槐花米中芦丁的提取
槐米中芦丁的提取、分离与鉴定
槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（一）一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
二、实验原理芦丁：浅黄色针状结晶，mp174℃-178℃。
溶解度：1：8000；热水1:200；冷乙醇1:300；热乙醇1:30；冷甲醇1:100；热甲醇1:10.槲皮素：黄色结晶，mp313℃-314℃（2分子结晶水），能溶解于冷乙醇（1:650），易溶于沸乙醇（1:60），可溶于甲醇、乙酸乙酯等；难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。
本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。
三、药品材料槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸四、实验操作芦丁的的提取和精制芦丁的提取：取槐米20g置500ml烧杯中，加入沸水400ml及1g硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟（注意保持PH8-9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。
浓缩至1/2体积，滤液在60℃-70℃再用盐酸调至PH4-5，静置一周，析出芦丁。
五、实验说明及注意事项1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。
在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。
槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。
PH应严格控制8-9，不得超过10,。
因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。
酸沉淀时PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。
2、提取过程中加入硼砂作用：保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。
槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（二）一、实验目的1、掌握芦丁水解生成苷元的方法及二者之间的分离。
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七、芦丁的鉴定
芦丁的定性反应 取芦丁3-4mg，加乙醇5-6ml使其溶解，分成二份
作下述试验： A.盐酸-镁粉反应：取上述溶液1-2ml，加2滴浓盐酸，
再加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。（红色） 鉴别黄酮类化合物。
ห้องสมุดไป่ตู้
B. Molish反应：糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱 水形成糠醛及其衍生物，再与α-萘酚作用形成 紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成 紫环，因此又称紫环反应。
槐花米中芦丁的提取与鉴定
背景知识
1.来源
芦丁（Rutin）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已 发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦
和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作
为大量提取芦丁的原料。（含量为12％—16％.）
2.结构组成
芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖 （Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖 （Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。分子式： C27H30O16
五、实验内容
流程图：
槐 花 米 粗 粉 （ 20g）
置 500m l烧 杯 中 ， 加 水 300m l， 在 搅 拌 下 加 入 石 灰 乳 （ 1~1.5g） ， 调 至 PH8~9， 加 热 至 微 沸 ， 保 持 30m in， 趁 热 抽 滤 。
然后将粗产物（连同抽滤用滤纸）放置在适宜大小的培 养皿上，于70℃条件下干燥30-40min，最后收集干燥产 物，进行下一步操作。
六、实验关键及注意事项
1.加入饱和石灰水溶液既可达到碱溶液提取芦丁的 目的，又可除去槐花米中大量多糖粘液质，更容 易过滤。也可直接加入150mL水和1g氢氧化钙粉 末，而不必配成饱和溶液。
从槐花米中提取芦丁
实验 从槐花米中提取芦丁 P.198【实验目的】通过从槐花米中提取芦丁的实验，掌握用酸碱调节提取中药活性成分的方法。
【实验原理】槐花米又名槐米，是槐花的花蕾。
性凉、味苦，功能凉血、止血，主治肠风、痔血、便血等症。
槐花米的主要活性成分是芦丁。
芦丁又名芸香苷，不仅存在于槐花米中（含量达10-20％），在荞麦叶等中，也有存在。
结构式如下：OHO OH OHOH O O CH 2从结构式中不难看出，芦丁实际上是由黄酮与糖（葡萄糖和鼠李糖）形成的苷。
由于含有黄酮结构，所以，呈黄色。
黄酮部分连有许多酚-OH ，故易溶于碱液，酸化复析出，这是本实验采用酸-碱调节法来提取芦丁的依据。
纯芦丁为淡黄色针状结晶，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，熔点为188℃（理论值），带三个结晶水的熔点为174-178℃。
芦丁能增强毛细管的韧性，适用于毛细管脆弱的患者。
【实验步骤】称取15g 槐花米，用粉碎机研成粉状。
置于250ml 烧杯中，加入150ml 饱和石灰水[1]，于石棉网上加热至沸，并不断搅拌，煮沸15分钟后，抽滤[2]。
滤渣再用100ml 饱和石灰水煮沸10分钟，抽滤。
合并两次滤液，用5％盐酸调节至pH3-4[3]。
放置1-2小时，使沉淀完全，抽滤，并用水洗涤2-3次，即得芦丁粗品。
将粗品置于250ml 的烧杯中，加水150ml ，在石棉网上加热至沸，不断搅拌，并慢慢加入约50ml 饱和石灰水，调节溶液pH 值为8-9，待沉淀溶解后，趁热过滤。
滤液置于250ml 的烧杯中，用5％盐酸调节至pH4-5，静置30分钟。
芦丁即以浅黄色结晶析出，抽滤，并用水洗涤1-2次，烘干，称重[4]，测熔点。
【注解】[1] 加入饱和石灰水既可达到用碱液提取芦丁的目的，同时，还可除去槐花米中的多糖粘液质。
[2] 抽滤时，宜先小心倾出上层清液，再慢慢倒出带结晶的溶液，以防结晶过早堵住滤纸孔。
后面的抽滤均需如此。
[3] 注意小心滴加，约需7-8ml稀盐酸。
槐米中芦丁的提取注意事项
槐米中芦丁的提取注意事项
提取槐米中的芦丁需要注意以下几点：
1. 原料选择：选择质量好、成熟度合适、没有明显病虫害的槐米。
2. 清洁处理：在提取过程之前，应对槐米进行清洁，去除杂质和灰尘等。
3. 切碎处理：将槐米研磨成适当的颗粒大小，以方便后续的提取过程。
4. 提取方法选择：芦丁的提取一般可以采用酒精提取、水提取、超临界流体提取等方法。
根据实际情况选择适合的提取方法。
5. 操作温度控制：提取过程中，应根据芦丁的理化性质和提取方法的要求控制合适的温度，避免温度过高或过低对芦丁的分解或热不稳定性造成影响。
6. 时间控制：提取时间的长短对提取效果有一定的影响。
根据不同的提取方法和需求，控制提取时间合适。
7. 槐米与提取剂的比例：槐米与提取剂的比例也会影响到提取效果。
根据实际情况调整比例，达到较好的提取效果。
8. 环境保护：在提取过程中应注意环境保护，避免对环境造成污染。
9. 实验设备清洁：提取过程中的实验设备应保持清洁，避免杂质的污染。
10. 合理储存：提取后的芦丁样品应储存在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射和潮湿，以免对芦丁的稳定性造成影响。
以上是提取槐米中芦丁时需要注意的一些事项，具体操作还需根据实际情况和提取方法的要求进行调整。
槐花米中芦丁的提取
四 实验操作——芦丁的提取
槐花米50 g
趁热用 纱布过滤
置于1000 ml烧杯 加沸水700 ml
滤液1
加热微沸1 h
滤渣
加水400 ml 加热微沸45 min
趁热过滤
滤液2
析出大量
合并二次滤液 放置过夜 淡黄色沉淀
抽滤
沉淀物用 水洗三、四次
抽滤， 自然干燥
得粗芦丁
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五 问题
1. 槐花米提取芦丁的实验过程中，1步为 什么加沸水，而不是冷水？
槲皮素在乙醇中的溶解度
乙醇：1：290（无水乙醇）,1：23（沸乙醇）。
可溶于甲醇，乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙 酮等溶剂。
不溶于水、苯、乙醚，氯仿，石油醚。
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三 实验原理
1、芦丁在沸水中溶解度大，在冷水中易析 出，可利用此性质进行提取。
2、芦丁为黄酮苷，苷在甲醇，乙醇中溶解 度较大，可利用这一性质选用甲醇为溶 剂进行热提取。
6
一 实验目的
掌握根据提取成分的极性和溶解性能选 择提取溶剂的方法。
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二 槐花米中主要成分的理化性质
芦丁（Rutin）：淡黄色小针状结晶，mp174-178℃ （含三分子结晶水），188℃（无水物）。溶解度： 水：0.0013%（冷） 0.55%（热） 甲醇：1.0%（冷） 11.2%（热） 乙醇：0.36%（冷） 3.5%（热） 吡啶：8.5%（冷） 易溶（热）
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易溶于碱液，呈黄色，酸化又析出。 不溶于乙醚、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、丙
酮等溶剂。
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HO
OH OH
O OH O
OH
O
OH
O OH
O H3C
O分子结构
槐花中芦丁的提取及鉴定
• 热甲醇（11.2%）
• 冷甲醇（1.0%）
步骤：将所提取的粗芦丁溶于蒸馏水中，于 电磁炉上直火加热10-15min，使其充分溶 解，趁热过滤，滤液放置2-4h，析出晶体 ，过滤，60-70℃以下干燥即得精制的芦丁 ，称重，计算提取率
A
6
3.芦丁的鉴定
• 3.1 化学方法：molish法 • 3.2 紫外光谱法 • 3.3 薄层色谱法
鉴定芦丁同时定量测定360nm处的吸光度，换算成
浓度
A
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4.旋转蒸发仪使用方法
1.高低调节：手动升降，转动机柱上面手轮，顺转 为上升，逆转为下降。
2.各磨口、密封面、密封圈及接头，安装前都需要 涂一层真空脂。
3.加热槽通电前必须加水，不允许无水干烧。 4. 必须使拧入保险孔内保险，以免损坏烧瓶。 5. 检查密闭性。(1)各接头,接口是否密封(2)密封圈,
A
8
3.2 薄层色谱法
• Rf=样品斑点中心到原点的 距离/溶剂前沿到原点的距离
Rf
A
9
3.3 紫外光谱法
• Abs=K1*C+K0
• k0=-o.3055,k1=0.3444 R2=0.9826 • 用已知浓度的标准溶液测得标准曲线得到吸光度与
浓度的关系式
• 取芦丁配制5*10-5mol/L乙醇溶液,可以通过紫外光谱
精制：利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、
冷乙醇的性质选择重结晶方A 法进行精制
3
2. 芦丁的提取步骤
滤 液旋 4蒸 5-浓 50℃缩
调 p H 值 到 2 - 3
浓 缩 液
静 置 沉 淀
A
4
2.1芦丁的提取步骤
实验从槐花米中提取芦丁
实验从槐花米中提取芦丁一、实验目的1．学习黄酮苷类化合物的提取方法。
2．掌握趁热过滤及重结晶等基体操作二、实验原理芦丁（Rutin ）又称芸香苷（Rutioside ）有调节毛细血管壁的渗透性的作用，临床上用作毛细血管止血药，作为高血压症的辅助治疗药物。
芦丁存在于槐花米和荞麦叶中，槐花米是槐系豆科槐属植物的花蕾，含芦丁量高达12%~16%，荞麦叶中含8%，芦丁是黄酮类植物的一种成分，黄酮类植物成分是存在于植物界并具有以下基本结构的一类化合物：就黄色色素而言，它们的分子中都有一个酮式羰基又显黄色，所以称为黄酮。
黄酮的中草药成分几乎都带有一个以上羟基，还可能有甲氧基、烃基、烃氧基等其它取代基，3、5、7、3'、4'、几个位置上有羟基或甲氧基的机会最多，6、8、1'、2'、等位置上有取代基的成分比较少见。
由于黄酮类化合物结构中的羟基较多，大多数情况下是一元苷，也有二元苷。
芦丁是黄酮苷，其结构如下：黄酮骨架OO123456782'3'4'5'6'芦丁（Rutin ）三、基本操作训练【操作步骤】1、 称取3g 槐花米于研钵中研成粉状，置于50mL 烧杯中，加入30mL 饱和石灰水溶液，加热至沸，并不断搅拌，煮沸一刻钟后，抽滤，滤渣再用20mL 饱和石灰水溶液煮沸10min ，合并滤液用15%盐酸中和，调节PH=3-4,放置1-2小时,使沉淀，抽滤，水洗，得芦丁粗产物。
2、 将制得的芦丁粗品置于50ml 烧杯中，加入30ml 水，加热至沸，并不断搅拌，并慢慢加入10mL饱和石灰水溶液，调节PH=8-9，等沉淀溶解后，趁热过滤，滤液置于50mL烧杯中，用15%盐酸调PH=4-5，静置30min，芦丁以浅黄色结晶析出，抽滤，水洗，烘干得芦丁纯品。
【实验流程】槐花米粉末煮沸提取，抽滤饱和石灰水粗提液中和、沉淀、抽滤粗提物洗涤水粗品煮沸、溶解溶液趁热过滤滤液酸化，静置，过滤结晶洗涤芦丁15%HCl四、实验关键及注意事项1、加入饱和石灰水溶液既可以达到碱溶解提取芦丁的目的，又可以除去槐花米中大量多糖粘液质。
槐米中芦丁的提取方法
槐米中芦丁的提取方法
提取槐米中的芦丁可以采用以下方法：
1. 热水浸提法：将槐米粉末加入适量的热水中，浸泡一段时间后，用滤纸或布过滤，收集滤液。
滤液中含有芦丁等水溶性成分。
2. 乙醇浸提法：将槐米粉末加入适量的乙醇中，加热回流浸泡一段时间后，用滤纸或布过滤，收集滤液。
滤液中含有芦丁等乙醇溶性成分。
3. 超声波辅助浸提法：将槐米粉末与适量的溶剂（如水、乙醇）混合后，利用超声波的作用加速浸提过程。
超声波的振动作用可以促使槐米中的芦丁等成分更好地溶解在溶剂中。
4. 色谱法：使用柱色谱或液相色谱等分离方法，将浸提得到的槐米滤液进行进一步分离和纯化，得到纯度较高的芦丁。
这些方法都是一些常用的提取槐米中芦丁的方法，根据需要可以选择适合的方法进行实验操作。
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三、实验流程
1、芦丁的提取
槐花米 （15g） 加水 300ml
搅拌下加 入石灰乳
保持微 沸30min
注意及时补充水 和石灰乳，维持 PH 8~9
调节 PH8-9
1.5g CaO 加10ml水 双层滤纸趁 热抽滤
• 趁热抽滤时，注意防 止滤液因减压而沸腾。
直火加热
滤液 残渣
芦丁可用于治疗毛细血管脆性引起的出血症，并用 作高血压辅助治疗剂。 芦丁还可以作为制备槲皮素、羟乙基槲皮素、羟乙 基芦丁、二乙胺基乙基芦丁等的原料。
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OH HO O OH O OH O glc rha
OH OH 3' 4'
槲皮素的化学结构式
芦丁的化学结构式
HO 7 5
Molish反应
盐酸-镁粉反应 醋酸镁反应 三氯化铝反应 锆-柠檬酸反应
10%α-萘酚乙醇、溶液浓硫酸
盐酸-镁粉 1％醋酸镁甲醇溶液 1％三氯化铝乙醇溶液 （紫外灯） 2％二氯氧锆甲醇溶液2％ 柠檬酸甲醇溶液3～4滴
紫色环
无现象
红色～紫红色 黄色荧光（紫外灯） 黄色荧光 黄色并褪色 黄色不褪色
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水解
按1:70量加入2%硫酸， 加热40min，放冷静置， 抽滤
残渣
抽滤时，热烧杯勿直接放在实 验台上，防止烧杯炸裂。
滤液 冷却 静置，抽滤
滤液 糖鉴定
沉淀 干燥、 95％ 乙醇重结晶
精制芦丁
槲皮素
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3、芦丁、槲皮素的理化鉴别方法
实验名称 实验试剂 现 芸香苷 象 槲皮素
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5、芦丁的IR、1HNMR鉴定
样品：自制芦丁。 实验：KBr压片，红外分光光度仪测试。 IR谱图与芦丁标准谱图对照。 DMSO-d6作溶剂，测芦丁的1HNMR。
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四、注意事项
在提取前应将槐花米粉碎，使芦丁易于被热水溶出。 粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢；
芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中， 酸化后又可析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
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碱溶酸沉法原理 由槐花米中提取芦丁的方法很多，本实验是根 据芦丁在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提 取和精制，或根据芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸 性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸 提取，其提取液加酸酸化后则芦丁游离析出。
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五、思考题
苷类结构的检识大体程序如何？
苷类水解的方法？ 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮素3-OH 上？ 苷元的结构怎样确定？
怎样确定苷键的构型？
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六、实验课后总结与讨论
芦丁提取 芦丁的分离纯化 芦丁的理化鉴别 芦丁的苷元-槲皮素的制备 芦丁与槲皮素的波谱鉴定
在60-70度下，用 浓盐酸调PH3-4 静置
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2、芦丁的精制与水解
第一次实验所得滤液 抽滤
• 酸水解过程 中，注意补充 蒸馏水，维持 原体积。 • 2%的硫酸用 98%浓硫酸自 己配制，注意 浓硫酸和水的 加入顺序。
滤液
沉淀（粗品芦丁） 均分2份
重结晶
按1:60量加入蒸馏水，沉淀 悬浮于蒸馏水中，加热煮沸 15分钟后，趁热抽滤
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槐花米中芦丁的提取、分离 和鉴定
制作人：熊 燕
一、实验目的要求
1、掌握黄酮类化合物的提取和分离的原理和方法。 2、掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。 3、了解IR及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。
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二、实验原理
中药槐米中的主要化学成分 主要含有芦丁、槲皮素，还含少量皂苷类及多糖、 粘液质等。 槐米含芦丁可高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。
本实验用碱溶酸沉法提取，加入石灰乳可以达到碱 性溶解的目的，又可除去槐花米中所含的大量粘液 质，但应严格控制其碱性pH8～9，不可超过pH10。 如pH值过高，加热提取过程中芦丁可被水解破坏， 降低收得率。加酸沉淀时，控制pH3～4,不宜过低， 否则芦丁可生成佯盐而溶于水，也降低收得率。
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O 3 OH OH O
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芦丁的性质
芦丁为浅黄色粉末或极细微淡黄色针状结晶，含3分子结晶 水（C27H30O16· 3H2O），加热至185℃以上熔融并开始分解。 芦丁可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、 乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
芦丁的溶解度，在冷水中1:10000，沸水中1:200，沸乙醇 中1:60，沸甲醇中1:7
4、芦照品：①芦丁对照品乙醇液; ②槲皮素对照品乙醇液。 吸附剂：聚酰胺薄膜。 展开剂：①氯仿—甲醇—甲酸(15：5：1); ②醋酸乙酯—甲酸—水(8：1：1)。 显色剂：①喷三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外灯 (365nm)下观察。