微生物学检验常用的技术方法
微生物学检验常用的技术方法
微生物学检验常用的技术方法分离培养技术是微生物学检验中最基本的技术方法之一、它是指通过将微生物样本分离到无菌培养基上进行单菌落培养，通过观察和研究微生物在不同培养基上的生长特性、菌落形态、产生的代谢产物等来判断其特性。
分离培养技术能够从复杂的微生物样品中鉴定和分离出单一微生物种类，为后续的鉴定和分析提供基础。
形态学观察技术是对微生物外形结构进行观察和描述的技术方法。
通过使用光学显微镜、电子显微镜等仪器，对微生物的形态结构、细胞壁结构、鞭毛、纤毛等特征进行观察和记录。
形态学观察技术能够直接观察到微生物的细胞形态、大小、形状等特征，为微生物的鉴定和分类提供重要依据。
生化鉴定技术是通过对微生物的生化代谢过程进行分析和检测，从而对微生物进行鉴定的方法。
生化鉴定技术主要包括对微生物的生长能力、代谢产物、酶活性等进行测试和分析，通过比较不同微生物种类之间的差异和特征，识别和区分微生物的种类和品系。
分子生物学技术在微生物学检验中起着重要的作用。
其中最常用的技术是PCR技术（聚合酶链反应），它能够从微生物样品中扩增出特定的DNA片段，通过测序等方法进行分析和鉴定。
PCR技术能够快速、准确地检测微生物的存在和种类，并且具有高灵敏度和特异性。
免疫学技术主要应用于病原微生物的检测和鉴定。
其中包括免疫荧光技术、酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫电泳等。
这些技术利用抗原抗体的特异性结合作用来检测微生物的存在和种类，对于特定微生物的检测和鉴定具有高度的特异性和敏感性。
除了上述常用的技术方法外，微生物学检验还可以使用质谱技术、流式细胞术、蛋白质组学等高级技术方法来进行微生物的检测和鉴定。
这些技术方法在微生物学领域的发展和应用，为微生物学研究和临床实验室提供了更多的手段和可能性。
微生物检验技术知识点
微生物检验技术知识点1.培养方法：培养是微生物检验的基础，通过将样品接种到培养基上，使微生物在合适的环境中繁殖生长。
培养方法包括常规培养和不同培养手段。
常见的培养手段有液体培养、固体培养和胶体培养等。
2.鉴定方法：微生物的鉴定是判断其种属、属或是菌株的过程。
传统的鉴定方法包括形态学、生理生化特性和生物学特性等，而现代鉴定方法则应用了分子生物学等技术。
常用的鉴定技术有酶联免疫吸附试验（ELISA）、脱氧核糖核酸（DNA）杂交和聚合酶链反应（PCR）等。
3.纯化和分离方法：对于复杂的微生物种群，需要进行纯化和分离，以便对特定的微生物进行进一步的研究。
纯化和分离方法包括传统的分光技术、平板法和筛选法，以及最新的流式细胞术、脉冲场凝胶电泳（PFGE）和DNA测序技术等。
4.对微生物的抗生素敏感性检测：抗生素敏感性是指微生物对抗生素的反应情况。
抗生素敏感性检测可以帮助医生选择最有效的抗生素治疗细菌感染疾病。
目前常用的抗生素敏感性检测方法包括纸片扩散法、E测试和微量稀释法等。
5.流行病学监测：微生物检验技术在流行病学监测中发挥着重要作用。
通过对微生物种群的监测和分析，可以及时发现并控制传染病的传播。
流行病学监测常用的技术包括病原体分子鉴定、序列分析和生物信息学分析等。
6.污染控制技术：微生物检验技术也在环境和食品安全方面发挥着重要作用。
通过对环境和食品中微生物的检验，可以评估污染程度，并采取相应的控制措施。
常用的污染控制技术包括灭菌消毒、高温杀菌和辐照等。
7.微生物基因工程：微生物基因工程是指利用基因工程技术对微生物进行改造，以生产有用的产物或者改善微生物的特性。
微生物基因工程的应用广泛，可以用于制药、农业、环境工程等领域。
常见的微生物基因工程技术包括基因克隆、基因敲除和基因转导等。
总之，微生物检验技术是一门广泛应用于医学、生物学、环境工程等领域的技术。
通过不断地研究和创新，微生物检验技术将为疾病诊断、污染控制和资源利用等问题提供更好的解决方法。
临床微生物学检验技术(85页)
应用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性，而沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。
4．β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验） 原理：乳糖发酵过程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解。有些细菌只有半乳糖苷酶，因而只能迟缓发酵乳糖，所有乳糖快速发酵和迟缓发酵的细菌均可快速水解邻硝基酚-β-D-半乳糖苷（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG）而生成黄色的邻硝基酚。用于枸橼酸菌属、亚利桑那菌属与沙门菌属的鉴别。 方法：将待试菌接种于ONPG肉汤中，35℃水浴或孵箱孵育18~24h，观察结果。
3．甲基红（MR）试验 原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解为甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培养基pH下降至4.5以下时，加入甲基红指示剂呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、醛、酮、气体和水），培养基pH在 5.4以上，加入甲基红指示剂呈桔黄色。 方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中，35℃孵育48~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基红指示剂，立即观察结果。
二、染色标本
细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类，因此染色标本的检查在细菌的初步鉴定中应用最广，起着非常重要的作用。 （一）常用染料：酸性染料、碱性染料、复合染料。 （二）常用的染色方法：革兰染色、抗酸染色、 荧光染色。
革兰染色
二、培养接种
（一）划线接种 1.方法 斜线法 、曲线法 、方格法 、放射法 、四格法。
斜线法
微生物检验技术
微生物检验技术
微生物检验技术是一种研究微生物结构、表型、数量及其功能的
技术。
它在食品、药品、食品添加剂安全性评价，消费品的可靠性等
方面发挥着重要作用。
微生物检验技术主要有三大类：1.基因检验技术；2.细胞检验技术；3.组织检验技术。
基因检验技术又称基因分析技术，是指可以用于检测特定基因片
段的技术。
它包括基因克隆、外显子分析、PCR技术、芯片分析等技术。
它可以用来研究微生物基因组结构、突变和重组，检测在不同微生物
组织或细胞中的蛋白表达差异，以及用于生产药物和生物材料。
细胞检验技术是指通过体外实验，通过细胞涂片或涂膜工艺检测
细菌、真菌、酵母等微生物及它们之间相互作用的技术。
该技术可用
于检测原料、中间体和成品在过程中的水质状况，以及评价药物的生
物可溶性、药效特征等。
组织检验技术是指利用显微镜或电镜等技术，把微生物细胞或以
细胞为单位的整晶体结构进行形态学分析的技术。
它可以用于研究微
生物的结构特征和关联性，以及对新药物、新抗生素的筛选。
微生物检验技术对食品、药品及食品添加剂安全性评价、消费品
可靠性等方面发挥着重要作用。
这些技术不仅可以用于研究微生物特性，还可以用于检测污染，检测过程中微生物的增殖情况，以及筛选
新的药物和抗生素。
做好它们的安全性评价，不仅能对食品、药品等
安全有效性更好地进行评价，还能为消费者提供更安全更可靠的消费
体验。
微生物学检验常用的技术方法
微生物学检验常用的技术方法随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。
医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。
微生物形态学检查细菌形态学检查是细菌检查的重要方法之一。
它是细菌分类和鉴定的基础。
根据其形态、结构和染色反应性，为进一步鉴定提供参考依据。
1、显微镜检查由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。
一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。
常用显微镜有如下几种。
1.普通光学显微镜采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。
显微镜的分辨率为波长的二分之一，即0.2μm，而肉眼可见的最小形象为0.2mm。
故用油(浸)镜放大1000倍，能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。
普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
2.暗视野显微镜它通常用于观察非染色微生物的形态和运动。
在普通显微镜中安装暗场集中器后，光线无法从中间直接穿透，视野变暗。
当试样从聚光器边缘接收到斜射光时，它可能会散射。
因此，可以在暗场背景下观察到细菌或螺旋体等明亮的微生物。
3.相衬显微镜相差显微镜利用相差板的光珊作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光强度差。
在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异，可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
4.荧光显微镜荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同。
主要区别在于光源、滤光片和集中器。
目前，大多数实验仪器使用落光装置。
高压汞灯通常用作光源，可以发出紫外线或蓝紫光。
滤波器有两种：激励滤波器和吸收滤波器。
除了普通的亮场集中器外，还可以使用蓝光荧光显微镜可用暗视野聚光器，以加强荧光与背景的对比。
食品中的微生物检验技术
食品中的微生物检验技术食品安全是人们日常生活中非常重要的一环，而微生物检验技术在保障食品安全方面起着关键作用。
微生物污染可能导致食品中的疾病和食物中毒事件发生。
因此，对于食品中微生物的检验至关重要，以确保食品的质量和安全。
本文将探讨食品中常用的微生物检验技术，以及其在食品行业中的应用。
一、菌落计数法菌落计数法是一种常用的微生物检验技术，用于测量食品中微生物的数量和增长情况。
通常，该方法要求将食品样品制成适当的稀释液，并将其平均均匀地涂布在富营养培养基上，然后在适当的温度下培养一段时间。
随后，通过观察和计数不同菌落的数量来评估食品样品中微生物的数量和种类。
菌落计数法的优点在于操作简单、成本低廉且能获得准确的结果。
然而，它只能提供关于微生物总数的信息，而无法检测特定的病原微生物。
因此，在食品行业中该方法通常用于检测食品中的常见的微生物。
二、PCR技术PCR（聚合酶链式反应）技术在食品微生物检验中得到了广泛应用。
PCR可通过扩增和检测食品中微生物的DNA，从而确认食物是否受到微生物的污染。
此外，PCR还能帮助鉴定特定微生物的存在，包括常见的食源性病原体。
PCR技术的优点在于其高灵敏度、高特异性和快速检测结果。
然而，该方法也存在一些局限性，如对设备要求较高，同时需要针对目标微生物设计和合成特异性引物。
此外，PCR技术还需要进行核酸提取和预处理等繁琐的操作步骤。
三、快速检测方法为了满足食品生产厂商和监管机构对食品微生物检验结果的快速反馈需求，快速检测方法在食品行业中得到了广泛应用。
这些方法通常基于免疫学技术，如ELISA（酶联免疫吸附试验）和免疫层析技术。
快速检测方法的优点在于操作简单、结果快速，并且能够在实验室以外的场所进行。
此外，它们还具有较高的灵敏度和特异性。
然而，这些方法可能对微生物种类有一定的限制，且可能不如传统的培养方法准确。
四、基因测序技术基因测序技术在食品微生物检验中的应用越来越广泛。
通过对食品样品中微生物基因组的测序分析，可以更准确地鉴定微生物的种类和数量，以及评估其对人体健康的潜在威胁。
食品微生物检验和检测技术
食品微生物检验和检测技术食品微生物检验和检测技术是指对食品样品进行微生物检验和检测的技术方法。
微生物的污染对食品的质量与安全具有重要影响，因此必须对食品中的微生物进行检验和检测，确保食品的卫生安全。
1. 菌落计数法：菌落计数法是一种常用的食品微生物检验方法，通过将食品样品接种在适当的培养基上，培养一定时间后，根据菌落的形状、颜色、大小等特征进行计数。
菌落计数法可以测定食品中的总菌落数、霉菌数、大肠菌群数等指标，对于评估食品的卫生质量具有重要意义。
2. PCR法：PCR法是一种利用聚合酶链反应技术对食品中微生物进行检测的方法。
该方法通过寻找并扩增微生物DNA片段，利用特定的引物和聚合酶，在经过多次扩增反应后，可以检测到微生物DNA的存在与数量。
PCR法具有高灵敏度、高特异性和高效性的优点，能够快速准确地检测食品样品中的微生物。
3. ELISA法：ELISA法是一种常用的免疫学分析方法，可以通过检测食品样品中微生物所产生的抗原或抗体来确定微生物的存在与数量。
ELISA法具有灵敏度高、选择性好、简便快速等优点，广泛应用于食品微生物检测中。
4. 快速检测技术：快速检测技术是指通过分子生物学、免疫学等方法，结合微生物的快速培养和检测手段，能够在较短时间内对食品样品中的微生物进行快速检测的技术。
这些技术包括Butterfield法、PETRIfilm法、ATP生物发光法等，具有操作简便、敏感性高、准确性强等特点，可以大大缩短食品微生物检测的时间。
1. 食品卫生监督：食品微生物检验和检测技术能够对食品加工过程中的微生物污染进行监督与控制，保证食品的卫生质量，确保食品安全。
3. 疾病防控：食品微生物检验和检测技术可以对食品中的病原微生物进行及时检测，发现病原微生物污染的食品，采取相应的措施进行隔离与处理，防止疾病的传播与流行。
食品微生物检验和检测技术是保证食品安全、质量稳定以及疾病防控的重要手段和方法，对于保障广大人民群众的身体健康具有重要意义。
微生物学常用技术
微生物学常用技术
1. 原位杂交：一种用于检测细胞内特定RNA 或DNA 序列的技术。
它使用标记的探针与目标RNA 或DNA 的互补序列进行杂交，然后使用显微镜观察杂交信号。
2. PCR：聚合酶链反应，一种体外复制DNA 的技术。
它使用DNA 建模酶、起始物和引物分别为反向和正向链引导反应，形成两条相同的DNA 分子。
3. 限制性酶切：一种通过特定酶切断DNA 链的技术。
它可以用于构建DNA 序列库、分析基因组结构和筛选重组DNA 片段等应用。
4. 克隆：通过将DNA 片段插入宿主细胞中复制的方法，使DNA 在数量和空间上得到扩增。
克隆是制造重组DNA 或生产重组蛋白的重要技术。
5. RFLP：限制性片段长度多态性，一种通过检测DNA 片段长度差异来确定基因型的技术。
它可以用于人类基因组和微生物基因组的分析。
6. 蛋白质电泳：分离蛋白质并确定它们的分子量和电荷。
这是鉴定微生物特征蛋白质和确定其功能的重要技术。
7. 荧光原位杂交：一种使用荧光标记探针的原位杂交技术。
它可以广泛应用于分离、定量和可视化微生物群落中的不同成分。
8. 全基因组测序：一种测定一个生物体完整基因组的序列的技术。
它可以提供比传统方法更全面的生物信息学数据，有助于深入了解微生物系统的功能和多样性。
微生物分子验证方法
微生物分子驗證方法全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：微生物分子验证方法是指利用分子生物学技术对微生物进行鉴定和检测的方法。
随着科学技术的不断发展，分子验证方法已经成为微生物学研究和实践中不可或缺的一部分。
它不仅可以更加准确地鉴定微生物的种类和品质，还可以快速、高效地进行检测和分析。
本文将介绍一些常用的微生物分子验证方法，以及它们在不同领域的应用。
一、PCR技术PCR（聚合酶链反应）技术是一种常用的微生物分子验证方法。
通过PCR技术可以在微生物体内特异性地扩增某一段特定的DNA序列，从而对微生物的种类进行鉴定。
PCR技术具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优点，可以检测极微量的微生物。
PCR技术还可以在短时间内完成大批样本的检测，适用于高通量的微生物鉴定和检测。
二、基因测序技术基因测序技术是一种通过测定微生物DNA序列来鉴定微生物的方法。
基因测序技术可以获得微生物的全基因组序列信息，从而对微生物的种类和基因组结构进行深入分析。
通过基因测序技术可以快速、准确地鉴定微生物的种类，并了解微生物的遗传变异和进化过程。
基因测序技术在微生物学研究、环境监测、食品安全等领域具有广泛的应用价值。
三、质谱技术质谱技术是一种通过分析微生物体内的代谢产物来鉴定微生物的方法。
质谱技术可以通过测定微生物代谢产物的分子质量和碎片谱图等信息，快速、准确地鉴定微生物的种类和代谢途径。
质谱技术具有高分辨率、高灵敏度和高准确性的优点，可以对微生物的多种代谢产物进行全面、快速地检测和分析。
质谱技术在微生物学领域的研究和应用方面具有重要意义。
四、荧光原位杂交技术荧光原位杂交技术是一种通过检测微生物的核酸序列来鉴定微生物的方法。
荧光原位杂交技术可以利用荧光标记的核酸探针与微生物DNA或RNA特异结合，从而在显微镜下观察到目标微生物的位置和数量。
荧光原位杂交技术具有高特异性、高敏感性和高分辨率的优点，可以对微生物的种类和数量进行快速、直观地检测和分析。
微生物检测的方法
微生物检测的方法微生物检测在食品安全、环境保护、疾病诊断等领域具有重要作用。
为了确保检测结果的准确性和可靠性，了解并掌握各种微生物检测方法至关重要。
本文将为您详细介绍微生物检测的常见方法。
一、直接显微镜检测法直接显微镜检测法是通过显微镜观察样品中的微生物形态、数量和活性等特征，从而进行微生物检测的方法。
该方法简单、快速，适用于现场快速检测。
但缺点是准确度较低，对操作人员的技术要求较高。
二、分离培养法分离培养法是将样品中的微生物分离出来，然后在适宜的培养基上进行纯化培养，通过观察菌落的特征、生理生化实验等方法进行鉴定。
这是传统的微生物检测方法，具有较高的准确性和可靠性，但检测周期较长，操作较为繁琐。
三、分子生物学检测法1.PCR技术：聚合酶链式反应（PCR）技术通过特异性引物扩增目标微生物的基因片段，从而实现微生物的快速检测。
该方法灵敏度高、特异性强，适用于微量微生物的检测。
2.实时荧光定量PCR技术：实时荧光定量PCR技术是在PCR反应过程中，通过荧光信号的变化实时监测目标基因的扩增情况。
该方法具有更高的灵敏度和定量准确性，已广泛应用于微生物检测领域。
3.基因测序技术：基因测序技术通过对微生物基因进行测序，分析其遗传信息，从而实现微生物的鉴定和分类。
该方法准确性高、检测范围广，但成本较高，操作复杂。
四、免疫学检测法免疫学检测法是利用抗原与抗体的特异性结合反应进行微生物检测。
常见的方法有：1.酶联免疫吸附试验（ELISA）：通过抗原或抗体的固定、抗原与抗体的特异性结合以及酶标记的检测，实现微生物的检测。
该方法灵敏度高、特异性强，适用于大批量样品的检测。
2.免疫荧光技术：利用荧光标记的抗体与微生物抗原特异性结合，通过荧光显微镜观察荧光信号，实现微生物的检测。
该方法操作简便、速度快，但灵敏度相对较低。
五、生物传感器检测法生物传感器检测法是将生物识别元件（如抗原、抗体、酶等）与传感器结合，通过检测生物分子间的特异性反应，实现微生物的快速、灵敏检测。
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微生物学检验常用的技术方法
随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。
医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。
微生物形态学检查
细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。
一、显微镜检查
由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。
一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。
常用显微镜有如下几种。
1.普通光学显微镜
采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。
显微镜的分辨率为波长的二分之一，即0.2μm，而肉眼可见的最小形象为0.2mm。
故用油(浸)镜放大1 000倍，能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。
普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
2.暗视野显微镜
常用于观察不染色微生物形态和运动。
在普通显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中间直接透入，视野呈暗色，当标本接受从聚光器边缘斜射光后可发生散射，因此可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。
3.相差显微镜
相差显微镜利用相差板的光珊作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光强度差。
在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异，可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
4.荧光显微镜
荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同，主要区别在于光源、滤光片和聚光器。
目前实验仪器中大多数使用的是落射光装置，常用高压汞灯作为光源，可发出紫外光或蓝紫光。
滤光片有激发滤光片和吸收滤光片二种。
用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外，也
可用暗视野聚光器，以加强荧光与背景的对比。
本法适用于对荧光色素染色或与荧光抗体结合的细菌的检测或鉴定。
5.电子显微镜
用电子流作为光源，波长与可见光相比差几万倍，大大提高了分辨力，并用磁性电圈作为光学放大系统，放大倍数可达数万倍或几十万倍，常用于病毒颗粒和细菌超微结构的观察。
二、不染色标本检查
不染色标本一般可用于观察细菌形态、动力及运动情况。
细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。
有鞭毛的细菌运动活泼，无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。
梅毒苍白密螺旋体、钩端螺旋体、弯曲杆菌等的活菌各有特征鲜明的形态和运动方式，具有诊断意义。
常用的方法有压滴法、悬滴法和毛细管法等。
1.悬滴法
在洁净凹玻片的凹孔四周涂上凡士林，用接种环取一环菌悬液放在盖玻片中央，再将凹玻片的凹孔对准盖玻片中央的液滴并盖上，然后迅速翻转，轻压盖玻片，使其与凹孔边缘的凡士林粘紧封闭后置高倍镜下(或暗视野)观察。
2.压滴法
用接种环取一环菌悬液置于洁净玻片的中央，在菌悬液上轻轻盖上一盖玻片，注意避免产生气泡并防止菌悬液外溢，静止数秒钟后置高倍镜下明视野(或暗视野)观察。
3.毛细管法
三、染色标本检查
细菌标本经染色后，由于细菌与周围环境间在颜色上形成鲜明对比，故在普通光学显微镜下可清楚地观察到细菌的形态特征(如细菌的大小、形状、排列等)和某些特殊结构(如荚膜、鞭毛、芽孢等)，并可根据染色反应性对细菌加以分类鉴定。
(一)细菌染色的一般程序
细菌染色的一般程序是：涂片(干燥)—固定—染色(媒染)—(脱色)—(复染)。
1.涂片制备
血液、分泌物、排泄物、穿刺液和液体培养物，直接在载玻片上作薄膜涂片;尸检或感染动物组织，病变局部涂抹采样的棉拭子直接涂片。
固体培养基上的菌落或菌苔的制片，先用接种环取一环生理盐水置载玻片中央，再用无菌接种环取少量的培养物在生理盐水中磨匀，涂布成1cm2大小的涂面，置室温下自然干燥或远火慢慢烘干。
2.固定
目的是杀死细菌，凝固细菌蛋白及结构，便于染色;促使细菌粘附在载玻片上，避免在水洗过程中被水冲掉;改变细菌对染料的通透性，有利于菌细胞内结构的染色。
通常用火焰加热固定，将已干燥的涂片在火焰中迅速通过3次，以手背皮肤接触玻片不烫为佳。
3.染色
根据检验目的不同，选择不同的染色方法进行染色。
染色时滴加染液，以复盖标本为度。
4.媒染
凡能增强染料和被染物的亲和力，使染料固定于被染物及能引起细胞膜通透性改变的物质，称媒染剂。
常用的有明矾、鞣酸、金属盐和碘等，也有用加热法促进着色。
媒染剂可用于初染与复染之间，也可用于固定之后或含于固定液、染色中。
5.脱色
凡能使已着色的被染物脱去颜色的化学试剂称为脱色剂。
常用乙醇、丙酮等作为脱色剂。
脱色剂可以查出细菌与染料结合的稳定程度，作为鉴别染色之用。
6.复染
已脱色处理的细菌或其结构常以复染液作复染以便于观察。
复染液与初染液的颜色不同而成一鲜明对比。
复染不宜太强，以免掩盖初染的颜色。
主要用于厌养菌动力的检查。
通常选用60~70mm长。
0.5~1.0mm孔径的毛细管虹吸厌养菌悬液后，用火焰将毛细管两端熔封。
并用塑胶纸将毛细管固定在载玻片上，置高倍镜下暗视野观察。
微生物培养与分离方法
大多数细菌均可以通过人工方法进行微生物培养和微生物检测，而衣原体和病毒的分离培养往往需要活组织、鸡胚、特殊细胞株及动物接种。
只有将微生物培养出来才能对它进行研究、鉴定和应用。