临床标本的细菌学检验54页PPT
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2、标本的直接检查： ★ 直接显微镜检查：
革兰阴性小杆菌或多形态杆菌，结合临床 症状，可做出初步诊断。
★ 抗原检测
荚膜肿胀试验等
★ 核酸检测
3、分离培养与鉴定 （1) 分离培养
★ ★ ★ ★ 营养要求：高，生长中需要X、V因子。 气体环境：生长时需要5%～10%的CO2环境。 温度：35℃ 培养基：兔血或马血最好
方法：密集划线接种待测菌，再点种金葡菌，培养后观察。
流感嗜血杆菌
流感嗜血杆菌（兔血+X、V因子）
流感粘液型菌落
大菌落为奈瑟菌
小菌落为嗜血杆菌
咽拭子培养（未加万古霉素）
咽拭子培养（加万古霉素）
标本接种后点种金葡菌
卫星现象
琼脂卫星试验（脑心琼脂）
X、V因子需求试验→又称纸片法卫星试验
① 不含血液琼脂平板上密集划线接种待测菌或0.5麦 氏单位菌悬液涂抹接种。 ②将X、V、X+V因子三种纸片贴在接种细菌的平板上 纸片间相距5cm以上，（因为V因子分子量小，扩散 距离远），否则会出现X因子假阳性结果。 ③培养后观察结果 ④ （X+V）因子结果阴性的几种可能原因
一、分类
根据伯杰细菌分类手册，嗜血杆菌属隶属于 巴斯德菌科。本菌属共包括17个菌种，其中与临 床有关的有9种，分别是流感嗜血杆菌、副流感 嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌、副溶血嗜血杆菌、杜 克雷嗜血杆菌、埃及嗜血杆菌、嗜沫嗜血杆菌、 副嗜沫嗜血杆菌和迟缓嗜血杆菌。后三者现划归 “凝聚杆菌属”。
二、临床意义
1、致病因子：细菌结构成分、毒素和酶类。
2、在假单胞菌属细菌引起的临床感染中占70%。 3、可引起机体各个系统的感染。 4、眼部感染的铜绿假单胞菌可合成胶原酶，引起角膜 穿孔而失明。
临床常见标本的细菌学检验
43
痰液的采集
采集指征
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰 可伴有胸痛、气急甚至呼吸困难，肺部可闻及湿罗音；
X线检查肺部有炎性浸润或胸腔积液 严重可致感染性休克和呼衰。
44
痰液的采集和运送
采集方法
自然咳痰法 支气管镜采集法 防污染毛刷采集 法 支气管肺泡灌洗法 胃内采痰法 小儿取痰法
45
痰液的采集和运送
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
30
尿液的检验
菌落计数
定量接种尿液培养标本 根据细菌在平板上的生长情况 定量报告每毫升尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）
31
尿液标本常见的病原菌
病原菌
正常 菌群
G+
金葡 化脓性链球菌 肠球菌 结核分枝杆菌 葡萄球菌 枯草杆菌 非致病性棒状杆菌
注意培养时间
加做无菌对照
涂片染色检查
结合培养细菌的生长特点对照判断
8
（四）检验程序
标本选择 采集（保存运送）
观察、前处理
直接 涂片
报告
快速 检验
报告
分离培养 （需、厌氧、CO2培养）
可疑菌落 (必要时先做培养)
增菌(需氧、厌氧、 CO2培养)
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
难辨梭菌
杆菌
G-
沙门菌 大肠埃希菌
志贺菌 霍乱弧菌 副溶血弧菌
弯曲菌 小肠结肠炎耶尔森菌
变形杆菌
41
粪便检验的临床意义
肠道致病菌
霍乱弧菌-霍乱，志贺菌-细菌性痢疾，伤寒沙门菌-伤寒；
食物中毒
沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、副溶血弧菌。
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
痰液的采集
采集指征
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰 可伴有胸痛、气急甚至呼吸困难，肺部可闻及湿罗音；
X线检查肺部有炎性浸润或胸腔积液 严重可致感染性休克和呼衰。
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痰液的采集和运送
采集方法
自然咳痰法 支气管镜采集法 防污染毛刷采集 法 支气管肺泡灌洗法 胃内采痰法 小儿取痰法
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痰液的采集和运送
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
30
尿液的检验
菌落计数
定量接种尿液培养标本 根据细菌在平板上的生长情况 定量报告每毫升尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）
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尿液标本常见的病原菌
病原菌
正常 菌群
G+
金葡 化脓性链球菌 肠球菌 结核分枝杆菌 葡萄球菌 枯草杆菌 非致病性棒状杆菌
注意培养时间
加做无菌对照
涂片染色检查
结合培养细菌的生长特点对照判断
8
（四）检验程序
标本选择 采集（保存运送）
观察、前处理
直接 涂片
报告
快速 检验
报告
分离培养 （需、厌氧、CO2培养）
可疑菌落 (必要时先做培养)
增菌(需氧、厌氧、 CO2培养)
涂片检查 生化试验 血清学鉴定 药敏试验 动物试验 报告
难辨梭菌
杆菌
G-
沙门菌 大肠埃希菌
志贺菌 霍乱弧菌 副溶血弧菌
弯曲菌 小肠结肠炎耶尔森菌
变形杆菌
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粪便检验的临床意义
肠道致病菌
霍乱弧菌-霍乱，志贺菌-细菌性痢疾，伤寒沙门菌-伤寒；
食物中毒
沙门菌、弯曲菌、葡萄球菌、副溶血弧菌。
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第二节 临床常见标本的细菌学检验
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5.血培养标本的运送
要求：（1）采集后的血培养瓶应在1小时之内 送往实验室。
（2）血培养瓶在接种前和接种后均不 得冷藏和冷冻。
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血液标本的处理
❖ 1.自动化血培养系统： ❖ 立即放入仪器内，直到仪器报警提示阳性瓶后进行下一步操作。 ❖ 2.传统血培养瓶： ❖ 放入35 ℃温箱孵育，每日观察，若有生长情况立即转种，若第7天仍
内一般不超过3次。 精选ppt课件最新
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4.采血量
要求： 成年患者推荐的采血量为每套不少于10ml，每 瓶不少于5ml。 婴幼儿患者推荐的采血量为每瓶不少于2ml。
说明：血标本采集的量是影响检出率的最重要的因素。成人
血培养采血量在2~30ml之间，病原菌检出率与采血量成正 比例增长。每增加1ml的血液，病原菌的检出率增加3.2%。 儿童患者因为血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于 成人。对血液病患者或者血容量相对较低的患者建议使用儿 童瓶来减少血液的采集量增加病原菌的检出率。
3.穿刺点消毒不使用低效消毒剂，切勿在静滴的静脉 处取血；
4.不宜从静脉导管或静脉留置口取血，若从该部位取 血，应在申请单上注明；最好同时静脉取血，以求 进行比对；
5.不推荐静脉血直接入瓶，以免血量控制不好或对患 者不利；
6.不主张换针头入瓶，以免增加污染的机会。
7.采血前把血培养瓶从冰箱拿出后，待恢复至室温后
不建议采集
（1）动脉血，因其诊断价值没有比静脉血更大； （2）静脉留置导管，因其常伴有高污染率。
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✓ 所谓“双瓶双侧”，是指从一个部位采血 接种一套培养瓶，再从另一部位采血接种另 一套培养瓶。（通常是双臂）
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法尿 和液 操标 作本 流细 程菌 检 验 方
Uricult 操作步骤
Uricult 菌落比密图
Uricult 细菌种类标准模式 图
4.特殊菌落培养 （1）淋病奈瑟菌培养 （2）厌氧菌培养 （3）结核分枝杆菌培养 5.报告方式 培养48h无细菌生长，报告“2 天无细菌生长”。查见细菌，报告菌名及 其菌落计数（菌落数/ml）和药敏结果。
（二）检验方法和操作流程
1.涂片检查 （1）革兰染色镜检 （2）梅毒螺旋体涂片检查 2.分离培养 （1）普通细菌培养 （2）淋病奈瑟菌培养 （3）阴道加特纳菌培养 （4）报告方式：如查见淋病奈瑟菌、阴道加特 纳菌等病原菌，报告菌名和药敏结果。
验生 方殖 法道 和标 操本 作细 流菌 程学 检
临床标本的细菌 学检查
（2）男性
（一）标本采集
1. 中段尿标本采集法 （1）女性：
（3）儿童、婴儿
（4）两侧肾盂尿
（5）膀胱穿刺
（二）检验方法和操作流程 ■1.涂片检查 （1）一般细菌及淋病奈瑟菌 （2）念珠菌 （3）结核分枝杆菌 ■ 2.一般细菌培养 如培养2d无细菌生长，即可弃 去。 （1）倾注平板法 （2）平板接种环法 （3）标准接种环法：若定量接种环含量为.001ml， 则整个平板菌落数超过100个，可报告“菌落数 >105/ml”。 （4）Uricult 半定量法
二 生殖道标本
正常的内生殖器是无菌的，而外生殖器 （包括男性尿道口和女性阴道）有多种细 菌寄生。 查见病原菌提示有细菌感染。 常见的病原菌主要有葡萄球菌、肠球菌、 链球菌、淋病奈女性生殖道标本 2.男性生殖道标本 3.梅毒螺旋体标本
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奥梅梁斯基法则：
100cm2 5’→10L A t → A·t *10L
100*50
N
50000N
XX个/M3= A·t
100*5
*1000= *10
→39.32N A·t （49.0；20’）
结果报告应注明 “普通琼脂平板培养”/“血 琼
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
4 、如病人已实施治疗，应在酚红葡萄糖肉汤 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 中加入相应对抗剂。
磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml.
青霉素→2u青霉素酶/ml
其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
（五）痰： 1、先让病人用清水嗉口数次，
以除去口腔内大量杂菌。 2、取清晨第一口咳出的痰，
（晨痰） 3、作结核杆菌培养可收集24h
痰。（冰箱保存）
（六）胆汁： 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用
1、行十二指肠引 流水收集“胆汁乙”1015ml。
革兰氏染色
球菌 G+杆菌:根据菌落特征,细 菌染色性,形态排列选择恰当 生化反应,免疫学反应及动物 试验 报告
G-杆菌
KIA
菌落描述:颜色,大小,溶血性,透明度,硬度,润 湿度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,边缘整齐度
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
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• 3、封闭性脓肿 要求先消毒局部皮肤或黏膜表面 后，用注射器抽取，将脓液注入无菌试管内送检 。疑为厌氧菌感染时，应作床边接种或置厌氧运 送培养基内送检。
•临床标本的细菌 •19
谢谢
•临床标本的细菌 •20
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• （二）标本采集 • １、采集时间 一般以晨痰为好；支气管扩张症患者清晨
起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。
• 2、标本采集方法 • （1）自然咳痰法 在留取痰之前，用清水反复漱口，以减
少常居菌的污染，应从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内 。
• （2）气管镜下采集法：在病灶附近用导管吸或用支气管 刷直接取得标本。
•临床标本的细菌学检 验
第一节 血液及骨髓标本 一、 血液标本 （一）标本采集 静脉采血，应严格消毒血培养瓶盖和皮肤，用无菌
采血装置采血，不换针头，直接将血液标本注入 血培养瓶中，注入血液后应颠倒混匀以防凝固。 采用真空采血装置可降低污染。
•临床标本的细菌 •2
• 2、采血部位 以无菌操作在患者肘静脉采血。儿童和 婴幼儿其采血的部位多为颈部和腹股沟，这两个部位 皮肤皱褶多，易造成皮肤寄生菌污染，因此必须严格 消毒。消毒过程同成人，但氯己定（洗必泰）不能用 于2个月以下婴儿。成人不建议采集动脉血，不宜从 静脉导管或静脉留置口取血，因其常伴有高污染率。 如果必须从留置导管内采血，必须同时从外周静脉采 集另外一个血培养标本，有助于对比和结果解释。静 脉导管采血时，不要弃去初段血，不要用抗凝剂冲洗 。
• （6）尿标本采集应及时送检，2h内进行接种，否 则应置4~8℃冰箱保存，冷却保存标本时间不得超 过8h。
•临床标本的细菌 •15
• 二、生殖道标本 • （一）标本采集 • 1、女性生殖道标本 由妇产科医师用无菌棉拭采
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• （二）标本采集 • １、采集时间 一般以晨痰为好；支气管扩张症患者清晨
起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。
• 2、标本采集方法 • （1）自然咳痰法 在留取痰之前，用清水反复漱口，以减
少常居菌的污染，应从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内 。
• （2）气管镜下采集法：在病灶附近用导管吸或用支气管 刷直接取得标本。
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第一节 血液及骨髓标本 一、 血液标本 （一）标本采集 静脉采血，应严格消毒血培养瓶盖和皮肤，用无菌
采血装置采血，不换针头，直接将血液标本注入 血培养瓶中，注入血液后应颠倒混匀以防凝固。 采用真空采血装置可降低污染。
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• 2、采血部位 以无菌操作在患者肘静脉采血。儿童和 婴幼儿其采血的部位多为颈部和腹股沟，这两个部位 皮肤皱褶多，易造成皮肤寄生菌污染，因此必须严格 消毒。消毒过程同成人，但氯己定（洗必泰）不能用 于2个月以下婴儿。成人不建议采集动脉血，不宜从 静脉导管或静脉留置口取血，因其常伴有高污染率。 如果必须从留置导管内采血，必须同时从外周静脉采 集另外一个血培养标本，有助于对比和结果解释。静 脉导管采血时，不要弃去初段血，不要用抗凝剂冲洗 。
• （6）尿标本采集应及时送检，2h内进行接种，否 则应置4~8℃冰箱保存，冷却保存标本时间不得超 过8h。
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• 二、生殖道标本 • （一）标本采集 • 1、女性生殖道标本 由妇产科医师用无菌棉拭采
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革兰染色过程
革兰染色过程
一紫二碘三酒精 第四复红皆水冲
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阴性菌红阳性紫
第二节
细菌分离培养和鉴定
一.培养基的种类和选择
（一）.培养基的种类
按物理状态分： 液体、半固体、固体培养基
高层
斜面
高层斜面
平板
按用途分：基础、营养、鉴别、选择和特殊培养基
克 氏 双 糖 铁 培 养 基 （KIA）
（二）培养基的选择
1.血平板（BA） 2.巧克力平板 3.中国蓝或伊红美蓝平板
4.麦康凯平板（MAC）
5.SS平板 6.碱性琼脂或TCBS琼脂平板 7.血液增菌培养基 8.营养肉汤
二.分离培养
主要用于各种临床标本或培养物中有一种或多 种细菌时，对某一种细菌进行分离，使细菌在平 板上分散生长，便于观察单个菌落特性，也易于 挑去单个菌落进行纯化（分纯），进行下一步鉴 定和药敏试验等。
◆ 培养基 ：葡萄糖蛋白胨水 ◆ 方法 将待测纯菌接种于葡萄糖蛋白胨水中， 孵育后加入甲基红试剂，立即观察结果。 ◆结果应用
6. V-P试验
◆ 原理 ：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成 中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气 中的氧氧化生成二乙酰，二乙酰再与培养基中精氨酸、肌 酐等所含的胍基结合，形成红色化合物（胍缩二乙酰）。
知识延伸
a 细菌分解乳糖需要两种酶，一种是半乳糖苷渗 透酶，可是乳糖通过细菌的细胞壁进入菌体内 另一种是β-半乳糖苷酶，可将乳糖分解成半 乳糖和葡萄糖，进而再分解。缓慢分解乳糖的 细菌缺乏渗透酶，不能将乳糖快速运到细胞内 所以需几天乳糖才能被分解。 b 乳糖：葡萄糖和半乳糖通过β-半乳糖苷键连接 ONPG：邻硝基酚取代了葡萄糖，其分子小很多 可直接进入菌体内。
第十九章临床常见标本的细菌学检验PPT课件
3.检验方法 （1）涂片检查
♦普通细菌检查：取沉淀涂片、染色、镜检 ♦淋病奈瑟菌检查
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦念珠菌检查 ♦结核分枝杆菌检查：应与耻垢分枝杆菌相鉴别 ♦钩端螺旋体检查：暗视野显微镜下，发现一串细密亮珠、两 端呈钩状且沿纵轴旋转运动的螺旋体时，报告找到螺旋体
第二节 临床常见标本的细菌学检验
不明原因发热 2～3份
2份
6.标本的运送和保存 立即送检，室温保存，切勿冷藏
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2. 检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）普通细菌的培养与鉴定
♦增菌培养：培养阳性指证及疑似菌列表
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2.检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）涂片检查 ♦ 霍乱弧菌检查： ①动力检查：动力及制动试验 ②染色镜检：革兰染色，发现鱼群状排列的革兰阴性弧菌， 可做出初步报告 ♦ 酵母样菌检查
第二节 临床常见标验、结果评价及建议 ♦ 阴性报告：48小时无细菌生长者，报告“48小时培养
无细菌生长”
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（三）临床意义
♦ 尿液中细菌数少于104cfu／ml或104～105cfu/ml之间， 反复多次查出同一细菌时，一般也认为是病原菌。 ♦ 同份尿液中检出三种或以上不同微生物，应认为标本采 集或处理不当被污染。 ♦ 尿液细菌学检查结果，应结合临床考虑综合
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本章内容
1 第一节 概述 2 第二节 临床常见标本的细菌学检验
学习目标及重点
学习目标： 掌握临床常见标本的采集、送检和处理的原则 临床常见标本细菌学检验程序、检验方法及结果报告 熟悉TAT、危急值在临床实际工作中的应用 临床标本常见病原菌的检验方法及鉴定要点 了解临床标本细菌学检验的临床意义 临床标本中正常菌群的分布及常见致病菌 本章重点： ★病毒标本采集和运送原则 ★病毒学诊断及鉴定常用方法 ★病毒培养的基本操作
♦普通细菌检查：取沉淀涂片、染色、镜检 ♦淋病奈瑟菌检查
第二节 临床常见标本的细菌学检验
♦念珠菌检查 ♦结核分枝杆菌检查：应与耻垢分枝杆菌相鉴别 ♦钩端螺旋体检查：暗视野显微镜下，发现一串细密亮珠、两 端呈钩状且沿纵轴旋转运动的螺旋体时，报告找到螺旋体
第二节 临床常见标本的细菌学检验
不明原因发热 2～3份
2份
6.标本的运送和保存 立即送检，室温保存，切勿冷藏
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（二）微生物学检验 1.常见病原菌
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2. 检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）普通细菌的培养与鉴定
♦增菌培养：培养阳性指证及疑似菌列表
第二节 临床常见标本的细菌学检验
2.检验程序
第二节 临床常见标本的细菌学检验
3.检验方法 （1）涂片检查 ♦ 霍乱弧菌检查： ①动力检查：动力及制动试验 ②染色镜检：革兰染色，发现鱼群状排列的革兰阴性弧菌， 可做出初步报告 ♦ 酵母样菌检查
第二节 临床常见标验、结果评价及建议 ♦ 阴性报告：48小时无细菌生长者，报告“48小时培养
无细菌生长”
第二节 临床常见标本的细菌学检验
（三）临床意义
♦ 尿液中细菌数少于104cfu／ml或104～105cfu/ml之间， 反复多次查出同一细菌时，一般也认为是病原菌。 ♦ 同份尿液中检出三种或以上不同微生物，应认为标本采 集或处理不当被污染。 ♦ 尿液细菌学检查结果，应结合临床考虑综合
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本章内容
1 第一节 概述 2 第二节 临床常见标本的细菌学检验
学习目标及重点
学习目标： 掌握临床常见标本的采集、送检和处理的原则 临床常见标本细菌学检验程序、检验方法及结果报告 熟悉TAT、危急值在临床实际工作中的应用 临床标本常见病原菌的检验方法及鉴定要点 了解临床标本细菌学检验的临床意义 临床标本中正常菌群的分布及常见致病菌 本章重点： ★病毒标本采集和运送原则 ★病毒学诊断及鉴定常用方法 ★病毒培养的基本操作
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29、在一切能够接受法律支配的人类 的状态 中，哪 里没有 法律， 那里就 没有自 由。— —洛克
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30、风俗可以造就法律，也可以废除 法律。 ——塞·约翰逊
谢谢
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
临床标本的细菌学检验
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26、我们像鹰一样，生来就是自由的 ，但是 为了生 存，我 们不得 不为自 己编织 一个笼 子，然 后把自 己关在 里面。 ——博 莱索
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27、法律如果不讲道理，即使延续时 间再长 ，也还 是没有 制约力 的。— —爱·科 克
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28、好法律是由坏风俗创造出来的。 ——马 克罗维 乌斯