人TLR4胞外段的克隆、表达及功能活性分析

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TLR4促进肿瘤细胞免疫逃逸和凋亡抵抗的分子机制研究

TLR4促进肿瘤细胞免疫逃逸和凋亡抵抗的分子机制研究一、本文概述随着对肿瘤发生发展机制的深入研究，越来越多的证据表明，肿瘤细胞能够利用多种机制逃避宿主免疫系统的攻击，从而实现免疫逃逸。

其中， toll样受体4（TLR4）作为一种重要的模式识别受体，在肿瘤免疫逃逸和凋亡抵抗中发挥了关键作用。

本文旨在深入探讨TLR4在肿瘤细胞免疫逃逸和凋亡抵抗中的分子机制，以期能为肿瘤免疫治疗提供新的思路和方法。

我们将对TLR4的基本结构和功能进行简要介绍，明确其在天然免疫和适应性免疫中的重要作用。

然后，我们将详细阐述TLR4如何被肿瘤细胞利用，通过调控免疫细胞的功能，实现免疫逃逸。

这包括但不限于抑制抗原提呈细胞的成熟和活化，抑制T细胞的增殖和活化，以及促进免疫抑制性细胞的生成和功能等。

接下来，我们将关注TLR4在肿瘤细胞凋亡抵抗中的作用。

我们将从凋亡信号通路的角度，探讨TLR4如何调控凋亡相关分子的表达，从而抵抗凋亡。

这包括但不限于抑制凋亡诱导信号的传递，下调凋亡执行分子的表达，以及促进抗凋亡分子的表达等。

我们将对TLR4在肿瘤免疫治疗中的潜在应用进行探讨。

我们将结合目前的研究进展，分析以TLR4为靶点的肿瘤免疫治疗策略的优点和挑战，以及未来的发展方向。

通过本文的综述，我们期望能够更深入地理解TLR4在肿瘤细胞免疫逃逸和凋亡抵抗中的分子机制，从而为肿瘤免疫治疗提供新的理论支持和实践指导。

二、TLR4与肿瘤免疫逃逸肿瘤免疫逃逸是指肿瘤细胞通过一系列机制逃避宿主免疫系统的攻击，从而得以在体内生长和扩散。

近年来，越来越多的研究表明，TLR4在这一过程中发挥着重要作用。

TLR4，即 Toll样受体4，是一种模式识别受体，能够识别并响应多种病原体相关分子模式（PAMPs）以及损伤相关分子模式（DAMPs），进而激活下游信号通路，诱导免疫应答。

在肿瘤微环境中，肿瘤细胞可以通过多种方式上调TLR4的表达。

这些方式包括但不限于基因突变、表观遗传学改变以及微环境信号的影响。

HMGB1-TLR4

㊃综述㊃HM G B1-T L R4/R A G E信号通路在A L I/A R D S中的研究进展秘乐范绍辉徐宇舒小燚王红嫚遵义医科大学第五附属(珠海)医院呼吸与危重症医学科519100通信作者:王红嫚,E m a i l2496453591@q q c o mʌ摘要ɔ急性肺损伤(A L I)/急性呼吸窘迫综合征(A R D S)是由弥漫性肺间质及肺泡水肿导致的急性呼吸功能不全㊂高迁移率族蛋白B1(HMG B1)作为A L I/A R D S炎症进展中重要的晚期炎性因子,可与其细胞表面受体T o l l样受体4(T L R4)㊁晚期糖基化终产物受体(R A G E)等结合,激活下游通路,进而诱导转录多种炎性因子㊂HMG B1-T L R4/R A G E信号通路复杂,在A L I/A R D S进程中的作用机制尚不明确㊂本文就HMG B1-T L R4/R A G E信号通路在A L I/A R D S中的研究进展进行综述,以期发现A L I/A R D S的治疗新靶点㊂ʌ关键词ɔ急性肺损伤;呼吸窘迫综合征,成人;高迁移率族蛋白B1;T o l l样受体4;晚期糖基化终产物受体;炎症因子基金项目:国家自然科学基金(81960023);贵州省科技合作计划项目(黔科合L H字[2015]7536号)D O I103760c m a j c n131368-20200420-00316R e s e a r c h p r o g r e s so nh i g h-m o b i l i t yg r o u p b o x1p r o t e i n-T o l l-l i k er e c e p t o r4r e c e p t o rf o ra d v a n c e dg l y c a t i o n e n d p r o d u c t s s i g n a l i n gp a t h w a y i na c u t e l u n g i n j u r y a c u t e r e s p i r a t o r y d i s t r e s s s y n d r o m eB iL e F a nS h a o h u i X uY u S h uX i a o y i W a n g H o n g m a nD e p a r t m e n t o f R e s p i r a t o r y a n dC r i t i c a lC a r e M e d i c i n e t h eF i f t hA f f i l i a t e d Z h u h a i H o s p i t a lo f Z u n y iM e d i c a lU n i v e r s i t y Z h u h a i519100C h i n aC o r r e s p o n d i n g a u t h o r W a n g H o n g m a n E m a i l2496453591@q q c o mʌA b s t r a c tɔ A c u t e l u n g i n i u r y A L I a c u t e r e s p i r a t o r y d i s t r e s s s y n d r o m e A R D S i s a n a c u t er e s p i r a t o r y i n s u f f i c i e n c y c a u s e d b y d i f f u s e i n t e r s t i t i a l a n d a l v e o l a r e d e m a H i g h-m o b i l i t y g r o u p b o x1p r o t e i n HMG B1a sa ni m p o r t a n t l a t e i n f l a mm a t o r y f a c t o r i nt h ei n f l a mm a t o r yp r o g r e s s i o no fA L I A R D S c a nb i n d t o c e l l s u r f a c e r e c e p t o r s s u c h a sT o l l-l i k e r e c e p t o r4T L R4a n d r e c e p t o r f o ra d v a n c e d g l y c a t i o ne n d p r o d u c t s R A G E a c t i v a t e t h ed o w n s t r e a m p a t h w a y a n dt h e n i n d u c et h et r a n s c r i p t i o n o f v a r i o u s i n f l a mm a t o r y f a c t o r s HMG B1-T L R4R A G Es i g n a l i n g p a t h w a y i s c o m p l e xa n d t h em e c h a n i s mo f a c t i o n i n t h eA L I A R D S p r o c e s s i su n c l e a r T h i s p a p e r r e v i e w s t h e r e s e a r c hp r o g r e s s o f HMG B1-T L R4R A G E s i g n a l i n g p a t h w a y i n A L I A R D S i n o r d e r t o f i n d n e wt h e r a p e u t i c t a r g e t s f o rA L I A R D SʌK e y w o r d sɔ A c u t e l u n g i n i u r y R e s p i r a t o r y d i s t r e s ss y n d r o m e a d u l t H i g h-m o b i l i t yg r o u pb o x1p r o t e i n T o l l-l i k er ec e p t o r4R e c e p t o rf o rad v a n ce d g l y c a t i o ne n d p r o d u c t s I nf l a mm a t o r yf a c t o rF u n d p r o g r a m N a t i o n a l N a t u r a l S c i e n c e F o u n d a t i o n o f C h i n a81960023S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y C o o p e r a t i o nP l a n n i n g i nG u i z h o uP r o v i n c e G r a n t20157536D O I103760c m a j c n131368-20200420-00316急性肺损伤(a c u t e l u n g i n i u r y,A L I)/A R D S是非心源性因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤,导致急性㊁顽固性呼吸窘迫㊂2012年柏林定义取消了A L I 命名,将本病统称为A R D S[1],但在动物实验研究中暂无统一的命名标准㊂其发病机制复杂,尚无有效治疗措施㊂高迁移率族蛋白B1(h i g h-m o b i l i t yg r o u p b o x1p r o t e i n,HMG B1)可能是启动㊁维持和加剧瀑布式炎症级联反应的重要晚期炎性因子[2-4]㊂当细胞外的HMG B1结合到细胞表㊃307㊃国际呼吸杂志2021年5月第41卷第9期I n t JR e s p i r,M a y2021,V o l.41,N o.9Copyright©博看网. All Rights Reserved.面受体时,如晚期糖基化终产物受体(r e c e pt o rf o r a d v a n c e d g l yc a t i o n e nd p r o d u c t s ,R A G E ),T o l l 样受体(T o l l -l i k ere c e pt o r s ,T L R )家族中的T L R 2㊁T L R 4[5]㊁T L R 9[6]及趋化因子C X C L 12[7]等,可激活下游通路,诱导转录多种炎性因子[8]㊂近年来,HMG B 1-T L R 4/R A G E信注:HM G B 1为高迁移率族蛋白B 1;T L R 4为T o l l 样受体4;R A G E 为晚期糖基化终产物受体;L P S 为脂多糖;M y D 88为髓样分化因子88;T R I F 为β干扰素T I R 结构域衔接蛋白;MA P K 为丝裂原活化蛋白激酶;N F -κB 为核转录因子κB ;J A K 为酪氨酸激酶;S T A T 为信号传导和转录激活蛋白图1 HM G B 1-T L R 4/R A G E 相关信号通路号通路在A L I /A R D S 中的作用逐渐引起大家关注,而寻找炎症相关的潜在分子机制可能有助于确定A L I /A R D S 新的治疗靶点(图1)㊂1 HM G B 1与A L I /A R D S1 1 HMG B 1的结构㊁分布与功能人类HMG B 1基因位于13q 12染色体上㊂HMG B 1是一种有215个氨基酸的单链蛋白,由A -b o x ㊁B -b o x 和C -t a i l 3个结构域组成,其中B -b o x 具有炎症活性,而A -b o x 对B -b o x 有一定的拮抗作用[9]㊂HMG B 1广泛存在于淋巴㊁脑㊁肺㊁肝㊁心㊁肾㊁脾等组织细胞中[10]㊂正常生理条件下,HMG B 1作为一种胞核内D N A 结合蛋白,表达量稳定在基础水平,在基因转录㊁基因调节及D N A 修复重组等过程中起重要作用[9,11]㊂在细胞应激㊁活化或凋亡㊁死亡过程中,HMG B 1转移至胞质和胞外基质[12-13],与相应受体结合,介导T L R 4/R A G E 等众多下游信号通路参与免疫炎症反应㊂㊃407㊃国际呼吸杂志2021年5月第41卷第9期 I n t JR e s p i r ,M a y 2021,V o l .41,N o .9Copyright ©博看网. All Rights Reserved.12 HMG B1在A L I/A R D S中的作用121 HMG B1放大炎症级联反应HMG B1作为A L I/ A R D S炎症反应进程中重要的晚期炎性因子,从胞核移至胞质,再由炎症细胞将其释放到胞外,可诱导炎性因子释放㊁细胞聚集[13]㊁细胞分化[14]㊁细胞极化[5]等多种反应㊂胞外HMG B1与细胞表面受体结合,如R A G E㊁T L R2㊁T L R4[5]㊁T L R9[6]等,进一步激活下游通路而发挥其生物学效应㊂此外,HMG B1可调节单核细胞的迁移[13],介导内皮细胞的高通透性[15],并激活巨噬细胞[13]㊁树突状细胞[16]㊁中性粒细胞等[5],使这些细胞释放单核细胞趋化蛋白1(m o n o c y t e c h e m o t a c t i c p r o t e i n1,M C P-1)㊁肿瘤坏死因子α(t u m o rn e c r o s i sf a c t o r-α,T N F-α)㊁I L-1β㊁I L-6㊁巨噬细胞炎性蛋白1β㊁I L-8㊁I L-18等,从而调节免疫应答[5,13,16-17]㊂S u n等[18]研究发现HMG B1的增加诱导了T N F-α和I L-6的第2次释放,表明了某些早期炎性细胞因子与HMG B1之间存在正反馈效应,从而在空间和时间上可进一步放大炎症级联反应㊂122 HMG B1在炎症反应中的时效性关于HMG B1的时效性目前尚无统一定论㊂肺脏是脓毒症最易被累及的靶器官,较早并发A L I/A R D S是死亡的主要原因之一㊂W a n g等[12]用脂多糖(l i p o p o l y s a c c h a r i d e s,L P S)刺激鼠巨噬细胞样R AW2647细胞株,筛选出了培养基中18h后明显出现的HMG B1,但HMG B1m R N A的表达在16h内没有上调㊂说明HMG B1作为一种晚期炎性因子,与早发炎性因子相比具有显著的释放延迟动力学[18]㊂有学者在L P S诱导小鼠的肺炎症和损伤中发现,诱导后2h小鼠支气管肺泡灌洗液中HMG B1水平已能测定,6h更高[19]㊂而有研究发现HMG B1的释放仅在L P S刺激R AW2647细胞8h后能被检测到[20]㊂C h e n等[21]使巨噬细胞暴露于烟草烟雾提取物8h后,可明显观察到核HMG B1易位至胞质和质膜中,至24h,HMG B1以可溶性分子或以微泡相关的形式释放到胞外㊂而有学者发现能够抑制HMG B1活性的药物即使在疾病发作后48h给予小鼠,也可显著提高脓毒症小鼠的存活率[22]㊂这些研究提示,尽管HMG B1是A L I/A R D S的晚期炎性因子,但它可能会在炎症进程的短时间内表达其毒性㊂123HMG B1可作为A L I/A R D S新的治疗靶点H a t a y a m a等[23]用抗HMG B1单克隆抗体处理A L I小鼠后,小鼠肺组织弥漫性水肿和出血明显减轻㊂L P S攻击后,巨噬细胞㊁中性粒细胞及淋巴细胞的数量明显增加,这种增加通过抗HMG B1处理后被显著减弱,而重组HMG B1可提高促炎因子的水平,加剧炎性细胞的浸润[5]㊂通过诱导HMG B1从胞核易位至胞质,可减少细胞自噬和凋亡,减轻呼吸机所致肺损伤[19]㊂减少HMG B1的释放也可减轻A L I的严重程度[24]㊂故HMG B1可能是A L I/A R D S有价值的临床治疗靶标㊂2T L R4与A L I/A R D S21 T L R4的结构㊁分布与功能 T L R是具有细胞外配体结合结构域㊁单个跨膜区段和胞质T o l l/I L-1R结构域的跨膜受体[25-26],其中T L R4基因位于9号染色体,主要在单核细胞㊁中性粒细胞中表达[27]㊂T L R4可识别L P S㊁肺表面活性蛋白A[28]㊁热休克蛋白70[29]及HMG B1等配体㊂其中L P S刺激T L R4后,可激活髓样分化因子88 (m y e l o i dd i f f e r e n t i a t i o nf a c t o r88,M y D88)和β干扰素T I R结构域衔接蛋白2种途径,这2种途径与其他信号通路的交互可使T L R4信号得到适当调节,最终活化核转录因子κB(n u c l e a r f a c t o r-k a p p a B,N F-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(m i t o g e n-a c t i v a t e d p r o t e i nk i n a s e,MA P K)等信号通路,导致细胞激活或凋亡,以及促炎因子㊁趋化因子的转录[30-32]㊂22T L R4-N F-κB信号通路在A L I/A R D S中的作用L P S㊁HMG B1等配体与T L R4结合,通过不同途径激活N F-κB信号通路,诱导下游趋化因子㊁细胞黏附分子及促炎因子大量释放,募集中性粒细胞,使血管内皮细胞和肺泡上皮细胞受损[5,32-34]㊂一项脓毒症致大鼠A L I研究中发现,大鼠肺组织中HMG B1㊁T L R4和N F-κB表达明显升高,而在抑制HMG B1-T L R4-N F-κB信号通路后肺的组织结构和功能有所改善,提示脓毒症所致A L I与此信号通路激活密切相关[35]㊂M e n g等[8]发现在使用右美托咪定干预L P S诱导的A L I后,降低了T N F-α㊁I L-6和I L-1β的释放,抑制了HMG B1㊁T L R4㊁M y D88和磷酸化N F-κB通路蛋白的表达,有效减轻了大鼠肺损伤程度㊂而基因敲除M y D88后可降低T N F-α和N F-κB的水平,减弱百草枯诱导的小鼠A L I[36]㊂通过抑制T L R4-N F-κB信号通路,可减轻A L I炎症反应程度㊂23 T L R4-MA P K信号通路在A L I/A R D S中的作用L P S与T L R4结合,激活MA P K信号通路,导致机体对应激刺激的信号级联反应㊂已有研究证实p38MA P K㊁c-J u n 氨基末端激酶(c-J u nN-t e r m i n a l k i n a s e,J N K)/应激活化蛋白激酶及细胞外调节蛋白激酶(e x t r a c e l l u l a rs i g n a l-r e g u l a t e dk i n a s e,E R K)可能参与了A L I/A R D S的发展[37],通过调节T L R4-MA P K信号通路可改善L P S诱导的A L I㊂木兰花碱可抑制p38MA P K㊁J N K和E R K活化,从而降低L P S诱导的A L I中T N F-α㊁I L-1β和I L-6的水平[37]㊂有学者发现丹宁酸抑制L P S诱导的T L R4的表达可能与其抑制了E R K1/2和p38MA P K的活化有关[38]㊂W a n g等[39]在L P S致A L I的体内和体外研究中发现,L P S 刺激以时间和浓度依赖性方式增加p38MA P K磷酸化,从而导致肺上皮通透性过高和肺水肿,而基因敲除T L R4可消除L P S介导的p38MA P K磷酸化,表明T L R4参与L P S 诱导的肺上皮屏障功能受损并在p38MA P K的上游起作用㊂有研究发现,p38MA P K可能在L P S致N F-κB活化的上游起作用,抑制p38MA P K介导的N F-κB信号通路也可成为减轻肺部炎症损害的措施[40]㊂3R A G E与A L I/A R D S31 R A G E的结构㊁分布与功能 R A G E是免疫球蛋白超家族中的一员,作为一种多配体模式识别受体,与多种炎性疾病的发病有关㊂人类R A G E编码基因位于6号染色体㊃507㊃国际呼吸杂志2021年5月第41卷第9期I n t JR e s p i r,M a y2021,V o l.41,N o.9Copyright©博看网. All Rights Reserved.上㊂由R A G E基因转录的m R N A可选择性剪切产生20多种异形体,这些异形体的存在导致多种信号传导胞质衔接子的存在[41]㊂生理状态下,R A G E在肺上皮细胞中较高基础水平表达,有助于维持肺泡上皮细胞的形态和特定结构,而在巨噬细胞㊁内皮细胞[42]等其他组织细胞中仅有低水平的表达[43]㊂病理条件下,R A G E在内皮细胞[42]㊁单核细胞[44]等细胞中的表达迅速升高,并与相应配体结合,参与调节炎症反应㊁细胞凋亡[45]等重要过程㊂当肺组织受刺激后可表达超生理水平的R A G E㊁HMG B1[46]和S100蛋白家族[47]等,它们相互作用,介导N F-κB㊁MA P K㊁酪氨酸激酶(J a n u s k i n a s e,J A K)/信号传导和转录激活蛋白(s i g n a l t r a n s d u c e r a n d a c t i v a t o r o f t r a n s c r i p t i o n,S T A T)[48]等下游信号通路,产生炎症和氧化应激,影响哮喘㊁C O P D和A L I等疾病的发生发展[49-50]㊂32 R A G E-N F-κB信号通路在A L I/A R D S中的作用N F-κB是R A G E下游介导体内炎症反应的重要信号途径之一,且R A G E-N F-κB信号传导的激活可促进R A G E本身的转录,两者之间形成正反馈回路,进一步介导促炎细胞因子分泌[51]㊂用L P S/HMG B1激活R AW2647细胞后,新型R A G E拮抗剂降低了细胞表面R A G E水平,抑制了N F-κB 的核转运,同时减少了T N F-α和I L-6的释放,提示体外通过降低R A G E介导的N F-κB活化可减轻A L I[52]㊂在一项用氯胺酮治疗L P S致大鼠A L I的研究中,氯胺酮下调了R A G E㊁N F-κB的m R N A和蛋白质水平,从而抑制了HMG B-1m R N A的上调[46]㊂这些结果表明,抑制R A G E-N F-κB信号通路可以作为治疗A L I的新选择㊂33 R A G E-MA P K信号通路在A L I/A R D S中的作用在L P S诱导的A L I小鼠中,通过抑制J N K m R N A和p38 MA P K的表达可显著抑制炎症反应[53]㊂X i a o等[54]的研究结果表明,在体外和体内抑制J N K磷酸化,可进一步抑制T N F-α㊁I L-6㊁I L-1β及C O X-2的表达,表明J N K在诱导表达炎症介质的上游途径中有调节作用㊂L i等[55]发现氯胺酮抑制了大鼠A L I中肺组织HMG B1和R A G E的表达,可能部分是由于氯胺酮抑制了MA P K的激活㊂且通过抑制R A G E-MA P K通路可减少氧化应激㊁抑制自噬并降低炎症反应,改善L P S诱导的A L I[56]㊂说明抑制R A G E-MA P K 信号通路在A L I/A R D S临床治疗中具有潜在价值㊂34 R A G E-J A K/S T A T信号通路在A L I/A R D S中的作用 R A G E与HMG B1等配体结合后,可激活J A K/S T A T 信号转导通路,诱导产生炎性细胞因子[48],可能是A L I/ A R D S炎症进程中的一个关键点㊂有研究发现使用小分子S T A T3抑制剂L L L12可减轻炎性细胞浸润,减少I L-1β和C C L2的表达,且L L L12减弱了A R D S患者血浆诱导的人外周血单核细胞中S T A T3的磷酸化[57]㊂另一些药物可通过部分抑制S T A T3转移到胞核[58]㊁降低J A K1/J A K2-S T A T1的总水平和磷酸化水平[59]而在L P S诱导的小鼠A L I中发挥抗炎作用㊂而体外下调J A K2/S T A T1磷酸化水平并诱导HMG B1从胞核转移至胞质可减少细胞自噬与凋亡[19]㊂这些发现揭示了R A G E-J A K/S T A T途径与A L I/A R D S的肺部炎症㊁细胞自噬和凋亡之间的联系㊂4展望A L I/A R D S发病机制复杂,其中心概念之一是失控的瀑布式炎症级联反应㊂HMG B1作为晚期炎性因子,其合成与释放可影响A L I/A R D S的发生发展㊂HMG B1通过激活T L R4/R A G E等,进一步介导众多下游信号通路,释放多种炎性介质和趋化因子㊂由于完整的炎症反应可能涉及多种不同但平行的信号途径,故HMG B1的时效性及T L R4/R A G E介导的多种炎性通路所占比例等尚无明确定论,而该反应涉及到的其他因素也需进一步探索㊂但目前的研究结果让我们相信,进一步探寻这些分子在A L I/ A R D S中的潜在作用机制,可为将来疾病的治疗提供新靶点㊂利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突参考文献1 A R D SD e f i n i t i o nT a s kF o r c e R a n i e r iVM R u b e n f e l dG D e ta l A c u t er e s p i r a t o r y d i s t r e s ss y n d r o m e t h eB e r l i nd e f i n i t i o nJ J AMA 2012307232526-2533D O I101001j a m a201256692J i n K M a Y J M a n r i q u e-C a b a l l e r o C L e ta l A c t i v a t i o n o fAM P-a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s e d u r i n g s e p s i s i n f l a mm a t i o ni m p r o v e s s u r v i v a l b y p r e s e r v i n g c e l l u l a rm e t a b o l i c f i t n e s s JF A S E B J20203457036-7057D O I101096f j201901900R3 Z h a n g K J i nY L a i D M e t a l R A G E-i n d u c e d I L C2e x p a n s i o ni na c u t e l u n g i n j u r y d u e t oh a e m o r r h a g i c s h o c k J T h o r a x2020753209-219D O I101136t h o r a x j n l-2019-2136134 G r a n tG J L i o uT G P a i n eR e t a l H i g h-m o b i l i t y g r o u p b o x-1i n c r e a s e s e p i t h e l i a l s o d i u mc h a n n e l a c t i v i t y a n d i n f l a mm a t i o nv i a t h e r e c e p t o r f o r a d v a n c e d g l y c a t i o n e n d p r o d u c t s J A mJP h y s i o lC e l lP h y s i o l20203183C570-C580D O I101152a j p c e l l002915 W a n g J L iR P e n g Z e ta l HM G B1p a r t i c i p a t e si n L P S-i n d u c e d a c u t e l u n g i n j u r y b y a c t i v a t i n g t h e A I M2i n f l a mm a s o m e i n m a c r o p h a g e sa n di n d u c i n gp o l a r i z a t i o no fM1m a c r o p h a g e s v i a T L R2 T L R4a n d R A G E N F-κBs i g n a l i n gp a t h w a y s J I n tJ M o lM e d202045161-80D O I103892i j mm 201944026 T a n g Z Z Z a n g N F u Y X e ta l HM G B1m e d i a t e s HA d V-7i n f e c t i o n-i n d u c e d p u l m o n a r y i n f l a mm a t i o n i n m i c e JB i o c h e m B i o p h y sR e sC o mm u n201850111-8D O I101016j b b r c2018031457 D eL e oF Q u i l i c iG T i r o n e M e ta l D i f l u n i s a l t a r g e t st h eHM G B1C X C L12h e t e r o c o m p l e x a n d b l o c k si mm u n e c e l lr e c r u i t m e n t J E M B O R e p2*******e47788D O I1015252e m b r2019477888 M e n g L L i L L u S e t a l T h e p r o t e c t i v e e f f e c t o fd e x m e d e t o m i d i n eo nL P S-i n d u c e da c u t e l u n g i n j u r y t h r o u g ht h e HM G B1-m e d i a t e d T L R4N F-κBa n dP I3K A k t m T O Rp a t h w a y s J M o l I mm u n o l2018947-17D O I101016jm o l i mm 2017120089 Y a n g H W a n g H C h a v a nS S e t a l H i g hm o b i l i t yg r o u p b o xp r o t e i n1HM G B1t h e p r o t o t y p i c a le n d o g e n o u s d a n g e rm o l e c u l e J M o lM e d201521S u p p l1S u p p l1S6-S12㊃607㊃国际呼吸杂志2021年5月第41卷第9期I n t JR e s p i r,M a y2021,V o l.41,N o.9Copyright©博看网. All Rights Reserved.D O I102119m o l m e d20150008710 Q u L C h e n C C h e n Y e ta l H i g h-m o b i l i t yg r o u p b o x1HM G B1a n d a u t o p h a g y i n a c u t el u n g i n j u r y A L I a r e v i e w J M e d S c i M o n i t2019251828-1837D O I1012659M S M 91286711M a n d k eP V a s q u e zKM I n t e r a c t i o n so fh i g h m o b i l i t yg r o u pb o x p r o t e i n1HM G B1w i t hn uc l e i ca c id s i m p l i c a t i o n s i nD N Ar e p a i r a n d i mm u n e r e s p o n s e s J D N AR e p a i r A m s t201983102701D O I101016j d n a r e p2019102701 12W a n g H B l o o m O Z h a n g M e t a l HM G-1a s a l a t em e d i a t o r o f e n d o t o x i n l e t h a l i t y i nm i c e J S c i e n c e199********248-251D O I101126s c i e n c e285542524813 L i u X X Y u D D C h e n M J e ta l H e s p e r i d i n a m e l i o r a t e sl i p o p o l y s a c c h a r i d e-i n d u c e d a c u t e l u n g i n j u r y i n m i c e b yi n h i b i t i n g HM G B1r e l e a s e J I n t I mm u n o 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o l.41,N o.9Copyright©博看网. 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Toll样受体4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制中期报告

Toll样受体4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制中期报告研究背景及意义：骨骼是人体支撑和运动的重要组成部分。

骨质疏松症和骨折等疾病给人类健康和生活质量带来了很大影响。

骨组织的修复和再生对于治疗这些疾病具有重要意义。

骨再生需要大量的成骨细胞和破骨细胞。

成骨细胞共培养体系是一种模拟骨再生的体外模型，可以探究骨细胞的分化和骨组织的再生过程。

Toll样受体4（TLR4）是一种广泛表达于各种细胞中的模式识别受体，可以识别多种病原微生物的分子结构，并诱导炎症反应。

近年来研究表明，TLR4在骨代谢中也发挥重要作用，可以调控成骨细胞和破骨细胞的分化和功能。

但是，TLR4在成骨细胞和破骨细胞之间的相互作用及其分子机制仍不清楚。

本研究旨在探究TLR4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制，为骨组织再生和骨修复的研究提供新的思路和借鉴。

研究进展：本研究利用小鼠成骨细胞共培养体系建立了干细胞向破骨细胞分化的模型。

通过Western blot和qPCR等技术检测了TLR4在共培养期间的表达情况，并添加了TLR4激动剂和抑制剂，分别检测了TLR4对共培养体系中成骨细胞和破骨细胞相关标记分子表达的影响。

初步结果显示，在共培养体系中，TLR4的表达变化与成骨细胞和破骨细胞相关标记分子的表达密切相关，但是具体的分子机制还需要进一步探究。

下一步工作：在研究的后续中，我们将进一步验证和深入探究TLR4在成骨细胞共培养体系中对干细胞向破骨细胞分化的影响及机制。

具体工作包括：1. 进一步检测TLR4在共培养体系中的表达动态变化，探究TLR4是否可以调控成骨细胞和破骨细胞的分化和功能；2. 利用TLR4基因敲除小鼠或TLR4拮抗剂等方法，进一步验证TLR4在共培养体系中的作用，并探究其下游信号通路的调控机制；3. 通过小鼠骨折模型等体内实验，验证TLR4在骨组织修复和再生中的重要性，为骨组织再生和骨修复提供新的靶点和策略。

目前承担的课题-苏州大学附属第一医院

目前承担的课题1. * 临床医学——江苏省高校优势学科II期建设项目经费：4000万元2014-2017项目负责人：阮长耿2. * 利用体内瞬时影像学技术研究血小板负调控信号对血管损伤过程中血小板异质性活化的影响（91439112）——国家自然科学基金重大研究计划（培育）经费：90万元2015-2017项目负责人：朱力3.* DNA解旋酶BRIP1在慢性粒单核细胞白血病及急性髓系白血病发生发展和预后中的作用研究（81470296）——国家自然科学基金面上项目经费：75万元2015-2017项目负责人：薛胜利4. * Tim-3/gal-9信号通路介导Th17/Treg细胞在造血干细胞移植后aGVHD中的调控作用研究（81470346）——国家自然科学基金面上项目经费：70万元2015-2017项目负责人：吴德沛5．* 荧光三维共培养研究整合素αvβ3受体拮抗剂对非小细胞肺癌辐射敏感性的影响及机制（81472191）——国家自然科学基金面上项目经费：80万元2015-2017项目负责人：季顺东6．* 肠道粘膜屏障在溃疡性结肠炎发病机制方面的研究（81470825）——国家自然科学基金面上项目经费：75万元2015-2017项目负责人：夏利军7．* zkscan3基因新功能的解析（31471283 ）——国家自然科学基金面上项目经费：85万元2015-2018项目负责人：杨林8．* 肿瘤细胞中坏死基因Rip3的表达调控机制（31471303 ）——国家自然科学基金面上项目经费：90万元2015-2018项目负责人：何苏丹9．* miR-224、miR-452在急性早幼粒细胞白血病中的功能和机制研究（81400112）——国家自然科学基金青年项目经费：23万元2015-2017项目负责人：姚红10．* 靶向GAS2-Calpain轴抑制CML干细胞的研究（81400113）——国家自然科学基金青年项目经费：24万元2015-2017项目负责人：周海侠11．* 伴有STAT5B-RARA融合基因的急性早幼粒细胞白血病患者的耐药机制研究（81400114）——国家自然科学基金青年项目经费：23万元2015-2017项目负责人：姚利12．* MiRNAs靶向Smoothened逆转弥漫大B细胞淋巴瘤化疗耐受的研究（81400155）——国家自然科学基金青年项目经费：23万元2015-2017项目负责人：曲昌菊13．* 非编码RNA激活子ncRNA-a7转录调控PRDX-6对皮肤细胞放射敏感性的影响及机制研究（31400720 ）——国家自然科学基金青年项目经费：23万元2015-2017项目负责人：王文洁14.* 母-胎界面交互对话异常致妊娠相关重大疾病的分子机制（2015CB943300）——国家重点基础研究发展计划经费：2015-2019团队成员：董宁征15.* 优化和规范造血干细胞移植中的分子诊断技术体系并推广应用（BL2014038）——江苏省临床医学科技专项（诊疗技术攻关）经费：50万元2014-2016项目负责人：何军16．* 融合基因DEK-NUP214的致白血病机制研究（BK20141201）——江苏省自然科学基金面上项目经费：10万元2014-2016项目负责人：文丽君17．* miR-130a参与核心结合因子急性髓系白血病致病的机制研究（BK20141202）——江苏省自然科学基金面上项目经费：10万元2014-2016项目负责人：戴海萍18．* 荧光三维共培养研究整合素αvβ3拮抗剂对非小细胞肺癌放射治疗的影响及机制（BK20141203）——江苏省自然科学基金面上项目经费：10万元2014-2016项目负责人：季顺东19．* 微小RNA靶向Smoothened逆转弥漫大B细胞淋巴瘤化疗耐受的研究（BK20140374）——江苏省自然科学基金青年项目经费：20万元2014-2016项目负责人：曲昌菊20．* 蛋白激酶A对血小板凋亡的调控作用及其机制研究（BK20140375）——江苏省自然科学基金青年项目经费：20万元2014-2016项目负责人：赵丽丽21．* KIR 2DS4基因及其变异体KIR1D对造血干细胞移植后巨细胞病毒激活的调控作用及其临床意义（H201416）——江苏省卫生厅面上项目经费：4万元2014-2016项目负责人：吴小津22．* 含地西他滨预处理方案的异基因造血干细胞移植治疗高危急性髓细胞性白血病的临床和基础研究（SYS201457）——苏州市应用基础研究计划项目经费：2万元2014-2016项目负责人：唐晓文23．* 重组人凝血因子的研制及临床前试验（2013ZX09102033）——苏州市政策性资助项目经费：42.8万元2014-2016 项目负责人：吴庆宇24．* 蛋白激酶A对血小板凋亡的调控作用及其机制研究（SYSD2014077）——苏州市应用基础研究计划项目（指导性）2014-2016 项目负责人：赵丽丽25．重组人凝血因子的研制的临床前试验（2013ZX09102033）——国家科技重大专项（重大新药创制）经费：558万元2013-2016 项目负责人：吴庆宇、阮长耿26．新型血小板受体CLEC-2维持脑血管完整性的机制研究（81370617）——国家自然基金面上项目经费：70万元2014-2016 项目负责人：傅建新27．白血病新融合基因PAX5-UBE2D4的致病机制研究（81370626）——国家自然基金面上项目经费：70万元2014-2016 项目负责人：仇惠英28．妊娠期子宫Corin表达调控机制及其在子痫前期发病中的作用（81370718）——国家自然基金面上项目经费：70万元2014-2016 项目负责人：董宁征29．GAS2调控慢性粒细胞白血病干细胞生长的研究（31371392）——国家自然基金面上项目经费：75万元2014-2016 项目负责人：赵昀30．MiR-146a治疗心肌梗死的机制及靶向投递的研究（81370216）——国家自然基金面上项目经费：75万元2014-2016 项目负责人：程柯31．轴突导向分子Sema4D及其可溶性片段参与动脉粥样硬化形成的机制研究（81370373）——国家自然基金面上项目经费：75万元2014-2016 项目负责人：朱力32．吡非尼酮对肿瘤免疫微环境的作用机制研究（81372245）国家自然基金面上项目经费：62万元2014-2016 项目负责人：黄玉辉33．肿瘤细胞主导的肿瘤血管正常化和消除研究（81372376）——国家自然基金面上项目经费：70万元2014-2016 项目负责人：周泉生34．多发性骨髓瘤细胞中大MAF家族蛋白泛素化酶的蛋白组学分析及其病理学意义研究（81320108023）——国家自然基金国际(地区)合作与交流项目经费：280万元2014-2016 项目负责人：毛新良35．新融合基因NUP98-HOXD8的致白血病机制研究（81300424）——国家自然基金青年科学基金项目经费：23万元2014-2016 项目负责人：王琴荣36．T细胞IL-7信号途径在Allo-HSCT后淋巴细胞增殖性疾病发病中作用机制研究(81300444) ——国家自然基金青年科学基金项目经费：23万元2014-2016 项目负责人：陈广华37．TLR4及TLR9信号通路活化促进多发性骨髓瘤细胞生长的机制研究(81302046) ——国家自然基金青年科学基金项目经费：23万元2014-2016 项目负责人：徐杨38．活化型高分子激肽原抑制内皮祖细胞活性在关节炎动脉粥样硬化发展中的作用(81301534) ——国家自然基金青年科学基金项目经费：24万元2014-2016 项目负责人：阳艾珍39．Matriptase表达上调在慢性淋巴细胞白血病中的作用机制及治疗靶点价值研究(81301844) ——国家自然基金青年科学基金项目经费：23万元2014-2016 项目负责人：刘萌40．心脏酶Corin在高血压性疾病中的机理和应用研究（213016A）——教育部科学技术研究项目（科学技术类）经费：50万元2014-2016 项目负责人：董宁征41．血栓形成过程中VWF的分子调控及其信号传递机制研究（BK20131167）——江苏省自然科学基金面上项目经费：10万元2013-2016 项目负责人：韩悦42．急性红白血病的分子遗传学特征及发病机制研究(BK20131168) (BK20131168) ——江苏省自然科学基金面上项目经费：10万元2013-2016 项目负责人：孙爱宁43．T细胞IL-7信号通路在Allo-HSCT后淋巴细胞增殖性疾病发病中作用机制研究（BK20130273）——江苏省自然科学基金面上项目经费：20万元2013-2017 项目负责人：陈广华44．支架、关节、人造血管等高端植介入重大产品研发2012BAI18B00——国家863计划子课题经费：60万元2012-2015 项目负责人：阮长耿45．新一代高新能五分类血细胞分析系统的细胞形态的标准制定和性能验证2011AA02A105 ——国家863计划子课题经费：10万元2012-2015 项目负责人：阮长耿46．胁迫环境中线粒体代谢与细胞凋亡调控机制2013CB910102——国家973计划子课题经费：339万元2013-2017 项目负责人：何苏丹47. 血小板在血栓形成起始阶段的调控机制及其信号转导机制研究 2012CB526609——国家973计划前期研究专项子课题经费：60万元2013-2015项目负责人：戴克胜48．重大疾病发生发展及干预策略研究2012CB526609——国家973计划前期研究专项经费：20万元2013-2016团队成员：武艺49．细胞生物学（病毒介导的程序性细胞坏死的调控机制）31222036——国家自然科学基金优秀青年科学基金项目经费：100万元2013-2015项目负责人：何苏丹50．混合系列急性白血病分子遗传学特征及MEF2C基因致白血病机制研究81270617 ——国家自然基金面上项目经费：70万元2013-2016项目负责人：吴德沛51．血管性血友病因子裂解酶ADAMTS13在血栓形成中的调控机制研究81270591 ——国家自然基金面上项目经费：70万元2013-2016项目负责人：韩悦52．树突状细胞在干扰素联合供体淋巴细胞输注治疗移植后白血病复发中增强抗白血病效应的机制研究81270645——国家自然基金面上项目经费：70万元2013-2016项目负责人：唐晓文53．抗供者特异性抗体(DSA)对造血干细胞移植预后的影响及其机制研究81273266 ——国家自然基金面上项目经费：70万元2013-2016项目负责人：何军54．人源化嵌合抗体hSZ-123的抗血栓机制研究81270593——国家自然基金面上项目经费：70万元2013-2016项目负责人：赵益明55．原始淋巴管网络重塑形成收集淋巴管的分子机制研究31271530——国家自然科学基金面上项目经费：75万元2013-2016项目负责人：何玉龙56．喹啉类药物对多发性骨髓瘤的实验性治疗作用及其抑制组蛋白去乙酰化酶的分子机理81272632——国家自然科学基金面上项目经费：75万元2013-2016项目负责人：毛新良57．造血干细胞自噬机制在预防血液肿瘤萌发中的作用81272336——国家自然科学基金面上项目经费：80万元2013-2016项目负责人：王建荣58．二硫键异构酶PDI和Erp57调控动脉血栓形成的特异性生理作用与机制研究81270592 ——国家自然科学基金面上项目经费：80万元2013-2016项目负责人：武艺59．多发性骨髓瘤化疗药物敏感基因的鉴定与作用机理研究81272476——国家自然科学基金主任基金项目经费：16万元2013-2015项目负责人：杨林60． ULK1复合体在哺乳动物细胞自噬中的调控与功能31271526——国家自然科学基金面上项目经费：85万元2013-2016项目负责人：姜学军61． PHF6基因突变在急性T淋巴细胞白血病发病中的作用及机制研究81200370——国家自然基金青年项目经费：24万元2013-2015项目负责人：王谦62．急性髓系白血病细胞中SATB1介导的染色质成环调控Mcl-1基因转录的机制研究81200369 ——国家自然基金青年项目经费：23万元2013-2015项目负责人：龚斐然63．Calpain调节血小板GPIbα膜外功能区酶切的机制研究81200343——国家自然基金青年项目经费：23万元2013-2015项目负责人：闫荣64．Gas6受体调控糖蛋白VI介导血小板活化的信号与分子机制研究31201058——国家自然科学基金青年科学基金项目经费：23万元2013-2015项目负责人：周俊松65．造血干细胞自噬的肿瘤病理学意义31201073——国家自然科学基金青年科学基金项目经费：24万元2013-2015项目负责人：张素萍66．HMGB1调节的自噬对多发性骨髓瘤化疗耐药性的影响及机制研究81201861——国家自然科学基金青年科学基金项目经费：24万元2013-2015项目负责人：张幸鼎67. 江苏省血液学协同创新中心——江苏省教育厅经费：4000万元2013-2016项目负责人：阮长耿68. 江苏省血液病临床医学研究中心BL2012005——江苏省生命健康科技专项经费：1500万元2012-2015项目负责人：阮长耿、吴德沛69.支架、关节、人造血管等高端植介入重大产品研发2012BAI18B00——国家863计划子课题经费：60万元2012-2015项目负责人：阮长耿70.干扰素诱导的树突状细胞（IFN-DC）增强新型供体淋巴细胞输注抗白血病效应的机制研究BK2012627——江苏省自然科学基金项目经费：10万元2012-2015项目负责人：唐晓文71.micoRNA-181c对糖尿病视网膜病变炎症反应的调控机制研究BK2012626——江苏省自然科学基金项目经费：10万元2012-2015 项目负责人：白霞72.PAX5新融合基因的克隆及致白血病机制研究BK2012006——江苏省自然科学基金杰出青年项目经费：100万元2012-2015 项目负责人：陈苏宁73.二硫键异构酶PDI和Erp57调控血栓形成的特异性生理作用与机制研究20123201110014——高校博士点基金资助课题（博导类）经费：12万元2013-2015 项目负责人：武艺74.血小板GPIb-IX结合VWF功能的调控及其信号转导机制研究81130008——国家自然科学基金重点项目经费：220万元2012-2016 项目负责人：戴克胜75.急性髓系白血病中长链非编码RNA LLEST功能的研究81170468——国家自然科学基金面上项目经费：60万元2012-2015 项目负责人：祁小飞76.新型白介素15亚型蛋白在自身免疫性疾病中的作用及机制研究81102171/H1008——国家自然科学基金青年项目经费：22万元2012-2015 项目负责人：胡博77.甲基化修饰介导的sFRP5表达沉默对骨髓增生异常综合征细胞生物表型影响及机制研究81100342——国家自然科学基金青年项目经费：22万元2012-2015 项目负责人：王虹78.蛋白水解酶系统作为癌症标记和癌症治疗的靶标31161130356——国家自然科学基金重大国际合作项目经费：250万元2012-2015 团队成员：吴庆宇79.白血病放化疗后造血肝细胞因子的治疗机制及其成药性研究XDA01040200——国家战略性先导专题经费：500万元2011-2016 团队成员：周泉生80.轴突导向分子Sema4D的基因敲出对心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究81170132——国家自然科学基金面上项目经费：65万元2012-2015 项目负责人：朱力81.心纳素转化酶corin的激活机制研究8117024——国家自然科学基金面上项目经费：60万元2012-2015 项目负责人：吴庆宇82.TWIST2的抑癌基因功能研究31170755——国家自然科学基金面上项目经费：60万元2012-2015 项目负责人：赵昀83.激酶RIP3调控Toll like receptor（TLR3）介导的细胞坏死的机制研究31171330——国家自然科学基金面上项目经费：65万元2012-2015 项目负责人：何苏丹84.江苏省血液病临床医学中心SZ201102——江苏省卫生厅经费：1500万元2011-2015项目负责人：阮长耿、吴德沛注：加*为2014年新增的项目。

tlr4分子量

tlr4分子量
TLR4分子量是一种重要的生物学参数，它指的是Toll样受体4（TLR4）蛋白质的分子量。

TLR4是一种细胞膜上的受体，可以识别和结合细菌的脂多糖，从而激活免疫反应。

其分子量约为95kDa，在人类和其他动物中均有广泛表达。

TL4的结构包括一个N-末端的信号肽、一个外部结构域、一个跨膜区域和一个C-末端的细胞质区域。

其外部结构域由多个重复的“leucine-rich repeats”（LRR）组成，可以与脂多糖结合。

因此，TLR4在机体的免疫防御中发挥着重要作用，对于许多疾病的治疗和预防具有潜在的应用价值。

- 1 -。

免疫学固有免疫

巨噬细胞和B细胞等APC细胞,以及上皮细胞、肥大细胞、成纤维细胞等。每种细胞所表达TLRs的种类有所不同。
主要TLR成员及其识别的PAMP
肽聚糖、磷壁酸（G＋）细菌脂蛋白 LPS（钩端螺旋体）分枝杆菌细胞壁酵母多糖
LPS（G－）磷壁酸（G＋） RSV F蛋白
dsDNA
鞭毛蛋白
非甲基化 CpGDNA
２.皮肤黏膜屏障：
（１）物理阻挡作用：上皮细胞，肠蠕动，上皮纤毛摆动，液体冲洗等
（２）杀菌和抑菌物质：汗液里的不饱和脂肪酸，胃酸等
（3）正常菌群的拮抗作用
屏障结构及其保护机制
屏障结构皮肤消化道
肺
眼/鼻
屏障结构及其保护机制
物理屏障
上皮细胞紧密连接
纵向的气体或液体流动黏膜纤毛运泪水/鼻纤
清道夫受体：结合细菌细胞壁某些组分，清除血循环中的细菌
CD14：结合LPS
３. Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)
❖ 在果蝇早期胚胎发育过程中有一个基因dToll，其编码的蛋白称为Toll蛋白，参与果蝇胚胎细胞向背腹轴方向分化及果蝇抗菌肽表达的调控，是果蝇天然免疫的重要因子。
吞噬细胞 phagocytes
单核吞噬细胞（系统）
Mononuclear phagocyte system
中性粒细胞
neutrophils
单核细胞
monocyte
巨噬细胞
macrophage
小胶质细胞、库普弗细胞、破骨细胞
巨噬细胞寿命长，达数月体大多形性胞浆富含溶酶体 MHC-I/II和多种黏附分子多种受体
3.固有免疫与炎性疾病:肥大细胞脱颗粒，非 IgE依赖性过敏样反应

第十三,十四章固有免疫与黏膜免疫LT【75页】

革兰阴性菌LPS、LTA、呼吸同上道轮状病毒F蛋白、纤维蛋白原
细菌鞭毛蛋白
同上
未知
泌尿系统病原及其产物；弓同上29 形虫成分
目录
（3）胞内型PRR
PRR TLR3
PAMP 病毒RNA、合成Poly(I:C)
生物学活性
激活胞内信号NF-κB、诱生粘附分子和炎性细胞因子
TLR7、TLR8 RNA病毒的ssRNA
▪ 固有免疫应答机制与特点
机制：模式识别 PAMP，PRR，DAMP，特点：多样性有限，非克隆表达，反应快速，维持时间短无免疫记忆
▪ 固有免疫的生物学意义
第一道防线，参与维持自稳，参与的免疫病理，参与特异性免疫应答的启动
目录
思考题
固有免疫与适应性免疫应答的关系怎样？
目录
第十四章免疫应答之五：黏膜免疫
• 模式识别受体（PRR）
固有免疫细胞表达的、识别PAMP的受体，统称为模式识别受体(pattern-recognition receptor), 又称为模式识别分子(PRM)。
25
目录
（2）损伤相关分子模式
• 损伤相关分子模式（damage associated molecular pattern, DAMP）:宿主体内因组织损伤而产生的内源性模式分子。
28
目录
（2）细胞膜型PRR
PRR
PAMP
甘露糖受体
甘露糖富
清道夫受体（SR）革兰阳性/阴性菌表面成分
生物学活性吞噬作用促进LPS与TLR结合吞噬作用、清除LPS等
TLR2 TLR2/TLR1 TLR2/TLR6
TLR4
TLR5 TLR10 TLR11
革兰阳性菌的PGN和LTA、细激活胞内信号NF-κB、菌脂蛋白、分枝杆菌细胞壁诱生粘附分子和炎性组分、钩端螺旋体LPS、酵母细胞因子菌的酵母多糖等

基因工程纳米颗粒在EB病毒疫苗研发中的应用概述

基因工程纳米颗粒在EB病毒疫苗研发中的应用概述1 引言EB 病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)是人类至今未攻克的一大科学难题。

该病毒在人群中感染非常广泛，流行病学研究表明全球约有90% 的成年人存在EB 病毒感染。

大多数初次感染发生在幼儿时期且无临床症状，而青少年时期的感染往往会引发传染性单核细胞增多症。

此外，成年人感染EB 病毒可诱发多种疾病甚至癌症，全球每年新增癌症病例中就有约20 万病例与EB 病毒感染直接相关，因此EB 病毒被世界卫生组织归为第一类致癌病毒。

与EB 病毒感染高度相关的癌症包括鼻咽癌、胃癌、霍奇金(Hodgkin’s)淋巴瘤、伯基特(Burkitt’s)淋巴瘤等。

其中，鼻咽癌与EB 病毒相关性最高，并且高发于我国广东、香港等南方地区，被列为我国重点防治的十大恶性肿瘤之一。

目前，全球还没有可接种的EB 病毒防治疫苗。

而在我国，针对高发的EB 病毒阳性鼻咽癌，主要手段为放射性疗法同多种化疗药联合治疗，而针对晚期鼻咽癌患者的治疗手段则更为有限。

因此，开发防治EB 病毒感染所诱发相关疾病的变革性疫苗刻不容缓。

随着合成生物学、基因工程技术的进步，各种工程化合成疫苗载体得以迅速发展，并在EB 病毒预防及相关肿瘤综合治疗中发挥着越来越重要的作用。

2 EB 病毒EB 病毒主要通过唾液在鼻咽部及扁桃体传播感染，在鼻咽上皮细胞以及随上皮组织中的血管到达B 淋巴细胞中增殖复制或进入潜伏期。

EB 病毒基因组主要以附加体形式(Episomes)游离于宿主细胞的细胞核并编码约100 个基因[3]。

EB 病毒存在多种变异株，因此引发的相关疾病具有非常明显的地域差异。

例如，伯基特淋巴瘤高发于中非地区，霍奇金淋巴瘤高发于欧美国家，鼻咽癌高发于我国南方地区。

通过大量比对华南高发区与欧美地区及其他低发区鼻咽癌样本中EB 病毒的全基因组捕获测序，分析鼻咽癌发生与相应EB 病毒基因组的关系，证实广东地区约83% 的鼻咽癌患者感染的EB 病毒高危亚型为BALF2基因非同义变异位点BALF2_CCT，而并非普遍感染中国人群的LMP1-China1 亚株[4]，该亚型在欧洲和非洲等地则极为罕见。

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中国免疫学杂志２１年第２０１７卷
ｄｉ１．６／．ｓ．００４４２１．９０３ｏ：０３９ｊｉｎ１０ —８Ｘ．０１０．１９ｓ
人ＴＲＬ４胞外段的克隆、表达及功能活性分析①
王凡平王明永孙瑞利郭庆合张婧婧杨景瑞张新富段巨洪
ＷｅｔｒｌｔＦｒｅｍｒ，ｔｄｅｓｇＥＩＡｔｅｔｙｗｅｅｅｆｓｏｒｔｉｏｌｉｄｔＬＳａｄｕｉｇＦＭｏｉｅｔｙｗｈｔｅｔｓｎｂｏ．ｕｔｒｏｅｓｉｓｕｉＬＳｉｎｉｈｔｒｔｉｐｏｅｎｃｕｄｂｎｏＰ，ｓＣｔｄｎｉｅｒｉｅｈｕｎｏｄｆｈｈｕｎｎｎｆｈ
ＴＲＬ４中扩增人ＴＲＬ４胞外段基因片段，将其插入载体ｐＴ２并导人大肠杆菌Ｂ２１Ｄ３ｐｓＥ３ａＩ（Ｅ）ｌＳ中表达。用Ｎ２。ＴｙｉＮＡ琼脂糖柱纯化融合蛋白。ＳＳＰＧＤ－ＡＥ和免疫印迹分析目的蛋白的相对分子质量和抗原性，ＬＳＥＩＡ和ＦＭ鉴定其功能活性。结果：得Ｃ获
ｌｂｔａｔＯｊｃｖ：ｏｃｎ，ｘｒｓａｄａａｓｔｅｆｃｏａａｔｉｅｏｘａｅｄｒＬ４ｐｏｉｓＬ４．ｔｏｓＴｅＡｓｃＪｂｅｔｅＴｌｅｅｐｅｓｎｎｙｅｈｎｔｎｌｃｖｓｆｔｅｌａ－ＲｒｅｒｉｏｌｕｉｉｔｅｒｋＴｉｔｎ（ＴＲ）Ｍｅｄ：ｈｈ
１１ｂｌｐ的人ＴＲ９Ｌ４胞外段基因片段，构建成重组表达载体ｐＴ２－Ｌ４并在大肠杆菌中表达。ＴＲ一ｋ融合蛋白的表达量占Ｅ３ａＴＲＬ４ｒ
菌体总蛋白的１％，纯度较高。ＥＡ和ＦＭ检测显示，Ｌ４ＴＸ融合蛋白不仅与配体ＬＳ结合，２其ＨＳＣＴＲ一ｒＰ还能竞争性抑制ＬＳ与ＰＴＰ细胞结合。结论：Ｈ１所获ＴＲ－ｒ融合蛋白纯度高，Ｌ４Ｔｘ功能活性好，为进一步研究ＴＲ相关的免疫调节机制提供物质基础。Ｌ［关键词］ＴＲＬ４胞外段蛋白；因克隆；基重组表达；功能活性
ｇｎｎｏｉｇｓＬ４ｗｓａｒｌｅｒｍＣＮＡ一Ｌ４ｐａｍｉＮＡｂＣｉｓｒｄｉｔｈｅｖｃｏＥ１２ｎｄｅｐｅｓｄｉｃｌＢ２ｅｅｅｃｄｎＴＲａｒｐｉｄｆ／ｆｉｏｐＤ３ＴＲｌｓｄＤｙＰＲ，ｎｅｔｎｏｔｅｔｒ＇ａａｘｒｓｅｎＥ．ｏｉＬ１ｅｐ３
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ｃｌｌｒｆａｍｅｅｌａｒｇｎｔｕ
（乡医学院医学检验系，乡４３０）新新５０３
中国图书分类号Ｑ８７５文献标识码Ａ文章编号１０．８Ｘ（０１０．８８０００４４目的：获得高纯度、高活性的人ＴＲＬ４胞外段蛋白。方法：采用ＰＲ方法从含人ＴＲＤＡ的质粒ｐＤＡ一ＣＬ４ｅＮＣＮ３