XBP1调控胶质瘤细胞氧化应激的实验研究(参考课件)
X盒结合蛋白1调控胶质瘤细胞氧化应激的研究
收稿日期：2010-01-16修回日期：2010-01-30通讯作者：赵世光Correspondence to:Shi -guang ZhaoTel:86-451-53629254E -mail:guangsz@此文为第六届中国肿瘤学术大会优秀论文X 盒结合蛋白1调控胶质瘤细胞氧化应激的研究刘耀华,杨光,张旭,陈晓丰,于洪伟,郑天虎,汪立刚,赵世光（哈尔滨医科大学附属第一医院神经外科，黑龙江哈尔滨150001）【摘要】背景与目的：活性氧（ROS ）可以通过诱导细胞氧化应激而诱导凋亡，肿瘤包括胶质瘤在体内的生长均处于高活性氧的状态，提高胶质瘤细胞对活性氧-氧化应激的敏感性可抑制肿瘤在体内的生长侵袭，而且还可以增强一些诱导活性氧的化疗药物的疗效。
本研究通过干预XBP1基因的表达，观察XBP1是否可调控胶质瘤细胞对氧化应激的敏感性，并探讨其机制。
方法：用siRNA 转染技术抑制U251MG 细胞XBP1基因的表达后对比细胞对H 2O 2诱导的细胞死亡、线粒体膜电位下降、活性氧堆积、以及P38磷酸化，以此来反映细胞内氧化应激的水平；并比较细胞内抗氧化分子的表达情况；将XBP1基因过表达后观察能否起到相反的效果；最后应用启动子突变技术分析XBP1对Catalase 表达的影响。
结果：U251MG 细胞XBP1表达抑制后可以显著提高H 2O 2诱导的细胞死亡、线粒体膜电位下降、活性氧堆积以及延长P38的磷酸化，并降低细胞内一些抗氧化分子包括过氧化氢酶表达，XBP1过表达可以增强Catalase 表达并且降低ROS 堆积；启动子序列突变分析结果显示XBP1增强Catalase 表达的效应完全依赖于启动子序列的CCAAT 框。
结论：XBP1对氧化应激引起的细胞损伤具有保护作用；其可能机制至少是通过上调Catalase 的表达实现。
抑制XBP1的表达可能作为一种分子靶向，对胶质瘤治疗有积极意义。
关键词：胶质瘤；XBP1；氧化应激；活性氧中图分类号:R739.41文献标识码:A文章编号:1726-8192（2010）01-0001-08Role of XBP1in the Regulation of Sensitivity of Glioma toOxidative StressYao -hua Liu,Guang Yang,Xu Zhang,Xiao -feng Chen,Hong -wei Yu,Tian -hu Zhen,Li -gang Wang,Shi -guang ZhaoDepartment of Neurosurgery,1st Clinical College of Harbin Medical university,Harbin 150001,P.R.China【ABSTRACT 】BACKGROUND &OBJECTIVE:High level of reactive oxygen species (ROS)can activateoxidative stress,which may lead to apoptosis.Cancer cells,including glioma cells,have to survive under conditions of high ROS level in vivo.Tumor invasion or development may be suppressed and the anti-cancer effects of some ROS -inducing agents may be augmented by increased sensitivity to oxidative stress in cancer cells.In this study,we investigated whether XBP1has an antioxidant role in glioma cells and what is the mechanism of this role.METHOD:Glioma cell line U251was used in this experiment.XBP1expression level in glioma cells was knocked down by SiRNA transfection.After exposure to hydrogen peroxide (H 2O 2),cell death,MMP loss,ROS level and P38phosphorylation were examined to show the oxidative stress level and expression of a variety of antioxidant molecules was compared in those cells.Overexpression of XBP1was performed to observe the converse effects.Promoter mutation analysis was taken to explore the mechanism of varied catalase expression level by XBP1.RESULT:Afterexposure to H 2O 2,more extensive loss ofmitochondrial membrane potential (MMP)and subsequent cell death,ROS generation and prolonged P38phosphorylation were observed in XBP1-KO cells.Lower expression of several antioxidant molecule s including catalase was also found.In addition,similar results were·论著·《中国神经肿瘤杂志》2010，8（1）：1-81胶质瘤是最常见的中枢神经系统肿瘤。
XBP1在氯化钴诱导骨肉瘤细胞缺氧环境下抗凋亡作用实验研究
XBP1在氯化钴诱导骨肉瘤细胞缺氧环境下抗凋亡作用实验研究杨接来;程冬冬;朱斌;闫明霞;姚明;杨庆诚【摘要】目的探讨在氯化钴诱导骨肉瘤细胞缺氧情况下，X 盒结合蛋白1（XBP1）在骨肉瘤细胞中表达量的变化、其对细胞凋亡的影响及与低氧诱导因子（HIF）-1α信号转导通路的关系。
方法通过氯化钴诱导骨肉瘤 MNNG、MG-63细胞达到模拟缺氧状态，通过实时聚合酶链式反应（PCR）检测不同时间、不同氯化钴浓度下 HIF-1α和 XBP1的表达情况；采用流式细胞仪检测骨肉瘤细胞凋亡率；采用siRNA 干扰技术，下调 XBP1。
实验将骨肉瘤细胞分为干扰组（经 XBP1 siRNA转染骨肉瘤细胞）和空白对照组（未经 XBP1 siRNA 转染骨肉瘤细胞）。
结果XBP1表达具有氯化钴浓度和时间依赖性：一定范围内，随着氯化钴浓度增高和时间延长，XBP1表达升高；敲除 XBP1后，干扰组骨肉瘤细胞凋亡率明显高于对照组（P ＞0．05）；PCR 检测 HIF-1α及下游靶基因 mRNA 表达无明显变化（P＜0．05）。
结论XBP1在氯化钴诱导缺氧的骨肉瘤细胞中表达明显增高，其对骨肉瘤细胞在缺氧环境下抗凋亡有明显作用，其抗凋亡作用与 HIF-1α信号转导通路无直接关联，具体机制有待进一步研究。
%Objective To investigate the expression level,anti-apoptotic effect and association with hypoxia inducible factor-1α(HIF-1α) signaling of X-box binding protein 1 (XBP1s)in osteosarcoma cells under CoCl2-induced hypoxic condition.MethodsCoCl2 was used to simulate hypoxic environment for MNNG and MG-63 cells.The expression of XBP1s and HIF-1αmRNA of osteosarcoma cells were detected by real-time polymerase chain reaction (PCR)for treatment of different CoCl2 concentration and time span.Flow cytometry was utilizedto measure the apoptotic rate of osteosarcoma cells.The siRNA interfering technique was used to reduce the expression of XBP1s.The osteosarcoma cells were divided into the XBP1s-siRNA transfected group and the un-transfected group.Results XBP1s expression was CoCl2-concentration and time-dependent,which increased with the raised CoCl2 concentration and prolonged time in a certain range.After knockdown of XBP1s,the cell apoptotic rate of osteosarcoma cells in the hypoxic group was significantly higher than that in the control group (P >0.05).However,the PCR results showed that there was no significant changes of HIF-1α and its downstream targeted genes after knockdown of XBP1s (P <0.05 ). Conclusion XBP1s could be increased remarkably in osteosarcoma cells after CoCl2-induced hypoxic treatment.It has anti-apoptotic effects on osteosarcoma cells under hypoxic condition.However,there is little relationship between XBP1s and HIF-1αsignaling pathway.The specific mechanism for XBP1s acting as an anti-apoptotic gene in osteosarcoma is needed further deeper investigation.【期刊名称】《国际骨科学杂志》【年(卷),期】2016(037)002【总页数】6页(P123-128)【关键词】骨肉瘤;X 盒结合蛋白 1;低氧诱导因子-1α信号转导通路;氯化钴;缺氧【作者】杨接来;程冬冬;朱斌;闫明霞;姚明;杨庆诚【作者单位】200233，上海交通大学附属第六人民医院骨科;200233，上海交通大学附属第六人民医院骨科;200233，上海交通大学附属第六人民医院骨科;200032，上海市肿瘤研究所;200032，上海市肿瘤研究所;200233，上海交通大学附属第六人民医院骨科【正文语种】中文恶性肿瘤的形成原因为肿瘤细胞无限增殖，细胞增殖过快必将导致局部组织营养不足。
脑胶质瘤中凋亡抑制生存基因和细胞周期蛋白 b1的表达及临床意义
脑胶质瘤中凋亡抑制生存基因和细胞周期蛋白 b1的表达及临床意义文志华;宋小兵;江普查;袁先厚【摘要】Objective To investigate the expression of survivin gene in human gliomas and its correlation with cyclin b1 .Methods The expression of survivin and cyclin b1 in 41 cases of glioma tissue and 10 cases of normal brain tissue were assessed by immunohistochemistry staining (SABC) method .Results The survivin gene expression pro-tein had no expressionin the normal brain tissue ,among 41 cases of glioma ,25 cases had the surviving positive ex-pression ,accounting for 61 .0% (25/41) .The expression had statistical difference between the grade Ⅰ - Ⅱ and gradeⅢ - Ⅳ (P< 0 .05) .There also was close correlation between surviving protein expression and cyclin b1 protein expression (rs = 0 .836 ,P <0 .01) .Conclusion The abnormal expression of survivin plays an important role in the development of glioma ,which together with cyclin b1 may play a promotion role in the stage G2 /M of glioma cell mi-tosis .%目的：探讨凋亡抑制生存基因（survivin）在人脑胶质瘤中的表达及其与细胞周期蛋白（cyclin）b1蛋白表达的相关性。
P53P21通过抑制TIMP-2表达促进人胶质瘤干细胞侵袭的机制研究的开题报告
P53P21通过抑制TIMP-2表达促进人胶质瘤干细胞侵袭的机制研究的开题报告一、研究背景胶质瘤是一种高度侵袭性的肿瘤，具有很高的死亡率。
近年来，研究表明胶质瘤干细胞起着重要的作用，是胶质瘤治疗中难以克服的难题。
因此，对胶质瘤干细胞分子调控机制的研究具有重要的意义。
P53是一种肿瘤抑制因子，与肿瘤的发生和发展密切相关。
P21是P53介导的抑癌基因。
研究表明，P53P21可以通过抑制细胞周期的进程，起到抑制肿瘤细胞增殖的作用。
而TIMP-2是一种金属蛋白酶抑制剂，具有抑制肿瘤细胞侵袭和转移的作用。
因此，本研究旨在探究P53P21通过抑制TIMP-2表达促进胶质瘤干细胞侵袭的机制，为胶质瘤的治疗提供新的思路和方法。
二、研究内容和方法1.研究内容通过建立胶质瘤干细胞模型，验证P53P21的抑癌作用和TIMP-2的抑制作用。
进一步研究P53P21是否能够通过抑制TIMP-2表达来促进胶质瘤干细胞的侵袭和转移。
2.研究方法2.1 建立胶质瘤干细胞模型选择人胶质瘤干细胞进行研究。
利用细胞培养技术和肿瘤球体培养技术，建立胶质瘤干细胞模型。
2.2 验证P53P21的抑癌作用和TIMP-2的抑制作用采用Western blotting技术检测胶质瘤干细胞中P53、P21和TIMP-2的表达水平，并采用MTT实验检测不同浓度P53P21和TIMP-2的抗增殖作用。
2.3 研究P53P21是否能够通过抑制TIMP-2表达来促进胶质瘤干细胞的侵袭和转移采用Transwell实验和Wound healing实验检测胶质瘤干细胞的侵袭和转移能力，观察P53P21和TIMP-2对胶质瘤干细胞侵袭和转移能力的影响。
三、研究意义和预期结果本研究可以对胶质瘤干细胞的分子调控机制有更深入的认识，为胶质瘤的治疗提供新的思路和方法。
预期结果是通过研究P53P21和TIMP-2的调控机制，探究P53P21是否能通过抑制TIMP-2表达来促进胶质瘤干细胞的侵袭和转移，为胶质瘤的治疗提供新的方向和方法。
X盒结合蛋白1调控胶质瘤细胞氧化应激的研究
《 国神 Leabharlann 肿 瘤 杂 志》２ １ ，（ ） １ ８ 中 ０ ０ ８ １ ：－
．
论著 ．
Ｘ 盒 结 合 蛋 白 １调 控 胶 质瘤 细 胞 氧 化 应 激 的研 究
刘耀华， 杨 光 ， 张 旭 ， 晓丰 ， 洪伟 ， 天 虎 ， 立 刚， 世 光 陈 于 郑 汪 赵
（ 尔滨 医科 大 学 附属 第 一 医 院神 经 外 科 ，黑 龙 江 哈 尔 滨 １０ ０ ） 哈 ５ ０ １
Ｄ ｐ ｒ ｎ ｅｒｓｒｅｙ １ｔ ｌ ｉ ｌＣ ｌ ｇ ａｂｎＭｅ ｉａ ｕ ｉｅｓ ｙ Ｈ ｂｎ１ ０ ０ ， ． Ｃ ｉ ｅ ａｔ ｔｆＷ ｕｏｕｇ ｒ， ｓ Ｃ ｉ ｃ ｏ ｅｅｏ Ｈ ｒｉ ｍｅ ｏ ｎ ａ ｌ ｆ ｄｃｌ ｎｖｒｉ ， ａ ｉ ５ ０ １ 尸 Ｒ． ｈｎ ｔ ｒ ａ
Ｏｘ ｄ ｔｖ ｔ ｅ ｓ ｉ ａ ｉ ｅ Ｓ ｒ ｓ
抗胶质瘤Ⅰ号方对脑胶质瘤细胞侵袭性的影响
抗胶质瘤Ⅰ号方对脑胶质瘤细胞侵袭性的影响目的：探讨抗胶质瘤Ⅰ号对胶质瘤细胞侵袭性降低的作用及其与PI3K/PKB信号传导通路之间的关系。
方法：MTT法检测抗胶质瘤Ⅰ号处理培养的C6胶质瘤细胞的抑制率，免疫印迹法检测肿瘤细胞内PI3K和PKB表达水平，最后，利用结晶紫染色法检测Transwell下室面的胶质瘤细胞数。
结果：抗胶质瘤Ⅰ号可以抑制PI3K和PKB蛋白表达水平，抗胶质瘤Ⅰ号作用0.5 h时PI3K蛋白表达水平最低为（25.1±3.1），作用1 h时PKB蛋白表达水平最低为（25.1±3.8），与对照组的（99.1±1.6）、（91.2±3.5）比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
而抗胶质瘤Ⅰ号作用3 h时对胶质瘤细胞的抑制程度最大，抑制率为（91.2±5.7）%，与对照组的（68.0±5.2）%比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。
且此时Transwell 下室面的细胞数最少，为（1.4±0.4）×106个，与对照组的（35.6±2.7）×106个比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论：抗胶质瘤Ⅰ号可能是通过抑制PI3K/PKB而抑制胶质瘤细胞的增殖，从而引起胶质瘤细胞侵袭性的降低。
在中枢神经系统肿瘤中，胶质瘤是最为常见的[1-3]。
而对于胶质瘤的治疗，除了大家广为熟悉的手术治疗以外，还往往在术后进行相应的放、化疗等辅助治疗[4-5]。
这是由于胶质瘤侵袭性高，而手术只能切除成型的病灶，已经侵袭到远处的膠质瘤细胞不易发现也做不到全部清除，因此术后胶质瘤患者往往复发率极高。
抗胶质瘤Ⅰ号方中的部分成分已经应用于临床其他肿瘤的治疗并取得了一定的效果，文献[6]研究发现，抗胶质瘤Ⅰ号具有抗胶质瘤作用，但其确切的分子生物学作用机制尚不十分清楚。
1 材料与方法1.1 材料与试剂（1）C6大鼠脑胶质瘤细胞株由中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心提供。
最新XBP1调控胶质瘤细胞氧化应激的实验研究-PPT文档
实验结果一
对H2O2的敏感性比较
survival fraction(%of total)
100
80
*
60
**
40
20
0 0
**
0.1
0.25
0.5
1
H2O2 concentration (mM)
Random
SiXBP1
H2O2处理后trypan blue检测细胞生存情况 *P<0.05, **P<0.01
13.0
流式细胞技术检测线粒体膜电位（MMP）
实验结果二
抑制XBP1特异性增强细胞对氧化应激的敏感性
survival fraction(%of total)
100 80 60 40 20 0 0
* **
**
5
10
20
40
PTL concentration (uM)
Random
SiXBP1
对活性氧诱导剂PTL的敏感性比较（*P<0.05, **P<0.01)
实验结果四
XBP1与细胞抗氧化分子的表达
c e ll d e a th (% o f to ta l)
100 80 60 40 20 0 C
**P<0.01
AT H2O2 AT+H2O2
AT H2O2 C 1h 2h 3h C 1h 2h 3h
PP38 P38
C
0.9
M1
AT 0.9
M1
0 200 400 600 FL2-A
c a ta la s e tra ns c ripts (fo ld)
Random XBP1
Catalase SOD1 TRX1 GPX GAPDH
XBP1对低氧环境下胶质瘤细胞活力及糖酵解的影响
摘要 目的 ： 明确低氧应激 对胶 质瘤细胞 ｘ 一 盒结合蛋 白 １ （ Ｘ — ｂ ｏ ｘ ｂ ｉ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ １ ， Ｘ Ｂ Ｐ １ ） 的作 用 ； 明确胶质 瘤细胞ＸＢ Ｐ １ 表达与
Ｔ ｈ ｉ ｓ ｗｏ ｒ ｋ ｗ ａ ｓ ｓ ｕ ｐ ｐ ｏ ｔ ｒ ｅ ｄ ｂ ｙ ｔ ｈ ｅ Ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ Ｉ Ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｆ ｏ ｕ ｎ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ（ Ｎ ｏ ． ８ １ ３ ７ ２ ７ ０ １ ） Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ０ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ： Ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ｃ ｓ ｔ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｎ ｇ ｌ ｉ ｏ ｍａ ｃ ｅ ｌ ｌ Ｘ Ｂ Ｐ １ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ， ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｈ ｉ ｐ ｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎ Ｘ Ｂ Ｐ １ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ —
ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｓ ｕ ｇ ａ ｒ ｍｅ ｔ ａ ｂ ｏ ｌ ｉ ｓ ｍ， ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｆ ｌ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ Ｘ Ｂ Ｐ １ ｒ ｅ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｓ ｕ ｒ ｖ ｉ ｖ ａ ｌ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ ｇ ｌ ｉ ｏ ｍａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｎ ｏ ｒ ｍｏ ｘ ｉ ａ ａ ｎ ｄ ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ａ ， ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｆ ｌ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ Ｘ Ｂ Ｐ １ ｏ ｎ ｇ ｌ ｉ ｏ ｍａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｇ ｌ ｙ ｃ ｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ： Ｗｅ ｔ ｅ ｓ ｔ ｅ ｄ Ｘ Ｂ Ｐ １ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｈ ｕ ｍａ ｎ ｇ ｌ ｉ ｏ ｍａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ ｓ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｄ ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｎ ｏ ｒ ｍｏ ｘ ｉ ａ ａ ｎ ｄ ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ａ ． Ｘ Ｂ Ｐ １ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ｒ ｅ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｓ ｉ Ｒ ＮＡ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ． Ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｐ ｈ Ｏ ｓ ｐ ｈ ０ ｒ ｙ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ． Ｗｅ ｔ ｈ ｅ ｎ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｔ ｈ ｅ ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｃ ｅ ｌ ｌ ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ， ｓ ｕ ｇ ａ ｒ ｍｅ ｔ ａ ｂ ｏ ｌ ｉ ｓ ｍ ｍｏ ｄ ｅ ， ａ ｎ ｄ ｃ ｅ ｌ ｌ ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｄ ｇ ｌ ｙ ｃ ｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｓ ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｎ ｏ ｒ ｍｏ ｘ ｉ ａ ａ ｎ ｄ ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ａ ． Ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ： Ｘ Ｂ Ｐ １ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｄ ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ａ ． Ｓ ｉ ｌ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｇ Ｘ Ｂ Ｐ １ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｇ ｌ ｉ ｏ ｍａ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｕ ｒ ｖ ｉ ｖ ａ ｌ ｌ ｅ ｖ ｅ ｌ ， Ａ Ｔ Ｐ ａ ｎ ｄ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ａ ｎ ｄ ｇ ｌ ｕ ｃ ｏ ｓ ｅ ｃ ｏ ｎ ｓ ｕ ｍｐ ｔ ｉ ｏ ｎ ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｈ ｙ ｐ ｏ ｘ ｉ ａ ． Ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｉ ｎ ｇ ｃ ｅ ｌ ｌ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｐ ｈ Ｏ ｓ ｐ ｈ Ｏ ｒ ｙ Ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， Ｘ Ｂ Ｐ １ ｒ ｅ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验结果一
对H2O2的敏感性比较
-C
H2O2-0.5
Random
7.1
100 101 102 103 104 FL1-H
-C
2299..44
100 101 102 103 104 FL1-H
H2O2-0.5
SiXBP1
5.4
100 101 102 103 104 FL1-H
60.3
100 101 102 103 104 FL1-H
实验结果二
抑制XBP1特异性增强细胞对氧化应激的敏感性
cell death(%of total)
50
random
SiXBP1
40
30
20
10
0 C
VP16
FK228
对其它2种化疗药物诱导的细胞死亡没有明显区别
实验结果二
XBP1缺失特异性增强细胞对氧化应激的敏感性
Random-C.001
Random-PTL-20
Random C 1h 2h 3h
SiXBP1 C 1h 2h 3h
Catalase
SOD1
TRX1
GAPDH
Random C 3h 6h 9h
SiXBP1 C 3h 6h 9h
Catalase 14-3-3
H2O2 处 理 细 胞 后 未 见 Catalase 、 SOD1 和 TRX1表达变化
实验结果四
13.0
流式细胞技术检测线粒体膜电位（MMP）
实验结果二
抑制XBP1特异性增强细胞对氧化应激的敏感性
survival fraction(%of total)
100 80 60 40 20 0 0
* **
**
5
10
20
40
PTL concentration (uM)
Random
SiXBP1
对活性氧诱导剂PTL的敏感性比较（*P<0.05, **P<0.01)
研究背景
活性氧（ROS）与胶质瘤
➢ 肿瘤，包括胶质瘤可以产生高水平活性氧； ➢ 肿瘤细胞的Akt过度激活，决定了其对活性氧敏感; ➢ 大量活性氧可以杀伤肿瘤，很多化疗药物为活性氧诱导剂; ➢ 调控胶质瘤细胞氧化应激水平可能对其治疗具有积极意义。
研究背景：内质网应激、氧化应激、XBP1
Hypoxia ROS
c a ta la s e tra ns c ripts (fo ld)
Random XBP1
Catalase SOD1 TRX1 GPX GAPDH
1.0
0.8
0.6
0.4
**
0.2
0.0 random SiXBP1
抑制XBP1后细胞中抗氧化分子的mRNA水平 (**P<0.01)
实验结果四
XBP1与细胞抗氧化分子的表达
Random-FK228
Random-VP16
9.0
100 101 102 103 104 FL1-H
SiXBP1-C
15.2
100 101 102 103 104 FL1-H
SiXBP1-PTL-20
28.6
100 101 102 103 104 FL1-H
SiXBP1-FK228
26.9
100 101 102 103 104 FL1-H
ERSE XBP1 NF-Y
target genes
transcripts transcripts transcripts
实验设计
➢ 胶质瘤细胞系U251MG进行RNA干扰，抑制XBP1基因表达后比 较细胞对外源性活性氧H2O2的敏感性；
➢ 流式细胞技术检测ROS蓄积和线粒体膜电位； ➢ 检测比较细胞内抗氧化分子表达水平； ➢ 将细胞进行XBP1基因过表达，观察能否起到相反的效果； ➢ 应用启动子突变分析探讨XBP1促抗氧化分子转录活性的机制。
XBP1与细胞抗氧化分子的表达
c e ll d e a th (% o f to ta l)
**P<0.01
100
80
60
40
XBP1调控胶质瘤细胞氧化应激的 实验研究
刘耀华 赵世光 陈晓丰 梁元 郑秉杰
哈尔滨医科大学附属第一医院 神经外科
ROS
The Achilles’ Heel of cancer cells(Cancer Cell. 2008;14(6):427-9 IF 24.962)
Catalase SOD
Exogenous ROS:CTanhceerlCaesltl 1s4t,rDaewcebmrbeera9k,s20t0h8e camel's back.
Nutrients Deprivation
XBP1 ?
Oxidative Stress
ER Stress
XBP1
Protective molecules
CCAAT NF-Y ? XBP1
CCAAT NF-Y
antioxidant genes (Catalase, SOD1, etc)
transcripts transcripts transcripts
实验结果一
对H2O2的敏感性比较
survival fraction(%of total)
100
80
*
60
**
40
20
0 0
**
0.1
0.25
0.5
1
H2O2 concentration (mM)
Random
SiXBP1
H2O2处理后trypan blue检测细胞生存情况 *P<0.05, **P<0.01
Random
C (4.6) 3h 12.1
100
SiXBP1
101
102
FL1-H
C (3.8)
3h 24.9
100
101
102
FL1-H
R O S (fo ld in c re a s e )
6
R andom
5
S iX B P 1
4
3
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
*
2
1
0
0
1h
** *
2h
3h
DCFH-DA孵育细胞，流式细胞技术检测细胞内ROS堆积： *P<0.05, **P<0.01
SiXBP1-VP16
6.7
100 101 102 103 104 FL1-H
C
41.5
100 101 102 103 104 FL1-H
PTL
23.5
100 101 102 103 104 FL1-H
FK22 8
21.3
100 101 102 103 104 FL1-H
VP16
实验结果三
抑制XBP1细胞内活性氧（ROS）明显增高
实验结果三
抑制XBP1细胞内活性氧（ROS）明显增高
H2O2
Random
SiXBP1
C 1h 2h 3h 4h C 1h 2h 3h 4h
P-JNK
JNK-1
P-P38 P38
PTL
Random
C 1h 2h 4h 6h
SiXBP1
C 1h 2h 4h 6h
P-P38
P38
实验结果四
XBP1与细胞抗氧化分子的表达