DNA的定量测定
DNA的定量测定(二苯胺法)实验报告
DNA的定量测定(二苯胺法)实验报告实验目的：本实验旨在掌握用二苯胺法定量测定DNA含量的基本原理和方法。
实验原理：在酸性环境中加热，DNA被水解为嘌呤、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸。
其中脱氧核糖在酸性条件下，脱水生成ω-羟基-y-酮基戊糖，后者与二苯胺作用呈现蓝色，在595nm处有最大光吸收。
当样品DNA的含量在40-400µg范围时，光密度与DNA的浓度成正比。
样品中含有少量RNA不影响测定结果，但是蛋白质、脱氧核糖、阿拉伯糖和芳香醛等能与二苯胺形成各种各样有色物质，干扰结果。
在反应中加入少量乙醛，可以提高反应灵敏度。
试剂与仪器：DNA标准液、二苯胺试剂、样品溶液、试管与试管架、吸管与洗耳球、可见分光光度计。
DNA标准液曲线的制作与样品DNA含量的测定：取8支洁净干燥的试管，按表格操作。
混合后，于60度水浴中保温1小时，冷却至室温中，用分光光度计测定吸光值A595nm。
以DNA浓度为横坐标吸光值A595nm为纵坐标，绘制标准曲线，对照组标准曲线计算样品中DNA的含量。
实验结果与讨论：通过实验得出DNA标准曲线，y=0.0098x，求出X1=40.71µg/ml，X2=39.39µg/ml，平均DNA 浓度为40.05µg/ml，含量n%=40.05/100%=40.05%。
注意：文章中的一些数字和符号可能需要根据实际情况进行调整。
分析：本实验使用标准曲线求得的DNA浓度为40.05µg/ml。
在40-400µg范围内，光密度与DNA浓度成正比，因此使用标准曲线求得的浓度是准确的。
此外，DNA的标准曲线线性关系的R2为0.9966，证明DNA光密度的关系密切，因此求出的浓度也比较精确。
然而，本实验测得的DNA含量比整体水平偏低。
造成这种偏低的原因可能是以下几个方面：1.在吸取DNA溶液样品时，未充分摇匀，便吸取2.0mlDNA样液，造成DNA含量不均，从而导致实验存在误差。
DNA定量测定(二苯胺法)实验报告
DNA定量测定(二苯胺法)实验报告
实验目的：利用二苯胺法对DNA进行定量测定，获得DNA
的浓度信息。
实验原理：二苯胺法是一种常用的DNA定量测定方法。
其原
理是DNA与二苯胺反应生成发色产物，并在560 nm波长下
具有最大吸收量，通过测定吸光度来计算DNA的浓度。
在实
验中，先将待测的DNA样品与二苯胺溶液反应得到发色产物，然后通过比较其吸光度与已知浓度标准曲线的关系来计算待测样品的DNA浓度。
实验步骤：
1. 准备工作：将工作区域消毒，摆放实验所需仪器器材。
2. 制备标准曲线：依次稀释5 μg/mL的DNA溶液，得到一系
列不同浓度的DNA标准溶液。
将标准溶液与相同体积的二苯
胺溶液混合，反应10分钟。
然后在560 nm波长下测定溶液的吸光度，并绘制标准曲线。
3. 处理待测样品：将待测样品与相同体积的二苯胺溶液混合，反应10分钟。
然后在560 nm波长下测定溶液的吸光度。
4. 计算DNA浓度：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代
入计算公式，得到DNA的浓度。
实验结果：
标准曲线数据：（以吸光度为横坐标，DNA浓度为纵坐标）
吸光度（A） DNA浓度（μg/mL）
0.1 1
0.2 2
0.3 3
0.4 4
0.5 5
待测样品数据：
吸光度（A） = 0.25
根据标准曲线计算得到的DNA浓度为2.5 μg/mL
实验结论：根据二苯胺法对DNA的定量测定结果，待测样品的DNA浓度为2.5 μg/mL。
dna浓度和纯度的测定[优质文档]
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DNA浓度和纯度的测定可以有两种方法：分光光度法溴化乙锭法Ⅰ分光光度法：一、目的熟练掌握分光光度法检测DNA纯度和浓度的方法。
二、原理DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。
波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。
对标准样品来说，浓度为1μg / ml时，DNA钠盐的OD260＝0.02当OD260＝1时，dsDNA浓度约为50μg / mlssDNA浓度约为37μg / mlRNA浓度约为40μg / ml寡核苷酸浓度约为30μg / ml（youyu底物不同有差异）当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。
一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230，计算其比值来衡量样品的纯度。
经验值：纯DNA：O D260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染）纯RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7时表明有蛋白质或酚污染；＞2.0时表明可能有异硫氰酸残存）若样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量，可使用方案二的方法或其他方法进行估算。
三、材料、试剂及器具1、材料提取的PUC19样品、PUC19标准样品2、试剂灭菌重蒸水，TE缓冲液3、器皿石英比色皿；UV-240紫外分光光度计四、操作步骤1、UV-240紫外分光光度计开机预热10min.2、用重蒸水洗涤比色皿，吸水纸吸干，加入TE缓冲液后，放入样品室的S池架上，关上盖板。
3、设定狭缝后校零。
4、将标准样品和待测样品适当稀释（DNA5μl或RNA4μl用TE缓冲液稀释至1000μl）后，记录编号和稀释度。
5、把装有标准样品或待测样品的比色皿放进样品室的S架上，关闭盖板。
6、设定紫外光波长，分别测定230nm、260nm、280nm波长时的OD值。
DNA含量测定的原理
DNA含量测定的原理
DNA是遗传信息的载体，它的含量在生物体的基因组里占有重要的地位。
DNA量的测定可以通过多种方法来进行，例如物理测定、生化测定和实验分析等。
在这篇文章中，我们将主要介绍DNA量测定的原理，以及常用的含量测定方法。
一、 DNA量测定的原理
DNA量测定实际上是使用一种特定技术，来测定某一基因组中DNA含量。
DNA量测定的原理很简单，即DNA量直接由 DNA量来确定，而DNA量又取决于测定基因组物质的总量。
DNA一种类似细丝的分子，它的大小约在2.5nm右，其重量可以通过把 DNA子转化为基因组物质的重量来确定。
因此，DNA含量可以通过把基因组物质的重量除以DNA子的重量来计算出来。
二、常用的DNA量测定方法
1.理测定法
物理测定法是最常用的DNA量测定方法，它的基本原理是通过对DNA大小和重量进行测定，从而计算出 DNA含量。
物理测定法中最常用的方法是超微重量分析法、电泳法和紫外光谱法。
2.化测定法
生化测定法也是常用的DNA量测定方法，它的基本原理是通过一系列生化反应来测定DNA含量。
生化测定法中最常用的方法是定序法和PCR。
3.验分析法
实验分析法也是常用的DNA量测定方法，它的基本原理是通过一系列实验分析，来测定DNA含量。
实验分析法中最常用的方法是放射性标记法和周期转换测定法。
综上所述，DNA量测定是一种研究DNA常见方法。
不同的DNA量测定方法具有各自的便利性，可以根据研究需求选择不同的方法来进行测定。
DNA的定量测定
实验八DNA的定量测定一、实验目的学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的方法。
二、原理核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法和分别针对DNA和RNA 的颜色反应方法。
本实验采用针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。
在酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在595nm有最大吸收，在40～400μg/mL范围内其峰值与DNA含量成正比。
DNA +三、试剂和器材1. 试剂200μg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂2. 器材可见分光光度计、恒温水浴锅、分析天平四、操作步骤1. 标准曲线的制作取12只试管分成6组，按下表操作。
取2管的平均值，以DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。
试管0 1 2 3 4 5标准DNA/mL 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0蒸馏水/mL 2 1.6 1.2 0.8 0.4 04 4 4 4 4 4二苯胺试剂/mL60℃恒温水浴中保温1h，冷却，在595nm波长处比色2. 样品的测定取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇匀，60℃保温1h，然后在595nm波长出测定光密度值。
根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应的DNA 的ug数，按下式计算待测样品的DNA的含量。
DNA%＝待测样品中测得的DNA的mg数 X 100待测样品液中样品的mg数五、注意事项其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等都对实验有干扰，测定前应尽可能除去。
六、思考题1、DNA含量测定的方法有哪些？各有何优缺点？2、简述二苯胺法测DNA的基本原理。
DNARNA的定量与纯度的测定-LCC的日志-网易博客
DNARNA的定量与纯度的测定-LCC的日志-网易博客DNA/RNA的定量与纯度的测定生物学实验 2009-05-13 22:01:29 阅读1231 评论0 字号：大中小一、实验目的学习、掌握紫外吸收法检测DNA浓度和纯度的原理和方法。
二、实验原理DNA/RNA在260nm处有最大的吸收峰，蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处。
因此，可以用260nm波长进行分光测定DNA浓度，OD值为1相当于大约50μg/ml 双链DNA。
如用1cm光径，用H2O稀释DNA/RNA样品n倍并以H2O为空白对照，根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度：DNA（mg/ml）=50×OD260读数×稀释倍数/1000。
RNA （mg/ml）=40×OD260读数×稀释倍数/1000。
DNA/RNA纯品的OD260/OD280为1.8或2.0，故根据OD260/OD280的值可以估计DNA的纯度。
若比值较高说明含有RNA，比值较低说明有残余蛋白质存在。
OD230/OD260的比值应在0.4-0.5之间，若比值较高说明有残余的盐存在.本实验室机器显示是OD260\OD230，则比值应在2-2.5之间，偏小则说明有残余盐剩余。
三、实验步骤1. 将制备的DNA悬浮溶解于TE缓冲液中[pH8.O, 1Ommo1/L的Tris缓冲液,内含〈1mmol/L EDTA〉]或悬浮溶解在灭菌水中(依据DNA含量加水)。
2. 用可扫描的紫外分光光度计测定制备的DNA/RNA的紫外吸收曲线，测定OD260和OD280，并计算比值：OD260/OD280，纯DNA的此比值约为1.8～2.0。
纯RNA的此比值约为大于2.0。
3. 根据：每毫升1微克的纯DNA的OD260值= 0.020，计算所得DNA的纯度；每毫升1微克的纯RNA的OD260值= 0.025，计算所得RNA的纯度；并讨论纯度较低的原因和解决办法。
生化-4DNA的紫外分光光度法定量测定-HZJ
光学原理
光的本质是电磁波，既有波动性， 又有微粒性。
c
光的速度
频率
＝c /
波长
电磁波谱
远紫外
近紫外
可见
近红外
中红外
远红外
(真空紫外)
1nm ~200nm
200nm 400nm 760 nm 2.5-3 m 25-40 m
~400nm ~ 780nm ~ 2.5-3 m ~25-
~1000 m
2、提取的DNA成涂布状： 操作过程中用力过猛，动作粗暴； 操作系统有污染。
3、与染色体DNA分离不全： 变性过程不完全；
二、DNA的紫外分光光度法定量测定
分光光度技术是利用物质特有的吸收光谱对其进 行定性、定量分析的实验技术。
特点 灵敏度高：测定下限可达10－5～10－6mol/L 准确度能够满足微量组分的测定要求： 相对误差1～2％ 操作简便快速 应用广泛
光吸收基本定律: Lambert-Beer定律
Lambert-Beer定律
A或D＝K C L
吸光度 摩尔消光系数 吸收物质的光径（cm）
溶液浓度（mol/L）
吸光度与浓度的关系 A = KLC
吸光度
0.00
光源
检测器 吸光度
0.22
L
光源
检测器
吸光度 L
0.42
光源
检测器
分光光度计的基本部件
1. 光源2. 单色器 吸5.收分检池光测光器单度色计器上是常把用混的合光光源波有分两解种为：单一波长光的装置。 （一光6.或般→测称由电量近比玻，装•光关紫色璃棱并置波。外镜杯或逐通光、石过级棱区比英放镜色制大时皿成，不、同比波色长的池光）折射率不同，折射率与波长成负相 注电意流：表可a、.•在见与衍记石光射光录英光区束或器栅玻垂和璃直数的钨；表字面丝b示刻. 灯规值划许格读多相数平同单行线；元，c.通清过洁光的干涉和衍射，形成
DNA的定量紫外光测定结果和讨论
DNA的定量紫外光测定结果和讨论在大多数基因组学过程中，DNA的定量和标准化是核酸纯化后的重要步骤。
因此，这些需要被纳入这个领域的所有工作流程中。
吸光度技术是该领域所有类型应用的标准，因为它具有广泛的灵活性和借助于特定经验消光系数来发现所有类型核酸浓度的能力。
在这里，Fluent实验室自动化解决方案和FluentControl软件证明了它们在为基因组程序中的工作流程增加动力和便利性方面的价值。
本文从Smart Commands功能的角度阐述了该系统的优势，它确保了简化的方法、无需手动计算以及更易于适应特定工作流。
这包括以下命令选项：用于液体处理的Fluent平台具有内置的微孔板读取器。
这允许建立系统，此后不需要操作员输入来产生量化和标准化结果。
除了这种简单性之外，该过程在25分钟或更短的时间内完成，包括设置定量板的9分钟，进行UV测量的5分钟，以及用移液器从标准化样品板上吸取样品的9分钟。
路径长度校正功能有助于使用预先指定的校正因子或读取器的自动校正功能来提高路径长度的DNA浓度计算的准确性。
直观的触摸工具触摸屏是一个用户界面，它实际上告诉操作员可以选择哪些选项（音量或浓度）以及有关设置工作站的说明。
这确保了该过程符合SOPs，并使该过程免受不想要的结果可变性来源的影响。
本实验采用UV定量测试的自动化装置，即Fluent平台，该平台具有使用过滤的一次性吸头的空气FCA、InfiniteR M200微孔板读取器和机器人夹持臂，所有这些都由FluentControl软件使用上述智能命令操作。
总体而言，标准化样品显示平均测量浓度为25.4 g/ml，CV为2.56%。
实验结果证明了Fluent自动化实验室溶液用于DNA紫外定量和标准化的高可靠性和重现性。
它的用户友好的触摸工具界面使操作的设置变得简单，也为快速适应特定工作流程提供了很大的空间，如核酸纯化后质量控制过程中所要求的。
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六、思考题
1、 DNA含量测定的方法有哪些？ 各有何优缺点？ 2、简述二苯胺法测DNA的基本原 理。
分光光度计
开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波 长调至测试用波长。仪器预热20分钟。 预热后，打开试样室盖（光门自动关闭），调 节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”，盖上试样 室盖，将盛有参比溶液的比色皿架置与校正位 置，使光电管受光，调节透过率“100%”旋钮， 使数字显示为“100.0”。连续几次调整“0”和 “100%”，仪器即可进行测定工作。 将选择开关置于“A”，调节吸光度调零旋钮， 使得数字显示为“.000”，然后将被测样品移入 光路，显示值即为被测样品的吸光度值。
样品的测定
取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇匀，沸水 中反应10分钟，冷却，然后在595nm波长出测定光 密度值。根据测得的光密度值，从标准曲线上查得 相应的DNA的ug数，按下式计算每100g兔肝组织中 的DNA的含量。
待测样品中测得的DNA的µg数 的 数 待测样品中测得的
DNA含量 DNA含量＝ 含量
试管
标准DNA/mL 标准 蒸馏水/mL 蒸馏水 二苯胺试剂 /mL
1 0 2 4
2 0.2 1.8 4
3 0.4 1.6 4
4 0.6 1.4 4
5 0.8 1.2 4
6 1.0 1.0 4
沸水中反应10分钟，冷却， 595nm波长处比色 沸水中反应 分钟，冷却，在595nm波长处比色 分钟 光密度值
图5 仪器外形图 1．数字显示器 2．吸光度调零旋钮 3．选择开关 4．吸光度调斜率电位器 5．浓度 ． ． ． ． ． 旋钮 6．光源室 7．电源开关 8．波长手轮 9．波长刻度窗 10．试样架拉手 ． ． ． ． ． 11．100%T旋钮 12．0%T旋钮 13．灵敏度调节旋钮 14．干燥器 ． 旋钮 ． 旋钮 ． ．
DNA的定量测定 的定量测定
实验目的
学习测定DNA含量的原理 掌握二苯胺法测定DNA含量的方法。
多种测定方法
紫外吸收法：核酸、核苷酸及其衍生物 的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共 轭双健系统（－C＝C一C＝C一），能够 强烈吸收250~280nm波长的紫外光。 定磷法 分别针对DNA和RNA某些特异的颜色反 应方法而建立的比色法
待测样品液中样品的g数 待测样品液中样品的 数
X 100
注意事项
糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等都对实验有干扰，测定前应 尽可能除去。 取样准确 选定一台分光光度计后，所有测定工作都在同一台上完成，以避 免不同仪器间的系统误差 二苯胺不容于水，取用和盛放二苯胺溶液的器皿应干燥，和DNA溶 液反应时迅速混合
100℃
DNA +
NH
冰醋酸，少量硫酸
蓝色复合物பைடு நூலகம்
试剂和器材 试剂
1mg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂
器材
可见分光光度计、恒温水浴锅、分析 天平
实验过程
标准曲线的制作
取6支试管，依次加入0、0.2、0.4、0.8、 和1.0mlDNA标准溶液。添加蒸馏水，使之 都成为2ml。然后各加入4ml二苯胺试剂， 混匀。于90摄氏度恒温水浴10min，冷却后 于595nm处进行比色测定。以DNA浓度为横 坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
二苯胺法的原理
强酸、加热条件下，可以使DNA中的嘌呤碱基与脱氧核糖间 的糖苷键断裂，而产生嘌呤碱基，脱氧核糖与嘧啶核苷酸。 其中2ˊ脱氧核糖在酸性环境中成为ω―羟基―γ―酮基戊醛， 此物与二苯胺反应生成蓝色化合物，在595nm处有最大吸收。 DNA在40-400µg范围内光密度与DNA浓度成正比。