临床医学检验基础知识讲解：巨噬细胞功能的检测
巨噬细胞吞噬功能 检测指标
巨噬细胞吞噬功能检测指标
巨噬细胞的吞噬功能是其重要的免疫反应机制之一，用于摄取和消化病原微生物、细胞残骸、死亡细胞等。
以下是常用于检测巨噬细胞吞噬功能的指标：
1. 吞噬指数（Phagocytic index）：用于评估巨噬细胞吞噬能力的定量指标。
它代表了单个巨噬细胞吞噬过的颗粒数量。
2. 吞噬率（Phagocytic rate）：表示巨噬细胞吞噬某种颗粒的能力，通常以百分比形式呈现。
它反映了吞噬事件在总细胞群中的发生率。
3. 吞噬效能（Phagocytic efficiency）：衡量巨噬细胞吞噬过程中的效率，即吞噬活跃度与吞噬细胞总量的关系。
4. 黏附因子（Adhesion molecules）：这些分子介导巨噬细胞与被吞噬物颗粒的结合，对吞噬功能起着重要作用。
常用的黏附因子有CD14、CD11b等。
5. 溶酶体活性（Lysosomal activity）：巨噬细胞内的
溶酶体是吞噬过程中的关键器官，其酶活性可以反映巨噬细胞的消化能力。
这些指标可以通过多种实验方法进行测定，如流式细胞术、显微观察、免疫组化等。
评估巨噬细胞吞噬功能的变化可帮助了解免疫系统活性和疾病状态。
巨噬细胞吞噬功能测定的原理
巨噬细胞是免疫系统中的一类重要细胞，具有吞噬功能。
巨噬细胞通过吞噬和消化病原微生物、细胞碎片和其他异物，起到保护机体免受感染和清除废物的作用。
巨噬细胞吞噬功能测定是评估巨噬细胞活性和功能的一种方法。
巨噬细胞吞噬功能测定的基本原理如下：1.制备巨噬细胞：首先需要从人或动物体内获取巨噬细胞，常用的来源包括骨髓、外周血单个核细胞、脾脏等。
这些组织中含有大量未分化或分化成熟的巨噬细胞前体，经过适当培养条件可以诱导其分化为成熟的巨噬细胞。
2.刺激剂处理：为了评估不同刺激剂对巨噬细胞吞噬能力的影响，常常将刺激剂加入到培养基中与巨噬细胞共同培养。
常用的刺激剂包括细菌成分（如脂多糖）、细菌、病毒等。
刺激剂的添加可以模拟体内感染环境，激活巨噬细胞。
3.吞噬实验：巨噬细胞吞噬功能测定通常采用荧光标记的微粒（如琼脂糖微球、细菌等）来评估巨噬细胞吞噬能力。
首先将荧光标记的微粒加入到培养基中与巨噬细胞共同培养，一定时间后，通过显微镜观察和计数吞噬的荧光标记微粒数量，进而评估巨噬细胞的吞噬能力。
4.统计分析：通过对多个样本进行重复实验，可以得到吞噬率、吞噬指数等数据。
根据不同实验设计和目的，还可以进行其他统计学分析，如t检验、方差分析等。
总结起来，巨噬细胞吞噬功能测定就是通过将刺激剂处理后的巨噬细胞与荧光标记微粒共同培养，然后观察和计数吞噬的荧光标记微粒数量来评估巨噬细胞的吞噬能力。
这种测定方法可以用于评估巨噬细胞在不同条件下的活性和功能，进而研究免疫应答、感染和疾病发展等相关问题。
巨噬细胞吞噬功能测定在实验室中有广泛的应用。
通过该方法可以评估不同刺激剂对巨噬细胞活性的影响，了解它们在感染和炎症过程中的作用。
此外，该方法还可以用于筛选新药物或治疗方法对巨噬细胞吞噬功能的影响，为药物开发提供参考。
然而，在进行巨噬细胞吞噬功能测定时需要注意以下几个方面：1.工作环境：实验室必须具备严格的无菌条件，以避免外源性污染对实验结果的干扰。
小鼠巨噬细胞功能的检测
小鼠巨噬细胞功能的检测伍国强（兰州大学草业学院兰州730020）摘要：本实验用CFA免疫小鼠后，检测小鼠腹腔巨噬细胞的数目以及用中性红检测巨噬细胞的吞噬能力。
结果表明，免疫小鼠的腹腔巨噬细胞的数目和吞噬能力均有所提高。
关键词：巨噬细胞；功能；检测1 前言巨噬细胞是一种多功能免疫细胞,在机体的特异性和非特异性免疫反应中发挥重要功能。
主要作用有：（1）吞噬杀伤作用：直接吞噬、调理吞噬作用。
（2）抗原提呈作用：即外来的抗原性异物通过巨噬细胞的捕获、加工和处理后，与胞内合成的MHC-1/II类分子形成抗原肽－MHC分子复合物，并被呈递到细胞膜表面，被TCR 识别的作用。
具有此作用的细胞叫抗原呈递细胞（antigen presenting cell,APC)。
此外，巨噬细胞表面还表达多种共刺激分子，如B7、ICAM-1、LFA-1,3等分别与T细胞上的CD28、LFA -1(CD11)、LFA-2(CD2)等相互作用，为T细胞的活化提供第二信号。
（3）抗肿瘤作用：Mφ被某些细胞因子如IFN-γ激活后能有效杀伤肿瘤等靶细胞，其吞噬杀菌能力也显著提高。
（4）分泌生物活性介质，产生免疫应答和其它免疫效应：如IL-1,12、IFN、TNF、PGE等;以及某些补体成份和凝血因子、组织修复因子等。
为了检测巨噬细胞的吞噬功能，我们用CFA免疫的小白鼠作为实验材料检测其腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用。
2 材料与方法2．1 材料2．1．1 药品：生理盐水、0.6%环磷酰胺、Hank’s溶液、1640培养基、细胞裂解液、中性红等。
2．1．2 仪器：血球计数板、细胞培养箱、分光光度计等。
2．1．3 动物：小白鼠2只，由兰大医学院动物实验中心提供。
2.2、方法2．2．1 小鼠腹腔巨噬细胞制备取小白鼠2只，分为对照组和实验组，对照组注射0.1ml生理盐水，试验组注射0.1mlcFA。
48小时后，小鼠眼眶放血，断颈处死。
腹腔注射3ml预冷的生理盐水。
巨噬细胞功能检测讲解学习
巨噬细胞功能检测单核－巨噬细胞吞噬功能测定单核－巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要作用，因此，检测单核－巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态具有重要意义。
小鼠巨噬细胞吞噬功能试验（体外法）1、原理巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞噬物(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同温育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而评价机体的免疫状态。
2、方法(1)．小鼠巨噬细胞制备实验前三天每只小鼠腹腔注射1％可溶性淀粉1 ml。
实验时眼球放血、断椎处死小鼠，碘酒、洒精消毒皮肤，剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一小口(注意避开血管)用生理盐水(或1640)灌注腹腔，收集腹腔液于试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清，沉积细胞用生理盐水(或1640)洗二次，离心转速、时间同上。
最后沉积细胞用含10％小牛血清1640配成适当浓度备用(1~2×106／ml)。
(2)被吞噬物的制备1）．鸡红细胞制备从鸡翼下抽取静脉血，加入5倍量Alsever液(2.05 g葡萄糖，0.42 g NaCl，0.8 g枸橼酸钠5H2O、0.55 g枸椽酸，加双蒸水到100 ml，加热溶解后过滤分装，8磅高压灭菌，4℃保存)，置4℃可以保存1个月。
用前取适量鸡红细胞悬液，用PBS洗涤二次后配成1％的浓度备用。
2）．白色念珠菌制备将白色念珠菌接种于沙氏平皿培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去掉上清，再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。
3、操作取巨噬细胞0.5 ml加1％鸡红细胞或l×l08／ml白色念珠菌悬液0.5ml，置37℃温育30min。
取2滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察计数，或离心1000r／min,10min，取细胞沉淀混悬液制成涂片，甲醇固定，姬姆萨染色、油镜观察计数。
巨噬细胞功能检测讲解学习
巨噬细胞功能检测讲解学习巨噬细胞功能检测单核－巨噬细胞吞噬功能测定单核－巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要作用，因此，检测单核－巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态具有重要意义。
小鼠巨噬细胞吞噬功能试验（体外法）1、原理巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞噬物(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同温育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而评价机体的免疫状态。
2、方法(1)．小鼠巨噬细胞制备实验前三天每只小鼠腹腔注射1％可溶性淀粉1 ml。
实验时眼球放血、断椎处死小鼠，碘酒、洒精消毒皮肤，剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一小口(注意避开血管)用生理盐水(或1640)灌注腹腔，收集腹腔液于试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清，沉积细胞用生理盐水(或1640)洗二次，离心转速、时间同上。
最后沉积细胞用含10％小牛血清1640配成适当浓度备用(1~2×106／ml)。
(2)被吞噬物的制备1）．鸡红细胞制备从鸡翼下抽取静脉血，加入5倍量Alsever液(2.05 g葡萄糖，0.42 g NaCl，0.8 g枸橼酸钠5H2O、0.55 g枸椽酸，加双蒸水到100 ml，加热溶解后过滤分装，8磅高压灭菌，4℃保存)，置4℃可以保存1个月。
用前取适量鸡红细胞悬液，用PBS洗涤二次后配成1％的浓度备用。
2）．白色念珠菌制备将白色念珠菌接种于沙氏平皿培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水配成悬液，100℃，煮沸30 min 灭活，离心去掉上清，再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。
3、操作取巨噬细胞0.5 ml加1％鸡红细胞或l×l08／ml白色念珠菌悬液0.5ml，置37℃温育30min。
取2滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察计数，或离心1000r／min,10min，取细胞沉淀混悬液制成涂片，甲醇固定，姬姆萨染色、油镜观察计数。
巨噬细胞吞噬功能检测ppt课件
来源
来自于骨髓 腹腔中有固有的巨噬细胞和炎性巨噬细 胞 炎性巨噬细胞可以通过抗原刺激诱导
巨噬细胞功能
固有免疫：非特异性吞噬 获得性免疫：细胞免疫－抗原提呈
第一步
• 腹腔注射: 2ml 2% 鸡红细胞 • 作用30min • 标记小鼠
第二步
材料
镊子及眼科剪刀 注射器 PBS 缓冲液 15ml, 50-ml 离心管 离心机 涂片机
方法
6-ml注射器吸取3.0 ml PBS ，注射进小 鼠腹膜腔 按摩小鼠腹部3-5 min. 颈椎脱位法处死小鼠，酒精消毒 腹白线剪口，暴露腹膜壁
吸管进入腹膜腔 吸取腹膜液约8ml 收集的腹膜液重置于50ml离心管中离心
制作腹腔巨噬细胞涂片
一滴细胞悬液置于载玻片，1500 rpm离心 5min后风干。
甲醛固定，干燥后吉姆萨染色
镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞
巨噬细胞拓展实验报告
一、实验目的1. 深入了解巨噬细胞的生物学特性及其在免疫反应中的作用。
2. 探究巨噬细胞在不同实验条件下的吞噬功能变化。
3. 学习和掌握巨噬细胞分离、培养及功能检测的方法。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中重要的免疫细胞，具有强大的吞噬和抗原呈递功能。
在本实验中，我们将通过分离小鼠腹腔巨噬细胞，观察其在不同实验条件下的吞噬功能，以探讨巨噬细胞在免疫反应中的作用。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：小鼠（雄性，体重18-22g）2. 仪器：解剖显微镜、离心机、培养箱、显微镜、细胞培养板等3. 试剂：无菌生理盐水、无菌淀粉液、鸡红细胞、冷亚甲蓝染液、胰蛋白酶、RPMI-1640培养基、胎牛血清等四、实验方法1. 巨噬细胞分离与培养- 将小鼠麻醉后处死，打开腹腔，用无菌生理盐水冲洗腹腔，收集腹腔液。
- 将腹腔液离心（1000r/min，10min），弃去上清液，加入胰蛋白酶消化液（1mg/ml）消化细胞，消化时间为5-10min。
- 消化结束后，加入胎牛血清终止消化，离心（1000r/min，10min），弃去上清液，加入RPMI-1640培养基重悬细胞。
- 将细胞接种于培养板中，置于培养箱中培养。
2. 巨噬细胞吞噬功能检测- 将培养好的巨噬细胞分为实验组和对照组。
- 实验组：加入鸡红细胞，培养一段时间后，观察巨噬细胞的吞噬功能。
- 对照组：不加入鸡红细胞，培养一段时间后，观察巨噬细胞的吞噬功能。
3. 数据分析- 通过显微镜观察巨噬细胞的吞噬现象，记录吞噬细胞的数量和吞噬指数。
- 对实验组和对照组的数据进行统计分析，比较两组间的差异。
五、实验结果1. 巨噬细胞分离与培养- 成功分离出巨噬细胞，细胞形态呈圆形或椭圆形，大小不一。
2. 巨噬细胞吞噬功能检测- 实验组巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力明显强于对照组。
六、实验分析1. 通过分离培养小鼠腹腔巨噬细胞，成功建立了巨噬细胞培养体系。
2. 实验结果表明，巨噬细胞具有较强的吞噬功能，在免疫反应中发挥着重要作用。
巨噬细胞功能实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞在免疫过程中的作用。
2. 掌握巨噬细胞的分离、培养和鉴定方法。
3. 学习巨噬细胞吞噬功能的检测方法。
二、实验原理巨噬细胞是一种具有强大吞噬功能的免疫细胞，在免疫过程中起着重要作用。
巨噬细胞能够识别、吞噬和消化病原微生物、凋亡细胞等异物，并参与抗原呈递、免疫调节等过程。
本实验通过分离、培养和鉴定小鼠腹腔巨噬细胞，并检测其吞噬功能，以了解巨噬细胞在免疫过程中的作用。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：6-8周龄小鼠2. 试剂：胎牛血清、RPMI-1640培养基、无菌生理盐水、鸡红细胞、冷亚甲蓝染液等3. 仪器：超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、移液器、培养皿、离心机等四、实验方法1. 巨噬细胞的分离与培养（1）小鼠处死后，打开腹腔，取出肠系膜，剪成1cm×1cm的小块。
（2）将小块组织放入装有生理盐水的培养皿中，用剪刀剪碎，制成组织悬液。
（3）将组织悬液移入离心管，以1000r/min的速度离心5min，弃去上清液。
（4）加入适量RPMI-1640培养基，重悬细胞，以1000r/min的速度离心5min，弃去上清液。
（5）加入适量胎牛血清的RPMI-1640培养基，重悬细胞，调整细胞浓度至1×10^6个/mL。
（6）将细胞悬液接种于培养皿中，放入CO2培养箱中培养24h。
2. 巨噬细胞的鉴定（1）取少量细胞悬液，加入适量台盼蓝染液，混匀，室温放置5min。
（2）用血细胞计数板计数，计算细胞死亡率。
（3）收集培养24h的细胞，用倒置显微镜观察细胞形态，判断细胞类型。
3. 巨噬细胞吞噬功能的检测（1）取适量鸡红细胞，用生理盐水洗涤3次，调整红细胞浓度为2×10^9个/mL。
（2）将鸡红细胞加入巨噬细胞培养液中，37℃、5%CO2条件下孵育30min。
（3）取出细胞，用生理盐水洗涤3次，弃去上清液。
（4）加入适量冷亚甲蓝染液，混匀，室温放置5min。
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人巨噬细胞可从外周血或经斑蝥激发的皮疱液中获取，也可从肺灌洗液或患者腹膜透析液中分离，但操作繁锁，得量不多。
许多实验室在进行基础或配合临床研究巨噬细胞功能及其与疾病的关系、或筛检免疫增强药物和探讨其作用机制时，常选用小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象，常用的检测方法如下。
(一)炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒，据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。
(二)吞噬功能的检测
巨噬细胞具有较强的吞噬功能，实验室常用比细菌大的细胞性抗原作为被吞噬颗粒，如鸡红细胞。
其检测原理是将受检细胞与适量的颗粒抗原混合后，置37℃保温0.5～1h，其间时加振摇，最后离心取测定细胞制成涂片，染色镜检，分别计数出吞噬百分比和吞噬指数。
各实验室应根据自己的条件建立正常参考值。
(三)巨噬细胞溶酶体酶的测定
巨噬细胞富含溶酶体酶，如酸性磷酸酶、非特异性酯酶、溶菌酶等，测定这些酶的活性也是衡量巨噬细胞功能的实用指标之一。
1.酸磷酸酶的测定
(1)硝酸铅法：本法优点是用普通试剂，价格便宜，一般实验室均有条件做，封片后可较长时间保存，并可用电子显微镜研究观察细胞的超微结构。
缺点是细胞必需固定，而且固定条件要求严格，如处理不当酶活性易消失，反应步骤也较多。
该法基本原理是在适当的酶性条件下，巨噬细胞内的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸钠水解成磷酸盐后，后者与硝酸铅反应产生磷酸铅，而磷酸铅再与硫酸铵反应则形成黑色硫化铅，沉积在胞浆内酸所在处，显示棕黑色颗粒。
酶活性强弱可根据颗粒的数量和粗细不同而分级判断，颗粒数量少则细的为+，颗粒多而粗的为++，颗粒很多且很粗的为+++。
(2)偶氮法：本法操作简便，反应液中的底物α-萘磷酸钠被酸性磷酸酶分解后，形成萘酚和磷酸盐，而萘酚结构中的羟基(-OH)邻近的活泼碳原子，立即与偶氮染料起反应，而产生鲜艳的棕色沉积在酶所在处，缺点是封片后保存时间短。
2.非特异性酶的测定该酶比较稳定，酶活性丧失较慢，细胞经涂片干燥，置室温至少可保存半天至一天，因此特别有利于临床检验室采用。
常用α-萘醋酸法，该酶可将-萘醋酸分解成萘酚和醋酸，萘酚迅速与偶染料结合，形成有色反应物而沉积。
(四)巨噬细胞促凝血活性测定
激活巨噬细胞可产生一种与膜结合的凝血活性因子，加速正常血浆的凝固，为此取已经37℃预温的正常兔血浆和CaC12混合液，加入经粘附单层巨噬细胞的试管中，移置37℃，即时记录血浆凝固时间。
实验证明当巨噬细胞与LPS、肿瘤相关抗原或HbsAg等温育后，可见血浆凝固时间明显缩短。
本法稳定方便，也是检测不同疾病患者巨噬细胞功能的指标之一。
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