临床标本的细菌学检验
临床标本的细菌学检查-精品文档
法尿 和液 操标 作本 流细 程菌
检 验 方
Uricult 操作步骤
Uricult 菌落比密图
临床标本的细菌学检查
第一节 血液及骨髓标本
一 血液标本
血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血 症的基本方法。
如从患者血液中检出细菌，一般应视为病 原菌。
常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球 菌、链球菌（A、B群、肺炎链球菌等）、 肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈 瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等。
(2)结核分枝杆菌涂片检查 (3)新生隐球菌涂片检查 2. 分离培养 3. 报告方式 培养48小时，仍无菌生长者报告“培养 2天无细菌生长”。查见细菌报告细菌，报告菌名和 药敏结果。
第三节 呼吸系统标本
下呼吸道的痰液是无细菌的，而经口腔咳出的痰 带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球 菌）。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病 菌，提示有上呼吸道感染。
脑脊液无论涂片或培养必须于 采集后立即送检不宜将其置于 冰箱保存，否则影响检出率。
法脑 和脊 操液 作标 流本 程细 图菌
学 检 验 方
（二）检验方法和操作流程
1. 涂片检查 (1) 一般细菌涂片检查： 例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能是脑膜
炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌；长丝状等多形 态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。
验呼 方吸 法系 和统 操标 作本 流细 程菌
学 检
（二）检验方法和操作流程
1. 肉眼观察
2. 涂片检查 其一依据100×镜下观察白细胞和
上皮细胞数目多少来评定(如表)；其二是初步判 定是否有病原存在。
痰标本镜下分类
分级 A B C
白细胞（个） >25 >25 <10
临床常见标本的细菌学检验
痰液的采集
采集指征
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰 可伴有胸痛、气急甚至呼吸困难，肺部可闻及湿罗音；
X线检查肺部有炎性浸润或胸腔积液 严重可致感染性休克和呼衰。
44
痰液的采集和运送
采集方法
自然咳痰法 支气管镜采集法 防污染毛刷采集 法 支气管肺泡灌洗法 胃内采痰法 小儿取痰法
45
痰液的采集和运送
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
30
尿液的检验
菌落计数
定量接种尿液培养标本 根据细菌在平板上的生长情况 定量报告每毫升尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）
31
尿液标本常见的病原菌
病原菌
正常 菌群
G+
金葡 化脓性链球菌 肠球菌 结核分枝杆菌 葡萄球菌 枯草杆菌 非致病性棒状杆菌
注意培养时间
加做无菌对照
涂片染色检查
结合培养细菌的生长特点对照判断
8
（四）检验程序
标本选择 采集（保存运送）
观察、前处理
直接 涂片
报告
快速 检验
报告
分离培养 （需、厌氧、CO2培养）
可疑菌落 (必要时先做培养)
增菌(需氧、厌氧、 CO2培养)
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
难辨梭菌
杆菌
G-
沙门菌 大肠埃希菌
志贺菌 霍乱弧菌 副溶血弧菌
弯曲菌 小肠结肠炎耶尔森菌
变形杆菌
41
粪便检验的临床意义
肠道致病菌
霍乱弧菌-霍乱，志贺菌-细菌性痢疾，伤寒沙门菌-伤寒；
食物中毒
沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、副溶血弧菌。
42
第二节 临床常见标本的细菌学检验
临床微生物学检验的标本采集
临床微生物学检验的标本采集一、血液和骨髓细菌学检验标本的采集（一）适应症菌血症、败血症和感染性骨髓炎等感染菌的培养鉴定和药物敏感试验。
（二）病人准备1．凡怀疑菌血症和败血症的患者，采血培养时，应尽量在未使用抗菌素前采血，如已使用过抗菌素，应尽量选择抗菌素在体内浓度最低时采血，或在病人第二次使用抗菌素之前采集血培养标本。
2．应在病人发热期或寒颤时采集（三）标本采集1．血培养瓶领取：凭医嘱和检验申请单到检验科细菌室领取。
按照实际情况选择相应类型的血培养瓶：如灰色瓶盖为普通成人培养瓶；粉红色盖为儿童需氧菌培养瓶；紫色盖为厌氧菌培养瓶。
2．将患者信息录入相应的血培养瓶条码中，并在作好病人姓名、科别、床号等标识。
2．采集方法：严格消毒病人采血部位和血培养瓶口，抽一定量血液或骨髓后，无菌注入血培养瓶内，轻轻摇匀。
3．标本量：成人每次采血5~10ml，小儿采血3~5ml，骨髓2~3ml，采血量足够则阳性率高，反之阳性率减低。
（四）注意事项1．抽血、抽骨髓和接种时，须严格注意无菌操作，避免污染杂菌。
2．从抽血、抽骨髓到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固。
3．成人不明原因发热、怀疑血流细菌感染时宜在不同部位抽血2套，每套2瓶（需氧、厌氧各一瓶）。
4．怀疑伤寒、亚急性细菌性心内膜炎及布鲁氏菌病的病人等，一般一日抽血三次培养，必要时需追加次数。
（五）标本送检和保存1．标本采集后应及时送检，一般不超过1h送交细菌室。
2．送检过程中应注意防止培养瓶打破或其它潜在性污染可能。
二、痰液或下呼吸道分泌物细菌学检验标本的采集（一）适应症肺炎、肺气肿、支气管炎、鼻窦炎、肺结核等感染菌的培养鉴定、药物敏感试验和抗酸菌检查。
（二）病人准备1．尽量在未使用抗菌素前留取标本。
准备好无菌标本容器，贴上条码、标明标识。
2．住院病人应留取清晨起床第一口痰。
为减少正常菌群的污染，嘱患者早上起床后用清水或生理盐水漱口，不要刷牙，除去鼻咽分泌物。
（三）标本采集1．一般病人用力咳出气管深处或肺部痰液，留于无菌标本容器内。
11.1.3细菌学检验的结果报告
临床标本各种各样 检验项目不尽相同 细菌种类数不胜数 检验结果究竟该如何报告？
一、涂片结果的报告
1、一般细菌涂片： 革兰染色，显微镜下观察
据细菌染色性和形态报告： “找到革兰阳性球菌（杆菌）” “找到革兰阴性球菌（杆菌）”
未发现细菌报告： “未找到细菌”
一、涂片结果的报告
二、细菌培养的结果报告
1、一般细菌培养的结果报告： 阳性报告： 报告具体鉴定菌名及药敏。
二、细菌培养的结果报告
2、真菌培养的结果报告： 阴性报告：“经7天培养无真菌生长”。 阳性报告：报告具体的真菌种类以及药敏情况
二、细菌培养的结果报告
3、沙门、志贺菌培养的结果报告： 阴性报告：“未检出沙门菌属和志贺菌属” 阳性报告：沙门、志贺菌种及药敏情况
痰、咽拭子、口腔拭子：“正常菌群生长” 无菌体液：“经需氧（厌氧）培养5天无细菌
生长” 导管、导管尖端：“培养4天无细菌生长”
二、细菌培养的结果报告
1、一般细菌培养的结果报告： 阴性报告： 妇科、产科分泌物：“正常细菌群” 其他 科室分泌物以及脓液、尿液、引流液
等：经2天培养无细菌生长”
4、淋球菌涂片： 发现革兰阴性双球菌，呈肾型，存
在于细胞内或细胞外： “找到革兰阴性双球菌，（疑似淋 球菌）” 未发现：“未找到革兰阴性双球菌”
一、涂片结果的报告
5、结核分枝杆菌涂片： 抗酸染色，查见红色杆菌：
“找到抗酸杆菌” 未找到红色杆菌：
“未找到抗酸杆菌”
二、细菌培养的结果报告
1、一般细菌培养的结果报告： 阴性报告：
2、真菌涂片： 发现革兰阳性卵圆形芽生孢子或假菌丝：
“找到真菌孢子及菌丝” 未发现革兰阳性卵圆形芽生孢子或假菌
临床细菌常规检验方法
临床细菌常规检验方法1.样本收集：通常采用微生物标本采集套装，如采血培养瓶、骨髓培养瓶、尿培养瓶、分泌物培养瓶等。
不同类型的标本要按照不同的采集方法进行采集，以确保样本的纯度和无污染。
2.样本处理：在获得样本后，要进行适当的处理，如血液样本要进行离心分离，分离出红细胞和血浆/血清。
尿液样本要进行离心去除悬浊物等。
3.细菌培养：将已处理的样本分别接种到含有适当培养基的培养皿中，并在适当温度和湿度下培养一段时间。
通常常规培养采用的培养基包括血浆琼脂、麦康凯琼脂等。
培养时间通常为24-48小时，特殊细菌可能需要更长的培养时间。
4.细菌鉴定：对培养出的菌落进行初步的形态学鉴定，如观察菌落形状、大小、颜色等。
然后进行革兰染色，观察细菌的形态特征，如是否革兰阳性或革兰阴性。
根据初步鉴定的结果，可以选择进一步的生化试验或分子生物学检测，如氧化/发酵试验、羟基酸钠试验、目标序列扩增等。
最终确定细菌的种类和特征。
5.药敏试验：对已鉴定出的细菌进行药敏试验，以确定细菌对各类抗生素的敏感性。
药敏试验通常采用纸片扩散法或肉汤稀释法，通过观察菌落的生长抑制区域大小来判断细菌对抗生素的敏感程度。
6.结果分析和报告：根据细菌培养和鉴定的结果以及药敏试验的结果，进行结果分析和判断。
最后将结果整理成报告，提供给临床医生参考，帮助临床医生做出正确的诊断和治疗决策。
总的来说，临床细菌常规检验方法包括了样本收集、样本处理、细菌培养、细菌鉴定、药敏试验等步骤。
这些步骤的顺序和方法都有一定的规范和标准，以确保检验结果的准确性和可靠性。
临床细菌常规检验在临床诊断和治疗中起着重要的作用，可以帮助医生选择合适的抗生素治疗方案，提高治疗效果。
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查从临床标本中分离细菌的目的是为疾病的病原学做诊断，或查找与疾病相关的微生物，以及对抗生素的敏感性，这对于临床诊断、治疗、预后和进行流行病学调查是很有价值的。
因此，对临床标本的处理和检测应掌握以下原则。
1．临床标本的正确采集和处理对于疾病的正确诊断关系很大。
病人标本一般应在应用抗菌药物前采集。
对血液、脑脊液或穿刺液等标本，应严格按照无菌技术进行采集；对鼻咽拭子、肛拭子、粪便等标本，虽无须严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌混入。
2．采集容器上应贴好送检号及病人姓名的标签，连同检验单一起尽早送检验室。
若路途较远，应冷藏保存送检；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等特殊标本，送检时应35℃～37℃保温。
3．人体很多部位与外界相通，存在有正常菌群，但不致病，故在涂片检查或分离培养时，应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。
另外，对某些无菌的部位，如血液、骨髓、脑脊液等，如检查出细菌应视为致病菌，但必须要排除采样及操作中的污染。
4．根据标本来源和可能存在的病原菌，选定各种分离培养基和孵育环境。
如痰标本一般选用血平板，用于化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离。
【血液标本检查】正常人的血液是无菌的。
当细菌侵入血流并在其中生长繁殖，产生毒素等，可引起菌血症或败血症。
细菌学检验对其诊断和治疗具有极其重要的意义。
一、标本采集l．标本采集必须严格遵守无菌操作，即应去除皮肤上的细菌，又应注意空气中的细菌。
穿刺部位以碘酒、酒精棉球消毒，用干燥的灭菌注射器抽取血液，立即注入选定的液体培养基瓶内，充分混匀以防凝固。
2．采血一般应在治疗前，并在高热、寒战时作培养。
伤寒在发病一周内即菌血症期间采血；化脓性脑膜炎，鼠疫应在发热1～2d内采血；亚急性细菌性心内膜炎也宜于发热高峰采血或多次采血，且每隔1～2h采血一次，连续3～4次，可获较高的阳性率。
3．采血量应相当于培养液的1／10，通常是50ml培养液采血5ml，这样可使存在于血液中的补体、抗体、调理素、溶菌酶等抑制因子被稀释，使之减弱或失去抑制作用。
临床标本的细菌学检查汇总
二 生殖道标本
正常的内生殖器是无菌的，而外生殖器 （包括男性尿道口和女性阴道）有多种细 菌寄生。 查见病原菌提示有细菌感染。 常见的病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、 链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃细菌、变形 杆菌等。
（一）标本采集 1.女性生殖道标本 2.男性生殖道标本 3.梅毒螺旋体标本
第五节 泌尿、生殖道标本
一 尿液标本
中段尿培养加计数对于泌尿道感染的诊断有重要 价值。细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病 原菌。 有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数>105/ml， 提示感染（膀胱炎，肾盂肾炎、肾或膀胱结核 等）。 常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、链球 菌、变形杆菌和伤寒沙门菌等。
（2）男性
（一）标本采集
1. 中段尿标本采集法 （1）女性：
（3）儿童、婴儿
（4）两侧肾盂尿
（5）膀胱穿刺
（二）检验方法和操作流程 ■1.涂片检查 （1）一般细菌及淋病奈瑟菌 （2）念珠菌 （3）结核分枝杆菌 ■ 2.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃 去。 （1）倾注平板法 （2）平板接种环法 （3）标准接种环法：若定量接种环含量为.001ml， 则整个平板菌落数超过100个，可报告“菌落数 >105/ml”。 （4）Uricult 半定量法
法尿 和液 操标 作本t 操作步骤
Uricult 菌落比密图
Uricult 细菌种类标准模式 图
4.特殊菌落培养 （1）淋病奈瑟菌培养 （2）厌氧菌培养 （3）结核分枝杆菌培养 5.报告方式 培养48h无细菌生长，报告“2 天无细菌生长”。查见细菌，报告菌名及 其菌落计数（菌落数/ml）和药敏结果。
临床标本检验-医学资料
检测方法和报告
特殊培养 脑膜炎奈瑟菌培养：37℃加5-10%CO2 伤寒或其它沙门菌：接种葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤 草绿色链球菌：胰酶酪蛋白大豆肉汤，同时做需要、 CO2和厌氧培养 L型细菌：高渗液体培养基，“油煎蛋”菌落 厌氧培养： 真菌培养：
临床意义
确诊菌血症和败血症 金黄色葡萄球见疖、痈、脓肿引起的败血症 革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症 草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎 铜绿、金葡引起烧伤后败血症
临床意义
检测引起腹泻、食物中毒的肠道菌致病菌 检测肠道正常菌群，预防菌群失调
患者杨某，女，24岁，2日前到某海滨城市旅 游，并在街边小店食入大量海鲜。回家后出现 腹痛、腹泻、呕吐、低热到医院就诊。临床采 集粪便标本送检验科微生物室。标本性状为糊 状，常规接种SS平板与CB平板，培养18h后发 现SS平板上除乳糖阳性菌落外有扁平、无色透 明、蜡滴状小菌落生长，CB平板上未见乳糖阴 性菌落生长。请问患者可能是何种细菌感染？ 如何进一步鉴定？
检测方法和报告
分离培养 -普通培养： -淋球菌培养： -厌氧菌培养： -真菌培养：
检测方法和报告
菌落计数
倾注平皿法： 尿液稀释成1：10、1：100、1：1000， 取此液1ml放入直径9cm灭菌平皿内，同时加入已熔化并 冷至50℃的培养基与尿混合，待凝固后置35 ℃培养。
定量接种环涂抹法：使用 1ul的定量接种环沾满尿液， 在分离培养基分离培养。生长的菌落数乘以 1000，等于 每毫升尿中的菌数。 报告： 革兰阴性菌>105cfu/ml， 革兰阳性菌>104cfu/ml有临床意义 阴性报告为“48h培养无菌生长”
临床标本的细菌学检验
基本要求
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
临床标本的细菌学检验
临床标本的细菌学检验，从各种标本中查找病原菌及其对抗生素的敏感性，在明确诊断、指
导用药、预防和流行病学调查等方面具有重要意义。
对各种标本，应根据实际要求和标本特
点选择适当的检验步骤及方法，准确、快速地检测病原菌，分析检验结果并报告，同时应注
意低耗和安全防护。
分离细菌的目的是查找与疾病相关的病原体及其对抗生素的敏感性，对
临床诊断、治疗、预后和流行病学调查很有价值。
1临床标本的采集与送检
临床标本的质量对于细菌学检验的结果至关重要，严格按操作规程的要求进行标本采集、运送、保存和处理，才能保证检验结果准确、可靠。
1.1临床标本的采集
1.1.1细菌学检验申请单的检查与登记：应仔细检查检验申请单上的内容，如标本类型、来源、送检目的、患者姓名、性别、年龄、临床诊断(如未明确，应注明主要症状)及是否已用
抗生素等，并及时登记。
1.1.2标本盛放容器：采集的标本，尤其是采自无正常菌群寄居部位的标本如血液、脑脊液、穿刺液等，必须盛放于无菌容器内[1]。
容器灭菌应采用干热、湿热等物理方法灭菌。
容器上
应贴上标签，注明待检患者姓名、床号等信息。
1.1.3无菌操作：在采集血液、脑脊液、穿刺液、骨髓时，应严格进行无菌操作，避免杂菌
污染标本。
采集粪便、痰液、咽拭子、肛拭子等标本，虽无需严格无菌操作，但也应尽量避
免杂菌污染。
1.1.4采集时间和部位：选择合适的采集时间是很重要的，一般情况下，标本应尽量在疾病
早期或在症状、体征明显时，在抗生素治疗之前采集，一些特殊检验的标本应按规定的时间
采集。
根据感染的具体情况，选择适当的部位采集标本。
1.1.5安全防护：采集的标本可能含有病原菌，因而采集、运送、保存和处理过程中必须注
意安全，防止标本中的病原菌溢出导致污染甚至传播；同时还需防止自身感染。
1.2标本的送检与保存
采集标本后，在盛装标本的容器上应贴好标签，并在标签上写明相关信息，立即将标本送至
检验室。
标本收集时间应加以准确记录，使检验人员接种时能判断标本是否延误。
如不能及
时送检，应根据病原菌的生物学特性，采用冷藏或保温等措施，以及将标本放入相应的保存
液或培养基中保存运送。
常规细菌学检验的标本在采集后，应于1 h内送交实验室，否则可
能影响病原菌检出。
若需保存于4℃，也不能超过24 h，否则会影响病原菌的检出率。
包括
厌氧菌培养的临床细菌检验标本，运送时间与原始标本的量有关，标本的量少应加快运送，
可在15～30 min内送达，否则必须于厌氧环境中25℃存放，不超过20～24 h。
不得冷藏及
冷冻。
如怀疑淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌感染标本应立即处理。
脑脊液、生
殖道、眼睛、内耳标本绝对不可以冷藏[2]。
任何临床标本，包括拭子、体屑、体液或组织块，已知或可能含有被分离的致病菌，都应视为生物危险材料。
运送时，无论距离远近都必须严
格执行有关病原微生物标本的运送管理规定，注意安全防护，且标识清楚、包装完整且符合
要求，然后安排专人运送。
2 临床标本的细菌学鉴定与报告
对标本进行直接涂片镜检、快速检测病原体成分或特异性抗原、直接药敏试验，同时进行病
原菌的分离培养、菌种鉴定和纯菌药物敏感试验，最后报告检验结果。
2.1细菌学鉴定方法
临床标本的细菌学鉴定原则上应结合细菌的生长特性、形态学特征、生化反应、抗原构造、
血清学试验、药敏试验、噬菌体感染试验、毒力测定及动物试验等多项检验综合作出判断。
因此，应根据所掌握的临床资料，利用实验室所具备的条件，遵循细菌科、属、种(群、型)
的基本鉴定思路，以最少的试验方法、最快的速度作出鉴定，并报告检验结果。
2.2细菌学检验结果报告检验结果的报告应表述正确，清晰易懂，其内容一般包括：①患者
的唯一性标识(如姓名、性别、门诊号或住院号等)和就诊科室，必要时注明报告送达地点；
②检验申请医师姓名或工号等唯一标识及科室、实验室的名称、地址和(或)标识；③标本采
集时间及实验室接收标本的时间；④标本种类及来源的解剖部位；⑤报告发布日期及时间；
⑥检验者或发布报告者的标识(如姓名或工作编号)。
为服务于临床诊断和治疗，应尽快提供临床细菌学检验报告。
可遵循分段报告原则：根据直
接镜检、快速鉴定结果，发出初步报告；进一步培养鉴定及药敏试验后，根据结果发出确诊
报告。
所有检验记录应按照有关规定保存一定时间。
如发现已发报告错误，应立即进行更改，并记
录更改内容、时间及责任人。
参考文献
[1]张卓然,倪语星.临床微生物学和微生物检验学[M].北京:人民卫生出版社,2003,7:233.
[2]马翔,孙丽君,等.传统方法在临床细菌学中的应用[J].中华检验医学杂志,2003,26:453～454.
[3]蔡文城.实用临床微生物诊断学[M].东南大学出版社,1998，11，71.。