威格拉斯生物技术(北京)有限公司 高效真核转染试剂 - ( VigoFect
Vero 细胞 HCP(宿主残留蛋白)ELISA试剂盒说明书
Vero 细胞HCP（宿主细胞蛋白）Vero细胞宿主蛋白酶联免疫检测目录#F500预期用途该试剂盒用于检测用Vero 细胞.生产的制品中是否有宿主蛋白残留。
仅供研究和工业生产，不能用于人和动物的诊断。
总结与说明病毒疫苗或其他治疗用蛋白在Vero细胞中表达使商业用大量生产药物原料产品的经济简便方法。
生产和纯化这些产品的过程中会残留Vero细胞中的一些蛋白质（称为宿主细胞蛋白，HCPs）而造成污染。
这种污染可以减少药物的疗效，引发毒副反应和免疫学反应，因此最好在实际生产制品过程中将HCPs降低到最低水平。
一些利用抗体来除HCPs的免疫学方法，如Western Blot 和ELISA被广泛使用。
虽然Western blot是一种检测HCPs的有效方法，但它受到了一些限制。
因为它过程复杂且技术依赖性强，需要操作者对结果进行分析解释。
而且，它在本质上是一种定性检测，不能定量分析。
Western blot的敏感性易受被检测样品量的影响，也受目的产品浓度的干扰。
因此Western blot可用来检测纯化上游的蛋白质，而对纯化下游或终产品的检测灵敏度与特异性较低。
本试剂盒中用到的ELISA方法克服了Western Blot的缺点，将敏感度提高了100倍。
ELISA操作简单、客观、可获得半定量的结果，是纯化工艺，过程控制，常规质量检测的最佳选择。
这个试剂盒可与纯化过程中残留的可独立污染产品的所有HCPs反应，就这个意义上来说，这个试剂盒是通用的。
用Vero细胞轻度裂解物获得抗体并经亲和纯化，得到的最终抗体可以与用于生产各种病毒疫苗和蛋白质产品的四种商用细胞系反应。
这一分析表明，绝大多数HCP存在于各种Vero细胞系和纯化过程中。
如果你需要一个更为敏感和特异性的方法去检测样品中的HCP量，Cygnus Technologies公司为你推荐一个优于2D Western blot的方法，我们将这个方法称为2D HPLC-ELISA。
RNAVzol 总RNA提取
总RNA提取试剂( RNAVzol )产品说明：本试剂是一种通用的总RNA提取试剂，适用于动植物细胞或组织及细菌的总RNA抽提。
试剂中含有对RNA酶有强烈抑制作用的胍类物质和苯酚等，可有效防止RNA在提取过程中的降解。
获得的RNA可直接用于Northern杂交，纯化mRNA，体外翻译，RNase保护实验，RT-PCR，以及cDNA克隆等一系列操作。
产品内容与储存方法：名称数量保存条件ml4℃RNAVzol 100可作100次总RNA提取（10平方厘米细胞或100mg组织）。
常温运输，4℃保存。
有效期12个月。
所需其它试剂：使用者需准备氯仿，异丙醇，75%乙醇和RNA溶解液（DEPC处理水或TE 缓冲液）。
操作方法：1. 细胞裂解或组织匀浆：1)贴壁细胞：吸尽培养液，每10平方厘米（6孔板孔或35 mm平皿）细胞加入1 mlRNAVzol，使其覆盖培养细胞，再用吸管或加样器吹打2~3次，细胞应完全裂解，然后转移至离心管中。
2)悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每五百万至一千万（5X106~107）动植物或酵母细胞，或一千万(107)细菌，加入1ml RNAVzol。
用吸管或加样器吹打，使其完全裂解。
某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，以确保其完全裂解。
转移至离心管中。
3)组织：先将组织剪切成小块，放入玻璃匀浆器内。
冷冻组织可在研钵中研磨匀浆。
每50~100mg组织加入1ml RNAVzol，匀浆至完全裂解。
转移至离心管中。
裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。
室温放置5分钟。
对于多糖、蛋白等杂质丰富的组织样品，匀浆后仍会存留有不溶物质，可12,000 g 4℃离心10分钟，然后吸取上清至一新的离心管中。
2. 分离：在装有裂解物的离心管中加入0.2倍体积的氯仿（1 ml RNAVzol加入0.2 ml氯仿），振荡器上充分振荡混匀30 秒，室温放置2-3分钟。
12,000 g 4℃离心10分钟，然后吸取含总RNA的上层水相至一新的离心管中，每毫升RNAVzol约可吸取0.5~0.55 ml。
CRISPR Cas9基因敲除载体构建试剂盒说明书V1.1
U6 promoter TGTACAAAAAAGCAGGCTTTAAAGGAACCAATTCAGTCGACTGGATCCGGTACCAAGGTCGGGCAGGAAGAGGGCC TATTTCCCATGATTCCTTCATATTTGCATATACGATACAAGGCTGTTAGAGAGATAATTAGAATTAATTTGACTGT AAACACAAAGATATTAGTACAAAATACGTGACGTAGAAAGTAATAATTTCTTGGGTAGTTTGCAGTTTTAAAATTA
产品说明书
Targeting sequence
gRNA sequence
gRNA-R primer
AAGGACGATACACCGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCG
TTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCTTTTTTT
V2.0
北京英茂盛业生物科技有限公司 北京市昌平区沙河镇青年创业大厦 B‐916 Tel：010‐62495135 Emai：order@ Web site：
产品内容
Cas9 基因敲除试剂盒 货号 CR0001 内容 pCas9/gRNA1 载体 pTYNE 验证载体 pCas9‐P 阳性对照载体 pCas9‐N 阴性对照载体
AAGACCTTCAGAAGGTTGCTGAGTACAAGACTGGGC
靶点挑选要点：
1）：Cas9/gRNA 基因敲除原理是对基因组 DNA 序列切割后引发 DAN 修复，产生 DNA 序列缺失突变。因此 基因敲除靶点应设计在起始密码子附近（包括起始密码子）或者起始密码子下游的外显子范围内。
高效真核转染试剂
高效真核转染试剂( VigoFect )产品说明：本试剂采用一类阳离子非脂性物质为主的配方，可以与DNA形成稳定的复合物，透过细胞膜进入细胞内，并保护DNA免受核酸酶的降解。
该试剂对细胞毒性很小，可在含血清与抗生素的完全培养液中充分发挥作用。
对多数培养细胞种类都有较高的转染效率（不同种类细胞的转染效率可有明显差异）。
此类试剂是目前非病毒介导方法中效率最高的转染试剂。
产品内容与储存方法：名称数量保存条件mlVigoFect 0.44℃可进行200次转染（6孔板或35 mm平皿）。
常温运输，4℃保存。
有效期6个月。
所需其它试剂：使用者需准备150 mM NaCl （超纯水配制，高压或过滤灭菌）或注射用生理盐水作为VigoFect及DNA的稀释液，和要转染的DNA溶液（高纯度，浓度0.1~2 μg/μl）。
操作方法：准备培养细胞：1)转染前24小时，接种适量细胞（接种数量可参考附表）。
至转染时细胞密度以40~60%为宜（80~90%亦可）。
2)转染前1小时，更换新鲜的完全培养液（体积可参考附表），置37℃，5% CO2 培养。
配制转染工作液：（6孔板或35 mm平皿，2 ml培养液）3)取5~8 μg DNA（起始用量5 μg），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀，室温放置。
4)取VigoFect 1~4μl（起始用量2 μl），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀，室温放置5分钟。
5)将稀释的VigoFect逐滴加入稀释的DNA溶液中，轻轻混匀，所得的转染工作液在室温放置15分钟。
6)将转染工作液轻轻混匀，逐滴加入2 ml培养液中，轻轻混匀培养液，置37℃，5% CO2培养。
细胞后续处理：7)24~48小时后，观察或收取细胞。
8)稳定转染时，于转染后24~48小时消化细胞分至3~5个培养皿中，加适当浓度的相应抗生素（如G418）筛选。
注意事项：1) 少量使用Vigofect 时，可取精确量的VigoFect 用无菌超纯水稀释一定倍数，以便精确取样量。
威格拉斯生物技术(北京)有限公司 质粒大量提取纯化试剂盒
1) 从大量的菌液或菌体提取质粒时，可按比例提高Buffer I、Buffer II和Buffer III的用 量，以充分裂解菌体，提高质粒的回收量和纯度。
2) 提取步骤7和纯化步骤5中，充分溶解沉淀对提高质粒产量和纯度非常重要。 3) 操作中要动作轻柔，防止机械剪切可能对DNA的损失。 4) 可在纯化的各个步骤前后留取数微升的DNA溶液，最后电泳鉴定比较提取和纯化
4 l）
0.5 ml -20℃
试剂盒可作20次（<150ml菌液/次）质粒提取纯化。常温运输。RNase A于-20℃保存， 首次使用时加入Buffer I中混匀，置4℃保存。Buffer IV与Buffer VI置4℃保存，其余溶 液保存于室温。有效期6个月。
0.5 ml Buffer I，完全溶解沉淀团块（可用宽口吸管轻轻吹打辅助溶解）。移入新 的1.5 ml离心管中，室温放置10~20 min。 8) 质粒粗提物用台式离心机室温高速离心2 min，上清移入新的1.5 ml离心管中。
质粒纯化： 1) 0.5 ml质粒粗提液中加入100 μl Buffer IV（杂质清除液A），轻轻混匀，12,000 x g
电话：（010）58941231, （010）58941232 传真：（010）58941232
网址：
电子邮件：runon@
如在步骤6未见沉淀担心dna丢失可保留上清液待完成全部操作后电泳鉴定以确定是否获得终产物数百微克高纯度的质粒dna离心后沉淀在管的侧壁上可能无法看到明显团块
威格拉斯生物技术（北京）有限公司
质粒大量提取纯化试剂盒
(Plasmid Maxprep Kit)
产品说明：
本试剂盒用碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA，采用全新技术，通过几次离心去除 蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质，获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280 通常在1.9左右，可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的 工作中。纯化过程均在Eppendorf管中操作，方法简单，不需特殊设备，无需过柱， 不用酚氯仿抽提；无论细菌裂解释放出的质粒在1mg以下还是在10mg以上, 基本都可 完全回收，不必担心质粒DNA的丢失。本方法提取纯化质粒DNA，对质粒损伤小， 即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或超大型质粒，只要碱裂解法能够提取，就可 以有效纯化。纯化过程约需1.5~2小时。
HighGene plus Transfection reagent 说明书
HighGene plus Transfection reagent说明书货号：RM09014P规格：1mL，10mL◆产品描述HighGene plus Transfection reagent细胞转染试剂是一种新型的混合型高分子聚合物转染试剂。
它可以与核酸（包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸）相互作用形成一种复合物将核酸转运到真核细胞内，适用于大部分真核细胞的细胞转染。
◆产品特点1、适用于多种细胞类型和培养板。
2、高转染效率、批次稳定重复性好、操作简单。
3、转染过程不受血清和抗生素的影响。
◆保存条件-20℃保存，24个月有效。
◆操作说明1、贴壁细胞转染（以293T细胞为例）（1）第一天，将293T细胞接种到6孔板中，细胞密度控制在70%-90%为宜；注：根据实验需求，可以选择不同的细胞培养装置，细胞接种数量和所需培养液体积详见附表1（2）第二天，先取4μg质粒加入到200μL无血清DMEM基础培养基离心管中，吹打混合均匀，然后加入8μL HighGene plus转染试剂，吹打混合；注：MEM、1640、F12等基础培养基均可用于HighGene plus转染试剂的溶剂，不同的细胞培养装置所需质粒的量和HighGene plus转染试剂剂量详见附表2（3）将200μL质粒/HighGene plus转染试剂复合物均匀滴加到6孔细胞培养板孔中，轻轻晃动细胞培养板使其均匀分布；注：6孔板中为完全培养基，轻轻晃动细胞培养板即可，切勿剧烈摇动细胞培养板，以免细胞脱落漂浮！（4）细胞转染4-6h后，半量更换新鲜完全培养基；注：半量换液时，吸弃一半原有完全培养基，补加一半新鲜完全培养基（5）细胞转染24-48h后，即可使用适当方式进行检测，如RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等，或加入相应筛选药物（G418或Puromycin）可获得稳定细胞株。
2、悬浮细胞转染（以HEK293F细胞为例）（1）第一天，在125mL摇瓶中接种30mL密度为1×106个/mL HEK293F悬浮细胞；（2）第二天，先取30μg质粒加入到3mL无血清DMEM基础培养基离心管中，吹打混合均匀，然后加入60μL HighGene plus转染试剂，吹打混合均匀；（3）将3mL质粒/HighGene plus转染试剂复合物均匀滴加到30mL体积HEK293F悬浮细胞的125mL摇瓶中，轻轻摇动摇瓶使其混合均匀；（4）细胞转染3-5天后，根据蛋白表达的情况（胞内表达或分泌表达），收集细胞或细胞培养上清，进行后续蛋白纯化操作。
聚焦转染：8大品牌转染试剂强中强[选购宝典]
![聚焦转染：8大品牌转染试剂强中强[选购宝典]](https://img.taocdn.com/s3/m/66b7e9b6960590c69ec376a0.png)
聚焦转染：8大品牌转染试剂强中强[选购宝典]生物通技术专评：数百万年来原核生物如大肠杆菌就经常相互分享它们的遗传物质的——受到自然的启发，出现了将DNA导入哺乳动物培养细胞的技术——这是分子生物学的又一个重要的里程碑。
也多谢这种技术的不断进步，我们终于可以在各种哺乳动物细胞中进行各种克隆化基因的表达，从而达到不同的目的－－比如，生产制备大量经过真核特有的翻译后加工的活性蛋白；研究表达蛋白的结构和生化特性；研究基因表达的调控机理；甚至调控基因的表达等等。
可以说在哺乳动物细胞中表达外源基因的2个关键：一个是选择构建合适的表达载体和表达细胞株，另一个就是选择合适的方法将克隆的基因导入培养细胞中进行表达。
转染技术的广泛使用促进了人们对外源基因在哺乳动物细胞中的表达等方面的认识，并在方法学上促进了该领域及相关领域的发展。
从磷酸钙到脂质体，到多胺，可用于转染的细胞种类已越来越多，转染试剂也不断更新换代，而转染也不再仅限于将DNA转入细胞中了，RNA，siRNA，蛋白质等等生物大分子也进入了转染的行列。
在纷纭的产品中，你会选择哪种转染试剂？生物通这个转染试剂专辑希望为大家介绍市面上主流的转染试剂和各自的个性特点和适用范围－－可以说，针对不同的细胞株，不同的转染实验目的，还有不同的转染要求，很难找到一种能满足所有的要求，十全十美的产品。
你需要一一尝试和优化条件——但是了解市面上各种产品的特点与长短，无论是对于转染新手，或者是“老革命遇到新问题”，都是有益的。
在生物通这个转染试剂专辑系列我们将分别介绍国外几个经典好用的王牌产品，以及国内物美价廉的后起之秀，以及总结一些使用心得和注意事项。
如果你有自己的心得并愿意和大家分享，欢迎投稿生物通哦:)一、打开转染之门：基本概念作为篇首还是要把老调调再弹弹。
请原谅我有点“唐僧”的回顾几种经典转染方法。
DEAE-葡聚糖（Diethylaminoethyl (DEAE)-dextran）：这个早在1965年出现的转染方法差不多是最古董级的方法之一了，直到现在竟然还有少数人坚持采用。
sirna转染试剂说明书
3
1
24-well
2
500
2 x 50
6
2
12-well
4
1000
2 x 100
12
4
6-well
10
2500
2 x 250
30
10
转染实验优化: 为了提高转染效率，最好对转染条件进行优化，特别是首次使用。例如：24 孔培养板，调整 siRNA 与 RFect 试剂的用量。
siRNA 用量在 0.6-30 pmol(final concentration 1- 50 nM)之间调整，RFect 试剂用量在 1.0 - 3.0μl 之间调整。客户可按照习惯用量进行预实验，
所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。
转染实验要点： 转染过程不可添加抗生素，否则会导致细胞死亡； 首次实验 siRNA 的用量可稍大（一般 10 nM） ，后续实验根据实验结果修改。
RFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels
传真: 0519-83382790
◎转染细胞范围广，绝大多数贴壁细胞株都能获得比较理想的转染结果
储存条件：-20℃
应用 ◎siRNA 转染 ◎antisense RNA 转染 ◎200bp 内的小分子 DNA 转染
产品介绍
RFect 小核酸转染试剂是国际知名科学家崔坤元博士领导我公司研发团队在美国西雅图实验室研发成功的一种新型的小核酸转染试剂。RFect 可用来转染 siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以内的小分子 RNA 和 DNA，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞 株、肿瘤细胞株等。目前，无论国外还是国内，转染试剂的主要成分均为脂质体或聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)，这两种成分都具有很 大的细胞毒性，并且转染效果不好。RFect 采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越的转染性能。与其它品牌的小核酸 转染试剂相比，RFect 的细胞转染阳性率一般在 90%以上，Lamin A/C 基因抑制效率在 95%以上，而其它品牌转染试剂的细胞转染阳性率一 般不超过 70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超过 75%。RFect 细胞毒性很低，转染细胞死亡率不到 10%，而其它品牌试剂的转染细胞死亡率 一般在 30%以上。血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。有关 RFect 小核酸转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了 国际专利，并通过 PCT 覆盖国际上多个国家和地区。
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表：建议的起始转染条件。
培养容器
96孔板 24孔板 6孔板 35mm平皿 60mm平皿
转染前一天接 种细胞数 万 1-1.5 5-10 20-40 20-40 40-60
转染时培 养液体积
ml 0.1 0.5 2 2 4
DNA用量与稀释 VigoFect 用量与
后体积
稀释后体积
µg
µl
µl
µl
0.25
操作方法：
准备培养细胞： 1) 转染前24小时，接种适量细胞（接种数量可参考附表）。至转染时细胞密度以
40~60%为宜（80~90%亦可）。 2) 转染前1小时，更换新鲜的完全培养液（体积可参考附表），置37℃，5% CO2 培
养。 配制转染工作液：（6孔板或35 mm平皿，2 ml培养液） 3) 取5~8 μg DNA（起始用量5 μg），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀，室
电子邮件：runon@
威格拉斯生物技术（北京）有限公司
注意事项：
1) 少量使用Vigofect时，可取精确量的VigoFect用无菌超纯水稀释一定倍数，以便精 确取样量。该稀释液可在4℃保存1月左右。
2) 细胞的生长状态是转染效率的一个主要决定因素。在实验条件许可的情况下，使 用高质量的培养液、优质血清等，可能会明显提高转染效率。
培养。 细胞后续处理： 7) 24~48小时后，观察或收取细胞。 8) 稳定转染时，于转染后24~48小时消化细胞分至3~5个培养皿中，加适当浓度的相
应抗生素（如G418）筛选。
电话：（010）58941231, （010）58941232 传真：（010）58941232
网址：
降低细胞毒性的方法：
通常本转染试剂对细胞的毒性很低。如个别种类细胞对本转染试剂特别敏感，可通过 以下方法降低细胞的毒性反应。 1) 确保质粒DNA无杂质污染。 2) 检查表达蛋白对细胞是否有毒性。 3) 增加转染时培养液体积，或略减低转染工作液的用量。 4) 转染后3~6小时去除含转染液的培养液，更换为新鲜的完全培养液。 5) 转染时细胞密度不能过低。
温放置。 4) 取VigoFect 1~4μl（起始用量2 μl），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀，
室温放置5分钟。 5) 将稀释的VigoFect逐滴加入稀释的DNA溶液中，轻轻混匀，所得的转染工作液在室
温放置15分钟。 6) 将转染工作液轻轻混匀，逐滴加入2 ml培养液中，轻轻混匀培养液，置37℃，5% CO2
体积不变），以确定不同细胞的最佳转染条件。一般固定DNA用量（5 μg），与 系列含量的VigoFect混合，选取VigoFect的最佳用量；也可固定VigoFect用量（2 μl ），与系列含量的DNA混合，选取DNA的最佳用量。 4) 进一步减少转染时培养液体积（转染后6~16小时再补加足量培养液）。 5) 如有可能，且细胞可以耐受，可将培养容器在加入转染工作液后立即250 g离心5 min。
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高效真核转染试剂
( VigoFect )
产品说明：
本试剂采用一类阳离子非脂性物质为主的配方，可以与DNA形成稳定的复合物，透 过细胞膜进入细胞内，并保护DNA免受核酸酶的降解。该试剂对细胞毒性很小，可 在含血清与抗生素的完全培养液中充分发挥作用。对多数培养细胞种类都有较高的 转染效率（不同种类细胞的转染效率可有明显差异）。此类试剂是目前非病毒介导 方法中效率最高的转染试剂。
产品内容与储存方法：
名称
数量 保存条件
VigoFect
06孔板或35 mm平皿）。常温运输，4℃保存。有效期6个月。
所需其它试剂：
使用者需准备150 mM NaCl （超纯水配制，高压或过滤灭菌）或注射用生理盐水作为 VigoFect及DNA的稀释液，和要转染的DNA溶液（高纯度，浓度0.1~2 μg/μl）。
5
0.1
5
1.25
25
0.5
25
5
100
2
100
5
100
2
100
10
200
4
200
电话：（010）58941231, （010）58941232 传真：（010）58941232
网址：
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3) DNA和VigoFect的混合比例，决定了形成复合物的颗粒大小和性质；复合物颗粒 的大小和性质，对细胞的DNA吸收能力有重要影响。不同细胞达到最佳转染效率 ，所需复合物的颗粒大小、性质和数量，可能又有微小或很大差异。
提高转染效率的方法：
1) 使用高质量、高纯度的质粒DNA。 2) 转染时细胞应处在生长旺盛状态。 3) 从起始用量开始，调整配制转染液中DNA和VigoFect的用量（保持转染工作液总