第十九章临床常见标本的细菌学检验
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临床标本的细菌学检验剖析
• 4、血培养套数 • 疑似菌血症患者应至少采集2套血培养，最好为3套，每套 血培养应包括1个需氧培养瓶和1个厌氧培养瓶。一个静脉 穿刺点只能采集一套血培养，采集2套血培养应选择第2个 静脉穿刺点。婴幼儿患者，推荐在不同部位同时采集2套 。对感染性心内膜炎和真菌血症患者则应多次采集。有研 究表明：一套血培养的阳性率为65%，两套血培养的阳性 率为80%，三套血培养的阳性率为96%。
第二节 脑脊液标本 （一）标本采集 由临床医师以无菌操作作腰椎穿刺，抽取脑脊液2~3ml，盛 于无菌容器中送检。脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶， 迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易死亡。 因此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检， 不宜将其置于冰箱保存，否则影响检出率。
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第五节 泌尿、生殖道标本 一、 尿液标本 （一） 尿培养的临床指征 以下任何一种情况时建议采集尿标本，进行细菌培养。 ①尿痛、尿急、尿频等典型的尿路感染症状。 ②出现血尿和脓尿。 ③膀胱排空功能受损。 ④泌尿系统疾病手术前。 ⑤留置导尿管时间太长，患者出现发热。 ⑥尿常规中白细胞高或（或）亚硝酸盐阳性。
• 2、采血部位 以无菌操作在患者肘静脉采血。儿童和 婴幼儿其采血的部位多为颈部和腹股沟，这两个部位 皮肤皱褶多，易造成皮肤寄生菌污染，因此必须严格 消毒。消毒过程同成人，但氯己定（洗必泰）不能用 于2个月以下婴儿。成人不建议采集动脉血，不宜从 静脉导管或静脉留置口取血，因其常伴有高污染率。 如果必须从留置导管内采血，必须同时从外周静脉采 集另外一个血培养标本，有助于对比和结果解释。静 脉导管采血时，不要弃去初段血，不要用抗凝剂冲洗 。
• 第六节 粪便标本 • （一） 标本采集 • 1、自然排便 采集自然排便后，挑取其脓血、 粘液部分2~3g，液体粪便取絮状物2~3ml，盛于 灭菌容器内或置于保存液（运送培养基）、增 菌培养基中送检。 • 2、直肠试子 对排便困难患者及婴儿，可用直 肠试子采取，即以无菌棉拭用保存液或生理盐 水湿润后，插入肛门内4~5cm（幼儿2~3cm）轻 轻转动取出，插入卡布运送培养基内或无菌试 管内送检。
临床标本的细菌学检验
临床标本的细菌学检验临床标本的细菌学检验，从各种标本中查找病原菌及其对抗生素的敏感性，在明确诊断、指导用药、预防和流行病学调查等方面具有重要意义。
对各种标本，应根据实际要求和标本特点选择适当的检验步骤及方法，准确、快速地检测病原菌，分析检验结果并报告，同时应注意低耗和安全防护。
分离细菌的目的是查找与疾病相关的病原体及其对抗生素的敏感性，对临床诊断、治疗、预后和流行病学调查很有价值。
1临床标本的采集与送检临床标本的质量对于细菌学检验的结果至关重要，严格按操作规程的要求进行标本采集、运送、保存和处理，才能保证检验结果准确、可靠。
1.1临床标本的采集1.1.1细菌学检验申请单的检查与登记：应仔细检查检验申请单上的内容，如标本类型、来源、送检目的、患者姓名、性别、年龄、临床诊断(如未明确，应注明主要症状)及是否已用抗生素等，并及时登记。
1.1.2标本盛放容器：采集的标本，尤其是采自无正常菌群寄居部位的标本如血液、脑脊液、穿刺液等，必须盛放于无菌容器内[1]。
容器灭菌应采用干热、湿热等物理方法灭菌。
容器上应贴上标签，注明待检患者姓名、床号等信息。
1.1.3无菌操作：在采集血液、脑脊液、穿刺液、骨髓时，应严格进行无菌操作，避免杂菌污染标本。
采集粪便、痰液、咽拭子、肛拭子等标本，虽无需严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌污染。
1.1.4采集时间和部位：选择合适的采集时间是很重要的，一般情况下，标本应尽量在疾病早期或在症状、体征明显时，在抗生素治疗之前采集，一些特殊检验的标本应按规定的时间采集。
根据感染的具体情况，选择适当的部位采集标本。
1.1.5安全防护：采集的标本可能含有病原菌，因而采集、运送、保存和处理过程中必须注意安全，防止标本中的病原菌溢出导致污染甚至传播；同时还需防止自身感染。
1.2标本的送检与保存采集标本后，在盛装标本的容器上应贴好标签，并在标签上写明相关信息，立即将标本送至检验室。
标本收集时间应加以准确记录，使检验人员接种时能判断标本是否延误。
临床标本的细菌学检查-精品文档
法尿 和液 操标 作本 流细 程菌
检 验 方
Uricult 操作步骤
Uricult 菌落比密图
临床标本的细菌学检查
第一节 血液及骨髓标本
一 血液标本
血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血 症的基本方法。
如从患者血液中检出细菌，一般应视为病 原菌。
常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球 菌、链球菌（A、B群、肺炎链球菌等）、 肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈 瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等。
(2)结核分枝杆菌涂片检查 (3)新生隐球菌涂片检查 2. 分离培养 3. 报告方式 培养48小时，仍无菌生长者报告“培养 2天无细菌生长”。查见细菌报告细菌，报告菌名和 药敏结果。
第三节 呼吸系统标本
下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰 带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球 菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病 菌，提示有上呼吸道感染。
脑脊液无论涂片或培养必须于 采集后立即送检不宜将其置于 冰箱保存，否则影响检出率。
法脑 和脊 操液 作标 流本 程细 图菌
学 检 验 方
（二）检验方法和操作流程
1. 涂片检查 (1) 一般细菌涂片检查： 例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能是脑膜
炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌；长丝状等多形 态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。
验呼 方吸 法系 和统 操标 作本 流细 程菌
学 检
（二）检验方法和操作流程
1. 肉眼观察
2. 涂片检查 其一依据100×镜下观察白细胞和
上皮细胞数目多少来评定(如表)；其二是初步判 定是否有病原存在。
痰标本镜下分类
分级 A B C
白细胞（个） >25 >25 <10
临床标本的细菌学检验
1.自然排便法 挑取黏液脓血或夹杂假膜部分的粪便 2.直肠拭子法
直肠拭子标本先增菌2-6h后转种。 粪便标本直接转种SS、中国蓝等选择培养基。 培养基选用原则上是一强一弱搭配。
（二）检验方法和操作流程
1.涂片检查 粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辩
是否为病原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。 2.培养 判断粪便培养出的细菌是否为致病菌，看其是否分解乳糖：
流感嗜血杆菌 儿童
三、真菌
新型隐球菌
白色念珠菌
18
（一）标本的采集
•由临床医师以无菌操作腰椎穿刺(图5一3)，抽取脑脊液3一5ml,盛
于无菌容器中立即送检，一般不能超过1h。
•脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶素、迅速自溶;肺炎链球菌及流感
嗜血杆菌也易死亡。因此脑脊液无论涂片或培养、必须于采集后立 即送检或床旁接种，不宜将其置于冰箱保存、否则影响检出率。
• 脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的诊断有
重要价值。
• 正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示有细菌
性（急性化脓性、结核性等）脑膜炎。
17
标本中常见的病原菌
一、革兰阳性菌
金葡菌
A群（化脓性）链球菌
B群（无乳）链球菌 新生儿
肺炎链球菌
成人
结核分枝杆菌
产单核细胞李斯特菌
二、革兰阴性菌
脑膜炎奈瑟菌 成人
（2）革兰阴性菌 卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌 流感嗜血杆菌、肠杆菌科细菌 铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌
（2）其他病原菌 放线菌、奴卡菌、真菌、肺炎支原体
25
（一）痰标本的采集
标本采集方法 (1) 自然咳痰法 (2) 支气管镜采集法 (3) 气管穿刺法 (4) 结核分枝杆菌标本收集法：收集24h痰液 以提高阳性检出率。
直肠拭子标本先增菌2-6h后转种。 粪便标本直接转种SS、中国蓝等选择培养基。 培养基选用原则上是一强一弱搭配。
（二）检验方法和操作流程
1.涂片检查 粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辩
是否为病原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。 2.培养 判断粪便培养出的细菌是否为致病菌，看其是否分解乳糖：
流感嗜血杆菌 儿童
三、真菌
新型隐球菌
白色念珠菌
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（一）标本的采集
•由临床医师以无菌操作腰椎穿刺(图5一3)，抽取脑脊液3一5ml,盛
于无菌容器中立即送检，一般不能超过1h。
•脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶素、迅速自溶;肺炎链球菌及流感
嗜血杆菌也易死亡。因此脑脊液无论涂片或培养、必须于采集后立 即送检或床旁接种，不宜将其置于冰箱保存、否则影响检出率。
• 脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的诊断有
重要价值。
• 正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示有细菌
性（急性化脓性、结核性等）脑膜炎。
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标本中常见的病原菌
一、革兰阳性菌
金葡菌
A群（化脓性）链球菌
B群（无乳）链球菌 新生儿
肺炎链球菌
成人
结核分枝杆菌
产单核细胞李斯特菌
二、革兰阴性菌
脑膜炎奈瑟菌 成人
（2）革兰阴性菌 卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌 流感嗜血杆菌、肠杆菌科细菌 铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌
（2）其他病原菌 放线菌、奴卡菌、真菌、肺炎支原体
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（一）痰标本的采集
标本采集方法 (1) 自然咳痰法 (2) 支气管镜采集法 (3) 气管穿刺法 (4) 结核分枝杆菌标本收集法：收集24h痰液 以提高阳性检出率。
临床标本的细菌检验
痰标本临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌或仅有少量细菌侵入。
在呼吸道标本细菌学检验中，上呼吸道标本（咽拭子）由于有正常菌群的存在，不易判断出何为与疾病有关的细菌，进行普通培养无特别意义《插入表上呼吸道存在的正常菌群》。
下呼吸道感染是最常见的呼吸道感染症，临床常取痰液标本进行细菌学检验，以明确感染病原及其药敏结果，有助于疾病治疗、流行病学调查和医院感染的监测。
痰标本须经上呼吸道排出，常受该处正常菌群的污染，因此，判断下呼吸道分泌物中是否有病原菌存在，须对上呼吸道的正常菌群有所了解。
上呼吸道的正常菌群有α、γ链球菌、微球菌、拟杆菌、梭杆菌、厌氧球菌、表皮葡萄球菌、奈瑟菌、嗜血杆菌、棒状杆菌。
标本的验收遇有不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的具体理由。
拒收标准：a.肉眼观察痰标本呈水样或唾液样。
b.标本涂片白细胞数＜10/低倍镜和鳞状上皮细胞数＞25/低倍镜，表示该标本已污染正常菌群，建议重送标本。
c.容器错误标本容器必须符合规定，溢漏、无盖者拒收。
分离培养1．痰标本培养前处理（均质化）2．分离培养（1）一般细菌培养应同时划区接种（痰半定量原则）痰半定量方法：用接种坏将痰液在血平板和巧克力平板上作三区划线接种标本，进行培养。
痰半定量培养的临床意义三区划线法：首先用无菌棉签挑取痰液的脓或血性部分（或将接种坏通过火焰灭菌，冷却后挑取标本少许，尽量取有脓或血部分）然后将其涂布在平板第一区，并作数次划线，再在二、三区依次用接种环划线，每划一个区域，应将接种环烧灼一次，待冷却后再划下一区域。
1）血平板（5%CO2环境）适用于分离肺炎链球菌和其他细菌。
2）巧克力平板（5%CO2环境）适用于分离嗜血杆菌。
3）麦康凯/中国蓝平板（需氧环境）适用于分离革兰阴性杆菌。
（2）分离培养血平板和巧克力平板置5%CO2环境，麦康凯平板/中国兰平板置普通孵箱，35℃孵育。
--临床常见标本的微生物学检验
取新鲜标本分别接种于两个血平板上一个取新鲜标本分别接种于两个血平板上一个血平板按一般的培养方法进行需氧培血平板按一般的培养方法进行需氧培养另或厌氧袋内进行厌氧培养内进行厌氧培养经经3535培养培养2天后认真天后认真观察生观察生长情况和菌落特征并挑取菌落涂片革兰染长情况和菌落特征并挑取菌落涂片革兰染色镜检根据形态特征得出初步印色镜检根据形态特征得出初步印象再按象再按各类厌氧菌的特征进行鉴定
尿液标本 细菌学检验Fra bibliotek标本采集
中段尿采集方法 肾盂尿采集法 膀胱穿刺采集法 导尿法
注意事项
1．尿液标本的采取和培养最大的问题是污染 杂菌，故应严格进行无菌操作。
2．标本采取后应立即送检和接种，放置时间 长，杂菌容易在尿液标本中生长繁殖， 影 响诊断。
3．尿液标本中不得加入防腐剂及消毒剂，否 则会影响阳性检出率。
细菌培养
L 型细菌培养
将尿液接种于血琼脂平皿和高渗液体培养基， 置35 ℃培养，由 于L 型细菌生长缓慢，所 以高渗培养应放5 ～7d ，液体中呈颗粒状生 长，可粘附于管壁 或沉于管底，吸出颗粒镜
下观察，同时转种平皿。无阳性发现可报告 无L 型细菌生长， 根据需要还可做结核菌、 沙门菌、厌氧菌培养。
6．标本的采取应以提高阳性检出率为目的。
血 液 骨 髓 标 本 的 细 菌 学 检 验 程 序
血液骨髓 细菌学检验
一般细菌的检验
标本接种于肉汤培养基后，立即置35 ±1 ℃温箱内 孵育，每天取出一次观察有无 细菌生长，应特别注 意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液 变色、指示剂变 色等现象，并记录之。
涂片检查 假丝酵母菌 涂片检查
取尿液离心沉淀物置于玻片上，加盖玻片 后用高倍镜观察，如发现卵圆形芽生孢子 或假菌丝，且革兰染色为阳性，即可做出 初步报告。
尿液标本 细菌学检验Fra bibliotek标本采集
中段尿采集方法 肾盂尿采集法 膀胱穿刺采集法 导尿法
注意事项
1．尿液标本的采取和培养最大的问题是污染 杂菌，故应严格进行无菌操作。
2．标本采取后应立即送检和接种，放置时间 长，杂菌容易在尿液标本中生长繁殖， 影 响诊断。
3．尿液标本中不得加入防腐剂及消毒剂，否 则会影响阳性检出率。
细菌培养
L 型细菌培养
将尿液接种于血琼脂平皿和高渗液体培养基， 置35 ℃培养，由 于L 型细菌生长缓慢，所 以高渗培养应放5 ～7d ，液体中呈颗粒状生 长，可粘附于管壁 或沉于管底，吸出颗粒镜
下观察，同时转种平皿。无阳性发现可报告 无L 型细菌生长， 根据需要还可做结核菌、 沙门菌、厌氧菌培养。
6．标本的采取应以提高阳性检出率为目的。
血 液 骨 髓 标 本 的 细 菌 学 检 验 程 序
血液骨髓 细菌学检验
一般细菌的检验
标本接种于肉汤培养基后，立即置35 ±1 ℃温箱内 孵育，每天取出一次观察有无 细菌生长，应特别注 意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液 变色、指示剂变 色等现象，并记录之。
涂片检查 假丝酵母菌 涂片检查
取尿液离心沉淀物置于玻片上，加盖玻片 后用高倍镜观察，如发现卵圆形芽生孢子 或假菌丝，且革兰染色为阳性，即可做出 初步报告。
常见临床标本细菌学检验简述
分离培养
将标本接种在适宜的培养 基上进行细菌分离培养。
注意事项
01 确保采集工具的无菌性，避免交叉感染。
02 采集足够的标本量，以保证检验结果的准 确性。
03
及时送检，避免延误检验时间。
04
注意个人防护，避免感染。
PART 02
临床标本细菌学检验方法
分离培养
分离培养
将临床标本接种于适宜的固体或 液体培养基上，在适宜的温度和 环境下进行培养，使细菌得以生
免疫学鉴定
利用抗原-抗体反应的原理 ，通过免疫学方法进行细 菌的鉴定。
药敏试验
纸片扩散法
将含有不同抗菌药物的纸片贴在已接 种细菌的平板上，观察细菌的生长情 况，以判断细菌对抗菌药物的敏感程 度。
稀释法
E试验
将细菌接种在含有抗菌药物的平板上 ，通过测量抑菌圈的大小来判断细菌 对抗菌药物的敏感程度。
通过不断增加抗菌药物的浓度，观察 细菌的生长情况，以判断细菌对抗菌 药物的敏感程度。
结果解读
1 2
解读临床意义
根据细菌培养和药敏试验结果，判断细菌种类、 感染部位及病原体对抗生素的敏感性，为临床医 生提供诊断和治疗依据。
鉴别病原菌
通过细菌形态、染色、生化反应等实验手段，鉴 别不同病原菌，有助于针对性地选择抗菌药物。
3
判断耐药性
监测细菌对抗生素的耐药性，预测治疗效果，为 临床医生提供抗菌药物选择的参考依据。
伤口分泌物标本
用无菌棉签擦拭伤 口表面分泌物。
血液标本
采集静脉血液，常 用无菌注射器抽取 。
呼吸道标本
采集鼻咽拭子或痰 液，用无菌棉签擦 拭鼻咽部或咳痰。
粪便标本
采集新鲜粪便，避 免污染。
临床标本的细菌学检验
•临床标本的细菌学检验
第一节 血液及骨髓标本 一、 血液标本 （一）标本采集 静脉采血，应严格消毒血培养瓶盖和皮肤，用无菌 采血装置采血，不换针头，直接将血液标本注入 血培养瓶中，注入血液后应颠倒混匀以防凝固。 采用真空采血装置可降低污染。
1、采血时间 一般应在抗菌药物治疗前，发热初期或高峰时 抽血。研究表明细菌通常在寒战或发热前1h入血，因为超 过发热峰值后，病原菌的检出率会随之降低。对间歇性菌 血症应在寒战或体温高峰到来之前采集血培养，因为细菌 流入血液与发热通常间隔1h，实际上在发热后由于细菌很 快会从血液中清除，因此，应尽快抽取血培养。
• 2、采血部位 以无菌操作在患者肘静脉采血。儿童和 婴幼儿其采血的部位多为颈部和腹股沟，这两个部位 皮肤皱褶多，易造成皮肤寄生菌污染，因此必须严格 消毒。消毒过程同成人，但氯己定（洗必泰）不能用 于2个月以下婴儿。成人不建议采集动脉血，不宜从 静脉导管或静脉留置口取血，因其常伴有高污染率。 如果必须从留置导管内采血，必须同时从外周静脉采 集另外一个血培养标本，有助于对比和结果解释。静 脉导管采血时，不要弃去初段血，不要用抗凝剂冲洗 。
• 第七节 脓液及创伤感染分泌物标本 • （一）标本采集 • 1、开放性脓肿和脓性分泌物 先以无菌盐水冲 洗溃疡表面，用2支灭菌棉试取溃疡深处的分 泌物后插入斯式运送培养基内送检。一支为涂 片检查用，一支作培养用。
• 2、大面积烧伤的创面分泌物 用灭菌棉拭取多部 位创面的脓液或分泌物，置灭菌试管内（注明采 集部位）送检。 • 3、封闭性脓肿 要求先消毒局部皮肤或黏膜表面 后，用注射器抽取，将脓液注入无菌试管内送检 。疑为厌氧菌感染时，应作床边接种或置厌氧运 送培养基内送检。
• 3、采血量 成年患者推荐的采血量为每套不少于10ml，每 瓶不少于5ml，最好为20ml血液，分注在2个血培养瓶（ 需氧瓶+厌氧瓶）内。2套血培养（4个血培养瓶）应至少 接种20ml血液。当培养的血量从2ml增加到20ml时，血培 养的阳性率增加30%~50%，因为培养的血液量每增加1ml ，阳性率增加3%~5%，因此采血量与阳性检出率呈正比关 系。 • 用静脉穿刺获得的血量，成人和儿童不同。儿童，特别是 新生儿很难获得大量的血液，对婴幼儿和儿童，一般静脉 采血1~5ml，当细菌浓度足够高时，血液少于1ml也足以 检测菌血症。标本量＞1ml，细菌量也增加，对于受感染 的儿童每毫升血液的含菌量比成人多。
第一节 血液及骨髓标本 一、 血液标本 （一）标本采集 静脉采血，应严格消毒血培养瓶盖和皮肤，用无菌 采血装置采血，不换针头，直接将血液标本注入 血培养瓶中，注入血液后应颠倒混匀以防凝固。 采用真空采血装置可降低污染。
1、采血时间 一般应在抗菌药物治疗前，发热初期或高峰时 抽血。研究表明细菌通常在寒战或发热前1h入血，因为超 过发热峰值后，病原菌的检出率会随之降低。对间歇性菌 血症应在寒战或体温高峰到来之前采集血培养，因为细菌 流入血液与发热通常间隔1h，实际上在发热后由于细菌很 快会从血液中清除，因此，应尽快抽取血培养。
• 2、采血部位 以无菌操作在患者肘静脉采血。儿童和 婴幼儿其采血的部位多为颈部和腹股沟，这两个部位 皮肤皱褶多，易造成皮肤寄生菌污染，因此必须严格 消毒。消毒过程同成人，但氯己定（洗必泰）不能用 于2个月以下婴儿。成人不建议采集动脉血，不宜从 静脉导管或静脉留置口取血，因其常伴有高污染率。 如果必须从留置导管内采血，必须同时从外周静脉采 集另外一个血培养标本，有助于对比和结果解释。静 脉导管采血时，不要弃去初段血，不要用抗凝剂冲洗 。
• 第七节 脓液及创伤感染分泌物标本 • （一）标本采集 • 1、开放性脓肿和脓性分泌物 先以无菌盐水冲 洗溃疡表面，用2支灭菌棉试取溃疡深处的分 泌物后插入斯式运送培养基内送检。一支为涂 片检查用，一支作培养用。
• 2、大面积烧伤的创面分泌物 用灭菌棉拭取多部 位创面的脓液或分泌物，置灭菌试管内（注明采 集部位）送检。 • 3、封闭性脓肿 要求先消毒局部皮肤或黏膜表面 后，用注射器抽取，将脓液注入无菌试管内送检 。疑为厌氧菌感染时，应作床边接种或置厌氧运 送培养基内送检。
• 3、采血量 成年患者推荐的采血量为每套不少于10ml，每 瓶不少于5ml，最好为20ml血液，分注在2个血培养瓶（ 需氧瓶+厌氧瓶）内。2套血培养（4个血培养瓶）应至少 接种20ml血液。当培养的血量从2ml增加到20ml时，血培 养的阳性率增加30%~50%，因为培养的血液量每增加1ml ，阳性率增加3%~5%，因此采血量与阳性检出率呈正比关 系。 • 用静脉穿刺获得的血量，成人和儿童不同。儿童，特别是 新生儿很难获得大量的血液，对婴幼儿和儿童，一般静脉 采血1~5ml，当细菌浓度足够高时，血液少于1ml也足以 检测菌血症。标本量＞1ml，细菌量也增加，对于受感染 的儿童每毫升血液的含菌量比成人多。
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1.中段尿采集法 2.导尿法 3.膀胱穿刺采集法 4.集尿法 5.标本的运送和保存
♦立即送检、及时接种 ♦室温不超过2小时，4℃不超过8小时 ♦淋病奈瑟菌感染尿液标本不能冷藏
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2.检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
第一节 概述
4.细菌的鉴定 ♦选择细菌检验鉴定方法的原则 ★选择有鉴定价值的试验：两种细菌出现不同的结果 ★选择快速、简易的试验：如触酶、氧化酶 ★综合考虑试验的敏感性和特异性
第一节 概述
5.细菌对抗菌药物敏感性试验 ♦纸片扩散法 ♦肉汤稀释法 ♦自动化仪器法 ♦E-test法等。
第一节 概述
四、细菌学检验报告原则
♦标本周转时间（TAT）：从标本采集起到临床医生收到检验 结果的时间 ♦危急值：指危及到患者生命健康安全的检验结果
检验报告原则 ♦初报告 ♦预报告 ♦最终报告 ♦报告抗菌药物敏感性试验结果
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
一、血液及骨髓标本的细菌学 检验
（一）标本的采集 1.皮肤消毒 ♦严格执行三步法 2.采血部位： ♦肘静脉 ♦肘动脉或股动脉采血 ♦婴幼儿采颈静脉血
3份（1～2小时） 2份
2～3份
2份
6.标本的运送和保存 立即送检，室温保存，切勿冷藏
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2. 检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）普通细菌的培养与鉴定
♦增菌培养：培养阳性指证及疑似菌列表
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.采集方法 ♦严格无菌操作
4.采血量
♦比例：1:10 ♦成人8～10ml/瓶 ♦儿童1～5ml/瓶 ♦婴儿1～2ml/瓶 ♦骨髓1～2ml/瓶
第二节 临床常见标本的细菌学检验
5.采血时间和頻度
疾病
24小时内
24小时后
菌血症、败血症 细菌性心内膜炎 不明原因发热
2～3份
即接种
第一节 概述
二、培养基及培养方法的选择 1.培养基 选择恰当的培养基或组合
第一节 概述
2.常用培养方法 ♦需氧培养、二氧化碳培养和厌氧培养
电热恒温培养箱
二氧化碳培养箱
厌氧培养箱
第一节 概述
三、细菌学检验的基本流程
（一）细菌学检验的基本程序
第一节 概述
（二）细菌学检验鉴定步骤 1.标本性状观察
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（三）临床意义 ♦脑膜炎奈瑟菌引起细菌性脑膜炎 ♦结核分枝杆菌引起的结核性脑膜炎 ♦真菌性脑膜炎最常见的病原体是新型隐球菌，白假丝酵 母菌、球孢子菌好发于免疫功能低下和恶性疾病患者
第二节 临床常见标本的细菌学检验
三、尿液（泌尿生殖道）标本的细菌学检验
（一）标本的采集
国家卫生和计划生育委员会规划教材
微生物学检验
《微生物学检验》
国家卫生和计划生育委员会规划教材
《微生物学检验》
第十九章 临床常见标本的细菌学检验
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本章内容
1 第一节 概述 2 第二节 临床常见标本的细菌学检验
学习目标及重点
学习目标： 掌握临床常见标本的采集、送检和处理的原则 临床常见标本细菌学检验程序、检验方法及结果报告 熟悉TAT、危急值在临床实际工作中的应用 临床标本常见病原菌的检验方法及鉴定要点 了解临床标本细菌学检验的临床意义 临床标本中正常菌群的分布及常见致病菌 本章重点： ★病毒标本采集和运送原则 ★病毒学诊断及鉴定常用方法 ★病毒培养的基本操作
鉴定：葡萄糖、麦芽 糖发酵阳性
药敏：CLSI标准
脑膜炎奈瑟菌菌落
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（2）特殊细菌培养与鉴定
血液 骨髓
♦草绿色链球菌
胰酶解酪蛋白 大豆肉汤培养瓶
血琼脂平板 （35℃, 5％～10％C02、
需氧和厌氧环境）
鉴定 药敏试验
7天培养无细菌生长，培养至第4周，仍无细菌生长则报告“经4周 培养无草绿色链球菌生长”
第一节 概述
（三）临床标本的处理
♦核对标本与申请单信息 常见标本处理方式 • 组织：无菌粉碎研磨后，加生理盐水制成悬液，接种 • 体液：3000r/mim离心10分钟后，接种。 • 棉拭子：置运送培养基送检，避免污染。 • 粪便：挑取带脓、血及黏液部分接种。 • 痰液：检查标本是否有血液、脓液、颗粒、干酪样物等 • 血液：采集后立即增菌培养 • 厌氧菌培养：检查标本、运送方式是否适合厌氧培养，立
♦ 符合生物安全防护要求
第一节 概述
（二）临床标本的保存和送检 ♦ 立即送检，否则应放入运送培养基或保存液中运送
1.普通细菌培养标本 ♦室温：1小时，4℃：24小时，运送培养基：48小时
2.苛养菌培养标本 ♦保温、保湿送检，“床头接种”
第一节 概述
3.厌氧菌培养标本 ♦防干燥，避免接触空气。
4.安全运送 ♦注意安全防护 ♦高致病性传染病标本，按生物安全有关规定包装， 由专人运送
葡萄球菌
艰难梭菌
弯曲菌
♦粪便中优势菌检查：推定主要优势菌并及时报告结果
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（2）分离培养与鉴定
♦ 沙门菌及志贺菌培养 粪便或直肠拭子→SS平板、麦康凯平板、GN增菌液→35℃、 需氧培养→可疑菌落→生化试验、血清学反应鉴定
验、结果评价及建议 ♦ 阴性报告：48小时无细菌生长者，报告“48小时培养
无细菌生长”
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（三）临床意义
♦ 尿液中细菌数少于104cfu／ml或104～105cfu/ml之间， 反复多次查出同一细菌时，一般也认为是病原菌。 ♦ 同份尿液中检出三种或以上不同微生物，应认为标本采 集或处理不当被污染。 ♦ 尿液细菌学检查结果，应结合临床考虑综合
第二节 临床常见标本的细菌学检验
四、粪便标本的细菌学检验
（一）标本的采集 1.自然排便法 ♦ 脓血、黏液粪便2～3克 2.直肠拭子法 ♦ 成人4～5厘米 ♦ 幼儿2～3厘米 3.标本的运送和保存 ♦ 卡-布（Cary-Blair）运送培养基
直肠肛拭子
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
培养基性状改变 均匀混浊，指示剂变色 微混浊，有绿色变化 有菌膜，均匀混浊有绿色荧光 上层澄清，下层有沉淀 细胞层自上而下的溶血 混浊、有胶冻状凝固现象 灰白色菌膜、培养基清晰
疑似病原菌 革兰阴性杆菌 肺炎链球菌 铜绿假单胞菌 链球菌 溶血性链球菌 葡萄球菌 枯草芽孢杆菌或类白喉棒状杆菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2.检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）涂片检查 ♦ 霍乱弧菌检查： ①动力检查：动力及制动试验 ②染色镜检：革兰染色，发现鱼群状排列的革兰阴性弧菌， 可做出初步报告 ♦ 酵母样菌检查
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（1）涂片检查 ♦葡萄球菌、艰难梭菌、弯曲菌检查
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（2）分离培养与鉴定 ♦普通细菌
标本→血琼脂平板和巧克力平板（35℃，CO2环境）→ 可疑菌落→形态、生化试验及血清学试验、药敏试验 ♦结核分枝杆菌
标本→罗-琴培养基或米氏7H-10培养基→35℃温箱孵 育→可疑菌落→鉴定
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦真菌 标本→血平板或沙保弱培养基→25℃及37℃孵育→
♦阳性培养瓶处理
阳性培养瓶
涂片染色镜检 直接药敏试验
报告 报告
分离培养
细菌鉴定 药敏试验
报告
♦阴性培养瓶处理 于12～18小时、第3天和第7天至少
（2）特殊细菌培养与鉴定
♦脑膜炎奈瑟菌
血液 骨髓
胰胨肉汤或 专业培养瓶
巧克力培养基
（35℃, 5％～10％C02）
第一节 概述
一、临床标本的采集、送检与处理原则
（一）临床标本的采集 1.核对检验单信息 ♦ 信息完整、无误 2.选择适当的容器
第一节 概述
3.早期采集 ♦ 使用抗菌药物前
4.无菌采集 ♦ 严格无菌操作技术
第一节 概述
5.选择采集部位和方法
第一节 概述
6.充足的标本量 ♦ 足量、适量
7.标记标本 8.归放标本
♦颜色、是否粘稠、是否浑浊、是否脓性、是否带血等 性状
第一节 概述
2.涂片检查 ♦不染色标本检查 ：检查细菌的动力 ♦染色标本检查
革兰染色
抗酸染色
墨汁染色
第一节 概述
3.细菌的分离培养 ♦目的：得到单个纯菌落 ♦甄别污染菌方法 ①观察菌落是否在划线上 ②观察菌落是否与直接涂片染色结果相符 ③观察菌落是否符合拟培养细菌的生长特点 ④注意培养时间
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦厌氧菌
标本
牛心脑浸液 或肝浸液
血平板或巧克力平 板
35℃、厌氧培养
生化鉴定
♦真菌： 真菌增菌肉汤增菌→沙保弱培养基（25℃或37℃）→菌落
特征→生化鉴定、报告 ♦L型细菌
高渗液体培养基→血琼脂平板和L型细菌培养基→典型“ 油煎蛋”菌落→返祖、鉴定
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）涂片检查
♦普通细菌检查：取沉淀涂片、染色、镜检 ♦淋病奈瑟菌检查
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦念珠菌检查 ♦结核分枝杆菌检查：应与耻垢分枝杆菌相鉴别 ♦钩端螺旋体检查：暗视野显微镜下，发现一串细密亮珠、两 端呈钩状且沿纵轴旋转运动的螺旋体时，报告找到螺旋体
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦立即送检、及时接种 ♦室温不超过2小时，4℃不超过8小时 ♦淋病奈瑟菌感染尿液标本不能冷藏
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2.检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
第一节 概述
4.细菌的鉴定 ♦选择细菌检验鉴定方法的原则 ★选择有鉴定价值的试验：两种细菌出现不同的结果 ★选择快速、简易的试验：如触酶、氧化酶 ★综合考虑试验的敏感性和特异性
第一节 概述
5.细菌对抗菌药物敏感性试验 ♦纸片扩散法 ♦肉汤稀释法 ♦自动化仪器法 ♦E-test法等。
第一节 概述
四、细菌学检验报告原则
♦标本周转时间（TAT）：从标本采集起到临床医生收到检验 结果的时间 ♦危急值：指危及到患者生命健康安全的检验结果
检验报告原则 ♦初报告 ♦预报告 ♦最终报告 ♦报告抗菌药物敏感性试验结果
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
一、血液及骨髓标本的细菌学 检验
（一）标本的采集 1.皮肤消毒 ♦严格执行三步法 2.采血部位： ♦肘静脉 ♦肘动脉或股动脉采血 ♦婴幼儿采颈静脉血
3份（1～2小时） 2份
2～3份
2份
6.标本的运送和保存 立即送检，室温保存，切勿冷藏
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2. 检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）普通细菌的培养与鉴定
♦增菌培养：培养阳性指证及疑似菌列表
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.采集方法 ♦严格无菌操作
4.采血量
♦比例：1:10 ♦成人8～10ml/瓶 ♦儿童1～5ml/瓶 ♦婴儿1～2ml/瓶 ♦骨髓1～2ml/瓶
第二节 临床常见标本的细菌学检验
5.采血时间和頻度
疾病
24小时内
24小时后
菌血症、败血症 细菌性心内膜炎 不明原因发热
2～3份
即接种
第一节 概述
二、培养基及培养方法的选择 1.培养基 选择恰当的培养基或组合
第一节 概述
2.常用培养方法 ♦需氧培养、二氧化碳培养和厌氧培养
电热恒温培养箱
二氧化碳培养箱
厌氧培养箱
第一节 概述
三、细菌学检验的基本流程
（一）细菌学检验的基本程序
第一节 概述
（二）细菌学检验鉴定步骤 1.标本性状观察
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（三）临床意义 ♦脑膜炎奈瑟菌引起细菌性脑膜炎 ♦结核分枝杆菌引起的结核性脑膜炎 ♦真菌性脑膜炎最常见的病原体是新型隐球菌，白假丝酵 母菌、球孢子菌好发于免疫功能低下和恶性疾病患者
第二节 临床常见标本的细菌学检验
三、尿液（泌尿生殖道）标本的细菌学检验
（一）标本的采集
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微生物学检验
《微生物学检验》
国家卫生和计划生育委员会规划教材
《微生物学检验》
第十九章 临床常见标本的细菌学检验
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1 第一节 概述 2 第二节 临床常见标本的细菌学检验
学习目标及重点
学习目标： 掌握临床常见标本的采集、送检和处理的原则 临床常见标本细菌学检验程序、检验方法及结果报告 熟悉TAT、危急值在临床实际工作中的应用 临床标本常见病原菌的检验方法及鉴定要点 了解临床标本细菌学检验的临床意义 临床标本中正常菌群的分布及常见致病菌 本章重点： ★病毒标本采集和运送原则 ★病毒学诊断及鉴定常用方法 ★病毒培养的基本操作
鉴定：葡萄糖、麦芽 糖发酵阳性
药敏：CLSI标准
脑膜炎奈瑟菌菌落
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（2）特殊细菌培养与鉴定
血液 骨髓
♦草绿色链球菌
胰酶解酪蛋白 大豆肉汤培养瓶
血琼脂平板 （35℃, 5％～10％C02、
需氧和厌氧环境）
鉴定 药敏试验
7天培养无细菌生长，培养至第4周，仍无细菌生长则报告“经4周 培养无草绿色链球菌生长”
第一节 概述
（三）临床标本的处理
♦核对标本与申请单信息 常见标本处理方式 • 组织：无菌粉碎研磨后，加生理盐水制成悬液，接种 • 体液：3000r/mim离心10分钟后，接种。 • 棉拭子：置运送培养基送检，避免污染。 • 粪便：挑取带脓、血及黏液部分接种。 • 痰液：检查标本是否有血液、脓液、颗粒、干酪样物等 • 血液：采集后立即增菌培养 • 厌氧菌培养：检查标本、运送方式是否适合厌氧培养，立
♦ 符合生物安全防护要求
第一节 概述
（二）临床标本的保存和送检 ♦ 立即送检，否则应放入运送培养基或保存液中运送
1.普通细菌培养标本 ♦室温：1小时，4℃：24小时，运送培养基：48小时
2.苛养菌培养标本 ♦保温、保湿送检，“床头接种”
第一节 概述
3.厌氧菌培养标本 ♦防干燥，避免接触空气。
4.安全运送 ♦注意安全防护 ♦高致病性传染病标本，按生物安全有关规定包装， 由专人运送
葡萄球菌
艰难梭菌
弯曲菌
♦粪便中优势菌检查：推定主要优势菌并及时报告结果
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（2）分离培养与鉴定
♦ 沙门菌及志贺菌培养 粪便或直肠拭子→SS平板、麦康凯平板、GN增菌液→35℃、 需氧培养→可疑菌落→生化试验、血清学反应鉴定
验、结果评价及建议 ♦ 阴性报告：48小时无细菌生长者，报告“48小时培养
无细菌生长”
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（三）临床意义
♦ 尿液中细菌数少于104cfu／ml或104～105cfu/ml之间， 反复多次查出同一细菌时，一般也认为是病原菌。 ♦ 同份尿液中检出三种或以上不同微生物，应认为标本采 集或处理不当被污染。 ♦ 尿液细菌学检查结果，应结合临床考虑综合
第二节 临床常见标本的细菌学检验
四、粪便标本的细菌学检验
（一）标本的采集 1.自然排便法 ♦ 脓血、黏液粪便2～3克 2.直肠拭子法 ♦ 成人4～5厘米 ♦ 幼儿2～3厘米 3.标本的运送和保存 ♦ 卡-布（Cary-Blair）运送培养基
直肠肛拭子
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
培养基性状改变 均匀混浊，指示剂变色 微混浊，有绿色变化 有菌膜，均匀混浊有绿色荧光 上层澄清，下层有沉淀 细胞层自上而下的溶血 混浊、有胶冻状凝固现象 灰白色菌膜、培养基清晰
疑似病原菌 革兰阴性杆菌 肺炎链球菌 铜绿假单胞菌 链球菌 溶血性链球菌 葡萄球菌 枯草芽孢杆菌或类白喉棒状杆菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2.检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）涂片检查 ♦ 霍乱弧菌检查： ①动力检查：动力及制动试验 ②染色镜检：革兰染色，发现鱼群状排列的革兰阴性弧菌， 可做出初步报告 ♦ 酵母样菌检查
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（1）涂片检查 ♦葡萄球菌、艰难梭菌、弯曲菌检查
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（2）分离培养与鉴定 ♦普通细菌
标本→血琼脂平板和巧克力平板（35℃，CO2环境）→ 可疑菌落→形态、生化试验及血清学试验、药敏试验 ♦结核分枝杆菌
标本→罗-琴培养基或米氏7H-10培养基→35℃温箱孵 育→可疑菌落→鉴定
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦真菌 标本→血平板或沙保弱培养基→25℃及37℃孵育→
♦阳性培养瓶处理
阳性培养瓶
涂片染色镜检 直接药敏试验
报告 报告
分离培养
细菌鉴定 药敏试验
报告
♦阴性培养瓶处理 于12～18小时、第3天和第7天至少
（2）特殊细菌培养与鉴定
♦脑膜炎奈瑟菌
血液 骨髓
胰胨肉汤或 专业培养瓶
巧克力培养基
（35℃, 5％～10％C02）
第一节 概述
一、临床标本的采集、送检与处理原则
（一）临床标本的采集 1.核对检验单信息 ♦ 信息完整、无误 2.选择适当的容器
第一节 概述
3.早期采集 ♦ 使用抗菌药物前
4.无菌采集 ♦ 严格无菌操作技术
第一节 概述
5.选择采集部位和方法
第一节 概述
6.充足的标本量 ♦ 足量、适量
7.标记标本 8.归放标本
♦颜色、是否粘稠、是否浑浊、是否脓性、是否带血等 性状
第一节 概述
2.涂片检查 ♦不染色标本检查 ：检查细菌的动力 ♦染色标本检查
革兰染色
抗酸染色
墨汁染色
第一节 概述
3.细菌的分离培养 ♦目的：得到单个纯菌落 ♦甄别污染菌方法 ①观察菌落是否在划线上 ②观察菌落是否与直接涂片染色结果相符 ③观察菌落是否符合拟培养细菌的生长特点 ④注意培养时间
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦厌氧菌
标本
牛心脑浸液 或肝浸液
血平板或巧克力平 板
35℃、厌氧培养
生化鉴定
♦真菌： 真菌增菌肉汤增菌→沙保弱培养基（25℃或37℃）→菌落
特征→生化鉴定、报告 ♦L型细菌
高渗液体培养基→血琼脂平板和L型细菌培养基→典型“ 油煎蛋”菌落→返祖、鉴定
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）涂片检查
♦普通细菌检查：取沉淀涂片、染色、镜检 ♦淋病奈瑟菌检查
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦念珠菌检查 ♦结核分枝杆菌检查：应与耻垢分枝杆菌相鉴别 ♦钩端螺旋体检查：暗视野显微镜下，发现一串细密亮珠、两 端呈钩状且沿纵轴旋转运动的螺旋体时，报告找到螺旋体
第二节 临床常见标本的细菌学检验