细菌学检验基本技术ppt课件
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细菌学检验基本技术共56页
第一节 样本的采集与送检
在公共卫生及预防医学领域所涉及的细菌学检验样 本种类繁多，包括来自食品、化妆品、涉水产品、 消毒及卫生用品、环境及物品（水、土壤、空气， 各种物品）、正常人体及临床等的样本。
许欣
1
一、临床样本的采集与送检
（一）血及骨髓样本的采集 1. 采样时间：发热期、用药之前、 病情发展 2. 采样部位及频率：多部位、高频率 3. 样本采集的量：成人血量10ml，婴儿1ml～2ml，儿
养基或pH7.0的甘油PBS 3. 注意事项：无菌操作、可能厌氧培养
许欣
3
一、临床样本的采集与送检
（四）痰及上呼吸道样本的采集 1. 采样时间：晨痰、鼻咽拭子 2. 采样方法：自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰
法、气管穿刺法等 ；咽拭子 3. 注意事项：先漱口、结核分枝杆菌和真菌可4℃保存
许欣
15
二、不染色检查
细菌的活体观察，主要用于观察动力 悬滴法——凹玻片
压滴法——平玻片
许欣
16
三、染色检查
常用碱性染料（美蓝、孔雀绿、碱性复红、结晶紫、 沙黄等）
单染色法，复染色法，特殊结构染色法（鞭毛、芽孢、 荚膜等），负染色法、荧光染色法，革兰染色法（结 晶紫、碘液、95%酒精、碱性复红），抗酸染色法 （分枝杆菌、石炭酸复红、美蓝）
许欣
13
第二节 细菌的形态结构检查法
了解标本中有无细菌及其大致的数量。 验证培养物是否为纯种。 形态检查结果可做初步诊断。 不染色检查法和染色检查法。 借助显微镜对形态、大小、排列、结构的直接观察。
许欣
14
一、显微镜检查
1、普通光学显微镜(light microscope)：分辨率0.2μm， 用于细菌染色标本的观察。
在公共卫生及预防医学领域所涉及的细菌学检验样 本种类繁多，包括来自食品、化妆品、涉水产品、 消毒及卫生用品、环境及物品（水、土壤、空气， 各种物品）、正常人体及临床等的样本。
许欣
1
一、临床样本的采集与送检
（一）血及骨髓样本的采集 1. 采样时间：发热期、用药之前、 病情发展 2. 采样部位及频率：多部位、高频率 3. 样本采集的量：成人血量10ml，婴儿1ml～2ml，儿
养基或pH7.0的甘油PBS 3. 注意事项：无菌操作、可能厌氧培养
许欣
3
一、临床样本的采集与送检
（四）痰及上呼吸道样本的采集 1. 采样时间：晨痰、鼻咽拭子 2. 采样方法：自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰
法、气管穿刺法等 ；咽拭子 3. 注意事项：先漱口、结核分枝杆菌和真菌可4℃保存
许欣
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二、不染色检查
细菌的活体观察，主要用于观察动力 悬滴法——凹玻片
压滴法——平玻片
许欣
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三、染色检查
常用碱性染料（美蓝、孔雀绿、碱性复红、结晶紫、 沙黄等）
单染色法，复染色法，特殊结构染色法（鞭毛、芽孢、 荚膜等），负染色法、荧光染色法，革兰染色法（结 晶紫、碘液、95%酒精、碱性复红），抗酸染色法 （分枝杆菌、石炭酸复红、美蓝）
许欣
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第二节 细菌的形态结构检查法
了解标本中有无细菌及其大致的数量。 验证培养物是否为纯种。 形态检查结果可做初步诊断。 不染色检查法和染色检查法。 借助显微镜对形态、大小、排列、结构的直接观察。
许欣
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一、显微镜检查
1、普通光学显微镜(light microscope)：分辨率0.2μm， 用于细菌染色标本的观察。
细菌的检查方法ppt课件
细菌学诊断
原理：分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围 在肽聚糖的外面，不易着色；分枝菌酸结合染料 结实。
用途：分枝杆菌的鉴定
方法
初染：石炭酸复红 〔初染加温延伸染色时 间〕
二、细菌感染的检查 细菌学诊断
致病菌的检验程序
普通琼脂平板
血平板
标 选择培育基 分别
本
培育
察看菌落性状、溶血性、色素 ——初步鉴别
普通光学显微镜
暗视野显微镜
相差显微镜
隧道显微镜
一、形状学的检查
〔二〕不染色标本的检查
一、形状学的检查
〔三〕染色标本的检查 1、单染法 2、复染法 革兰染色 抗酸染色 3、特殊染色法
革兰染色〔Gram stain〕
方法
•涂片 •枯燥 •固定 •染色：
初染：结晶紫
媒染：碘液 脱色：95%酒精
复染：苯酚复红或沙黄
细菌学诊断
细菌学诊断
初染：结晶紫 媒染：碘液 脱色：95%酒精 复染：苯酚复红或沙黄
G+金黄色葡萄球菌 紫色 G-大肠杆菌 红色
革兰染色〔Gram stain〕 原理：细胞壁构造 用途: 细菌分类 了解细菌致病性 选择用药
细菌学诊断
抗酸染色
碱性美兰细菌学诊断1617致病菌的检验程序普通琼脂平板血平板选择培养基分离培养细菌学诊断观察菌落性状溶血性色素初步鉴别纯培养生化反应测定挑取可疑菌落涂片染色镜检血清学鉴定18细菌分离培养分离培养是微生物学诊断的金标准是最可靠的传统诊断技术
第六节 细菌的检查方法
一、细菌形状的检查
〔一〕显微镜 普通光学显微镜 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜 电子显微镜 扫描隧道显微镜
挑取可疑菌落
涂片、染色、镜检
细菌检验技术ppt课件
+ 原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐 作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯 一氮源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳 酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是 指示剂呈碱性反应。
+ 培养基：枸盐酸盐培养基（淡绿色）
+ 试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色， pH7.6以上呈蓝色）
3、玻璃器材的清洗
★新购置的玻璃器材：1％～2％盐酸浸泡－→清水 清洗
★用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷－→清水清洗 细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷
★盛培养基试管和平皿：高压灭菌－→趁热倒出－ →洗涤剂洗刷－→清水冲洗
★吸管：3％来苏浸泡－→清水冲洗 ★玻片和盖玻片：3％来苏和清洁液浸泡－→清水
冲洗；染色后的玻片，应肥皂水煮沸10min再洗 涤
★含油脂的器皿：单独灭菌
（四）培养箱
1、电热恒温培养箱 2、二氧化碳培养箱 3、厌氧培养箱
（五）培养基 培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖 的综合营养基质。 1、培养基的成分及作用
+ 营养物质：肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血 液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐
+水 + 凝固剂：琼脂、明胶 + 抑制剂 + 指示剂
调配 溶化 矫正pH 过滤澄清 分装 灭菌
培养基灭菌
★ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟 ★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌
检定
保存
二、细菌接种与培养技术 （一）无菌技术 1、细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台
+ 糖发酵试验 + 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验） + 甲基红试验 + V-P试验 + 七叶苷水解试验 + Β－半乳糖苷渗透酶试验
常见临床标本的细菌学检验ppt课件
奥梅梁斯基法则：
100cm2 5’→10L A t → A·t *10L
100*50
N
50000N
XX个/M3= A·t
100*5
*1000= *10
→39.32N A·t （49.0；20’）
结果报告应注明 “普通琼脂平板培养”/“血 琼
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
4 、如病人已实施治疗，应在酚红葡萄糖肉汤 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 中加入相应对抗剂。
磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml.
青霉素→2u青霉素酶/ml
其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
（五）痰： 1、先让病人用清水嗉口数次，
以除去口腔内大量杂菌。 2、取清晨第一口咳出的痰，
（晨痰） 3、作结核杆菌培养可收集24h
痰。（冰箱保存）
（六）胆汁： 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用
1、行十二指肠引 流水收集“胆汁乙”1015ml。
革兰氏染色
球菌 G+杆菌:根据菌落特征,细 菌染色性,形态排列选择恰当 生化反应,免疫学反应及动物 试验 报告
G-杆菌
KIA
菌落描述:颜色,大小,溶血性,透明度,硬度,润 湿度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,边缘整齐度
经营者提供商品或者服务有欺诈行为 的，应 当按照 消费者 的要求 增加赔 偿其受 到的损 失，增 加赔偿 的金额 为消费 者购买 商品的 价款或 接受服 务的费 用
细菌学检验ppt课件
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细菌学检验
第一节 一、概述
假单胞菌属
假单胞菌属一大群氧化分解葡萄糖、专性需氧氧化酶 阳性（少数菌种阴性）、有鞭毛的革兰阴性杆菌。生 化反应非常相似，代表菌种为铜绿假单胞菌。
（一）分类
根据伯杰细菌鉴定手册，按照rRNA 同源性，假单胞菌属分为5个群和未定rRNA同源群的 有关种。临床常见的多位于第Ⅰ群和第Ⅴ群。
扁平、湿润有金属光泽，有生姜气味的灰绿色或黄绿色菌 落菌落周围有透明溶血圈。
◆ SS、MAC：
微小半透明菌落，48小时后菌落及周围常呈棕绿色。
3、生化反应
1）氧化酶+、精氨酸水解+ 2）葡萄糖、木糖：O型 3) 吲哚4) 明胶+/-、枸橼酸盐+/- 、硝酸盐还原+
鉴定思路
◆ 特征明显者：溶血现象、氧化酶+、色素、 特殊气味。 ◆特征不明显者：
3）核酸检测
3、分离培养与鉴定
1）形态学
2）培养特性
1）专性需氧→液体培养基有菌膜生长。 2）温度：最适温度25-30℃，4 ℃不生长，42 ℃生长 3）产生多种水溶性色素（绿脓素、青脓素等）。 4）培养时产生特殊气味，菌落表面有金属光泽
5）血平板上可出现透明溶血现象。
胶冻状菌落（MAC）
（二）临床意义
1、自然界分布广泛，可存在于医院各种环境中。
2、在非发酵菌感染中占70-80%。
3、是医院感染的主要病原菌
（三）微生物学检验 1. 检验程序（P135）
2、鉴定
1）菌体形态 2）培养温度 3）氧的需求→严格需氧 4）营养要求 5）色素 6）耐受性强：理化因素和药物。
假单胞菌（革兰染色）
经培养后形成圆形、中等大小、表面光滑、湿润边缘整齐、 不溶血的菌落，但菌下的培养基常呈绿色。多数菌株产生黄色素
细菌学检验
第一节 一、概述
假单胞菌属
假单胞菌属一大群氧化分解葡萄糖、专性需氧氧化酶 阳性（少数菌种阴性）、有鞭毛的革兰阴性杆菌。生 化反应非常相似，代表菌种为铜绿假单胞菌。
（一）分类
根据伯杰细菌鉴定手册，按照rRNA 同源性，假单胞菌属分为5个群和未定rRNA同源群的 有关种。临床常见的多位于第Ⅰ群和第Ⅴ群。
扁平、湿润有金属光泽，有生姜气味的灰绿色或黄绿色菌 落菌落周围有透明溶血圈。
◆ SS、MAC：
微小半透明菌落，48小时后菌落及周围常呈棕绿色。
3、生化反应
1）氧化酶+、精氨酸水解+ 2）葡萄糖、木糖：O型 3) 吲哚4) 明胶+/-、枸橼酸盐+/- 、硝酸盐还原+
鉴定思路
◆ 特征明显者：溶血现象、氧化酶+、色素、 特殊气味。 ◆特征不明显者：
3）核酸检测
3、分离培养与鉴定
1）形态学
2）培养特性
1）专性需氧→液体培养基有菌膜生长。 2）温度：最适温度25-30℃，4 ℃不生长，42 ℃生长 3）产生多种水溶性色素（绿脓素、青脓素等）。 4）培养时产生特殊气味，菌落表面有金属光泽
5）血平板上可出现透明溶血现象。
胶冻状菌落（MAC）
（二）临床意义
1、自然界分布广泛，可存在于医院各种环境中。
2、在非发酵菌感染中占70-80%。
3、是医院感染的主要病原菌
（三）微生物学检验 1. 检验程序（P135）
2、鉴定
1）菌体形态 2）培养温度 3）氧的需求→严格需氧 4）营养要求 5）色素 6）耐受性强：理化因素和药物。
假单胞菌（革兰染色）
经培养后形成圆形、中等大小、表面光滑、湿润边缘整齐、 不溶血的菌落，但菌下的培养基常呈绿色。多数菌株产生黄色素
细菌学检验基本技术课件
液体培养法等。
倾注法是将样品与液体培养
04
基混合，然后倒入培养皿中，
使细菌在培养基上生长繁殖。
液体培养法是将样品与液体
06
培养基混合，然后在液体培
养基中培养细菌。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ菌培养技术
01
02 培养基的选择：根据细菌种类和生长
培养温度和时间：根据细菌种类和生
需求选择合适的培养基
长需求选择合适的培养温度和时间
C
代谢组学：研究细菌的代 谢途径和调控机制
D
系统生物学：研究细菌的 生物学系统及其相互作用
谢谢
03
04 培养方法：采用平板培养、液体培养、
细菌鉴定：通过观察细菌形态、生长
半固体培养等方法
特性、生化反应等方法进行细菌鉴定
细菌鉴定技术
01
形态学鉴定：通过显微镜观察 细菌的形态、大小、颜色等特 征进行鉴定
03
血清学鉴定：利用细菌的抗原 与抗体反应进行鉴定
05
生物信息学鉴定：利用生物信 息学方法，如基因序列比对、 系统发育分析等，进行鉴定
3
细菌学检验在医学、食品、环境等 领域具有广泛的应用
4
细菌学检验可以帮助诊断疾病、评 估食品安全、监测环境污染等
细菌学检验的重要性
01
细菌学检验是医学检 验的重要组成部分， 对疾病的诊断、治疗 和预防具有重要意义。
04
细菌学检验可以指导 抗生素的合理使用， 减少抗生素滥用和耐
药菌株的产生。
02
细菌学检验可以帮助 医生确定病原体，为 治疗提供依据。
快速检测技术的发展
01
免疫学检测：利用抗体和抗原
的特异性结合，快速检测细菌
《细菌基本检验技术》PPT课件
实验一 细菌检验在 液体、半固体培养基的生长表现及 意义。
❖ 掌握革兰染色法和熟悉细菌涂片的 制备。
❖ 掌握细菌和基本形态和特殊结构。
2
【器材】
❖ 显微镜、载玻片、察镜纸、小镊子、接种环、 酒精灯等
3
细菌染色标本的制作程序
涂片
干燥
固定
染色
4
染色方法 ❖革兰染色法（Gram stain） ❖芽胞染色法（spore stain）
❖ 1、早期皮肌炎患者，还往往伴 有全身不适症状，如-全身肌肉酸 痛，软弱无力，上楼梯时感觉两 腿费力；举手梳理头发时，举高 手臂很吃力；抬头转头缓慢而费 力。
结果 紫色：革兰阳性菌
红色：革兰阴性菌
8
芽胞染色法（spore stain）
方法： 涂片→干燥→固定→5%孔雀绿加温染 3～5min →水洗 →0.5%沙黄1min→水洗、晾干、油镜检
结果：菌体呈红色，芽胞呈绿色。
9
影响因素
染色关键：脱色时间的长短 其他影响因素：菌龄、涂片厚薄、染液
质量控制
革兰阳性菌——金黄色葡萄球菌 ATCC25923
革兰阴性菌——大肠埃希菌ATCC25922
10
三、拉丝试验
原理：革兰阴性菌的细胞壁在稀碱溶液中容易破 裂，释放出未断裂的DNA螺旋，使菌液呈粘性。
5
革兰染色法（Gram stain）
方法（改良快速法）
– 初染： 结晶紫＋等量NaHCO3 3～5s，水洗
– 媒染： 碱性碘液
3～5s，水洗
– 脱色： 丙酮酒精
3～5s，水洗
– 复染： 碱性稀释复红
3～5s，水洗
6
皮肌炎图片——皮肌炎的症状表现
❖ 皮肌炎是一种引起皮肤、肌肉、 心、肺、肾等多脏器严重损害的， 全身性疾病，而且不少患者同时 伴有恶性肿瘤。它的1症状表现如 下：
❖ 掌握革兰染色法和熟悉细菌涂片的 制备。
❖ 掌握细菌和基本形态和特殊结构。
2
【器材】
❖ 显微镜、载玻片、察镜纸、小镊子、接种环、 酒精灯等
3
细菌染色标本的制作程序
涂片
干燥
固定
染色
4
染色方法 ❖革兰染色法（Gram stain） ❖芽胞染色法（spore stain）
❖ 1、早期皮肌炎患者，还往往伴 有全身不适症状，如-全身肌肉酸 痛，软弱无力，上楼梯时感觉两 腿费力；举手梳理头发时，举高 手臂很吃力；抬头转头缓慢而费 力。
结果 紫色：革兰阳性菌
红色：革兰阴性菌
8
芽胞染色法（spore stain）
方法： 涂片→干燥→固定→5%孔雀绿加温染 3～5min →水洗 →0.5%沙黄1min→水洗、晾干、油镜检
结果：菌体呈红色，芽胞呈绿色。
9
影响因素
染色关键：脱色时间的长短 其他影响因素：菌龄、涂片厚薄、染液
质量控制
革兰阳性菌——金黄色葡萄球菌 ATCC25923
革兰阴性菌——大肠埃希菌ATCC25922
10
三、拉丝试验
原理：革兰阴性菌的细胞壁在稀碱溶液中容易破 裂，释放出未断裂的DNA螺旋，使菌液呈粘性。
5
革兰染色法（Gram stain）
方法（改良快速法）
– 初染： 结晶紫＋等量NaHCO3 3～5s，水洗
– 媒染： 碱性碘液
3～5s，水洗
– 脱色： 丙酮酒精
3～5s，水洗
– 复染： 碱性稀释复红
3～5s，水洗
6
皮肌炎图片——皮肌炎的症状表现
❖ 皮肌炎是一种引起皮肤、肌肉、 心、肺、肾等多脏器严重损害的， 全身性疾病，而且不少患者同时 伴有恶性肿瘤。它的1症状表现如 下：
临床细菌学检验技术ppt课件
革兰染色过程
革兰染色过程
一紫二碘三酒精 第四复红皆水冲
时间要看说明书
阴性菌红阳性紫
第二节
细菌分离培养和鉴定
一.培养基的种类和选择
（一）.培养基的种类
按物理状态分： 液体、半固体、固体培养基
高层
斜面
高层斜面
平板
按用途分：基础、营养、鉴别、选择和特殊培养基
克 氏 双 糖 铁 培 养 基 （KIA）
（二）培养基的选择
1.血平板（BA） 2.巧克力平板 3.中国蓝或伊红美蓝平板
4.麦康凯平板（MAC）
5.SS平板 6.碱性琼脂或TCBS琼脂平板 7.血液增菌培养基 8.营养肉汤
二.分离培养
主要用于各种临床标本或培养物中有一种或多 种细菌时，对某一种细菌进行分离，使细菌在平 板上分散生长，便于观察单个菌落特性，也易于 挑去单个菌落进行纯化（分纯），进行下一步鉴 定和药敏试验等。
◆ 培养基 ：葡萄糖蛋白胨水 ◆ 方法 将待测纯菌接种于葡萄糖蛋白胨水中， 孵育后加入甲基红试剂，立即观察结果。 ◆结果应用
6. V-P试验
◆ 原理 ：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成 中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气 中的氧氧化生成二乙酰，二乙酰再与培养基中精氨酸、肌 酐等所含的胍基结合，形成红色化合物（胍缩二乙酰）。
知识延伸
a 细菌分解乳糖需要两种酶，一种是半乳糖苷渗 透酶，可是乳糖通过细菌的细胞壁进入菌体内 另一种是β-半乳糖苷酶，可将乳糖分解成半 乳糖和葡萄糖，进而再分解。缓慢分解乳糖的 细菌缺乏渗透酶，不能将乳糖快速运到细胞内 所以需几天乳糖才能被分解。 b 乳糖：葡萄糖和半乳糖通过β-半乳糖苷键连接 ONPG：邻硝基酚取代了葡萄糖，其分子小很多 可直接进入菌体内。
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养基或pH7.0的甘油PBS 3. 注意事项：无菌操作、可能厌氧培养
许欣
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一、临床样本的采集与送检
（四）痰及上呼吸道样本的采集 1. 采样时间：晨痰、鼻咽拭子 2. 采样方法：自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰
法、气管穿刺法等 ；咽拭子 3. 注意事项：先漱口、结核分枝杆菌和真菌可4℃保存
许欣
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二、不染色检查
细菌的活体观察，主要用于观察动力 悬滴法——凹玻片
压滴法——平玻片
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三、染色检查
常用碱性染料（美蓝、孔雀绿、碱性复红、结晶紫、 沙黄等）
单染色法，复染色法，特殊结构染色法（鞭毛、芽孢、 荚膜等），负染色法、荧光染色法，革兰染色法（结 晶紫、碘液、95%酒精、碱性复红），抗酸染色法 （分枝杆菌、石炭酸复红、美蓝）
（二）采样点的选择 注意样品的代表性，河水、湖水、地下水、自来水 （三）采样器具 采样瓶、自动采样器、容器可加硫代硫酸钠
（四）样品送检及注意事项 4h内检验、可冷藏
许欣
9
五、消毒及卫生用品
（一）医疗卫生机构消毒及卫生用品 物表 ：5cm×5cm灭菌规格板，100cm2 区域 空气：高度150cm、距墙100cm；面积≤30m2，设
许欣
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第二节 细菌的形态结构检查法
了解标本中有无细菌及其大致的数量。 验证培养物是否为纯种。 形态检查结果可做初步诊断。 不染色检查法和染色检查法。 借助显微镜对形态、大小、排列、结构的直接观察。
许欣
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一、显微镜检查
1、普通光学显微镜(light microscope)：分辨率0.2μm， 用于细菌染色标本的观察。
许欣
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大肠杆菌革兰染色阴性
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19
金黄色葡萄球菌革兰染色阳性
许欣
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变形杆菌周身鞭毛
许欣
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绿脓杆菌单鞭毛
许欣
22
肺炎链球菌荚膜
许欣
23Байду номын сангаас
钩端螺旋体
许欣
24
霍乱弧菌
许欣
25
破伤风芽胞杆菌
许欣
26
第三节 细菌的分离培养方法
所谓细菌的分离培养就是提供某细菌生长所需的各种条 件（营养、温度、湿度、酸碱度和气体），将其从微生 物混合物中培养出来的方法。
细菌学检验
细菌学检验基本技术
许欣
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第一节 样本的采集与送检
在公共卫生及预防医学领域所涉及的细菌学检验样 本种类繁多，包括来自食品、化妆品、涉水产品、 消毒及卫生用品、环境及物品（水、土壤、空气， 各种物品）、正常人体及临床等的样本。
许欣
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一、临床样本的采集与送检
（一）血及骨髓样本的采集 1. 采样时间：发热期、用药之前、 病情发展 2. 采样部位及频率：多部位、高频率 3. 样本采集的量：成人血量10ml，婴儿1ml～2ml，儿
一条对角线上内、中、外3点；面积 ＞ 30m2，设4 角及中央5点，暴皿5min；或用采样器 手/皮肤粘膜：含中和剂棉拭子，5cm×5cm规格板 医疗用品：破坏、棉拭子 消毒剂：1ml加至9ml中和剂中
许欣
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五、消毒及卫生用品
（二）一次性使用的卫生用品 同一批号3个运输包装中至少随机抽取12个最小包装
许欣
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六、空气样本
按照流量的有效数字分，3位数以上为大流量(≥500 L/min)，2~3位数为中流量(499L/min～11 L/min)，1 位数为小流量(≤10L/min)。
按照采样器所用介质性质又可分为固体及液体采样器。 按采样器的工作原理可分为六种：撞击式、沉降式、过
滤式、静电吸附式、旋风式和离心撞击式采样器。
童3ml～5ml；当怀疑为真菌感染时，应采集双份量， 分别作双相培养(37℃/28℃)。骨髓1 ml～2 ml。 4. 样本的送检：尽快，室温 5. 注意事项：同时需氧和厌氧培养
许欣
3
一、临床样本的采集与送检
（二）尿液样本的采集 1. 采样时间：晨尿、用药前
2. 采样方法：10ml，中段尿、肾盂尿、导尿 3. 注意事项：无菌操作，用药前 （三）粪便样本的采集 1. 采样时间：急性期、新鲜粪便 2. 采样方法：自然排便、直肠拭子、Cary-Blair运送培
许欣
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六、空气样本
（二）空气中细菌等微生物采样的介质 采样介质(包括培养基)对细菌等微生物具有支撑、黏附、
保护和生长作用。常用有凡士林、聚硅酮，氧化烯二十 二烷酮(OED)和SGB(糖、甘油、牛血清白蛋白) （三）空气中细菌等微生物采样方法及送检 1. 平板沉降法：参见医院空气采样规定。 2. 空气采样器采样：常用Andersen采样器
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一、临床样本的采集与送检
（五）其它临床样本 化脓和创伤样本：棉拭子 脑脊液、胆汁、胸水、腹水、心包液、关节液和鞘膜液
等：穿刺 生殖道：棉拭子 组织样本：内镜 炎症或组织坏死部位：手术
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四、生活饮用水细菌学检验样本
（一）水样采集
许多水体随时间和空间会发生很大变化，要采集具有代 表性的样品，必须定出合理的采样规划。
2、暗视野显微镜(dark-field microscope)：具有暗视野 聚光器，用于观察不染色标本活菌的形态、运动方式。
3、相差显微镜(phase contrast microscope)：具有环状光 栅聚光器和相差物镜，既可观察活体细胞的外形和运动 方式，又能观察其内部细微结构及这些结构的数量。
量；1/4用于检测、1/4用于留样、2/4就地封存准备复 测。
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六、空气样本
平板沉降法和采样器采集法 （一）空气微生物采样器分类 按照采样方式的不同可分为两类(Ⅰ和Ⅱ类)，Ⅰ类是将
微生物直接采到固体培养基上(如Andersen采样器)， Ⅱ类是把微生物先采到液体或其它介质上，再转种到培 养基或细胞上显示(如Porton采样器)。
在细菌的分离培养过程中，必须采用无菌技术或称无菌 操作。
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一、培养基的制备
（一）培养基的种类： 1. 按用途分类
基础培养基：仅最基本的营养成分。 营养培养基：在基础培养基上加入葡萄糖、血液、血清等。 增菌培养基：多为液体培养基，一般含有抑制剂，且是具有
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一、临床样本的采集与送检
（四）痰及上呼吸道样本的采集 1. 采样时间：晨痰、鼻咽拭子 2. 采样方法：自然咳痰法、支气管镜采集法、胃内采痰
法、气管穿刺法等 ；咽拭子 3. 注意事项：先漱口、结核分枝杆菌和真菌可4℃保存
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二、不染色检查
细菌的活体观察，主要用于观察动力 悬滴法——凹玻片
压滴法——平玻片
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三、染色检查
常用碱性染料（美蓝、孔雀绿、碱性复红、结晶紫、 沙黄等）
单染色法，复染色法，特殊结构染色法（鞭毛、芽孢、 荚膜等），负染色法、荧光染色法，革兰染色法（结 晶紫、碘液、95%酒精、碱性复红），抗酸染色法 （分枝杆菌、石炭酸复红、美蓝）
（二）采样点的选择 注意样品的代表性，河水、湖水、地下水、自来水 （三）采样器具 采样瓶、自动采样器、容器可加硫代硫酸钠
（四）样品送检及注意事项 4h内检验、可冷藏
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五、消毒及卫生用品
（一）医疗卫生机构消毒及卫生用品 物表 ：5cm×5cm灭菌规格板，100cm2 区域 空气：高度150cm、距墙100cm；面积≤30m2，设
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第二节 细菌的形态结构检查法
了解标本中有无细菌及其大致的数量。 验证培养物是否为纯种。 形态检查结果可做初步诊断。 不染色检查法和染色检查法。 借助显微镜对形态、大小、排列、结构的直接观察。
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一、显微镜检查
1、普通光学显微镜(light microscope)：分辨率0.2μm， 用于细菌染色标本的观察。
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大肠杆菌革兰染色阴性
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金黄色葡萄球菌革兰染色阳性
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变形杆菌周身鞭毛
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绿脓杆菌单鞭毛
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肺炎链球菌荚膜
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23Байду номын сангаас
钩端螺旋体
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霍乱弧菌
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破伤风芽胞杆菌
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第三节 细菌的分离培养方法
所谓细菌的分离培养就是提供某细菌生长所需的各种条 件（营养、温度、湿度、酸碱度和气体），将其从微生 物混合物中培养出来的方法。
细菌学检验
细菌学检验基本技术
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第一节 样本的采集与送检
在公共卫生及预防医学领域所涉及的细菌学检验样 本种类繁多，包括来自食品、化妆品、涉水产品、 消毒及卫生用品、环境及物品（水、土壤、空气， 各种物品）、正常人体及临床等的样本。
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一、临床样本的采集与送检
（一）血及骨髓样本的采集 1. 采样时间：发热期、用药之前、 病情发展 2. 采样部位及频率：多部位、高频率 3. 样本采集的量：成人血量10ml，婴儿1ml～2ml，儿
一条对角线上内、中、外3点；面积 ＞ 30m2，设4 角及中央5点，暴皿5min；或用采样器 手/皮肤粘膜：含中和剂棉拭子，5cm×5cm规格板 医疗用品：破坏、棉拭子 消毒剂：1ml加至9ml中和剂中
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五、消毒及卫生用品
（二）一次性使用的卫生用品 同一批号3个运输包装中至少随机抽取12个最小包装
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六、空气样本
按照流量的有效数字分，3位数以上为大流量(≥500 L/min)，2~3位数为中流量(499L/min～11 L/min)，1 位数为小流量(≤10L/min)。
按照采样器所用介质性质又可分为固体及液体采样器。 按采样器的工作原理可分为六种：撞击式、沉降式、过
滤式、静电吸附式、旋风式和离心撞击式采样器。
童3ml～5ml；当怀疑为真菌感染时，应采集双份量， 分别作双相培养(37℃/28℃)。骨髓1 ml～2 ml。 4. 样本的送检：尽快，室温 5. 注意事项：同时需氧和厌氧培养
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一、临床样本的采集与送检
（二）尿液样本的采集 1. 采样时间：晨尿、用药前
2. 采样方法：10ml，中段尿、肾盂尿、导尿 3. 注意事项：无菌操作，用药前 （三）粪便样本的采集 1. 采样时间：急性期、新鲜粪便 2. 采样方法：自然排便、直肠拭子、Cary-Blair运送培
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六、空气样本
（二）空气中细菌等微生物采样的介质 采样介质(包括培养基)对细菌等微生物具有支撑、黏附、
保护和生长作用。常用有凡士林、聚硅酮，氧化烯二十 二烷酮(OED)和SGB(糖、甘油、牛血清白蛋白) （三）空气中细菌等微生物采样方法及送检 1. 平板沉降法：参见医院空气采样规定。 2. 空气采样器采样：常用Andersen采样器
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一、临床样本的采集与送检
（五）其它临床样本 化脓和创伤样本：棉拭子 脑脊液、胆汁、胸水、腹水、心包液、关节液和鞘膜液
等：穿刺 生殖道：棉拭子 组织样本：内镜 炎症或组织坏死部位：手术
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四、生活饮用水细菌学检验样本
（一）水样采集
许多水体随时间和空间会发生很大变化，要采集具有代 表性的样品，必须定出合理的采样规划。
2、暗视野显微镜(dark-field microscope)：具有暗视野 聚光器，用于观察不染色标本活菌的形态、运动方式。
3、相差显微镜(phase contrast microscope)：具有环状光 栅聚光器和相差物镜，既可观察活体细胞的外形和运动 方式，又能观察其内部细微结构及这些结构的数量。
量；1/4用于检测、1/4用于留样、2/4就地封存准备复 测。
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六、空气样本
平板沉降法和采样器采集法 （一）空气微生物采样器分类 按照采样方式的不同可分为两类(Ⅰ和Ⅱ类)，Ⅰ类是将
微生物直接采到固体培养基上(如Andersen采样器)， Ⅱ类是把微生物先采到液体或其它介质上，再转种到培 养基或细胞上显示(如Porton采样器)。
在细菌的分离培养过程中，必须采用无菌技术或称无菌 操作。
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一、培养基的制备
（一）培养基的种类： 1. 按用途分类
基础培养基：仅最基本的营养成分。 营养培养基：在基础培养基上加入葡萄糖、血液、血清等。 增菌培养基：多为液体培养基，一般含有抑制剂，且是具有