木瓜蛋白酶活力测定方法
木瓜蛋白酶的原料鉴别方法
木瓜蛋白酶的原料鉴别方法
木瓜蛋白酶是一种天然的酶，通常从木瓜果实中提取。
其原料鉴别方法可以从多个角度进行考虑：
1. 外观特征，木瓜蛋白酶的原料主要是木瓜果实，因此外观上应具有木瓜的特征，如外皮颜色、形状和大小等。
成熟的木瓜果实通常呈现为黄色或橙色，外表光滑且有特殊的香味。
2. 化学成分分析，通过化学分析可以鉴别木瓜蛋白酶的原料。
木瓜果实中含有丰富的木瓜蛋白酶，可以通过化学方法检测木瓜蛋白酶的含量，如酶活力测定和蛋白质含量测定等。
3. 酶活性测定，木瓜蛋白酶的原料可以通过酶活性测定来确定其含有活性酶的水平。
一般来说，木瓜蛋白酶具有一定的酶活性，可以通过酶活性测定方法来鉴别原料。
4. 微生物学检测，通过检测木瓜蛋白酶原料中的微生物含量和种类，可以判断原料的质量和纯度。
微生物学检测可以帮助排除原料受到污染的可能性。
5. 原产地证明，木瓜蛋白酶的原料通常应该有明确的原产地证明，通过追溯原料的产地和生产过程，可以确保原料的质量和安全性。
综上所述，通过外观特征、化学成分分析、酶活性测定、微生物学检测和原产地证明等多种方法，可以全面鉴别木瓜蛋白酶的原料。
这些方法的综合应用可以有效确保木瓜蛋白酶原料的质量和纯度。
【免费下载】酶活力的测定 国标
（mL）
0
1
2
3
4
5
（mL）
10
9
8
7
6
5
然后按以下流程操作：
试管A（空白）
↓ 加酶液2.00mL
↓（40±0.2）℃，2min 加三氯乙酸4.00mL（摇匀）
↓（40±0.2）℃，10min
加酪蛋白溶液2.00mL（摇匀） 加三氯乙酸4.00mL（摇匀）
↓ 取出静止10min，过滤
（慢速定性滤纸）
100mL，即得到100μg/mL的L-酪氨酸标准储备溶液。 3. 氢氧化钠溶液（20g/L）
称取氢氧化钠2g，加水搅拌溶解。待溶液到室温后 ，以水定容 至100mL，搅拌均匀。 4. 盐酸溶液
1mol/L:取22.5ml的浓盐酸溶液，加水定容至250ml。 0.1mol/L：取1.8ml的浓盐酸溶液，加水定容至200ml。 5. 酪蛋白溶液（10.0g/L） 称取标准酪蛋白1g，用少量氢氧化钠溶液润湿，加入相应的缓冲 溶液约80mL，在沸水浴中100℃加热回流30min。冷却到室温后转入 100mL容量瓶中，用适宜的pH缓冲溶液稀释至刻度。此溶液在冰箱内 贮存，有效期为3d。使用前重新确认并调整pH至规定值。
式（1）中：
X1—由标准曲线所得的样品最终稀释液的酶活力，u/mL；
X2—样品的酶活力，u/g；
V—溶解样品所使用量瓶的体积，mL；
n—稀释倍数；
8—反应试剂的总体积，mL；
2—吸取酶液的体积，mL；
m—样品的质量，g；
1/10—反应时间 10min，以 1min 计。
1、标线的绘制
管号 酪氨酸的浓度
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根通保据过护生管高产线中工敷资艺设料高技试中术卷资，配料不置试仅技卷可术要以是求解指，决机对吊组电顶在气层进设配行备置继进不电行规保空范护载高与中带资负料荷试下卷高问总中题体资，配料而置试且时卷可，调保需控障要试各在验类最；管大对路限设习度备题内进到来行位确调。保整在机使管组其路高在敷中正设资常过料工程试况中卷下，安与要全过加，度强并工看且作护尽下关可都于能可管地以路缩正高小常中故工资障作料高；试中对卷资于连料继接试电管卷保口破护处坏进理范行高围整中，核资或对料者定试对值卷某，弯些审扁异核度常与固高校定中对盒资图位料纸置试，.卷保编工护写况层复进防杂行腐设自跨备动接与处地装理线置，弯高尤曲中其半资要径料避标试免高卷错等调误，试高要方中求案资技，料术编试交写5、卷底重电保。要气护管设设装线备备置敷4高、调动设中电试作技资气高，术料课中并3中试、件资且包卷管中料拒含试路调试绝线验敷试卷动槽方设技作、案技术，管以术来架及避等系免多统不项启必方动要式方高，案中为；资解对料决整试高套卷中启突语动然文过停电程机气中。课高因件中此中资，管料电壁试力薄卷高、电中接气资口设料不备试严进卷等行保问调护题试装，工置合作调理并试利且技用进术管行，线过要敷关求设运电技行力术高保。中护线资装缆料置敷试做设卷到原技准则术确：指灵在导活分。。线对对盒于于处调差，试动当过保不程护同中装电高置压中高回资中路料资交试料叉卷试时技卷，术调应问试采题技用，术金作是属为指隔调发板试电进人机行员一隔，变开需压处要器理在组；事在同前发一掌生线握内槽图部内 纸故，资障强料时电、，回设需路备要须制进同造行时厂外切家部断出电习具源题高高电中中源资资，料料线试试缆卷卷敷试切设验除完报从毕告而，与采要相用进关高行技中检术资查资料和料试检，卷测并主处且要理了保。解护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
木瓜蛋白酶酶活力检测方法
木瓜蛋白酶酶活力检测方法南宁庞博生物工程有限公司企业标准Q/NPB 01-2019食品添加剂木瓜蛋白酶制剂1、范围本标准规定了食品添加剂木瓜蛋白酶制剂的原辅料要求、技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输、贮存。
本标准适用于以木瓜果乳汁为原料，添加葡萄糖，经浸泡提取、过滤、浓缩、干燥、调配粉碎、包装等工艺制成的食品添加剂木瓜蛋白酶制剂。
2、规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 191-2019 包装储运图示标志GB/T 601-2002 化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T 602-2002 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备 GB/T 603-2002 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB 2760 食品添加剂使用卫生标准GB/T 4789.2-2019 食品卫生微生物检验菌落总数的测定 GB/T 4789.3-2019 食品卫生微生物检验大肠菌群计数 GB/T 4789.4-2019 食品卫生微生物检验沙门氏菌检测GB/T 4789.6-2019 食品卫生微生物检验致泻大肠埃希氏菌检测 GB/T 4789.10-2019 食品卫生微生物检验金黄色葡萄球菌检验 GB/T 5009.3-2019 食品中水分的测定GB/T 5009.74-2019 食品添加剂中重金属限量试验 GB/T 5009.75-2019 食品添加剂中铅的测定 GB/T 5009.76-2019 食品添加剂中砷的测定 GB 5749-2019 生活饮用水卫生标准GB/T 6682-2019 分析实验室用水规格和试验方法 GB 7718 预包装食品标签通则GB/T 8170-2019 数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB/T 20880-2019 食用葡萄糖JJF 1070 定量包装商品净含量检验规则 NY/T 691-2019 番木瓜定量包装商品计量监督管理办法国家质量监督检验检疫总局令（2019）第75号 3、原辅料要求 3.1 水应符合 GB 5749-2019规定 3.2 木瓜果应符合NY/T 691-2019的规定 3.3 葡萄糖应符合GB/T 20880-2019中无水葡萄糖的规定 3.4 食品添加剂食品添加剂使用的品种和使用量应符合GB2760 的规定，质量应符合相应产品标准的规定。
木瓜蛋白酶的检测
2、以BAEE为底物测木瓜蛋白酶的活性
BAEE( 苯甲酰一L－精氨酸乙酯）被木瓜蛋白酶 催化水解成苯甲酰一L精氨酸(BA) 和乙醇 ， 可以利用 BA和BAEE在253nm 处光吸收值的不同，用光学法测 定酶活性。 BAEE法底物纯度高，准确性高，重复性 好，操作简便， 最省工省时，连续测定时，一个样品 在10min之内即可完成，但仪器设备昂贵， 成本偏高： 该测定方法尤其适合精酶制品的活性检测及酶动力学 性质的研究， 也常用于商品木瓜蛋白酶制品的活性测 定。
紫外吸光光度法测定化妆品中木瓜蛋白酶的活力 冯健雯
工业生产中木瓜蛋 白酶 的活性检测方法比较 方 焕 生吉萍 吴显荣
十二烷基苯磺酸钠共振散射光谱法测定木瓜蛋白酶活力 黄国霞 蒋治 良 梁爱徐红娣
云南峨山番木瓜中木瓜蛋白酶的初步纯化及活性测定 黄兴奇等
4、实验室木瓜蛋白酶活力测定
(1)样品处理：精确称取0.05g的木瓜蛋白酶干粉于研钵中，加入少量石英砂 和几滴酶稀释液研磨15min,将酶液用蒸馏水少量多次洗入500ml容量瓶 (不 要将石英砂带入)，定溶，摇匀。取样液5ml,加入酶溶解液10ml，混匀盖严， 将酶激活15min以上(激活时半胱氨酸的浓度要高于0.03mol/L，而且要当天 配制，激活的酶最好在2h内测完)备用。
乙醇溶液对木瓜蛋白酶催化活性的影响 何 平 詹福建 丘泰球
初志战 黄卓烈 巫光宏
木瓜蛋白酶的生产工艺研 谭爱娟 王利民
一、木瓜蛋白酶的简介：
木瓜蛋白酶是从南方果王——番木瓜中提取的乳汁，经科 学加工而制成的食品添加剂。木瓜蛋白酶具有很高的蛋白分解 活性，已广泛用于啤酒酿造、肉类加工、动植物蛋白水解制品、 饼干果酱 、果汁加工和果酒的生产上。特别是在啤酒工业上， 木瓜蛋白酶可作为澄清剂 ，将啤酒中游离的蛋白质分解为易溶 于水的短肽 、氨基酸 ，既丰富了营养成分，又防止啤酒在贮 运过程中产生浑浊与沉淀，延长了啤酒的保存期；另外，在麦 芽糖化阶段加入木瓜蛋白酶，可弥补麦芽中蛋酶 活力不足的缺 陷，提高氨基氮的浓度，保证发酵的正常进行，确保产品具有 良好风味；在肉制品加工方面，木瓜蛋白酶可作为肉类的嫩化 剂(如嫩肉粉 )、分解剂(能够将固体肉完全水解为容易消化吸 收的肉汁，例如鸡精、兔精制造等)等 。
酶活力测定方法
空白和对照试验： 空白试验：是指杂质反应和自发反应引起
的变化量，它提供的是未知因素的影响。空 白值可以通过不加酶，或不加底物，或二者 都加（酶预先经过失效处理）。
对照试验：是指用纯酶或标准酶制剂测得 的结果，主要作为比较或标定的标准。
3）测定方法：
取样测定法：
酶变性剂：5% 三氯醋酸 3% 高氯酸 其它酸、碱、醇类
A1 - A2
0.003 : 1 =
:X
T
A1 - A2 0.003T
每mg供试品中含胰蛋白酶单位数为
A1 - A2
0.003TW
A1—A 2 P=
0.003 T W
重组人白细胞介素 11的胰蛋白酶切肽 图分析
肽图分析是评价重组产品蛋白质结构及其 生产工艺稳定性的重要方法,目前常用的方 法有ＣＮＢｒ裂解ＳＤＳ-ＰＡＧＥ微量肽 图法和胰蛋白酶切ＲＰ ＨＰＬＣ肽图法。返回练习与思考
1．何谓：生化药物、生物技术药物、 基因工程药物和生物制品？ 2．生化药物和基因工程药物各分哪 几种？ 3．与化学合成药物的分析相比，生 物药物的分析有何特点？
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加热：使酶失效
酶反应
不同的时间取样
终止反应
测定
连续测定法：在反应过程中对反应系统进 行直接连续检测。
检测方法： 紫外-可见分光光度法 旋光法 荧光分光光度法 电化学测定法 酶偶联测定法 离子选择性电极测定法等。
示例：胰蛋白酶效价测定 胰蛋白酶 肽键、酰氨键、酯键（碱性氨基酸） 水解速率：酯键﹥酰氨键﹥肽键 供试品溶液：50～60单位/ml 底物溶液：N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯
2．酶活力测定法
1）基本原理： 酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶
活力测定实质上是测定一个被酶所催化的化学 反应速度。酶反应速度越快所表示的酶活力越 高。
木瓜蛋白酶活性实验报告
一、实验目的1. 了解木瓜蛋白酶的性质和作用机理。
2. 探究不同条件对木瓜蛋白酶活性的影响。
3. 通过实验验证木瓜蛋白酶在食品加工中的应用潜力。
二、实验原理木瓜蛋白酶是一种含疏基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力。
木瓜蛋白酶的活性受pH、温度、离子强度等因素的影响。
本实验通过测定木瓜蛋白酶在不同pH、温度和离子强度下的活性，探讨其活性影响因素。
三、实验材料1. 木瓜蛋白酶样品2. 酚酞指示剂3. 酶反应缓冲液4. 硫酸铜溶液5. 碘液6. pH计7. 恒温水浴锅8. 移液器9. 试管四、实验方法1. pH对木瓜蛋白酶活性的影响（1）取5支试管，分别加入0.5ml酶反应缓冲液，编号为1、2、3、4、5。
（2）分别向5支试管中加入0.1ml木瓜蛋白酶样品，编号为1、2、3、4、5。
（3）分别向5支试管中加入0.5ml不同pH的酶反应缓冲液（pH 2、4、6、8、10）。
（4）将5支试管置于37℃恒温水浴锅中保温10分钟。
（5）向5支试管中加入0.5ml酪蛋白溶液，摇匀。
（6）观察并记录各试管溶液的颜色变化。
2. 温度对木瓜蛋白酶活性的影响（1）取5支试管，分别加入0.5ml酶反应缓冲液，编号为1、2、3、4、5。
（2）分别向5支试管中加入0.1ml木瓜蛋白酶样品，编号为1、2、3、4、5。
（3）分别将5支试管置于0℃、20℃、37℃、50℃、70℃恒温水浴锅中保温10分钟。
（4）向5支试管中加入0.5ml酪蛋白溶液，摇匀。
（5）观察并记录各试管溶液的颜色变化。
3. 离子强度对木瓜蛋白酶活性的影响（1）取5支试管，分别加入0.5ml酶反应缓冲液，编号为1、2、3、4、5。
（2）分别向5支试管中加入0.1ml木瓜蛋白酶样品，编号为1、2、3、4、5。
（3）分别向5支试管中加入不同离子强度的硫酸铜溶液（0.01mol/L、0.05mol/L、0.1mol/L、0.5mol/L、1.0mol/L）。
紫外吸光光度法测定化妆品中木瓜蛋白酶的活力
紫外吸光光度法测定化妆品中木瓜蛋白酶的活力作者：冯健雯(梧州市产品质量监督检验所,梧州543002)样品用磷酸盐半胱氨酸ＥＤＴＡ缓冲溶液搅拌溶解后,选择一定的ｐＨ值和温度条件,样品中的木瓜蛋白酶能将加入的酪蛋白水解生成可溶解的氨基酸,末水解的酪蛋白用三氯乙酸沉淀后过滤,溶解的水解产物用紫外吸光光度法测定[1]。
1试验部分1.1试剂与仪器磷酸钠溶液:0.05ｍｏｌ·Ｌ-1,称取十二水磷酸氢二钠1.79ｇ溶解于100ｍｌ水中。
柠檬酸溶液:0.05ｍｏｌ·Ｌ-1,将柠檬酸一水合物1.05ｇ用100ｍｌ水溶解。
缓冲溶液:称取十二水磷酸氢二钠17.89ｇ溶于800ｍｌ水中,再将ＥＤＴＡ钠盐二水合物14.0ｇ和盐酸半胱氨酸一水合物6.1ｇ溶于其中。
用1ｍｏｌ·Ｌ-1盐酸或1ｍｏｌ·Ｌ-1氢氧化钠将ｐＨ值调到6.0±0.1,加水定容至1Ｌ。
三氯乙酸溶液:将三氯乙酸30ｇ溶于100ｍｌ水中酪蛋白作用物:将1ｇ干燥的酪蛋白分散在50ｍｌ磷酸钠溶液中,在沸水浴中加热30ｍｉｎ,经常搅拌之,冷至室温,在连续快速的搅拌下,用柠檬酸溶液调ｐＨ值至6.0±0.1,加水定容至100ｍｌ。
标准溶液:1ｍｇ·ｍｌ-1,称取ＵＳＰ木瓜蛋白酶对照标准物100ｍｇ(其活力为100ＰＵ·ｍｇ-1),用磷酸盐半胱氨酸ＥＤＴＡ缓冲溶液溶解,定容100ｍｌ。
标准使用液:移取0.25,0.50,1.00,1.50,2.00,2.50ｍｌ标准溶液于一组10ｍｌ容量瓶中,用缓冲溶液稀释至刻度,摇匀。
酸度计:分度值0.1ｐＨ,ｐＨ6.0±0.1。
超级恒温水浴:40±0.1℃紫外分光光度计:波长200～1000ｎｍ1.2测定方法1.2.1样品处理称取样品1.00～2.00ｇ,加磷酸盐半胱氨酸ＥＤＴＡ缓冲溶液搅拌溶解后转移至50ｍｌ容量瓶中,用缓冲溶液稀释至刻度,摇匀。
木瓜蛋白酶活力测定方法
木瓜蛋白酶活力测定方法分别精密量取酪蛋白溶液5ml，置3支具塞试管中，置40℃水浴中保温10分钟，各精密加入供试品溶液2ml，摇匀，置40℃水浴中，开始记时，准确反应1小时，立即精密加入三氯醋酸溶液5ml，强力振摇混匀，置40℃水浴中放置30~40分钟，使沉淀的蛋白质完全凝固，滤过，滤液作为供试品溶液。
精密量取酪蛋白溶液5ml置另一具试管，于40℃水浴中保温1小时，精密加入三氯醋酸溶液5ml，强力振摇混匀，精密加入供试品溶液2ml，置40℃水浴中放置30~40分钟，滤过，滤液作为空白溶液。
照分光光度法（中国药典2000年版二部附录IV A），以0.1mol/L盐酸溶液为空白，在275nm的波长处测定空白溶液、供试品溶液和对照品溶液的吸收度，按下式计算：效价（单位/mg）=A/As＊Cs＊12/2＊稀释倍数/W式中A为供试品溶液的吸收度减去空白溶液的吸收度：As为酪氨酸对照品溶液的吸收度：Cs为酪氨酸对照品溶液的浓度，ug/mlW为供试品重量，mg;在上述条件下，释放1ug的酪氨酸的酶量为一个活力单位。
试剂酪蛋白溶液：取酪蛋白1g，加0.05mol/L磷酸氢二钠溶液50ml,置沸水浴中煮30分钟，时时搅拌，冷至室温，加0.05mol/L枸椽酸溶液调节PH至6.0±0.1，并迅速搅拌，防止酪蛋白沉淀，用水稀释至100ml（临用新配）。
酶稀释液：取无水磷酸氢二钠3.55g，加水400ml溶解，加乙二胺四醋酸二钠1.1g和盐酸半胱氨酸2.74g，振摇溶解，用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠溶液调节PH6.5±0.1，用水稀释至500ml,混匀（临用新配）三氯醋酸溶液:取三氯醋酸17.99g，加醋酸钠29.94g和冰醋酸18.9ml，加适量水溶解后，加水使成1000ml，摇匀。
酶活力测定对照品溶液的制备:精密称取已105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，用0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含40ug的溶液。
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木瓜蛋白酶活力测定方法分别精密量取酪蛋白溶液5ml，置3支具塞试管中，置40℃水浴中保温10分钟，各精密加入供试品溶液2ml，摇匀，置40℃水浴中，开始记时，准确反应1小时，立即精密加入三氯醋酸溶液5ml，强力振摇混匀，置40℃水浴中放置30~40分钟，使沉淀的蛋白质完全凝固，滤过，滤液作为供试品溶液。
精密量取酪蛋白溶液5ml置另一具试管，于40℃水浴中保温1小时，精密加入三氯醋酸溶液5ml，强力振摇混匀，精密加入供试品溶液2ml，置40℃水浴中放置30~40分钟，滤过，滤液作为空白溶液。
照分光光度法（中国药典2000年版二部附录IV A），以0.1mol/L 盐酸溶液为空白，在275nm的波长处测定空白溶液、供试品溶液和对照品溶液的吸收度，按下式计算：效价（单位/mg）=A/As＊Cs＊12/2＊稀释倍数/W式中A为供试品溶液的吸收度减去空白溶液的吸收度：As为酪氨酸对照品溶液的吸收度：Cs为酪氨酸对照品溶液的浓度， ug/mlW为供试品重量，mg;在上述条件下，释放1ug的酪氨酸的酶量为一个活力单位。
试剂酪蛋白溶液：取酪蛋白1g，加0.05mol/L磷酸氢二钠溶液50ml,置沸水浴中煮30分钟，时时搅拌，冷至室温，加0.05mol/L枸椽酸溶液调节PH至6.0±0.1，并迅速搅拌，防止酪蛋白沉淀，用水稀释至100ml（临用新配）。
酶稀释液：取无水磷酸氢二钠3.55g，加水400ml溶解，加乙二胺四醋酸二钠1.1g和盐酸半胱氨酸2.74g，振摇溶解，用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠溶液调节PH6.5±0.1，用水稀释至500ml,混匀（临用新配）三氯醋酸溶液:取三氯醋酸17.99g，加醋酸钠29.94g和冰醋酸18.9ml，加适量水溶解后，加水使成1000ml，摇匀。
酶活力测定对照品溶液的制备:精密称取已105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，用0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含40ug的溶液。
供试品溶液的制备:取本品适量（约相当于木瓜酶活力120万单位），精密称定，加酶稀释液振摇，制成每1ml中含200~300单位的溶液，摇匀。
淀粉酶活力测定实验技术 2008-05-27 18:01:29 阅读213 评论0字号：大中小一、目的淀粉是葡萄糖以α-1,4糖苷键及α-1，6糖苷键连结的高分子多糖，是人类和动物的重要食物，也是食品、发酵、酿造、医药、纺织工业的基本原料。
淀粉酶是加水分解淀粉的酶的总称，淀粉酶对淀粉的分解作用是工业上利用淀粉的依据，也是生物体利用淀粉进行代谢的初级反应。
小麦成熟期如遇阴雨天气，有的品种会发生严重的穗发芽，造成巨大损失，这是小麦种子中淀粉酶活动的结果。
因此，淀粉酶的活性测定，具有理论和应用研究的意义。
通过本实验，学习酶活测定的一般方法，巩固并熟练分光光度计的使用。
二、原理淀粉酶主要包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和R-酶，它们广泛存在于动物、植物和微生物界。
不同来源的淀粉酶，性质有所不同。
植物中最重要的淀粉酶是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
α-淀粉酶随机作用于直链淀粉和支链淀粉的直链部分α-1,4糖苷键，单独使用时最终生成寡聚葡萄糖、α-极限糊精和少量葡萄糖。
Ca2+能使α-淀粉酶活化和稳定，它比较耐热但不耐酸，pH3.6以下可使其钝化。
β-淀粉酶从非还原端作用于α-1,4糖苷键，遇到支链淀粉的α-1,6键时停止。
单独作用时产物为麦芽糖和β-极限糊精。
β-淀粉酶是一种巯基酶，不需要Ca2+及Cl—等辅助因子，最适pH偏酸，与α-淀粉酶相反，它不耐热但觉耐酸，70℃保温15min 可使其钝化。
通常提取液中α-淀粉酶和β-淀粉酶同时存在。
可以先测定（α+β）淀粉酶总活力，然后在70℃加热15min，钝化β-淀粉酶，测出α-淀粉酶活力，用总活力减去α-淀粉酶活力，就可求出β-淀粉酶活力。
淀粉酶活力大小可用其作用于淀粉生成的还原糖与3,5-二硝基水杨酸的显色反应来测定。
还原糖作用于黄色的3,5-二硝基水杨酸生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，生成物颜色的深浅与还原糖的量成正比。
以每克样品在一定时间内生成的还原糖（麦芽糖）量表示酶活大小。
三、仪器、试剂和材料1.仪器（1）电子顶载天平（2）研钵（3）容量瓶100mL2个（4）具塞刻度试管25Ml15支（5）试管8支（6）吸管1mL3支，2mL12支，5mL1支（7）离心机（8）离心管（9）恒温水浴锅（10）分光光度计2.试剂（1）1%淀粉溶液（2）0.4mol/L氢氧化钠（3）pH5.6柠檬酸缓冲液称取柠檬酸20.01g，溶解后定容至1000mL，为A液。
称取柠檬酸钠29.41g，溶解后定容至1000mL，为B液。
取A液13.7mL与B液26.3mL混匀，即为pH5.6之缓冲液。
（4）3,5-二硝基水杨酸精确称取1g3,5-二硝基水杨酸溶于20mL1mol/L氢氧化钠中，加入50mL蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水稀释至100Ml ，盖紧瓶塞，防止CO2进入。
（5）麦芽糖标准液（1mg/ml）称取0.100g麦芽糖，溶于少量蒸馏水，定容至100mL。
3.材料萌发3天的小麦芽。
四、操作步骤1.酶液提取称取2g萌发3天的小麦种子（芽长1cm左右），置研钵中加少量石英砂和2m1左右蒸馏水，研成匀浆，无损地转入100m1容量瓶中，用蒸馏水定容至100m1，每隔数分钟振荡1次，提取20min。
3000r／min离心l0min，转出上清液备用。
2.a-淀粉酶活力测定（1）取试管4支，标明2支为对照管，2支为测定管。
（2）于每管中各加酶液lml，在70℃士0.5℃恒温水浴中准确加热15min，钝化β-淀粉酶。
取出后迅速用流水冷却。
（3）在对照管中加入4m10.4mol/L氢氧化钠。
（4）在4支试管中各加入1mlpH5.6的柠檬酸缓冲液。
（5）将4支试管置另一个40℃士0.5℃恒温水浴中保温15min，再向各管分别加入40℃下预热的1％淀粉溶液2m1，摇匀，立即放入40℃恒温水浴准确计时保温5min。
取出后向测定管迅速加入4ml0.4mol/L氢氧化钠，终止酶活动，准备测糖。
3.淀粉酶总活力测定取酶液5ml，用蒸馏水稀释至100m1，为稀释酶液。
另取4支试管编号，2支为对照，2支为测定管。
然后加入稀释之酶液lml。
在对照管中加入4m10.4mol氢氧化钠。
4支试管中各加1mlpH5.6之柠檬酸缓冲液。
以下步骤重复α-淀粉酶测定第（5）步的操作，同样准备测糖。
4.麦芽糖的测定（1）标准曲线的制作取25ml刻度试管7支，编号。
分别加入麦芽糖标准液（lmg/ml）0,0.2,0.6,1.0,1.4,1.8,2.0ml，然后用吸管向各管加蒸馏水使溶液达2.0ml，再各加3，5一二硝基水杨酸试剂2.0m1，置沸水浴中加热5min。
取出冷却，用蒸馏水稀释至25m1。
混匀后用分光光度计在520nm波长下进行比色，记录吸光度。
以吸光度为纵坐标，以麦芽糖含量（mg）为横坐标，绘制标准曲线。
（2）样品的测定取步骤2,3中酶作用后的各管溶液2m1,分别放入相应的8支25ml具塞刻度试管中，各加入2m13,5-二硝基水杨酸试剂。
以下操作同标准曲线制作。
根据样品比色吸光度，从标准曲线查出麦芽糖含量，最后进行结果计算。
（A—A0）xVT五、结果处理式中A为a-淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖（mg）；Ao为a-淀粉酶的对照管中麦芽糖量（mg）；B为（a十β）淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖（mg）；Bo为（a十β）淀粉酶的对照管中麦芽糖（mg）；VT为样品稀释总体积（ml）；VU为比色时所用样品液体积（ml）；W为样品重（g）。
六、注意事项（1）酶反应时间应准确计算。
（2）试剂加入按规定顺序进行。
七、思考题1.淀粉酶活性测定原理是什么？2.酶反应中为什么加pH5.6的柠檬酸缓冲液？为什么在40℃进行保温？3.测定酶活力，应注意什么问题？一、目的淀粉是葡萄糖以α-1,4糖苷键及α-1，6糖苷键连结的高分子多糖，是人类和动物的重要食物，也是食品、发酵、酿造、医药、纺织工业的基本原料。
淀粉酶是加水分解淀粉的酶的总称，淀粉酶对淀粉的分解作用是工业上利用淀粉的依据，也是生物体利用淀粉进行代谢的初级反应。
小麦成熟期如遇阴雨天气，有的品种会发生严重的穗发芽，造成巨大损失，这是小麦种子中淀粉酶活动的结果。
因此，淀粉酶的活性测定，具有理论和应用研究的意义。
通过本实验，学习酶活测定的一般方法，巩固并熟练分光光度计的使用。
二、原理淀粉酶主要包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和R-酶，它们广泛存在于动物、植物和微生物界。
不同来源的淀粉酶，性质有所不同。
植物中最重要的淀粉酶是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
α-淀粉酶随机作用于直链淀粉和支链淀粉的直链部分α-1,4糖苷键，单独使用时最终生成寡聚葡萄糖、α-极限糊精和少量葡萄糖。
Ca2+能使α-淀粉酶活化和稳定，它比较耐热但不耐酸，pH3.6以下可使其钝化。
β-淀粉酶从非还原端作用于α-1,4糖苷键，遇到支链淀粉的α-1,6键时停止。
单独作用时产物为麦芽糖和β-极限糊精。
β-淀粉酶是一种巯基酶，不需要Ca2+及Cl—等辅助因子，最适pH偏酸，与α-淀粉酶相反，它不耐热但觉耐酸，70℃保温15min 可使其钝化。
通常提取液中α-淀粉酶和β-淀粉酶同时存在。
可以先测定（α+β）淀粉酶总活力，然后在70℃加热15min，钝化β-淀粉酶，测出α-淀粉酶活力，用总活力减去α-淀粉酶活力，就可求出β-淀粉酶活力。
淀粉酶活力大小可用其作用于淀粉生成的还原糖与3,5-二硝基水杨酸的显色反应来测定。
还原糖作用于黄色的3,5-二硝基水杨酸生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，生成物颜色的深浅与还原糖的量成正比。
以每克样品在一定时间内生成的还原糖（麦芽糖）量表示酶活大小。
三、仪器、试剂和材料1.仪器（1）电子顶载天平（2）研钵（3）容量瓶100mL2个（4）具塞刻度试管25Ml15支（5）试管8支（6）吸管1mL3支，2mL12支，5mL1支（7）离心机（8）离心管（9）恒温水浴锅（10）分光光度计2.试剂（1）1%淀粉溶液（2）0.4mol/L氢氧化钠（3）pH5.6柠檬酸缓冲液称取柠檬酸20.01g，溶解后定容至1000mL，为A液。
称取柠檬酸钠29.41g，溶解后定容至1000mL，为B液。
取A液13.7mL与B液26.3mL混匀，即为pH5.6之缓冲液。
（4）3,5-二硝基水杨酸精确称取1g3,5-二硝基水杨酸溶于20mL1mol/L氢氧化钠中，加入50mL蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水稀释至100Ml ，盖紧瓶塞，防止CO2进入。
（5）麦芽糖标准液（1mg/ml）称取0.100g麦芽糖，溶于少量蒸馏水，定容至100mL。