小鼠睾丸支持细胞分离培养

合集下载

一种小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法

一种小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法真皮成纤维细胞是一种重要的细胞类型，其在生物医学研究、组织工程和再生医学等领域具有广泛的应用前景。

以下是一种常用的小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法：1. 实验前准备：- 小鼠或大鼠- 麻醉剂，如异氟醚等- 消毒剂- 必需的培养基和培养液2. 小鼠/大鼠的取材：- 麻醉小鼠或大鼠，确保其在实验过程中不会感到疼痛或不适。

- 消毒动物的表面，以减少细菌或其他微生物的污染。

- 取下小鼠/大鼠的皮肤。

使用消毒剪刀和镊子将皮肤切割成小块，以便后续的分离过程。

3. 细胞的分离和培养：- 将皮肤块转移到含有酶解消化液（如胰蛋白酶）的培养皿中，并在37°C的恒温搅拌器上进行酶解（通常为1-2小时）。

- 将酶解后的皮肤块过滤，移至新的培养皿中，加入培养基和培养液，如DMEM/F12或RPMI-1640，并添加10%胎牛血清。

- 将培养皿放在37°C的细胞培养箱中，保持适当的温度、湿度和CO2浓度。

- 培养皿中的细胞会开始生长和扩增。

定期更换培养基，并进行细胞的孵育以保持其正常生长。

4. 细胞的传代：- 当细胞密度达到80-90%时，使用胰蛋白酶或胰蛋白酶-EDTA溶液将培养皿中的细胞与培养皿底部松散的连接断开。

- 将细胞计数，并根据需要的细胞数量进行传代。

一般情况下，将细胞按照1:3或1:4的比例重新分装到新的培养皿中。

- 重复上述步骤，直到获得足够数量且健康的细胞。

这种方法能够有效地分离和培养小鼠或大鼠真皮成纤维细胞，为相关研究提供了重要的细胞资源。

通过优化培养条件和细胞的传代方法，可以获得高质量和稳定的细胞群体，以支持各种实验或应用的需要。

神经生长因子对小鼠睾丸支持细胞生理状态影响初探

中图分类号：Ｒ３３９．２１文献标识码：Ａ
ＮＧＦ对小鼠睾丸支持细胞生长有着重要的作用。
Ｔｈｅｐｒｅ－ｔｅｓｔｏｆｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｅｆｆｅｃｔｏｎｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｔａｔｅｏｆｍｏｕｓｅｔｅｓｔｉｓｓｅｒｔｏｌｉｃｅｌｌｓＦ【，『ＪＭ — “，ＺＨＥＮ（Ｌｉａｎ —
ｇｅｎａｓｅｅｎｚｙｍｅａｎｄｐａｎｃｒｅａｔｉｃｅｎｚｙｍｅｗｏｒｋｉｎｇｏｎｔｈｅＦｕｏｕｓｅｔｅｓｔｉｓｓｅｒｔｏｌｉｃｅｌｌｓｗｈｉｃｈｏｎｅｗｅｅｋａｇｅ，ｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｏｂ—
文章编号：１００７ —４２８７（２０１４）０３０３７４０３
神经生长因子对小鼠睾丸支持细胞生理状态影响初探、
付璐璐，郑连文，徐耀宏，张静文，梁文君，高利伟，胡文宇，王春强 ”
油红（）染色对分离得到的细胞进行鉴定；用加入ＮＧＦ的培养基和对照培养基分别体外培养小鼠睾丸支持细胞，探索ＮＧＦ对小鼠睾丸支持细胞生长情况的影响。结果分离得到ｒ较高纯度的小鼠睾丸支持细胞，培养４８小时后ＮＧＦ组的小鼠睾丸支持细胞生长情况明显优于对照组。结论关键词：神经生长因子；小鼠睾丸支持细胞

国家级动物科学实验教学示范中心建设项目

李勤凡
兽医临床诊断学实验实习指导编写
杨增歧
预防兽医学实习指导编写
靳亚平
临床兽医学实习指导编写
.实验室开放模式与制度的建立
序号
主持人
项目名称
苏利红
教学实验室开放运行与管理
王立新
水产科学实验室开放模式与管理办法的探索
耿果霞
教学、科研实验室共享运行管理模式的探索
宁蓬勃
动物疫病预防平台开放管理模式与制度的建立
龙明秀
牧草栽培学实验指导（双语）
高景慧
牧草种子学实验实习指导
王高学
水产动物病害学及疾病学实验实习指导
吉红
养殖水域生态学实验实习指导
周继术
鱼类增养殖学实习指导
赵慧英
动物解剖学实验实习指导编写
卿素珠
动物组织胚胎学实验指导编写
李新平
动物生理学实验指导编写
杨鸣崎
动物病理生理学实验指导编写
童德文
动物病理解剖学实验实习指导编写
临床兽医学实习改革
.本科实验教材、实习教材建设
序号
主持人
教材名称
田秀娥
动物繁殖学实验实习指导
雷初朝
蓝贤勇
动物遗传学实验指导
张建勤
顾玉兰
动物育种学实验指导
宋宇轩
家畜环境卫生学实验指导
牛竹叶
家畜生态学实验指导
王平
饲料分析实验指导
陈玉林
畜产品品质测定技术实验指导
刘福柱
禽生产学实习指导
杨朝霞
羊生产学实习指导
陈宏
动物遗传学实验教学改革
刘小林
动物育种学实验教学改革
龚月生
饲料分析实验、配合饲料及加工工艺实习教学改革

小鼠睾丸支持细胞分离培养及生物学特性鉴定

睾丸支持细胞是由意大利组织学家Ｓｒｌ于ｅｔｉｏ
１１，．主要试剂２
胶原酶Ｖ（ｉ公司）胰蛋白酶Ｓｍａｇ、
１６８５年发现的存在于生精上皮中的一种大细胞，作为曲精细管的重要组成部分，多年来被认为是生精细胞的支架［２１１。它参与构成生精细胞分化发育的最
１．方２法
释放、泌、疫豁免等多种功能【１分免３。
睾丸支持细胞的体外分离、培养对明确体内精子发生机理具有重要作用ｌ５１。另外，临床上将睾丸支持细胞和胰岛共移植可以降低免疫排斥反应，提高糖尿病治愈的成功率ｌ６１试验对国外睾丸支持细。本胞分离、化技术加以改进，此基础上，行小鼠纯在进
Ｎａ８０Ｃ１．ｇ，ＫＣ１．００４ｇ，Ｃ２１ｇ，ｇＯ４‘ Ｈ２Ｃａ１０．４ＭＳ７００．０ｇ，２２ＮａＨＰＯ４‘ Ｏ０ＫＨ２Ｏ４０．６ｇ，ＨＣＨ２０．６ｇ，Ｐ０ＮａＯ３
睾丸支持细胞原代培养，并对其生物学特性进行检
突起很多，核仁清晰，胞质中可见大小不等的红色空泡状脂质小滴。
关键词：睾丸支持细胞；离；分纯化；培养；小鼠
中图分类号：８５１０３￥６．－．￣３文献标识码：Ａ文章编号：２８７３（０８０－０７００５ — ０３２０）９０１— ４

Hsf1—潜在的睾丸支持细胞雄激素受体靶基因

ｇｙ公司）；内参ｐ — ａｃｔｉｎ抗体（美国Ｓｉｇｍａ — Ａｌｄｒｉｃｈ公
文献标志码Ａ文章编号１０００—１４９２（２０１３）０６— ０５８７— ０３
司）；热休克蛋白６０（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ６０，ＨＳＰ６０）、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＨＳＰ１０５抗体及二抗（美国Ｐｒｏｔｅｉｎ－
ｔｅｃｈ公司）；ＥＣＬ显色试剂盒（美国Ｐｉｅｒｃｅ公司）；
雄激素发挥效应依靠结合雄激素受体（ａｎｄｒｏ — ｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＡＲ），ＡＲ转录调控是通过结合靶基因的雄激素反应元件（ａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔｓ，ＡＲ－
安徽医科大学学报
ＡｃｔａＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＭｅｄｉｃｉｎａｌｉｓＡｎｈｕｉ２０１３Ｊｕｎ；４８（６）
・５８７・
Ｈｓ Ⅱ一潜在的睾丸支持细胞雄激素受体靶基因
王亚东，叶炯贤，牟丽莎，来永庆，李贤新，桂耀庭
被雄激素药物补救。尽管ＡＲ参与生精，但成熟
精子中并不表达ＡＲ＿３Ｊ。该研究通过对小鼠进行比
体系推荐使用２ｇ总ＲＮＡ进行反转为ｃＤＮＡ，并用

【国家自然科学基金】_小鼠睾丸_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140801

2008年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
科研热词小鼠睾丸精子发生隐睾胰岛素样因子3 精原干细胞生精细胞移植环境内分泌干扰物附睾间充质干细胞荧光定量pcr 自由基细胞增殖精原细胞睾丸引带热休克蛋白70 抗生育己烯雌酚实时荧光定量聚合酶链反应基因表达基因芯片分化克隆 spata3 dna甲基化龙葵碱黄犏牛黄牛雷公藤雄性不育间接免疫荧光锰锁阳多糖钙离子浓度金匮肾气丸/治疗应用金匮肾气酶联免疫吸附测定法邻苯二甲酸二(2-乙已基)酯邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯邻苯二甲酸二(2-乙基已基)酯邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯遗传性角膜病通用引物逆转录聚合酶链反应输精管转染转基因鼠转基因超氧化物歧化酶类/代谢超氧化物歧化酶(sod) 超微结构
谷胱苷肽(gsh) 诱蛋白视黄酸表面标志表达纯化表达潜表达序列标签行为学测试血液检测蛋白质免疫印迹分析脐带脏器重量/脏器指数脏器功能脂质过氧化胚胎胎鼠肿瘤-睾丸抗原ct45-5 肾阳虚/中医药疗法肺脏绿色荧光蛋白质类细菌脂多糖细胞核自身抗原精子蛋白(nasp) 细胞培养技术细胞培养细胞因子细胞周期细胞分选细胞凋亡组织表达谱线粒体纳米羟基磷灰石系统炎症精母细胞精子形成精子精卵融合精卵结合端粒酶睾丸组织睾丸注射睾丸发育睾丸/酶学白消安男性生殖细胞男性不育电离辐射电磁脉冲(emp) 电子克隆甲基敏感扩增多态性技术甲基化生育生精功能生物学特性生物信息学

小鼠睾丸支持细胞的分离培养与生物学研究

ｌｏｒｅｌｏｐｍｍｔｇｎａｔｍｅｌ．ａｓｎｗａｆｓｅｅｏｏｉｓｅｃｌｓｌＫｅｒｓＭｏｓＳｒｏｉｃｌ；ｓｌｔｎ；ｐｍｍｔｇｎａｔｍｅｌＰｏｉｒｔｏｙｗｏｄｕｅ；ｅｔｌｅｌＩｏａｉＳｅｏｏｏｉｓｅｃｌ；ｒｌｅａｉｎｌｆ
ｔｅｔｉｒｓＨＣｌｔｍｏｅｓｅｍｔｇｎｃｃｌｄｈｇｕｔｅｔｌｃＨｓｗｅｂａ，ｒａｅｗｔＴｉ— ｄｈｏｒｅｖｐｍｏｅｉｅｌａｉｈｐｆｙｓｒｏｉｅｒｏｔｉｓｎｅ￣ｄ．ｅｔｌｃＨｓｔａｅｔｔｍｙｉｗｒｓｄａｅｄｒＳｒｉｅｒｔｗｉｍｉｏｅｄｈｏｃｎＣｅｕｅｓｆｅｅｅｃｌ，ｏｓｕｙｔｅｅｅｔｏＩＯＳｐｍｍｔｇｎａｔｍｅｌ．ｔｒａｗｅｋｏｕｔｒｃｍｐａｗｉｏｔｏ，ｅｗｅＩＯｕｅｆｓｅｍｔｇｎａｔｍｅｓｔｔｄｈｆｃｎ／ＵｅｓｅｌｏｏｉｓｅｃｌｓＡｆｅｌｅｆｃｌｅ，ｏ￣ｕｈｔｃｎｒｌｔｒｈｅｅＩｒＴｒｎｍｂｒｐｍｏｏｉｓｅｅｏｌｃｌｅｉｅＭｏｈｎ９ｅｌｒｍａｎｄ．ｒｔａ０％ｏｈｅＳｒｌｃｌｓｅｆｔｅｔｉｅｌｏｓｗｅｅｉｌｔｄａｄｃｌｕｅＳｒｏｉｃｌａｒｍｏｅｐｏｉｅａｉｎｏｐｍｍｔｇｎａｔｍｅｌｂｉｕｌｒｓａｅｎｕｔｒｄ．ｅｔｌｅｌｃｐｏｔｒｌｒｔｆｓｅｏｓｎｆｏｏｏｉｌｓｅｃｌｏｖｏｓｙ．ｓ

小鼠睾丸支持细胞使用说明

小鼠睾丸支持细胞小鼠睾丸支持细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的小鼠睾丸支持细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。

研发的小鼠睾丸支持细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。

同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。

注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。

4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。

5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。

小鼠睾丸支持细胞产品简介：产品名称：小鼠睾丸支持细胞组织来源：小鼠睾丸产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠睾丸支持细胞细胞简介：睾丸支持细胞又称sertoli细胞。

它是生精细胞的支架,为其提供必需的营养物质,能合成与分泌雄激素结合蛋白,为其提供高浓度的雄激素环境等,还具有构成血-睾屏障,形成睾丸内微环境,调节精子发生等功能。

制备高活率的sertoli 不仅对sertoli的基础研究有重要价值,而且在精子发生等领域有重要意义。

本研究旨在建立小鼠sertoli的快速高效分离方法,并根据其分泌FasL的特性,采用细胞免疫化学方法对分离的小鼠sertoli进行鉴定,以期为进一步研究和应用sertoli奠定基础。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

小鼠睾丸支持细胞分离培养
一、材料和器械：
1、材料：小白鼠（18~ 20 日龄）1只
2、配液：
PBS 1L，高压灭菌
细胞洗液：DMEM+双抗
消化液：0 25% ( 质量分数) 胰蛋白酶，0 1%( 质量分数) 胶原酶
细胞培养液：DMEM+10%FBS+双抗
3、器械：
镊子、手术剪、手术刀各3-4把，高压灭菌
500mL烧杯2个，高压灭菌
25 mL离心管、5 mL离心管各20个，高压灭菌
酒精棉一瓶
细胞培养皿若干
冰块若干
二、操作步骤：
1、处死小鼠颈椎脱臼法处死；
2、消毒置于含75% ( 体积分数) 乙醇平皿中浸泡2 min, 然后置于超净台上；
3、取睾丸用中剪剪开下腹部皮肤, 眼科剪从下腹部附睾部剪断精索, 取出双侧睾丸, 放入含预冷细胞洗液的培养皿中；
4、取实质修剪睾丸附带的精索。

剥除睾丸被膜, 将睾丸实质剪成约1 mm 1 mm 1 mm 碎块, 静置3~ 4 min；
5、消化转入25mL 离心管中。

吸出上层细胞洗液, 每只睾丸加入1 5mL 37 预温的0 25% ( 质量分数) 胰蛋白酶，37 高速振荡消化15~ 20min, 直到残存的间质消化成粘液状, 可见成片断的曲细精管；
6、终止消化加入入少许血清终止消化,；
7、离心1000 r/ min离心5 min, 倾去上层胰酶。

加入DMEM/ F12 培养基重悬, 1000r/min 离心5min。

倾去上层培养液；
8、再消化每只睾丸加入1 mL 37 预温的0 1%( 质量分数) 胶原酶, 37 低速
缓慢振荡消化20~ 25min；
9、铜网过滤取滤液800 r/ min 离心5min, 2 次去除胶原酶, 用培养液洗涤；
10、接种往离心管加入细胞培养液5ml左右，吹打均匀，接种到两个30细胞培养皿中，补加培养液到培养皿1/3~1/2,培养皿标记显微观察后放入36CO2培养箱培养。

三、换液纯化，计数结果鉴定。