病毒包装原理

汉恒生物2017产品手册

--您身边的病毒载体专家

专注于基因技术的研发与应用转化

病毒载体为工具的基因技术操作全平台

汉恒已成为国内生物医药科研与研发领域最主流的基因载体与基因技术供应商

覆盖、并抢占国内主流科研、临床前研究及药物研发的AAV市场,完成基础底层市场的教育及占领

与国内临床机构合作申报并实施基因治疗临床前及临床研究项目

上市1-2种自主知识产权的基因治疗AAV药物

2012年4年多的发展短期目标

中期目标2-5年内长期目标10年内

2010成立汉恒简史

汉恒生物成立于2010年,专注于基因技术的研发与应用转化。2012年,

汉恒建立了以病毒载体为工具的基因技术操作全平台,经过7年多的发展,汉恒已成为国内生物医药科研与研发领域最主流的基因载体与基因技术供应商。 汉恒在一系列基因载体技术如腺病毒、慢病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、细胞功能学服务的基础上,进一步开发基因及信号通路研究工具,包括自噬流

研究工具、lncRNA&环状RNA载体工具、分子载体探针、基于病毒载体的Crispr/Cas9基因编辑工具等。

以核心基因技术为基础,汉恒更加注重技术应用与临床转化。

公司简介

目 录

1 Zhu Y , Di S, Hu W et al. A new flavonoid glycoside (APG) isolated from Clematis tangutica attenuates myocardial ischemia/reperfusion injury via activating PKCepsilon signaling. Biochim Biophys Acta 2017; 1863:701-711.

2 Zheng X, Chen W, Hou H et al. Ginsenoside 20(S)-Rg

3 induced autophagy to inhibit migration and invasion of ovarian cancer. Biomed Pharmacother 2017; 85:620-626.

3 Zhao H, Xue Y , Guo Y , Sun Y , Liu D, Wang X. Inhibition of endocan attenuates monocrotaline-induced connective tissue disease related pulmonary arterial hypertension. Int Immunopharmacol 2017; 42:115-121.

4 Yang Z, Hou Y , Hao T et al. A human proteome array approach to identifying key host proteins targeted by Toxoplasma kinase ROP18. Mol Cell Proteomics 2017.

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6 Wang X, Fu Z, Chen Y , Liu L. Fas expression is downregulated in gastric cancer. Mol Med Rep 2017; 15:627-634.

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8 Wang P , Wang Y , Tang W et al. Bone Morphogenetic Protein-9 Enhances Osteogenic Differentiation of Human Periodontal Ligament Stem Cells via the JNK Pathway. PLoS One 2017; 12:e0169123.

9 Li M, Y uan Y , Hu B, Wu L. Study on Lentivirus-Mediated ABCA7 Improves Neurocognitive Function and Related Mechanisms in the C57BL/6 Mouse Model of Alzheimer's Disease. J Mol Neurosci 2017.

10 Li C, Guo XD, Lei M et al. Thamnolia vermicularis extract improves learning ability in APP/PS1 transgenic mice by ameliorating both Abeta and 2017客户最新文献节选

06一流质量标准汉恒专利08

产品介绍

07公司优势

02汉恒客户发表文献专题研究

33HB-infusion TM 无缝克隆试剂盒 36SaveIt TM 抗支原体试剂盒

37

Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒

34LipoFiter TM 脂质体转染试剂汉恒自主研发试剂

30CRISPR-Cas9专题研究 27环状RNA专题研究28自噬专题研究

32

探针工具

细胞器定位工具

25悬浮细胞专用病毒 26

原代T细胞专用病毒

17化学遗传学AAV现货工具 14光遗传学AAV现货工具22慢病毒 24

逆转录病毒

09

腺相关病毒AAV

19腺病毒特色服务

1 Jiang JZ, Yang BH, Ji LL et al. Metabolic-induced cytotoxicity of diosbulbin B in CYP3A4-expressing cells. Toxicol In Vitro 2017; 38:59-66.

2 Hu J, Zhang L, Yang Y et al. Melatonin alleviates postinfarction cardiac remodeling and dysfunction by inhibiting Mst1. J Pineal Res 2017; 62.

3 Guo J, Qin W, Xing Q et al. TRIM33 is Essential for Osteoblast Proliferation and Differentiation via BMP Pathway. J Cell Physiol 2017.

4 Gao Y , Hou R, Fei Q et al. The Three-Herb Formula Shuang-Huang-Lian stabilizes mast cells through activation of mitochondrial calcium uniporter. Sci Rep 2017; 7:38736.

5 Feng D, Wang B, Wang L et al. Pre-ischemia melatonin treatment alleviated acute neuronal injury after ischemic stroke by inhibiting ER stress-dependent autophagy via PERK and IRE1 signalings. J Pineal Res 2017.

6 Dong W, Sun S, Cao X et al. Exposure to TNFalpha combined with TGFbeta induces carcinogenesis in vitro via NF-kappaB/Twist axis. Oncol Rep 2017.

7 Zue J, Zhu C. GW27-e1151 ABCG1 protects vascular endothelial cells against high glucose-induced oxidative stress through the Nrf2-dependent pathway. Journal of the American College of Cardiology 2016; 68:C42.

8 Zhu W, Xu J, Jiang C et al. Pristane induces autophagy in macrophages, promoting a STA T1-IRF1-TLR3 pathway and arthritis. Clinical Immunology 2016.

9 Zhu T, Yao Q, Wang W, Yao H, Chao J. iNOS induces vascular endothelial cell migration and apoptosis via autophagy in ischemia/reperfusion injury. Cellular Physiology and Biochemistry 2016; 38:1575-1588.

10 Zhu J, Zhu F, Song W et al. Altered miR-370 expression in hepatic ischemia-reperfusion injury correlates with the level of nuclear kappa B (NF-κB) related factors. Gene 2016.

11 Zhou Z-HX, Yang Z-J. Ad-HGF induces autophagy in hypoxia-injured H9c2 cardiomyocytes via activating NF-κB signaling. Int J Clin Exp Pathol 2016; 9:10169-10178.

12 Zhou Y , He Z, Gao Y et al. Induced pluripotent stem cells inhibit bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice through suppressing TGF-β1/Smad-mediated epithelial to mesenchymal transition. Frontiers in Pharmacology 2016; 7.

13 Zhiming Y , Xue J, Yang H, Liang B, Zhao Y , Yang Z. GW27-e1148 Angiotensin 1-7 Protects against Ox-LDL-Induced Endothelial Endoplasmic Reticulum Stress and Apoptosis. Journal of the American College of Cardiology 2016; 68:C41.

14 Zhao H, Zhang M, Zhou F et al. Cinnamaldehyde ameliorates LPS-induced cardiac dysfunction via TLR4-NOX4 pathway: The regulation of autophagy and ROS production. Journal of Molecular and Cellular Cardiology 2016; 101:11-24.

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16 Zhang Z, Guo M, Zhao S, Shao J, Zheng S. ROS-JNK1/2-dependent activation of autophagy is required for the induction of anti-inflammatory effect of dihydroartemisinin in liver fibrosis. Free Radical Biology and Medicine 2016; 101:272-283.

17 Zhang Y , Song H, Guo T et al. Overexpression of Annexin II receptor-induced autophagy protects against apoptosis in uveal melanoma cells. Cancer Biotherapy and Radiopharmaceuticals 2016; 31:145-151.

18 Zhang Y , Ma Q, Liu T et al. Interleukin-6 suppression reduces tumour self-seeding by circulating tumour cells in a human osteosarcoma nude mouse model. Oncotarget 2016; 7:446.

19 Zhang Y , Li Y , Y uan W, Xia Y , Shen Y . Autophagy is associated with pathogenesis of Haemophilus parasuis. Frontiers in Microbiology 2016; 7.

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21 Zhang W, Zhang M, Wang Z et al. Neogambogic acid prevents silica-induced fibrosis via inhibition of high-mobility group box 1 and MCP-1-induced protein 1. Toxicology and applied pharmacology 2016; 309:129-140.

22 Zhang W, Chen L, Shen Y , Xu J. Rifampicin-induced injury in L02 cells is alleviated by 4-PBA via inhibition of the PERK-A TF4-CHOP pathway. Toxicology in Vitro 2016; 36:186-196.

23 Zhang M, Zhao Z, Shen M et al. Polydatin protects cardiomyocytes against myocardial infarction injury by activating Sirt3. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease 2016.

24 Zhang M, Zhang L, Hu J et al. MST1 coordinately regulates autophagy and apoptosis in diabetic cardiomyopathy in mice. Diabetologia 2016; 59:2435-2447.

25 Zhang L-D, Liu Z, Liu H et al. Oridonin enhances the anticancer activity of NVP-BEZ235 against neuroblastoma cells in vitro and in vivo through autophagy. International journal of oncology 2016; 49:657-665.

26 Zhang L, Zhao S, Y uan L, Wu H, Jiang H, Luo G. Hyperoxia-mediated LC3B activation contributes to the impaired transdifferentiation of type II alveolar epithelial cells (AECIIs) to type I cells (AECIs). Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology 2016; 43:834-843.

27 Zhang L, Y u Y , Xia X et al. Transcription factor E2-2 inhibits the proliferation of endothelial progenitor cells by suppressing autophagy. International journal of molecular medicine 2016; 37:1254-1262.

28 Zhang L, Liu L, He X et al. CHIP promotes thyroid cancer proliferation via activation of the MAPK and AKT pathways. Biochemical and biophysical research communications 2016; 477:356-362.

29 Zhang H-M, Li S-P , Y u Y et al. Bi-directional roles of IRF-1 on autophagy diminish its prognostic value as compared with Ki67 in liver transplantation for hepatocellular carcinoma. Oncotarget 2016; 7:37979.

30 Zhang H, Luo W, Sun Y et al. Wnt/β-Catenin Signaling Mediated-UCH-L1 Expression in Podocytes of Diabetic Nephropathy. International

汉恒客户发表文献节选

汉恒客户发表文献节选

31 Zhang G, Guo L, Y ang C et al. A novel role of breast cancer-derived hyaluronan on inducement of M2-like tumor-associated macrophages formation. OncoImmunology 2016; 5:e1172154.

32 Zhang F, Liu G, Wei C, Gao C, Hao J. Linc-MAF-4 regulates Th1/Th2 differentiation and is associated with the pathogenesis of multiple sclerosis by targeting MAF. The FASEB Journal 2016:fj-201600838R.

33 Zhang D, Zhao Q, Sun H et al. Defective autophagy leads to the suppression of stem-like features of CD271+ osteosarcoma cells. Journal of Biomedical Science 2016; 23:82.

34 Zhang C, Liu F, Chen H et al. Bif-1 promotes tumor cell migration and metastasis via Cdc42 expression and activity. Clinical & Experimental Metastasis 2016:1-13.

35 Zhang C, Hou B, Y u S, Chen Q, Zhang N, Li H. HGF alleviates high glucose-induced injury in podocytes by GSK3β inhibition and autophagy restoration. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Cell Research 2016; 1863:2690-2699.

36 Zhang C, Cai Z, Liang Q et al. RLIP76 Depletion Enhances Autophagic Flux in U251 Cells. Cellular and Molecular Neurobiology 2016:1-8.37 Y u W, Wang Z, Li Y et al. Endocytosis mediated by Caveolin-1 inhibits activity of matrix metalloproteinase-2 in human renal proximal tubular cells under hypoxia. INTERNA TIONAL JOURNAL OF CLINICAL AND EXPERIMENTAL PA THOLOGY 2016; 9:1276-1284.

38 Yin X, Xu C, Zheng X et al. SnoN suppresses TGF-β-induced epithelial-mesenchymal transition and invasion of bladder cancer in a TIF1γ-dependent manner. Oncology Reports 2016; 36:1535-1541.

39 Yang Y , Sun X, Yang Y et al. Gambogic acid enhances the radiosensitivity of human esophageal cancer cells by inducing reactive oxygen species via targeting Akt/mTOR pathway. Tumor Biology 2016; 37:1853-1862.

40 Yang W, Wang J-G, Wang Q et al. Decreased HCRP1 promotes breast cancer metastasis by enhancing EGFR phosphorylation. Biochemical and Biophysical Research Communications 2016; 477:222-228.

41 Yang Q, Chen X, Zheng T et al. Transplantation of Human Urine-Derived Stem Cells Transfected With Pigment Epithelium-Derived Factor to Protect Erectile Function in a Rat Model of Cavernous Nerve Injury. Cell transplantation 2016; 25:1987-2001.

42 Yang M, Zhang G-G, Wang T et al. TBX18 gene induces adipose-derived stem cells to differentiate into pacemaker-like cells in the myocardial microenvironment. International Journal of Molecular Medicine 2016; 38:1403-1410.

43 Y ang K, Lu Y , Xie F et al. Cationic liposomes induce cell necrosis through lysosomal dysfunction and late-stage autophagic flux inhibition. Nanomedicine 2016; 12:3117-3137.

44 Yan Y , Xie M, Zhang L et al. Ras-related associated with diabetes gene acts as a suppressor and inhibits Warburg effect in hepatocellular carcinoma. OncoTargets and therapy 2016; 9:3925.

45 Yan X, Ye T, Hu X, Zhao P , Wang X. 58-F, a flavanone from Ophiopogon japonicus, prevents hepatocyte death by decreasing lysosomal membrane permeability. Scientific Reports 2016; 6.

46 Y an X, Liu J, Wu H et al. Impact of miR-208 and its Target Gene Nemo-Like Kinase on the Protective Effect of Ginsenoside Rb1 in Hypoxia/Ischemia Injuried Cardiomyocytes. Cellular Physiology and Biochemistry 2016; 39:1187-1195.

47 Xue E, Zhang Y , Song B, Xiao J, Shi Z. Effect of autophagy induced by dexamethasone on senescence in chondrocytes. Molecular Medicine Reports 2016; 14:3037-3044.

48 Xu Z, Li P , Wei D et al. NMMHC-IIA-dependent nuclear location of CXCR4 promotes migration and invasion in renal cell carcinoma. Oncology Reports 2016; 36:2681-2688.

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51 Xu D, Chen B, Gu J et al. Inhibition of autophagy ameliorates pulmonary microvascular dilation and PMVECs excessive proliferation in rat experimental hepatopulmonary syndrome. Scientific Reports 2016; 6.

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53 Xiaoling Y , Li Z, ShuQiang L et al. Hyperhomocysteinemia in ApoE-/-Mice Leads to Overexpression of Enhancer of Zeste Homolog 2 via miR-92a Regulation. PloS one 2016; 11:e0167744.

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55 Xiao C, Zhong L, Shan Z et al. NLS-RARα Inhibits the Effects of All-trans Retinoic Acid on NB4 Cells by Interacting with P38α MAPK.

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57 Xia J-B, Liu G-H, Chen Z-Y et al. Hypoxia/ischemia promotes CXCL10 expression in cardiac microvascular endothelial cells by NFkB activation. Cytokine 2016; 81:63-70.

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61 Widrick JJ, Yan WX, others. Jacques P Tremblay1, Jean-Paul Iyombe-Engembe1, Benjamin Duchêne1 and Dominique L Ouellet1. Molecular Therapy 2016; 24:1889.

62 Wei Y , Chen Y , Qiu Y et al. Prevention of Muscle Wasting by CRISPR/Cas9-mediated Disruption of Myostatin In Vivo. Molecular therapy: the journal of the American Society of Gene Therapy 2016; 24:1889.

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68 Wang T, Zhang L, Hu J et al. Mst1 participates in the atherosclerosis progression through macrophage autophagy inhibition and macrophage apoptosis enhancement. Journal of Molecular and Cellular Cardiology 2016; 98:108-116.

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73 Wang L-Q, Liu J-C, Chen C-L et al. Regulation of primordial follicle recruitment by cross-talk between the Notch and phosphatase and tensin homologue (PTEN)/AKT pathways. Reproduction, Fertility and Development 2016; 28:700-712.

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75 Tian Y , Guo R, Shi B, Chen L, Y ang L, Fu Q. MicroRNA-30a promotes chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells through inhibiting delta-like 4 expression. Life sciences 2016; 148:220-228.

76 Tan X, Chen Y , Liang X et al. Lipopolysaccharide-induced podocyte injury is mediated by suppression of autophagy. Molecular medicine reports 2016; 14:811-818.

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79 Shen P , Feng X, Zhang X et al. SIRT6 suppresses phenylephrine-induced cardiomyocyte hypertrophy though inhibiting p300. Journal of pharmacological sciences 2016; 132:31-40.

汉恒客户发表文献节选

汉恒客户发表文献节选

79 Shen P , Feng X, Zhang X et al. SIRT6 suppresses phenylephrine-induced cardiomyocyte hypertrophy though inhibiting p300. Journal of pharmacological sciences 2016; 132:31-40.

80 Shen B, Y u S, Zhang Y et al. mir-590-5p regulates gastric cancer cell growth and chemosensitivity through recK and the aKT/erK pathway. OncoTargets and therapy 2016; 9:6009.

81 Qiu A-W, Bian Z, Mao P-A, Liu Q-H. IL-17A exacerbates diabetic retinopathy by impairing Müller cell function via Act1 signaling. Experimental & Molecular Medicine 2016; 48:e280.

82 Qian Y , Xia S, Feng Z. Sox9 mediated transcriptional activation of FOXK2 is critical for colorectal cancer cells proliferation. Biochemical and Biophysical Research Communications 2016.

83 Qian M, Yang X, Li Z et al. P50-associated COX-2 extragenic RNA (PACER) overexpression promotes proliferation and metastasis of osteosarcoma cells by activating COX-2 gene. Tumor Biology 2016; 37:3879-3886.

84 Pang X, Tang Y , Zhang D. Role of miR-145 in chronic constriction injury in rats. Experimental and Therapeutic Medicine 2016; 12:4121-4127.85 Mingming Z, Wang H, Sun D. GW27-e1162 Mst1 coordinately regulates autophagy and apoptosis in diabetic cardiomyopathy. Journal of the American College of Cardiology 2016; 68:C42.

86 Ma Z, Fan C, Yang Y et al. Thapsigargin sensitizes human esophageal cancer to TRAIL-induced apoptosis via AMPK activation. Scientific reports 2016; 6.

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88 Ma T, Chen T, Li P et al. Heme oxygenase-1 (HO-1) protects human lens epithelial cells (SRA01/04) against hydrogen peroxide (H 2 O 2)-induced oxidative stress and apoptosis. Experimental eye research 2016; 146:318-329.

89 Luo J, Zhang M, Huang H et al. Matrilin-2 regulates proliferation, apoptosis and cell cycle during radiation-induced injury in HPAEpiC cell. Biochemical and Biophysical Research Communications 2016.

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94 Liu Z, Zhang G, Y u W, Gao N, Peng J. mir-186 inhibits cell proliferation in multiple myeloma by repressing jagged1. Biochemical and biophysical research communications 2016; 469:692-697.

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97 Liu X, Tang Y , Cui Y , Zhang H, Zhang D. Autophagy is associated with cell fate in the process of macrophage-derived foam cells formation and progress. Journal of biomedical science 2016; 23:57.

98 Liu T-Y , Xiong X-Q, Ren X-S et al. FNDC5 Alleviates Hepatosteatosis by Restoring AMPK/mTOR-Mediated Autophagy, Fatty Acid Oxidation, and Lipogenesis in Mice. Diabetes 2016; 65:3262-3275.

99 Liu S, Yi L, Ling M et al. HSP70L1-mediated intracellular priming of dendritic cell vaccination induces more potent CTL response against cancer. Cellular & Molecular Immunology 2016.

100 Liu N, Mei L, Fan X et al. Phosphodiesterase 5/protein kinase G signal governs stemness of prostate cancer stem cells through Hippo pathway. Cancer letters 2016; 378:38-50.

101 Liu L, Liu Y , Zhang X et al. Inhibiting cell migration and cell invasion by silencing the transcription factor ETS-1 in human bladder cancer. Oncotarget 2016; 7:25125.

汉恒专利

● 一种表达腺病毒的细胞株及高效表达腺病毒的方法● 一种高效表达腺病毒的细胞及制备腺病毒的方法● 一种可以缓解小鼠心衰症状的携带MG53基因的 腺相关病毒载体

● 一种原代T细胞感染试剂盒及其应用● 一种超敏细胞活力检测试剂盒及其应用● 一种外泌体分离试剂盒及其应用

省/直辖市 一级办事处 二级办事处

北京上海

广东 广州、深圳 汕头、东莞 、湛江

江苏 南京、苏州 徐州、无锡、南通、扬州浙江 杭州 温州、宁波黑龙江 哈尔滨吉林 长春辽宁 沈阳、大连

山东 济南、青岛 滨州、泰安、济宁、潍坊陕西 西安

四川 and重庆 成都 泸州、南充湖北 武汉 宜昌、十堰、荆州河南 郑州、新乡山西 太原

湖南 长沙、衡阳 福建 福州、厦门天津

45

自主知识产权的基因试剂研发

汉恒试剂研发团队已陆续开发了LipoFiter TM 、SaveIt TM 、HB-infusion TM 一步法无缝克隆试剂盒、AnnexinV/PI凋亡一步检测试剂盒、CCK-8细胞增殖检测试剂盒。

药物筛选工具体系开发

汉恒基于药物靶标信号通路的报告基因系统,陆续开发出适合药物筛选应用的药筛稳定工具细胞,目前陆续向市场开放,国内外药物研发人员应用汉恒的药筛工具细胞,筛选到更多的药物分子。

● 常规基因过表达和干扰AAV定制;● 组织特异性启动子过表达AAV定制;

● 组织特异性DIO AAV的定制(需结合组织特异性Cre工具鼠使用);● 常规启动子和组织特异性启动子驱动的AAV-Cas9定制;● AAV-mRFP-GFP-LC3自噬流监测工具;

● 各种AAV介导的光遗传和化学遗传载体现货及改造服务等。

感染

效果

汉恒生物-AAV in vivo

汉恒生物-AAV in

vivo

汉恒生物-AAV in vivo 汉恒生物-AAV in vivo

汉恒生物-AAV in vivo 汉恒生物

汉恒生物

汉恒生物-AAV in vivo

汉恒生物

汉恒生物

汉恒生物-AAV in vivo

汉恒生物-AAV in vivo 汉恒生物-AAV in vivo

AAV2/1

AAV2/6

AAV2/8

AAV2/9AAV2/DJ

AAV2/Rh10

汉恒生物-AAV in vivo

空白对照

AAV-DJ

AAV-9

汉恒生物-AAV in vivo

汉恒生物-AAV in vivo

元处于静息状态。在特定条件下,可用于增加细胞内pH或减少细胞外基质pH。和

NpHR相比,当激光关闭的时候,Arch立即从通道打开状态恢复到关闭状态。

● Mac:即为 Leptosphaeria maculans fungal opsins,蓝色激光激活的质子泵,能够将 带正电的质子从神经元内移动到细胞外环境中,使神经元保持超极化状态,从而保证 神经元处于静息状态。

目前Gq-DREADD系统应用最多元件主要是hM3Dq蛋白,该蛋白改造自人毒蕈碱型乙酰胆碱受体(the human muscarinic acetylcholine receptor,mAchRs)亚型M3(也称为hM3)。改造后的蛋白能特异性结合CNO,然后和Gq类G蛋白耦合受体耦合, 引起GPCR级联反应,最终影响了胞内钙离子这一信号通路。在神经元内一半会引起细胞去极化,加强神经元的兴奋性,这也是hM3Dq最常用的功能,即促使神经元的放电活动。

同样的,研究者改造了mAchRs亚型M4,形成Gi-hM4Di。因为Gi耦合的GPCRs可以激活G蛋白内向整流钾通道(内向整流钾离子通道,GIRK),所以hM4Di起到抑制神经元的作用。

载体名称

pHBAAV-CAG-DIO-DTR-2A-GFP pHBAAV-hSyn-DTR-2A-GFP pHBAAV-CaMKII-DTR-2A-GFP

pHBAAV-CAG-DIO-hM3D(Gq)-mCherry pHBAAV-CAG-DIO-hM4D(Gi)-mCherry pHBAAV-hSyn-DIO-hM3D(Gq)-mCherry pHBAAV-hSyn-DIO-hM4D(Gi)-mCherry pHBAAV-hSyn-hM3D(Gq)-mCherry pHBAAV-hSyn-hM4D(Gi)-mCherry pHBAAV-CaMKII-hM3D(Gq)-mCherry pHBAAV-CaMKII-hM4D(Gi)-mCherry

载体特点

CAG启动子,DIO元件

hSyn(神经特异启动子)白喉毒素受体CaMKII(神经特异启动子)

CAG启动子,DIO元件CAG启动子,DIO元件hSyn(神经特异启动子)hSyn(神经特异启动子)hSyn(神经特异启动子)hSyn(神经特异启动子)CaMKII(神经特异启动子)CaMKII(神经特异启动子)

subtypes oppositely regulate olfactory cue-induced innate fear. Nat Neurosci. 2016;19(2):283-9.4.

Montgomery KL, Iyer SM, Christensen AJ, Deisseroth K, and Delp SL. Beyond the brain: Optogenetic control in the

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化学遗传学参考文献节选

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体外分离培养神经元细胞,用腺病毒介导eNOS高效表达。

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感染

效果

● 对病毒结构和感染体系进行了优化改造,极大提高对悬浮细胞的感染能力;● 兼容贴壁细胞,感染能力大幅度增强。

汉恒生物

汉恒生物

汉恒生物-悬浮细胞专用病毒Ads ● 病毒感染具有人鼠细胞特异性;● 可以用来构建稳转系;

感染

汉恒T细胞专用逆转录病毒Blank

mTRv-GFP

1. Takahashi K, and Yamanaka S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell. 2006;126(4):663-76.

2.

Hacein-Bey-Abina S, Garrigue A, Wang GP , Soulier J, Lim A, Morillon E, Clappier E, Caccavelli L,

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效果

感染

效果

● 悬浮细胞专用腺病毒(Ads)● T细胞专用逆转录病毒(TRV)

感染

效果

1. Zheng Q, Bao C, Guo W, Li S, Chen J, Chen B, Luo Y , Lyu D, Li Y , Shi G, et al. Circular RNA profiling reveals an abundant circHIPK3 that regulates cell growth by sponging multiple miRNAs. Nat Commun. 2016;7;11215.

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细胞:小鼠原代CD4+ T细胞刺激方式:CD3/CD28抗体和 IL-2激活48 h

病毒:Ads-GFP,1×1010 pfu/ml, MOI=500

GFP +0.08%

Bright field

Blank

GFP

Ads-GFP

汉恒悬浮细胞专用腺病毒感染小鼠原代CD4+ T细胞

汉恒T细胞专用逆转录病毒Blank

GFP +0.49%

GFP +68.8%

汉恒生物成环元件介导的circRNA成环示意图汉恒生物circRNA非病毒过表达载体图谱

stress induced by tunicamycin and thapsigargin protects against transient ischemic brain injury: Involvement of PARK2-dependent mitophagy. Autophagy. 2014;10(10):1801-13.

10. Wang X, Liu J, Zhen J, Zhang C, Wan Q, Liu G, Wei X, Zhang Y , Wang Z, Han H, et al. Histone deacetylase 4 selectively contributes to podocyte injury in diabetic nephropathy. Kidney Int. 2014;86(4):712-25.

PhagyEasy TM 自噬双荧光检测体系原理mRFP-GFP-LC3自噬双标客户实例

感染

Fluorescent signals of puncta

Typical results of autophagic flux

Basal level Induction Suppression at early stage Suppression

at late stage

效果

mRFP-GFP-LC3

mRFP

GFP

Merge

● AAV-spCas9+AAV-sgRNA

● CRISPR克隆构建试剂盒-pHBCas9 gRNA Easy KO Reagent 另外,还可以定制组织特异性表达Cas9的各种病毒。

T7E1 Assay

应用实例

6.

Ran FA, Hsu PD, Wright J, Agarwala V , Scott DA, and Zhang F. Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system.

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Cong L, Ran FA, Cox D, Lin S, Barretto R, Habib N, Hsu PD, Wu X, Jiang W, Marraffini LA, et al. Multiplex genome

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Ran FA, Cong L, Yan WX, Scott DA, Gootenberg JS, Kriz AJ, Zetsche B, Shalem O, Wu X, Makarova KS, et al. In

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12. He X, Tan C, Wang F, Wang Y , Zhou R, Cui D, You W, Zhao H, Ren J, and Feng B. Knock-in of large reporter genes in human cells via CRISPR/Cas9-induced homology-dependent and independent DNA repair. Nucleic Acids Res. 2016;44(9):e85.

pHB-Hglu pHB-Lglu pHB-Laconic pHB- Pyronic pHB-Mag1pHB-Mag6

pHB-GW1-PercevalHR pHB-CAG-VSFP

高剂量葡萄糖测定低剂量葡萄糖测定乳酸测定丙酮酸测定Mg 2+离子测定

Mg 2+离子测定对照质粒胞内ATP:ADP比例的变化细胞膜电位测定

细胞器定位工具(病毒现货)

pHBmTur-Actin pHBmTur-Tubulin pHBmTur-Peroxi pHBmTur-H2A pHBmTur-Mito pHBmTur-Palmito pHBDsRed-Mito pHB Lamp1-RFP

Actin细胞骨架定位Tubulin细胞骨架定位过氧化物酶体定位H2A细胞核定位Mito线粒体定位Palmito细胞膜定位Mito线粒体定位溶酶体定位

1. San Martin A, Ceballo S, Baeza-Lehnert F, Lerchundi R, Valdebenito R, Contreras-Baeza Y, Alegria K, and Barros LF. Imaging mitochondrial flux in single cells with a FRET sensor for pyruvate. PLoS One. 2014;9(1):e85780.

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3. T antama M, Martinez-Francois JR, Mongeon R, and Yellen G. Imaging energy status in live cells with 参考文献节选

◆HB-infusion TM 试剂盒的优点:

● 高效,操作更简单,只需要一次反应即可完成定向克隆; ● 对酶切位点无要求,可以把目的片段插入到任意载体的任意位点; ● 连接片段之间不会引入任何其他序列,属于无缝组装; ● 可以同时克隆多个片段; ● 适合克隆长片段。

Gibson DG, Young L, Chuang RY , V enter JC, Hutchison CA, 3rd, and Smith HO. Enzymatic assembly of DNA molecules up to several 无缝克隆参考文献节选

图2. 采用HB-infiusion TM 试剂盒时PCR上下游引物设计示例

图1. HB-infusion TM 快速克隆试剂盒原理示意图

规格

20 T ests 50 T ests 100 T ests

货号

HB-infusion-20HB-infusion-50HB-infusion-100

目录价/元

询价询价询价

包装信息

工具名称

工具特点

miRNA-99b-5p suppresses liver metastasis of colorectal cancer by down-regulating mTOR. Oncotarget. 2015;6(27):24448-62.

8. Deng X, Wu B, Xiao K, Kang J, Xie J, Zhang X, and Fan Y. MiR-146b-5p promotes metastasis and induces epithelial-mesenchymal transition in thyroid cancer by targeting ZNRF3. Cell Physiol Biochem. 2015;35(1):71-82.

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规格

1 ml

2 ml

3 ml

货号

HB-TRLF-1

HB-TRLF-2

HB-TRLF-3

目录价/元

询价

询价

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包装信息

规格

1 ml

2 ml

3 ml 5 ml

货号

HB-SV-1

HB-SV-2

HB-SV-3

HB-SV-5

目录价/元

询价

询价

询价

询价

包装信息

图1:Annexin V-FITC和PI染色后的

流式细胞仪检测效果图

规格

20 T

50 T

100 T

货号

HB-AX-20

HB-AX-50

HB-AX-100

目录价/元

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包装信息

图2-实例:用不同浓度的喜树碱诱导Jurkat,

24h检测细胞凋亡

慢病毒包装体系使用说明

慢病毒包装体系使用说明 本说明书适用于以下产品: 名称货号 慢病毒包装体系KLV3501 慢病毒包装体系(含293V细胞)KLV3502 慢病毒包装体系(含转染试剂)KLV3503 慢病毒包装体系(含293V细胞、转染试剂)KLV3504 北京英茂盛业生物科技有限公司 Web site:https://www.360docs.net/doc/1014613186.html,

1 北京英茂盛业生物科技有限公司 https://www.360docs.net/doc/1014613186.html,/ 产品内容 KLV3501 KLV3502 KLV3503 KLV3504 慢病毒载体(过表达或RNA 干扰载体任选一种) 3 3 3 3 辅助载体pH1 3 3 3 3 辅助载体pH2 3 3 3 3 HEK293V 细胞 3 3 Polyfect-V 转染试剂 3 3 载体采用质粒形式发货,请在收到质粒后放-20℃冻存,也可以直接转化大肠杆菌感受态进行质粒扩增。 HEK293V 细胞采用干冰或培养瓶发货。请在收到细胞后根据附带说明书进行复苏或传代。 慢病毒载体 慢病毒载体中含有病毒整合和表达所需原件及表达外源目的基因的元件。外源基因通过载体中的多克隆位点插入慢病毒载体中进行表达。 pLV-EGFP-C 的载体图谱见下,本公司的其它慢病毒载体结构与之基本相似。其它载体信息见本公司网站https://www.360docs.net/doc/1014613186.html, 或本说明书后面的附表。

慢病毒包装载体 慢病毒包装载体包括pH1和pH2,表达生产病毒颗粒所需的病毒蛋白。载体图谱见下:

HEK293V细胞 包装细胞的状态对病毒包装效果有直接影响。我公司保存的293V细胞为低次代293V细胞,细胞性状稳定。在高密度下生长3天仍可保持贴壁状态,持续产生病毒颗粒,因此可多次收获病毒,降低病毒包装实验成本。 Polyfect‐V转染试剂 Polyfect-V转染试剂专为293V细胞转染及慢病毒包装研制,可以在细胞铺板同时进行转染,缩短病毒包装时间;无需要求细胞处于生长对数期,细胞转染时密度可以很高;细胞毒性极低;质粒和转染试剂用量是普通转染试剂的1/3到1/2等显著优点;包装病毒时转染效率接近100%,能提高病毒产量3-5倍。 3 北京英茂盛业生物科技有限公司 https://www.360docs.net/doc/1014613186.html,/

慢病毒包装实验步骤

慢病毒包装实验的要点: 1:良好的293FT细胞状态是转染成功的首要因素,细胞代数不宜超过30代; 2:细胞铺板需均匀,避免细胞成团,影响转染效率;尽量多的细胞转入质粒,产生的病毒就越多; 3:细胞换液和共转染时,动作要轻柔避免细胞漂浮。尽量少的细胞死亡,产生的病毒就越多; 实验前要准备的试剂、耗材和仪器; 试剂准备:10%灭活胎牛血清+90%DMEM配好的完全培养基,0.25%胰酶,PBS,TRL转染试剂,包装质粒,目的质粒,无血清培养基。 耗材准备:10cm细胞培养皿,6孔细胞培养板,吸头规格1ml、200ul、10ul,10ml移液管,离心管规格15ml、5ml、1.5ml,0.22um PVDF滤膜和10ml无菌注射器,试管架。仪器准备:倒置荧光显微镜,普通光学倒置显微镜,电动移液器,吸引器,移液枪,二级生物安全柜,二氧化碳细胞培养箱。 第一天:上午(病毒包装质粒共转染前,293FT细胞复苏后至少让其传代两次以上,293FT 细胞能成倍的增长,确定细胞状态好); 实验前准备: 安全柜开紫外灯照30分钟; 把培养基和试剂放置常温; 消化细胞: 从37 5%的co2细胞培养箱拿出细胞状态良好的293FT细胞,吸出原培养基,加入PBS 1ml略洗之后吸出,加入1ml胰酶消化1-2min,轻轻拍打培养皿,再加入3ml新鲜培养基终止消化,将培养皿中的细胞转移至15ml离心管内离心1000r /5min,吸出上清液,加入10ml PBS 吹打混匀后,离心1000r /5min, 吸出上清液。 细胞铺板: 在10cm细胞培养皿上标记细胞名称、细胞代数、时间和操作人,将计数好大约2.5×106个293FT细胞吸入15ml离心管,再加入完全培养基至10ml充分混匀,然后把混匀的293FT细胞移入10cm培养皿)。放置培养箱中培养48h。 插入铺板后图片

慢病毒包装

慢病毒包装. 慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种,它需要相对较长的孵育时间,所以称之为“慢”病毒,Lenti在拉丁文中就是慢的意思。它包括人免疫缺陷病毒(HIV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、牛免疫缺陷病毒等。其中研究最多的是HIV-1慢病毒。 慢病毒载体(Lentivirus vector)是以慢病毒基因组为基础,由所需的目的基

因取代部分基因构建而成。目前使用的慢病毒载体多采用HIV-1基因组改造而来。与一般的逆转录病毒载体相比,慢病毒载体对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力而具有更广的宿主范围。慢病毒载体还可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而实现持久表达。在感染能力方面可以有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,又很少引发机体免疫反应,能达到良好的基因治疗效果,具有广阔的应用前景。 随着人们对慢病毒载体的深入研究,为了提高慢病毒在临床上使用的安全性,慢病毒载体的优化也在不断的探讨中。慢病毒载体的发展经历了三个阶段,第一代慢病毒载体系统是以三质粒系统为代表,在构建时把HIV-1基因组中进行包装、逆转录和整合所需的顺式作用原件与编码反式作用蛋白的序列分离,分别构建在三个质粒表达系统上,即包装质粒、包膜质粒和载体质粒。包装质粒在巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)启动子的作用下,控制除env以外所有病毒结构基因的表达;包膜质粒编码水泡口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)G 糖蛋白;载体质粒中含有目的基因。用这三种质粒共转染包装细胞如人胚胎肾293T细胞,在细胞上清中即可收获只有一次感染能力、而无复制能力的慢病毒颗粒。第一代慢病毒载体系统的特点是在构建三种包装质粒时,为了降低产生有复制能力的病毒的可能性,尽可能减少三种质粒之间的同源序列,但包装质粒中仍然保留HIV的附属基因。第二代慢病毒载体系统是在第一代的基础上进行改进,在包装质粒中删除了HIV的所有附属基因。这些附属基因的去除并不影响病毒的滴度和感染能力,同时增加了载体的安全性。第三代慢病毒载体系统又增加了两个安全特性:一是构建自身失活的慢病毒载体,即删除了U3区的3′LTR,

慢病毒系统简介及应用

慢病毒包装系统简介及应用 一、慢病毒包装简介及其用途 慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快,研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的基因治疗效果,在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,因此具有广阔的应用前景。 目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差,转移到细胞内的siRNA半衰期短,体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的,因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体,然后转移到细胞内转录siRNA的策略,不但使脂质体有效转染的细胞种类增加,而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA,在长期稳定表达载体的细胞中,甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的siRNA表达载体中,是由RNA聚合酶Ⅲ启动子来指导RNA合成的,这是因为RNA聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列,而且合成的RNA不会带poly A尾。当RNA聚合酶Ⅲ遇到连续4个或5个T时,它指导的转录就会停止,在转录产物3' 端形成1~4个U。U6和H1 RNA启动子是两种RNA聚合酶Ⅲ依赖的启动子,其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游,适合于表达~21ntRNA和~50ntRNA茎环结构(stem loop)。在siRNA表达载体中,构成siRNA 的正义与反义链,可由各自的启动子分别转录,然后两条链互补结合形成siRNA;也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA),载体包含位于RNA聚合酶Ⅲ启动子和4~5T转录终止位点之间的茎环结构序列,转录后即可折叠成具有1~4个U 3 '突出端的茎环结构,在细胞内进一步加工成siRNA。构建载体前通常要通过合成siRNA的方法,寻找高效的siRNA,然后从中挑选符合载体要求的序列,将其引入siRNA表达载体。 慢病毒载体(Lentiviral vector)较逆转录病毒载体有更广的宿主范围,慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达shRNA的高滴度的慢病毒,在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达shRNA,实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默,为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能,以及产生特定基因表达降低的动物提供了可能性。 慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。 二、这一系统的目的,主要是为了解决以下问题: 1. 对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,能大大提高目的基因转导效率,而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加,这就为RNAi,cDNA克隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径。 2. 进行稳转细胞株的筛选;

病毒包装原理

汉恒生物2017产品手册 --您身边的病毒载体专家

专注于基因技术的研发与应用转化 病毒载体为工具的基因技术操作全平台 汉恒已成为国内生物医药科研与研发领域最主流的基因载体与基因技术供应商 覆盖、并抢占国内主流科研、临床前研究及药物研发的AAV市场,完成基础底层市场的教育及占领 与国内临床机构合作申报并实施基因治疗临床前及临床研究项目 上市1-2种自主知识产权的基因治疗AAV药物 2012年4年多的发展短期目标 中期目标2-5年内长期目标10年内 2010成立汉恒简史 汉恒生物成立于2010年,专注于基因技术的研发与应用转化。2012年, 汉恒建立了以病毒载体为工具的基因技术操作全平台,经过7年多的发展,汉恒已成为国内生物医药科研与研发领域最主流的基因载体与基因技术供应商。 汉恒在一系列基因载体技术如腺病毒、慢病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、细胞功能学服务的基础上,进一步开发基因及信号通路研究工具,包括自噬流 研究工具、lncRNA&环状RNA载体工具、分子载体探针、基于病毒载体的Crispr/Cas9基因编辑工具等。 以核心基因技术为基础,汉恒更加注重技术应用与临床转化。 公司简介 目 录 1 Zhu Y , Di S, Hu W et al. A new flavonoid glycoside (APG) isolated from Clematis tangutica attenuates myocardial ischemia/reperfusion injury via activating PKCepsilon signaling. Biochim Biophys Acta 2017; 1863:701-711. 2 Zheng X, Chen W, Hou H et al. Ginsenoside 20(S)-Rg 3 induced autophagy to inhibit migration and invasion of ovarian cancer. Biomed Pharmacother 2017; 85:620-626. 3 Zhao H, Xue Y , Guo Y , Sun Y , Liu D, Wang X. Inhibition of endocan attenuates monocrotaline-induced connective tissue disease related pulmonary arterial hypertension. Int Immunopharmacol 2017; 42:115-121. 4 Yang Z, Hou Y , Hao T et al. A human proteome array approach to identifying key host proteins targeted by Toxoplasma kinase ROP18. Mol Cell Proteomics 2017. 5 Xu J, Zhang X, Wang H et al. HCRP1 downregulation promotes hepatocellular carcinoma cell migration and invasion through the induction of EGFR activation and epithelial-mesenchymal transition. Biomed Pharmacother 2017; 88:421-429. 6 Wang X, Fu Z, Chen Y , Liu L. Fas expression is downregulated in gastric cancer. Mol Med Rep 2017; 15:627-634. 7 Wang T, Wang P , Cao Z et al. Effects of BMP9 and pulsed electromagnetic fields on the proliferation and osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells. Bioelectromagnetics 2017; 38:63-77. 8 Wang P , Wang Y , Tang W et al. Bone Morphogenetic Protein-9 Enhances Osteogenic Differentiation of Human Periodontal Ligament Stem Cells via the JNK Pathway. PLoS One 2017; 12:e0169123. 9 Li M, Y uan Y , Hu B, Wu L. Study on Lentivirus-Mediated ABCA7 Improves Neurocognitive Function and Related Mechanisms in the C57BL/6 Mouse Model of Alzheimer's Disease. J Mol Neurosci 2017. 10 Li C, Guo XD, Lei M et al. Thamnolia vermicularis extract improves learning ability in APP/PS1 transgenic mice by ameliorating both Abeta and 2017客户最新文献节选 06一流质量标准汉恒专利08 产品介绍 07公司优势 02汉恒客户发表文献专题研究 33HB-infusion TM 无缝克隆试剂盒 36SaveIt TM 抗支原体试剂盒 37 Annexin V-FITC 细胞凋亡检测试剂盒 34LipoFiter TM 脂质体转染试剂汉恒自主研发试剂 30CRISPR-Cas9专题研究 27环状RNA专题研究28自噬专题研究 32 探针工具 细胞器定位工具 25悬浮细胞专用病毒 26 原代T细胞专用病毒 17化学遗传学AAV现货工具 14光遗传学AAV现货工具22慢病毒 24 逆转录病毒 09 腺相关病毒AAV 19腺病毒特色服务

慢病毒载体包装构建过程

慢病毒载体包装构建过程 原理:慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体,能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的几率大大增加,能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。 概念:慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体,慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息,是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下,经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒,通过感染细胞或活体组织,实现外源基因在细胞或活体组织中表达。 辅助成分:慢病毒载体辅助成分包括:慢病毒包装质粒和可产生病毒颗粒的细胞系。 慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。 基本原理:慢病毒载体系统由两部分组成,即包装成分和载体成分。

包装成分:由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建,能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白。包装成分通常被分开构建到两个质粒上,一个质粒表达Gag和Pol蛋白,另一个质粒表达Env蛋白,其目的也是降低恢复成野生型病毒的可能。将包装成分与载体成分的3个质粒共转染细胞(如人肾293T细胞),即可在细胞上清中收获只有一次性感染能力而无复制能力的、携带目的基因的HIV-1载体颗粒。 载体成分:与包装成分互补,即含有包装、逆转录和整合所需的HIV顺式作用序列,同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。 为降低两种成分同源重组恢复成野生型病毒的可能,需尽量减少二者的同源性,如将包装成分上5′LTR换成巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、3′LTR换成SV40 polyA等。 一、实验流程(1和2为并列步骤) 1.慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,PCR(采用高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(CDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区(coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入慢病毒过表达质粒载体。 2.慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构,退火后连入慢病毒干扰质粒载体 3. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒,三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,转染后6 h 更换为完全培养基,培养24和48h后,分别收集富含

慢病毒包装原理介绍

慢病毒包装原理介绍Last revision on 21 December 2020

慢病毒包装系统简介及应用 一、慢病毒包装简介及其用途 慢病毒( Lentivirus )载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷 I 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快,研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果,在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,因此具有广阔的应用前景。 目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差,转移到细胞内的 siRNA 半衰期短,体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的,因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体,然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略,不但使脂质体有效转染的细胞种类增加,而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA ,在长期稳定表达载体的细胞中,甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的siRNA 表达载体中,是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的,这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列,而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个T 时,它指导的转录就会停止,在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。 U6 和 H1 RNA 启动子是两种RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子,其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游,适合于表达~ 21ntRNA 和~ 50ntRNA 茎环结构( stem loop )。在 siRNA 表达载体中,构成 siRNA 的正义与反义链,可由各自的启动子分别转录,然后两条链互补结合形成 siRNA ;也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA),载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ~ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列,转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构,在细胞内进一步加工成 siRNA 。构建载体前通常要通过合成 siRNA 的方法,寻找高效的 siRNA ,然后从中挑选符合载体要求的序列,将其引入 siRNA 表达载体。 慢病毒载体( Lentiviral vector )较逆转录病毒载体有更广的宿主范围,慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达 shRNA 的高滴度的慢病毒,在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达 shRNA ,实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默,为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能,以及产生特定基因表达降低的动物提供了可能性。 慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装 RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。 二、这一系统的目的,主要是为了解决以下问题: 1. 对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,能大大提高目的基因转导效率,而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加,这就为 RNAi,cDNA 克隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径。 2. 进行稳转细胞株的筛选;

慢病毒包装操作说明

Clontech-Lenti-X? Lentiviral Expression Systems User ManualProtocol No. PT5135-1慢病毒包装操作说明 A.用Lenti-X HTX Packaging System生产慢病毒悬浮物为了获得最高效价的病毒悬液,用Lenti-X 293T细胞系,严格尊守以下说明,尤其尊守(1)培养体系和培养量(2)DNA的量和转染质量(3)无四环素血清(4)孵育时间。 所有的Xfect?转染成份,量和条件最好用Lenti-XVectors,Lenti-XHTX包装混合物,Lenti-X293T细胞。 用10cm组织培养板并确保血清无四环素,四环素污染的血清对表达包装成份是有害的。 所有的实验步骤均在无菌组织培养器血中完成。 包装病毒需要有微生物安全等级2的生物安全柜中进行,注意重组的假性慢病毒包装颗粒能够感染人。 6 1.转染24小时前,在10cm培养板接种4-5×10个293T细胞,添加10ml的生长培养基。 在37℃,5%CO2℃条件下过夜。 在进行第7步前确保培养血有80-90%的覆盖率。 2.充分混均Xfect Polymer。 3.每个转染样品需准备两个离心管,按顺序添加如下试剂Tube 1(Plasmid DNA) Tube 2(Polymer)557μlXfectReaction Buffer 592.5μl Xfect ReactionBuffer36μl Lenti-X HTX Packaging Mix 7.5μl Xfect Polymer7μl Lenti-X Vector DNA(1μg/μl)600μl 总量600μl 总量注意: Xfect Polymer不要在室温下搁置长于30min

病毒包装实验整体规程及原理(慢病毒、腺病毒)

广州英思特生物科技有限公司为您提供高效快速的病毒包装实验外包服务, 病毒感染细胞实验整体流程及原理目的基因不能直接整合到大多数真核细胞,常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞,从而得到表达满足实验需求。 1、病毒的种类 1.1 1.1.1 体,一方面 1.1.2 1)研 。? 2)可以通过简单方式,在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。 3)可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。 4)无需任何转染试剂,操作简便。 5)可以根据客户需要制备多种标记。 1.1.3慢病毒包装简要流程: 1)含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。

2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3)培养 48hrs - 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培养液。 4)病毒的纯化和浓缩。 5)分装、- 80 ℃保存。 6)滴度测定目的基因检定,并出具检测报告。 1.2 1.2.1 达E1 1.2.2 1) 2) 3) 4) 5) 1.2.3腺病毒包装简要流程 1)构建表达 siRNA/miRNA 的腺病毒载体 2)采用 PacI 消化纯化的质粒。 3)消化好的腺病毒表达载体转染 293A 细胞,收获细胞以制备病毒粗提液。4)将病毒粗提液感染 293A 细胞以扩增病毒。

5)分装,-80℃保存。 1.3、慢病毒和腺病毒的比较

2、构建目的基因到载体 2.1构建手段 一般是根据原始质粒信息确定克隆方案,有以下两种手段。 1)如果原始质粒与载体有匹配酶切位点,采用相应的内切酶切下相应片段,回收并连接到载体,酶切,并测序鉴定 DNA分子。质粒在宿主细胞体内外都可复制。通过个些特性,人们可以把一些目的DNA片断构建在质粒中,通过转化入大肠杆菌中,利用选择培养基来筛选从而不断的复制,来得到目的产物。

慢病毒包装简介及应用

慢病蠹包装系统简介及应用 、慢病蠹包装简介及其用途 慢病蠹(Lentivirus )载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷I型病蠹)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病蠹载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病蠹载体的研究发展得很快,研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果,在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,因此具有广阔的应用前景。 目前慢病蠹也被广泛地应用丁表达RNAi的研究中。由丁有些类型细胞脂质体转染效果差,转移到细胞内的siRNA半衰期短,体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的,因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体,然后转移到细胞内转录siRNA的策略,不但使脂质体有效转染的细胞种类增加,而且对基因表达抑制效果也不逊色丁体外合成siRNA ,在长期稳定表达载体的细胞中,甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的siRNA表达载体中,是由RNA聚合酶用启动子来指导RNA合成的,这是因为RNA聚合酶用有明确的起始和终止序列,而且合成的RNA不会带poly A尾。当RNA聚合酶用遇到连续4个或5个T时,它指导的转录就会停止,在转录产物3'端形成1~4个U。U6和H1 RNA启动子是两种RNA聚合酶m依赖的启动子,其特点是启动子自身元素均位丁转录区的上游,适合丁表达?21ntRNA和?50ntRNA茎环结构(stem loop )。在siRNA 表达载体中,构成siRNA的正义与反义链,可由各自的启动子分别转录,然后两条链互补结合形成siRNA ;也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA),载体包含位丁RNA聚合酶用启动子和4?5T转录终止位点之间的茎环结构序列,转录后即可折叠成具有1~4个U 3 '突出端的茎环结构,在细胞内进一步加工成siRNA。构建载体前通常要通过合成siRNA的方法,寻找高效的siRNA ,然后从中挑选符合载体要求的序列,将其引入siRNA表达载体。 慢病蠹载体(Lentiviral vector )较逆转录病蠹载体有更广的宿主范围,慢病蠹能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病蠹载体能够产生表达shRNA的高滴度的慢病蠹,在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达shRNA ,实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默,为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能,以及产生特定基因表达降低的动物提供了可能性。 慢病蠹表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病蠹包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病蠹载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病蠹颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病蠹的包装,包装好的假病蠹颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上活液后,可以直接用丁宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平■的表达效应分子。 二、这一系统的目的,主要是为了解决以下问题:

293T细胞中包装慢病毒实验方案

慢病毒包装实验?方案 实验步骤 ?一、细胞培养 1、?用含10%FBS的H-DMEM培养基于37°C、5%CO2培养箱中培养293T 细胞,其中加1×102U/ml?青霉素、100μg/ml链霉素和10μg/ml ciprofloxacin防?止?支原体污染, 2、待10cm?皿中细胞融合度到80%左右,?用0.25%胰酶消化293T细胞,分 到两个6cm?皿中,另?一盘10cm293T作同样处理理,使细胞在接种之后的 18-24h达到70%融合度。 ●注意事项 293T细胞转染慢病毒24h之前,培养液中停?止使?用抗?生素和ciprofloxacin,减少对病毒转染的影响;注意接种后的293T细胞密度,过?高和过低的细胞密度都会导致转染后细胞死亡。 ?二、细胞转染 3、每个6-cm培养?皿在转染之前4h?用5ml不不含?血清的H-DMEM培养基换 液, 4、应?用500μl Optimum和14.18μl Lipofactamine2000混匀于室温静置5min, 将500μl Optimum、1.7μg慢病毒载体、1.13μg psP AX2和0.57μg MD2.G 混匀配制成DNA mixture,然后与静置5min的 Optimum/Lipofactamine2000混匀,于室温静置20min后,将混匀后的 mixture加?入到培养基中。 5、6h之后将培养基更更换为含10%FBS的H-DMEM完全培养基, 6、分别收集48h、72h和96h的细胞上清液。 ●注意事项 ①293T细胞容易易脱落?皿底,加H-DEME沿?皿侧壁缓慢加?入,并且边加边轻微摇晃使培养基均匀分布?皿底防?止细胞?无培养基死亡 ②质粒换算要准确, ③将mixture加?入培养基中要边滴边摇晃培养?皿使其mixture与培养基混匀,这样直?至结束。

病毒感染细胞实验整体流程和原理

病毒感染细胞实验整体流程及原理 目的基因不能直接整合到大多数真核细胞,常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞,从而得到表达满足实验需求。 1、病毒的种类 病毒有很多种,常见的有慢病毒和腺病毒 1.1慢病毒 1.1.1原理 慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体,与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA 载体相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。 1.1.2特点 1)直接包装成为假病毒颗粒,对分裂和非分裂细胞均有感染作用,适合RNAi 研究和体内实验中难于转染的细胞(比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。 2)可以通过简单方式,在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。

3)可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。 4)无需任何转染试剂,操作简便。 5)可以根据客户需要制备多种标记。 1.1.3慢病毒包装简要流程: 1)含有目的基因的慢病毒RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。 2)慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3)培养48hrs - 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培养液。 4)病毒的纯化和浓缩。 5)分装、- 80 ℃保存。 6)滴度测定目的基因检定,并出具检测报告。 1.2、腺病毒 1.2.1 原理 腺病毒(Adenovirus,Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒,其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型,大多数Ad载体都是基于血清型2和5,通过转基因的方式取代E1和E3基因,降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制,因此是一种适用于治疗的高效控制系统。

第二代和第三代慢病毒包装系统

第二代和第三代慢病毒包装系统 将HIV-1 基因组中的顺式作用元件(如包装信号、长末端重复序列) 和编码反式作用蛋白的序列进行分离。载体系统包括包装成分和载体成分:包装成分由HIV-1 基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建,能反式提供产生病毒颗粒所需的蛋白;载体成分与包装成分互补,含有包装、逆转录和整合所需的 HIV-1顺式作用序列。同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。 第一代包装系统中,除vpu之外的辅助基因都被保留下来,Env包膜蛋白由VSV-G蛋白代替,应用 VSV-G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围,而且增加了载体的稳定性。3质粒系统,包括包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒。其中包装质粒在 CMV 启动子的控制下,表达 HIV 21 复制所需的全部反式激活蛋白,但不产生病毒包膜蛋白及辅助蛋白vpu;包膜蛋白质粒编码水泡性口炎病毒G蛋白 (VSV 2G),应用 VSV 2G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围,而且增加了载体的稳定性,允许通过高速离心对载体进行浓缩,提高了滴度;转移质粒中除含有包装、逆转录及整合所需的顺式序列,还保留 350 bp 的 gag 和 RRE,并在其中插入目的基因或标志基因 ( 绿色荧光蛋白 GFP) 。 在第二代系统中辅助基因vif、vpr、nef被进一步剔除,这些辅助基因的去除并不影响病毒的滴度和感染能力,同时增加了载体的安全性。第二代系统中5’LTR 634bp,3' LTR 634bp,5’LTR前不需要强启动子。4质粒系统。 第三代系统中,tat调节基因也被剔除,对5’LTR进行了改造,换上了异源启动子,从而不需依赖tat基因(Tat 基因编码蛋白可与LTR结合,增加病毒所有基因转录率);构建自身失活的慢病毒载体(SIN),即删除了U3区的3’LTR, 使载体失去HIV-1增强子及启动子序列,即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出RNA;一些增强包装病毒滴度的元件被加入,如cPPT、WPRE。因此,第三代系统的安全性大大提升,进一步减少重组成复制型病毒(RCV) 的可能性。5' LTR (truncated) 181bp,3' LTR (ΔU3) 234bp,5’LTR前要有强启动子。4质粒系统。

慢病毒包装原理介绍定稿版

慢病毒包装原理介绍 HUA system office room 【HUA16H-TTMS2A-HUAS8Q8-HUAH1688】

慢病毒包装系统简介及应用 一、慢病毒包装简介及其用途 慢病毒( Lentivirus )载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷 I 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快,研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果,在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,因此具有广阔的应用前景。 目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差,转移到细胞内的 siRNA 半衰期短,体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的,因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体,然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略,不但使脂质体有效转染的细胞种类增加,而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ,在长期稳定表达载体的细胞中,甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的 siRNA 表达载体中,是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的,这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列,而且合成的RNA 不会带 poly A 尾。当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时,它指导的转录就会停止,在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。 U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶 Ⅲ依赖的启动子,其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游,适合于表达~ 21ntRNA 和~ 50ntRNA 茎环结构( stem loop )。在 siRNA 表达载体中,构成 siRNA 的正义与反义链,可由各自的启动子分别转录,然后两条链互补结合形成 siRNA ;也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA),载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子

慢病毒包装、浓缩、纯化、滴度实验步骤

创作编号: GB8878185555334563BT9125XW 创作者:凤呜大王* 一、包装细胞293T细胞的培养 一、293T细胞的冻存 1. 随着传代的次数增加,293T细胞会出现生长状态下降,出现突变等。所以要在细胞购进时就进行冻存。 2. 在细胞对数生长期进行冻存,增加细胞复苏成活率。 3. 倒去细胞上清液,加入D-Hank's液洗去残留的培养基。 4. 加入0.25%的胰酶,消化10-20s后倒去。 5. 镜下观察细胞变圆,细胞间间隙加大时,加入新鲜培养基吹打混匀。 6. 细胞计数。 7.将细胞离心,1000rpm,2min。 8. 根据计数结果加入细胞冻存液(70%完全培养基+20%FBS+10% DMSO)重悬细胞,密度为3×106个/ml。 10. 第二天将细胞放入液氮灌,并记录。 二、293T细胞的传代 1. 当细胞生长至汇合率达到80~90%需要对细胞进行传代操作,以扩大细胞数量,维持细胞良好的生长状态。 2. 消化细胞,方法同上。 3. 细胞离心结束后,加入完全培养基重悬。密度为3×105个/ml。 4. 分到10cm培养皿中,10ml/皿。 三、293T细胞的复苏 1. 当细胞传代次数过多(超过50代),细胞状态变差时或细胞出现污染事故时,需要丢弃并对开始冻存的细胞进行复苏。 2. 打开水浴锅,设置温度为40℃。

3. 查看细胞库记录,根据记录从液氮灌中取出冻存的细胞(需戴上棉手套,防止被冻伤),迅速丢入水浴锅中并快速晃动,在1~2 min内使细胞溶液完全溶解。 4. 将1ml细胞溶液加入9 ml完全培养基中并混匀后转入10cm培养皿。 5. 放回37℃、3%CO2和95%相对湿度的培养箱中培养。 6. 第二天观察细胞存活率。倒掉旧的培养基,加入10ml新鲜培养基。 二、慢病毒的包装、浓缩和滴度测定 1. 所用病毒检测引物为WPRE特异引物,序列如下 5'-CCTTTCCGGGACTTTCGCTTT-3' (forward primer), 5'-GCAGAATCCAGGTGGCAACA-3' (reverse primer) and 5'-FAM-ACTCATCGCCGCCTGCCTTGCC-TAMRA-3' (probe) 2. TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems,cat. no. 4304437) 3. TaqMan DNA Template Reagent Kit (Applied Biosystems,cat. no. 401970) 4. TaqMan RNaseP control reagent (Applied Biosystems,cat. no. 4316844) 用于包装的293T细胞的培养 用于包装的293T细胞(ATCC No. CRL-11268)必需选择处于生长旺盛期,细胞状态较佳,存活率90%以上,细胞边缘清晰,传代次数较低。任何时候细胞汇合率都不准达到100%。 慢病毒的包装 1. 预先准备3个T150瓶的293T细胞,培养基为DMEM + 10% FBS,1% Glutamax ,1% 青霉素-链霉素。

关于慢病毒包装的简介

关于慢病毒包装的简介-源井生物 源井生物提供完整的病毒包装技术服务体系,可以提供高质量的慢病毒,腺病毒和腺相关病毒,满足于广大客户的不同科研需求。不同病毒的比较数据如下: 1、技术原理: 慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础,使用疱疹病毒VSVG 外壳蛋白发展起来的工具载体。其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒。慢病毒具有感染谱广泛特点,并且可以有效感染分裂和非分裂细胞。慢病毒可以把外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达;因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因敲除/敲入、基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。 2、技术优势: 慢病毒与其他病毒比较,具有以下优势: ① 表达时间长:慢病毒通过将外源基因整合到宿主细胞基因组上,可实现目的基因长时间稳定的表达,不随着细胞分裂传代而丢失,是细胞实验的首选; ② 免疫原性低:直接注射活体组织不易造成免疫反应,适用于动物实验; ③ 安全性高:未发现致病性,已被用于CAR-T 治疗作用于人体。 3、质量控制: ① 基因序列测序 ② 载体酶切鉴定 ③ 慢病毒通过qPCR对病毒基因拷贝进行测定 ④ 一般情况下,慢病毒的滴度在108~109TU/ml 4、应用: 细胞感染:慢病毒可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,为神经领域、心血管领域、肝脏、肌肉、眼、肺、肿瘤及其他领域的科研工作者们提供更强有力的基因研究工具。 体内注射:神经系统

病毒图片来源百度 ※源井生物独有的病毒分级纯化工艺,满足您从永生化细胞到原代细胞和干细胞,到动物体内水平等不同实验需求。源井生物可以提供的服务如下: ①基因过表达慢病毒服务 ②基因干扰慢病毒服务 ③ MicroRNA研究慢病毒服务 ④ CRISPR/Case9慢病毒服务

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