10蛋白酶活力的测定
蛋白酶活力测定实验报告
蛋白酶活力测定实验报告
实验目的：
通过测定蛋白酶的活力，了解其功能和活性。
实验原理：
蛋白酶是一类能够水解蛋白质的酶，可以将蛋白质分解为多肽和氨基酸。
蛋白酶活力是指单位时间内酶水解蛋白质的能力，通常以单位时间内水解的底物的量来表示。
本实验使用的方法是酶促反应测定法。
首先，将待测蛋白酶与底物混合，反应一定时间后，停止反应并添加淀粉溶液产生反应终止剂，最后用碘化钾溶液滴定反应产物。
实验步骤：
1. 预备试剂：制备蛋白酶和底物的工作液，制备淀粉溶液和反应终止剂，制备碘化钾溶液。
2. 实验装置：准备滴定装置和试管架。
3. 设置实验条件：保持温度恒定，控制pH值。
4. 实验操作：在试管中加入待测蛋白酶和底物工作液，反应一定时间后，加入淀粉溶液和反应终止剂，最后用碘化钾溶液滴定。
5. 记录数据：记录滴定所需碘化钾的体积，计算出酶活力。
实验结果：
根据实验数据，计算出蛋白酶的活力，通常以单位时间内水解的底物的量来表示。
实验讨论：
分析实验结果，比较不同条件下蛋白酶的活力差异，并讨论影响蛋白酶活力的因素。
实验结论：
通过分析实验结果，得出结论，总结蛋白酶活力与其他因素之间的关系，并提出可能的应用前景。
实验总结：
总结实验过程，评价实验结果及数据，提出改进意见，并对今后可能的研究方向进行展望。
参考文献：
列出所参考的文献。
蛋白酶活性的测定方法
蛋白酶活性的测定方法
蛋白酶活性的测定方法有多种，常见的方法包括：
1. 比色法：基于酶催化底物的产物与染色剂之间发生化学反应的原理。
测定过程中，酶水解底物产生的产物与染色剂发生反应形成有色产物，通过测定产物的吸光度来估计酶活性的强弱。
2. 荧光法：利用荧光底物的酶催化产物发出的荧光信号来测定酶活性。
荧光强度与酶催化产物的浓度成正比，通过测定荧光强度来分析酶活性。
3. 放射性标记法：将底物标记上放射性同位素，使其具有放射性。
通过测定底物放射性崩解的程度来估计酶活性的大小。
4. 免疫学方法：利用特异性抗体与酶结合形成抗原-抗体-酶复合物，测定抗原-抗体-酶复合物的活性来检测酶活性的强弱。
5. 吸收光谱法：利用特定的酶底物，通过测量其吸收光谱的变化来分析酶活性的强弱。
需要根据具体实验目的和条件选择适合的测定方法。
蛋白酶活力测定方法
酸性蛋白酶产品概述:蛋白质由氨基酸组成，是自然界中发现的最复杂的有机化合物之一。
由盐酸和蛋白酶分解成易被高等动物的肠道和微生物有机体的细胞膜吸收的氨基酸。
包括人类在内的每种动物，必须要有足够的蛋白质来维持自身生长，来生成每个细胞所必需的氨基酸，一些特种蛋白质还是某些特殊细胞、腺体分泌物、酶和激素的功能性组成元素。
蛋白酶是指一些有催化功能的酶，能够水解（断裂）蛋白质，因此也被称为蛋白水解酶。
蛋白水解酶在许多的生理和病理过程中发挥着重要作用，在食品和乳品加工业也有着广泛应用。
工作机理蛋白水解酶制剂本产品能在酸性条件下水解蛋白质食品中的缩氨酸键，释放氨基酸或者多肽。
在酒精、葡萄酒、果汁、啤酒、黄油和酱油生产中，添加酸性蛋白酶可澄清发酵液中的雾气。
酵母在发酵阶段的生长可以通过悬浮蛋白质转化的氨基酸来加以促进，从而加速发酵并提高产量。
本产品是一种酸性蛋白酶制剂，在酸性条件下具有较高活性，由酸性蛋白酶高产菌株——曲霉菌深层发酵而成。
它广泛应用于饲料、纺织、废水处理和果汁提纯方面。
酸性蛋白酶（Acid protease ）是指蛋白酶具有较低的最适pH，而不是指酸性基团存在于酶的活性部位，酸性蛋白酶的最适PH从2左右（胃蛋白酶）到4左右。
从酶的活力-PH曲线分析，在酶的活性部位中含有一个或更多的羟基。
这一类蛋白酶中研究最彻底的是胃蛋白酶。
（酸性蛋白酶537容易失活）简介：酸性蛋白酶是由隆科特黑曲霉优良菌种经发酵精制提炼而成，它能在低PH条件下，有效水解蛋白质，广泛应用于酒精、白酒、啤酒、酿造、食品加工、饲料添加、皮革加工等行业。
1、产品规格：，规格有5万u/g～10万u/g液体型为黑褐色液体，规格有50000u/ml～10000u/ml.2、酶活力定义：一个酶活力单位是1g酶粉或1ml酶液在40℃，PH3.0条件下，1分钟水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位（u/g或u/ml）特性1、温度范围为：最适温度范围为40℃-50℃2、PH为：最适PH范围为2.5～3.5使用方法1、白酒工业：本品用以淀粉为原料的生产酒精及白酒行业，提高出酒率0.25%个酒分，提高发酵速度。
福林酚法测定蛋白酶活力原理
福林酚法测定蛋白酶活力原理1. 引言：蛋白酶的神秘面纱哎呀，说到蛋白酶，大家可能会觉得这玩意儿离我们有点远。
其实不然，蛋白酶可是咱们身体里忙前忙后、默默奉献的小工人。
它们像一群勤劳的清道夫，帮我们分解食物中的蛋白质，让营养更好地被吸收。
不过，有时候我们得搞清楚这些小工人到底干了多少活儿，这时候就需要用到福林酚法了。
说到这儿，可能有人要问：啥是福林酚法？怎么听起来这么高大上？别急，我这就给大家捋捋这其中的门道。
2. 福林酚法的基本原理2.1 蛋白酶活力的测定首先，福林酚法其实是个很聪明的办法，它可以用来测定蛋白酶的活力。
蛋白酶，顾名思义，就是能把蛋白质搞得七零八落的那种酶。
我们要知道它的活力，就得看看它把蛋白质分解的效率如何。
简单来说，就是用这套方法来测一测它干了多少活儿。
咋测呢？这就需要一点点化学的小窍门了。
2.2 福林酚法的步骤那么，福林酚法到底怎么操作呢？这个过程其实没那么复杂，只要几个步骤就能搞定。
首先，我们需要一种叫做“福林酚试剂”的化学液体。
这个试剂像是福尔摩斯，能准确找出蛋白酶分解蛋白质后剩下的东西。
接下来，我们会把待测的蛋白质样品和福林酚试剂混合，然后放到一个小瓶里。
再往里面加上另一种试剂，这时候，瓶子里的液体就会发生颜色变化。
这种颜色的变化，就告诉我们蛋白酶的活力到底如何。
明白了吧？简单来说，颜色越深，蛋白酶活力越强。
3. 实验操作的细节3.1 样品准备为了让实验结果更准确，我们需要对样品进行准备。
首先，得把蛋白质样品溶解成一定浓度的液体。
这个过程就像是在做一道美味的汤，得控制好原料的比例，才能保证最终的味道。
我们通常会用去离子水来溶解，这样可以避免杂质影响结果。
接着，样品需要经过过滤，确保液体里没有大颗粒的沉淀物。
这样一来，实验才会更靠谱，像是给蛋白酶干活提供了一个干净整洁的环境。
3.2 反应时间与测量接下来，就是关键的反应时间了。
通常，我们会让样品和试剂反应一段时间，这个时间的长短可是有讲究的，太短了可能测不出准确的结果，太长了又可能产生误差。
蛋白酶活力的测定
1 蛋白酶活力的测定1.1 原理采用福林-酚试剂法。
福林-酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色(钼蓝和钨蓝混合物)，由于蛋白质分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)，可使蛋白质及其水解产物呈上述反应。
因此可利用此原理测定蛋白酶活力。
通常以酪蛋白为底物，在一定pH值和温度条件下，同酶液反应，经一段时间后终止酶促反应，经离心或过滤除去酪蛋白筹沉淀物后取上清液，用Na2CO3碱化，再加入福林-酚试剂显色，蓝色的深浅与滤液中生成产物酪氨酸量成正比;酪氨酸含量用分光光度计在660nm波长处测定，从而计算出蛋白酶的活力。
1.2 试剂1.2.l 福林-酚试剂向2000mL的磨口回流瓶中加入100g钨酸钠(Na2WO4?2H2O)、25g钼酸钠及700mL的去离子水，再加入50mL85%的磷酸及浓盐酸l00mL，充分混合后，接上回流冷凝管，以文火回流10h，结束后再加入150g的硫酸锂(LiSO4)、50mL去离子水及数滴溴水，再继续沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后滤液呈黄绿色(如仍呈绿色，需再重复滴加溴水的步骤)，加去离子水定容至1000mL乱，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中，贮于冰箱中可长期保存备用。
此溶液使用时可按1:3比例用去离子水稀释。
1.2.2 0.4mol/L三氯乙酸(TCA)溶液精确称取TCA65.4g，加去离子水定容至1000mL。
1.2.3 0.4mo1/L碳酸钠溶液精确称取无水碳酸钠42.4g，加去离于水溶解后，定容至1000mL。
1.2.4 pH值3～6醋酸缓冲液精确取NaAc?3H2O16g与268mL浓度为6mol/L醋酸溶液混合，用去离子水稀释定容至1000mL。
1.2.5 2%酪蛋白底物缓冲液1.2.5.1 测试酸性蛋白酶缓冲液精确称取酪蛋白20g，加入0.1mol/L氢氧化钠20mL(用去离子水配制)，在水浴中加热溶解，然后用pH值3.6醋酸缓冲液定容至1000mL。
简述蛋白酶活力测定的原理
简述蛋白酶活力测定的原理蛋白酶活力测定是一种用于评估酶分解蛋白质的能力的方法。
蛋白质是生命活动不可或缺的重要分子，然而，它们需要在体内被分解为较小的分子才能被利用。
其中，蛋白酶是一种特殊的酶，它能够将蛋白质分解为较小的肽链或氨基酸。
蛋白酶活力测定的原理主要基于蛋白质分解后的产物——氨基酸的检测。
在这个测定中，蛋白质被蛋白酶分解为氨基酸，然后这些氨基酸与一些特定的化学物质反应，产生一种有颜色的产物，这种产物能够吸收光，从而使溶液的吸光度增加。
通过测量溶液的吸光度，可以定量地测定蛋白酶的活力。
具体来说，测定蛋白酶活力的步骤如下：1.准备测试样品：将待测的蛋白酶与适当底物（即待分解的蛋白质）混合，置于适宜的反应条件下。
2.设定反应时间：在一定时间内，蛋白酶将底物分解为氨基酸。
为了确保反应在最佳条件下进行，需要设定一个适当的反应时间。
3.终止反应：在反应达到设定时间后，需要终止酶促反应，以便停止蛋白质的分解。
通常使用一种称为终止液的化学物质来实现这一步骤。
4.显色反应：终止液中的化学物质将与氨基酸反应，生成一种有颜色的产物。
这种产物能够吸收光，从而使溶液的吸光度增加。
5.吸光度测量：使用分光光度计测量溶液的吸光度。
吸光度的大小与溶液中氨基酸的浓度成正比，因此可以用来计算蛋白酶的活力。
通过这种测定方法，可以评估不同样品中蛋白酶的相对活力，并了解在不同条件下的酶促反应动力学。
这对于研究蛋白质分解过程、优化蛋白质分解反应的条件以及生物工程等领域都具有重要意义。
此外，蛋白酶活力测定也可以用于诊断和治疗某些与蛋白质分解相关的疾病，如胰腺炎等。
总之，蛋白酶活力测定的原理是基于蛋白质分解后的氨基酸形成染料，通过测量溶液的吸光度来定量测定蛋白酶活力。
这种方法在生物学、生物工程和医学等领域具有广泛的应用价值。
蛋白酶活力测定方法
中华人民共和国专业标准蛋白酶活力测定法 SB/T 10317-1999Measurement of proteinase activity━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本方法适用于酿造酱油时在制品菌种、成曲的蛋白酶活力测定。
1 福林法1.1 试剂及溶液: 以下试剂都为分析纯1.1.1 福林试剂(Folin试剂):于2000mL磨口回流装置内,加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O) 100g,钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g,蒸馏水700mL,85%磷酸50mL,浓盐酸100mL,文火回流10h。
取去冷凝器,加入硫酸锂(Li2SO4)50g,蒸馏水50mL,混匀,加入几滴液体溴,再煮沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色而非绿色。
若溶液仍有绿色,需要再加几滴溴液,再煮沸除去之。
冷却后,定容至1000mL,用细菌漏斗(No4～5)过滤,置于棕色瓶中保存。
此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释。
即成已稀释的福林试剂。
1.1.2 0.4mol碳酸钠溶液: 称取无水碳酸钠(Na2CO3)42.4g,定容至1000mL。
1.1.3 0.4mol三氯乙酸(T C A)溶液: 称取三氯乙酸(CCL3COOH)65.4g,定容至1000mL。
1.1.4 pH7.2磷酸盐缓冲液:称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)31.2g,定容至1000mL,即成0.2mol溶液(A液)。
称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)71.63g,定容至1000mL,即成0.2mol溶液(B液)。
取A 液28mL 和B 液72mL,再用蒸馏水稀释1倍,即成0.1mol pH7.2的磷酸盐缓冲液。
1.1.5 2%酪蛋白溶液:准确称取干酪素2g,称准至0.002g,加入0.1N氢氧化钠10mL,在水浴中加热使溶解(必要时用小火加热煮沸),然后用pH7.2磷酸盐缓冲液定容至100mL即成。
（食品化学）实验四、蛋白酶酶活力的测定
实验四、蛋白酶酶活力的测定一、原理以酪蛋白为反应底物，令蛋白酶在其最适宜条件下反应一定时间，用三氯乙酸终止反应后过滤或离心得上清液，用Folin比色法测上清液中蛋白酶解物的浓度，计算蛋白酶活力。
蛋白酶活力定义：在一定的条件下，每分钟水解酪蛋白生成与1μg酪氨酸相当的三氯醋酸可溶物所需的木瓜蛋白酶的量，为1个酶活力单位（u）。
二、材料、仪器与试剂（一）材料：木瓜蛋白酶（二）仪器：可见-紫外分光光度计、水浴锅、天平、具塞刻度试管（10、15ml）、漏斗、滤纸、试管架，容量瓶、移液管（1、10ml）、烧杯（25ml）、玻璃棒。
（三）试剂：1福林试剂(Folin试剂)市场购买的Folin试剂。
此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释，即成已稀释3倍的福林试剂。
2、中性稀释液－pH7.2磷酸盐缓冲液称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)31.2g,定容至1000mL,即成0.2mol/L溶液(A液)。
称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)71.63g,定容至1000mL,即成0.2mol/L 溶液(B液)。
取A 液28mL 和B 液72mL,再用蒸馏水稀释1倍,即成0.1mol pH7.2的磷酸盐缓冲液。
3、酪蛋白溶液2g恒重的酪蛋白，用0.5mol/LNaOH溶液润湿后加入80ml pH7.2磷酸盐缓冲液，沸水浴溶解，冷却后，用1 mol/L盐酸调至pH 7.0，再用磷酸盐缓冲液定容至100ml，得浓度为2%的酪蛋白溶液。
临用现配。
4、三氯醋酸溶液称取三氯乙酸(CCL3COOH)65.4g,定容至1000mL，得0.4mol/L三氯乙酸(TCA)溶液5、酪氨酸标准溶液精确称取精确称取在105℃烘箱中烘至恒重的酪氨酸0.1000g，逐步加入6mL 1N盐酸使溶解,用0.2N盐酸定容至100mL,其浓度为1000μg/mL,再用水稀释5倍，得到200μg/mL的酪氨酸标准溶液。
取200μg/mL的标准酪氨酸溶液，配成不同浓度的溶液（0、20、40、60、80、100μg/mL）6、样品溶液称取木瓜蛋白酶0.100g, 置于研钵中,加入相应的缓冲液定容至50mL,得到稀释500倍的酶液（当天配制、稀释）。
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注意
严格按顺序加入试剂。
先加NaCO3，再加Follin试剂，后者只有
在碱性条件下才能被还原成兰色物质。 说明：酪蛋白在低温下有少量降解为酪氨酸， 此操作是与测定样品的条件保持一致， 消除系统误差。 注意：滤纸不能润湿。
校正：
用紫外分光光度计，以蒸馏水作对照， 在680nm处测定光密度。用1-6号管的光
平均吸光度值
以空白为对照，680mn测定吸光度值，求平均值。
从标准曲线上找到酪氨酸的质量A，ug；
OD
y=kx
测得的OD值
A=？ 酪氨酸质量，ug
四、计算
样品蛋白酶活力单位(以干基计)= A 10 ×4×n× 1 （1-w）
式中 A——标准曲线上查的酪氨酸质量，ug； 4——4mL反应液取出1mL测定； N——酶液稀释倍数； W——样品中水分，%。
醋酸碘， 甲醛
抑肽酶，PMSF，TPCK，α—巨球蛋白 EDTA，EGTA，还原剂，但无血清存在 EDTA，EGTA，Hg2+，重金属 α巨球蛋白，TLCK EDTA，α菲咯啉 α巨球蛋白，TLCK TLCK，抑肽酶，抑蛋白酶醛肽
PMSF，APMSF，大豆胰蛋白酶抑制物 TPCK，TLCK，α-巨球蛋白 抑肽酶，抑蛋白酶醛肽 TPCK，TLCK，抑蛋白酶醛肽α—巨球蛋白，烷化剂 胃蛋白酶抑制素 PMSF，TLCK，抑肽酶，α—巨球蛋白 B．M．完整药片 PMSF，PefablocSc PMSF，α巨球蛋白，苯甲脒 EDTA TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽 抑肽酶，α巨球蛋白，苯甲脒 TLCK，PMSF，抑蛋白酶醛肽 抑肽酶，α巨球蛋白
2
3 4 5 6
2
4 6 8 10
20
40 60 80 100
6
4 2 0
于上述各管中各吸取1mL于10mL比色管中，分别加入 5mL0.4mol/mL碳酸钠溶液、1mL Folin试剂使用液。摇匀，40毒 水浴显色20min后，680mn测定吸光度。以吸光度值和酪氨酸浓度 绘制标准曲线。
以光密度OD为纵坐标，酪氨酸含量（μg） 为横坐标，绘制标准曲线。
组织蛋白酶C
胰凝乳蛋白酶 胶原酶 dispase 内肽酶Arg-C 内肽酶Asp-N 内肽酶Glu-C 内肽酶Lys-C 肠激酶 Xa因子 无花果蛋白酶 激肽释放酶 木瓜蛋白酶 胃蛋白酶 纤溶酶 链霉蛋白酶 蛋白酶K 枯草杆菌蛋白酶 热溶素 凝血酶 胰蛋白酶
琉基蛋白酶
丝氨酸蛋白酶 金属蛋白酶 金属蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 金属蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 琉基蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 巯基蛋白酶 酸蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 混合型 丝氨酸蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 锌金属蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 丝氨酸蛋白酶
福林试剂（Folin）：钨酸钠、钼酸钠、硫酸锂）金黄色溶液
二、仪器与试剂
1、仪器
电子天平、紫外分光光度计、电热恒温水浴锅
2、试剂
（1）福林试剂 贮存液和使用液 （3）pH7.2磷酸缓冲溶液 （2）2%酪蛋白溶液 （4）100ug/mL标准酪氨酸溶液
（5）0.4mol/L碳酸钠溶液
（6）0.4mol/L三氯乙酸溶液
保温/min
第二步
样品管号 操作步骤 加对应的离心上清液/ mL c（1/2 Na2CO3）=0.8mol/L Na2CO3溶液/ mL 加Folin试剂使用液/ mL 保温显色/min 1’ 2’ 3’ 空白管号 1’ 2’ 3’
1.0
5.00 1.00 20
1.0
5.00 1.00 20
吸光度值
第十章 蛋白酶活力测定
概述
蛋白酶定义
水解蛋白质肽链酶类的总称，适宜PH和温度下水解 蛋白为肽段和氨基酸。
蛋白酶分类
碱性蛋白酶、中性蛋白酶、 酸性蛋白酶（内肽酶）
蛋白酶
分类
作用位点
已知抑制物
氨基肽酶
菠萝蛋白酶 羧肽酶A 羧肽酶B 羧肽酶Y
金属蛋白酶
巯基蛋白酶 锌金属蛋白酶 锌金属蛋白酶 丝氨酸羧肽酶
应用
发酵：发酵酒精时，蛋白水解充分。 皮革脱毛和软化 丝绸脱胶 医药生产
要求
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
掌握测定蛋白酶活力的原理
理解制备标准曲线的目的和意义 学习制备标准曲线的基本操作
一、原 理
蛋白酶 Folin
OH-
酪蛋白
PH=10，40℃酪氨酸
钼蓝和钨蓝（蓝色）
680nm
OD
酶活力单位：
1mL液体或1g固体酶粉在一定温度、PH下，每分钟水解 酪蛋白产生1ug酪氨酸，为一个酶活力单位。
（7）c（1/2 Na2CO3）=0.8mol/L Na2CO3溶液 （8）c（Hcl）=1mol/mL Hcl 溶液
三、测定方法
1、标准曲线的绘制
取6支10mL具塞比色管，编号，按下表将酪氨酸溶液稀释， 配制酪氨酸系列标准溶液：
试管 编号 1 酪氨酸溶液（100μg /mL） mL 0 稀释后的酪氨酸 蒸馏水 10 8 标准溶液浓度（ug/ml） ( ml ) 0
带有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不能分解由X-Pro、· D或· Q组成 的肽键
无特异性 带有自由氨基酸的L—氨基酸羧基端；不能分解R、P或羟脯氨酸 K，R羧基端 氨基酸羧基端
2，2，双吡啶，1．1()-菲咯啉
α2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化 EDTA，EGTA EDTA，EGTA，碱性氨基酸 PMSF
密度值减去0号管的光密度值。
end
【实验结果】
酪氨酸标准曲线
0.7 0.6 0.5
光密度
y = 0.0011x R 2 = 0.9999
0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 100 200 300 400 酪氨酸含量 500 600 700
一、原理
一、酶活力的定义
酶活力是指酶催化某些化学反应的能力
酪氨酸标准曲线
0.7 0.6 0.5
光密度
y = 0.0011x R
2
= 0.9999
0.4 0.3
0.2
0.1 0 0 100 200 300 400 500 600 700 酪氨酸含量ug
2、待测酶液的制备（称取、溶解、稀释）
称取0.1g酶粉，用pH7.2磷酸缓冲溶液溶解并 定容至100mL，吸取5mL，再用pH7.2磷酸缓 冲溶液稀释定容至250mL，即稀释500倍待测。
二、酶活力和酶促反应速度的关系
酶活力的大小可以用在一定条件下它 所催化的某一化学反应的速度来表示 测定酶活力就是测定酶促反应的速度
【实验原理】
三、酶促反应速度的测定方法及条件
通常用单位时间内
产物的生成量表示 酶促反应的速度。
必须测定酶促反应
酶 促 反 应 速 度 （ ）
v
的初速度。
时间（t）
氨基端双肽，可通过K，R或P氨基端作为第二或第三个氨基酸封闭
在F，T或Y之后 在P-X-G-P肽链中X之后 无特异性 在R之后 在D和半胱氨酸之前 在E或D之后 在K之后 在D-D-D-D-K-肽链中K之后 在R之后 无特异性 在一些R之后 长期孵育时具有广泛特异性 广泛特异性 在K或R之后 无特异性 广泛特异性 无特异性 在非极性残基之前 在K之后 在K或R之后
3、样品测定
第一步
样品管号 操作步骤 加预热酶液/ mL 加预热2%酪蛋白溶液/ mL 保温显色/min 加0.4mol/mL三氯乙酸溶液/mL 1.0 10 2.00 20 1 2 3 操作步骤 空白管号 1 2 1.00 2.00 10 1.00 3
加预热酶液/ mL
加0.4mol/mL三氯乙酸溶液/ mL 保温显色/min 加预热2%酪蛋白溶液/mL