻片法检出D、结合凝固酶和游离凝固酶均可用试管法检出E、结合凝固酶和游离凝固酶不能用玻片法和试管法检出31．下列CAMP试验阳性的细菌是A、A群链球菌B、B群链球菌C、C群链球菌D、D群链球菌E、F群链球菌32．下列对杆菌肽敏感的细菌是A、A群链球菌B、B群链球菌C、C群链球菌D、D群链球菌E、F群链球菌33.下列对optochin纸片敏感的细菌是A、A群链球菌B、B群链球菌C、肺炎链球菌D、草绿色链球菌E、肠球菌34．对沙门菌属及志贺菌属进行血清分型时，一般采用的凝集反应试验是A、玻片法凝集试验B、反向间接血凝试验C、胶乳凝集试验D、协同凝集试验E、试管法凝集试验35．用分子生物学方法检测耐β-内酰胺抗生素的TEM型β-内酰胺酶基因（bla-TEM-1）时，常用的方法是A、Southern印迹B、Northern印迹C、斑点杂交D、PCRE、生物芯片技术36．下列可产生内毒素的病原体是A、革兰阳性细菌B、真菌C、抗酸性细菌D、病毒E、革兰阴性细菌37．有关细菌培养基的描述，不正确的是A、按物理状态可分为液体、固体和半固体B、血琼脂平板属于营养培养基C、SS培养基属于鉴别培养基D、疱肉培养基属于厌氧培养基E、蛋白胨水为常用的基础培养基38．细菌检查最快速的检测方法是A、电镜检查B、动物试验C、分离培养D、直接涂片镜检E、血清学试验39．用鲎试验测定的物质是A、类毒素B、肠毒素C、神经毒素D、外毒素E、内毒素40．细菌染色法中，最常用最重要的鉴别染色法是A、革兰染色B、抗酸染色C、鞭毛染色D、荚膜染色E、芽胞染色41．为鉴定肠杆菌科细菌进行IMViC试验，不属于IMViC试验项目的是A、VP试验B、甲基红试验C、硝还试验D、枸橼酸盐利用试验E、吲哚试验42．芽胞、鞭毛、荚膜及异染颗粒等的染色称为A、美兰染色B、革兰氏染色C、抗酸染色D、特殊染色E、复红染色43．革兰染色阴性的细菌颜色是A、蓝色B、紫色C、红色D、黄色E、白色44．适于用麦康凯（MacConKey）琼脂培养基培养的细菌是A、肠道菌B、分离培养鼠疫杆菌C、白喉棒状杆菌D、培养布鲁氏菌E、百日咳杆菌45．常用痰涂片抗酸染色光镜检查进行初步诊断的细菌是A、军团菌B、支原体C、流感嗜血杆菌D、肺炎链球菌E、分枝杆菌46．患者6岁，春节后突然发热、剧烈头痛、喷射状呕吐、颈项强直。
检验科细菌学常见检测与分析方法
检验科细菌学常见检测与分析方法细菌学是生物学的一个重要分支，研究微生物种类、数量、构成和变化规律等内容。
在检验科中，细菌学的检测与分析方法是非常重要的，可以帮助医生判断疾病的种类和病情的严重程度，为患者提供准确的诊断和治疗方案。
下面将介绍细菌学常见的检测与分析方法。
一、细菌培养法细菌培养法是一种将患者的样本（如血液、尿液、脑脊液等）接种于含有营养物质的培养基上，利用培养基提供的适宜环境，使细菌在体外生长繁殖的方法。
通过观察培养基上的菌落形态、颜色、大小等特征，可以初步确定细菌的种类。
此外，还可以对细菌进行药敏试验，了解其对不同抗生素的敏感性，为临床治疗提供依据。
二、酶标记法酶标记法利用酶作为标记物，通过酶与其底物发生反应，产生显色或荧光信号来检测细菌的存在和活性。
常见的酶标记法包括酶联免疫吸附测定（ELISA）和酶联免疫斑点测定（EIA）。
这些方法操作简便，敏感度高，广泛应用于细菌学的检测和分析中。
三、聚合酶链式反应（PCR）PCR是一种体外合成DNA的技术，能够快速、准确地检测细菌的遗传物质。
通过PCR扩增细菌DNA片段，可以在短时间内对微生物进行快速鉴定，尤其适用于检测数量极少的致病菌。
PCR技术具有高度特异性和敏感性，已成为现代细菌学研究和临床诊断的重要手段。
四、质谱分析质谱分析是一种通过测定样品中各种分子离子的质量和相对丰度，来确定样品组分和结构的方法。
在细菌学中，质谱分析可以用于细菌的鉴定和分类，以及对细菌代谢产物的检测分析。
质谱分析技术已广泛应用于微生物学、生物医学等领域，为细菌学的研究提供了强大的工具支持。
五、荧光显微镜观察荧光显微镜是一种通过荧光染料标记目标物质，在荧光显微镜下观察的技术。
在细菌学中，荧光染色可以帮助区分细菌的不同种类，观察其形态、结构和分布情况。
通过荧光显微镜观察，可以直观地了解细菌的特征，为细菌学的研究和诊断提供重要信息。
综上所述，细菌学常见的检测与分析方法包括细菌培养法、酶标记法、PCR技术、质谱分析和荧光显微镜观察等。
细菌的一般检验方法
细菌的一般检验方法
细菌是一类微小的生物体，它们存在于自然界的各个角落，有
些对人类健康有益，有些则可能引发疾病。
因此，对细菌进行检验
是非常重要的。
下面将介绍一般的细菌检验方法。
首先，最常见的细菌检验方法之一是培养法。
培养法是通过将
样本置于适当的培养基上，利用培养基中的营养物质和条件，促使
细菌在培养皿中生长和繁殖。
在适当的环境条件下，细菌会形成典
型的菌落，通过观察菌落的形态、大小、颜色等特征，可以初步判
断细菌的种类。
其次，鉴定细菌的生化试验也是一种常用的方法。
生化试验是
通过检测细菌在特定生化反应条件下的代谢产物，来判断细菌的特性。
比如，利用氧化酶试验来判断细菌是否具有氧化酶酶活性，利
用大肠杆菌培养基来区分大肠杆菌等。
除此之外，PCR法也是一种常用的细菌检验方法。
PCR法是一种
快速、高效的分子生物学技术，通过扩增细菌DNA片段，再通过电
泳等手段来检测细菌的存在。
PCR法的优点是操作简便、灵敏度高，可以快速准确地检测出细菌。
最后，抗生素敏感性试验也是细菌检验的重要环节。
抗生素敏感性试验是通过将不同抗生素涂布在培养皿上，观察细菌对不同抗生素的敏感性，从而选择出对患者病情最有利的治疗方案。
总的来说，细菌的一般检验方法包括培养法、生化试验、PCR 法和抗生素敏感性试验。
这些方法各有优势，可以相互补充，提高细菌检验的准确性和可靠性。
在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的方法，以确保检验结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的细菌检验方法对您有所帮助。
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• 无菌用具、包装完好、混合、震摇、冷冻、冷藏
• （三）采样的数量
• 根据食品种类的不同，采样的数量也应不同
• （四）注意事项
• 3h内送实验室，无菌操作
许欣
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三、化妆品细菌学检验样本
• （一）采样数量
• 每批两个大包装抽取4个包装，10g或10ml
• （二）样本的处理
• 1. 液体样品：10倍稀释，油性物用液体石蜡、土温-80
• 按照采样方式的不同可分为两类(Ⅰ和Ⅱ类)，Ⅰ类是将 微生物直接采到固体培养基上(如Andersen采样器)，Ⅱ 类是把微生物先采到液体或其它介质上，再转种到培养 基或细胞上显示(如Porton采样器)。
许欣
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六、空气样本
• 按照流量的有效数字分，3位数以上为大流量(≥500 L /min)，2~3位数为中流量(499L/min～11 L/min)， 1位数为小流量(≤10L/min)。
• （一）水样采集
• 许多水体随时间和空间会发生很大变化，要采集具有代 表性的样品，必须定出合理的采样规划。
• （二）采样点的选择
• 注意样品的代表性，河水、湖水、地下水、自来水
• （三）采样器具
• 采样瓶、自动采样器、容器可加硫代硫酸钠
• （四）样品送检及注意事项
• 4h内检验、可冷藏
许欣
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五、消毒及卫生用品
• 按照采样器所用介质性质又可分为固体及液体采样器 。
• 按采样器的工作原理可分为六种：撞击式、沉降式、
过滤式、静电吸附式、旋风式和离心撞击式采样器。
许欣
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六、空气样本
• （二）空气中细菌等微生物采样的介质
• 样介质(包括培养基)对细菌等微生物具有支撑、黏 附、保护和生长作用。常用有凡士林、聚硅酮，氧化 烯二十二烷酮(OED)和SGB(糖、甘油、牛血清白蛋白 )
• 脑脊液、胆汁、胸水、腹水、心包液、关节液和鞘膜 液等：穿刺
• 生殖道：棉拭子
• 组织样本：内镜
• 炎症或组织坏死部位：手术
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二、食品卫生细菌学检验样本
• （一）样品采集原则
• 注意代表性，防止样品受污染、变质和细菌生长
• 大样(一整批 )、中样(混合200g )和小样(检样25g)
• （二）样品采集方法
许欣
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一、显微镜检查
• 1、普通光学显微镜(light microscope)：分辨率0.2μm， 用于细菌染色标本的观察。
• 2、暗视野显微镜(dark-field microscope)：具有暗视野聚 光器，用于观察不染色标本活菌的形态、运动方式。
• 3、相差显微镜(phase contrast microscope)：具有环状光 栅聚光器和相差物镜，既可观察活体细胞的外形和运动 方式，又能观察其内部细微结构及这些结构的数量。
• （二）尿液样本的采集
• 1. 采样时间：晨尿、用药前
• 2. 采样方法：10ml，中段尿、肾盂尿、导尿
• 3. 注意事项：无菌操作，用药前
• （三）粪便样本的采集
• 1. 采样时间：急性期、新鲜粪便
• 2. 采样方法：自然排便、直肠拭子、Cary-Blair运送培 养基或pH7.0的甘油PBS
• 3. 注意事项：无菌操作、可能厌许氧欣 培养
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一、临床样本的采集与送检
• （四）痰及上呼吸道样本的采集
• 1. 采样时间：晨痰、鼻咽拭子
• 2. 采样方法：自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采 痰法、气管穿刺法等 ；咽拭子
• 3. 注意事项：先漱口、结核分枝杆菌和真菌可4℃保
存
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一、临床样本的采集与送检
• （五）其它临床样本
• 化脓和创伤样本：棉拭子
• （一）医疗卫生机构消毒及卫生用品
• 物表 ：5cm×5cm灭菌规格板，100cm2 区域
• 空气：高度150cm、距墙100cm；面积≤30m2，设 一条对角线上内、中、外3点；面积 ＞ 30m2，设4 角及中央5点，暴皿5min；或用采样器
• 手/皮肤粘膜：含中和剂棉拭子，5cm×5cm规格板
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二、不染色检查
• 细菌的活体观察，主要用于观察动力
• 悬滴法——凹玻片
• 压滴法——平玻片
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三、染色检查
• 常用碱性染料（美蓝、孔雀绿、碱性复红、结晶紫 、沙黄等）
• 单染色法，复染色法，特殊结构染色法（鞭毛、芽 孢、荚膜等），负染色法、荧光染色法，革兰染色 法（结晶紫、碘液、95%酒精、碱性复红），抗酸 染色法（分枝杆菌、石炭酸复红、美蓝）
• （三）空气中细菌等微生物采样方法及送检
• 1. 平板沉降法：参见医院空气采样规定。
• 2. 空气采样器采样：常用Andersen采样器
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第二节 细菌的形态结构检查法
• 了解标本中有无细菌及其大致的数量。 • 验证培养物是否为纯种。 • 形态检查结果可做初步诊断。 • 不染色检查法和染色检查法。 • 借助显微镜对形态、大小、排列、结构的直接观察。
• 医疗用品：破坏、棉拭子
• 消毒剂：1ml加至9ml中和剂中
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五、消毒及卫生用品
• （二）一次性使用的卫生用品 • 同一批号3个运输包装中至少随机抽取12个最小包
装量；1/4用于检测、1/4用于留样、2/4就地封存 准备复测。
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六、空气样本
• 平板沉降法和采样器采集法
• （一）空气微生物采样器分类
• 2. 膏霜乳剂样品：亲水性-玻璃珠，疏水性-先行乳化
• 3. 固体样品的处理：均质后取上清液
• （三）样品送检原则及注意事项
• 1. 维持样品污染原状（出厂污染状态）
• 2. 去除残留防腐剂及抑菌剂（吐温-80和卵磷脂 ）
• 3. 注意事项（室温存放，多项目时先做微生物）
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四、生活饮用水细菌学检验样本
• 2. 采样部位及频率：多部位、高频率
• 3. 样本采集的量：成人血量10ml，婴儿1ml～2ml， 儿童3ml～5ml；当怀疑为真菌感染时，应采集双份 量，分别作双相培养(37℃/28℃)。骨髓1 ml～2 ml 。
• 4. 样本的送检：尽快，室温
• 5. 注意事项：同时需氧和厌氧培养
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一、临床样本的采集与送检
细菌学检验
细菌学检验基本技术
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第一节 样本的采集与送检
• 在公共卫生及预防医学领域所涉及的细菌学检验 样本种类繁多，包括来自食品、化妆品、涉水产 品、消毒及卫生用品、环境及物品（水、土壤、 空气，各种物品）、正常人体及临床等的样本。
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一、临床样本的采集与送检
（一）血及骨髓样本的采集
• 1. 采样时间：发热期、用药之前、 病情发展