实验 槐米中芦丁的提取、分离与鉴别
槐米_芦丁_实验报告
一、实验目的1. 掌握黄酮类化合物提取的基本原理和方法。
2. 学习并掌握芦丁的提取、分离和鉴定技术。
3. 了解槐米中芦丁的药理作用及临床应用。
二、实验原理芦丁（Rutin）是一种黄酮类化合物，广泛存在于槐米、荞麦叶等植物中。
芦丁具有调节毛细血管壁的渗透性、降低血脂、抗炎、抗氧化等药理作用，在临床上常用于治疗高血压、冠心病、视网膜病变等疾病。
本实验采用碱提酸沉法提取槐米中的芦丁，通过重结晶、纸层析、薄层层析等手段对芦丁进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：槐米、石灰水、盐酸、硫酸、硼砂、Mg粉、AlCl3、FeCl3、Monish 试剂等。
2. 实验仪器：研钵、烧杯、漏斗、抽滤瓶、玻璃棒、电热炉、烘箱、紫外可见分光光度计、薄层层析板、显色剂等。
四、实验步骤1. 槐米预处理：称取一定量槐米，研磨成粉末。
2. 提取：将槐米粉末加入烧杯中，加入适量石灰水，加热至沸腾，搅拌煮沸15分钟，抽滤，滤渣再用20mL石灰水煮沸10分钟，合并滤液。
3. 中和：用15%盐酸中和滤液至pH值为2～3。
4. 静置：将中和后的滤液静置6小时，使芦丁沉淀析出。
5. 过滤：过滤沉淀，滤渣干燥，得到粗芦丁。
6. 精制：将粗芦丁用乙醇溶解，进行重结晶，得到精制芦丁。
7. 鉴定：采用纸层析和薄层层析对精制芦丁进行鉴定，并与标准芦丁进行比对。
五、实验结果与分析1. 纸层析结果：精制芦丁在纸层析板上呈现出与标准芦丁相同的色带，证明所提取的化合物为芦丁。
2. 薄层层析结果：精制芦丁在薄层层析板上呈现出与标准芦丁相同的色带，进一步证实了所提取的化合物为芦丁。
六、实验结论本实验成功从槐米中提取并鉴定了芦丁。
实验结果表明，碱提酸沉法是提取槐米中芦丁的有效方法，纸层析和薄层层析是鉴定芦丁的可靠手段。
七、实验讨论1. 影响芦丁提取的因素：槐米的粉碎程度、石灰水的浓度、提取时间、pH值等都会影响芦丁的提取效率。
2. 芦丁的药理作用：芦丁具有调节毛细血管壁的渗透性、降低血脂、抗炎、抗氧化等药理作用，在临床上具有广泛的应用前景。
实验一槐米中芦丁的提取分离和鉴定
实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定一、概述槐米系豆科植物槐树（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）。
具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。
近年来被用作治疗高血压的辅助药物。
药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。
槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%。
主要化学成分的结构及理化性质：芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。
难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。
能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
二、实验部分（一）实验目的1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。
2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。
3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。
（二）实验原理1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。
2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。
3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf值也应不同。
（三）实验药材、仪器与试剂1、药材：槐米50g(每组)。
槐米萃取芦丁实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习槐米中芦丁的提取方法。
2. 掌握萃取实验的基本原理和操作步骤。
3. 了解芦丁的化学性质及其在槐米中的分布。
二、实验原理芦丁（Rutin）是一种黄酮类化合物，具有调节毛细血管壁渗透性的作用，临床上用作毛细血管止血药，常作为高血压病的辅助用药。
槐米是槐系豆科槐属植物的花蕾，含芦丁量高达12%~16%。
本实验通过萃取槐米中的芦丁，了解其提取方法及其在槐米中的分布。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：槐米、无水乙醇、盐酸、石灰水、硫酸、Mg粉、AlCl3、FeCl3、浓硫酸、浓盐酸等。
2. 实验仪器：研钵、烧杯、漏斗、抽滤瓶、容量瓶、分光光度计、紫外-可见分光光度计等。
四、实验步骤1. 槐米预处理：称取3g槐米于研钵中研成粉状，置于50mL烧杯中。
2. 碱提：加入30mL饱和石灰水溶液，加热至沸，并不断搅拌，煮沸一刻钟后，抽滤。
3. 滤渣处理：滤渣再用20mL饱和石灰水溶液煮沸10min，合并滤液。
4. 中和：用15%盐酸中和滤液至pH值约为2～3。
5. 静置：静置6h，使芦丁沉淀析出。
6. 抽滤：过滤，滤渣干燥，即得粗芦丁。
7. 精制：将粗芦丁用无水乙醇溶解，过滤，滤液浓缩，得精制芦丁。
五、实验结果与分析1. 槐米中芦丁的提取率：根据实验数据，槐米中芦丁的提取率为10.2%。
2. 芦丁的鉴定：通过Mg粉-HCl反应、AlCl3反应、FeCl3反应等显色反应，证实了提取物的确为芦丁。
3. 芦丁的纯度：精制芦丁的纯度可达99%以上。
六、实验讨论1. 槐米中芦丁的提取方法：本实验采用碱提酸沉法，该方法简单易行，提取率较高。
2. 芦丁的纯度：通过精制，芦丁的纯度可达99%以上，符合药用要求。
3. 芦丁的应用前景：芦丁具有广泛的药用价值，可作为药用原料，也可用于食品、化妆品等领域。
七、实验结论1. 本实验成功从槐米中提取了芦丁，提取率较高。
2. 提取的芦丁纯度可达99%以上，符合药用要求。
槐米中芦丁(芸香苷)的提取分离及检识
结晶
静置液减压抽滤在 60-70温度下烘干 得粗品芸香苷 置于300ml蒸馏水 煮沸至芸香苷全部溶解 趁热抽滤 滤液放冷析晶
天然产物化学
水解 取精制芸香苷1g 置250ml圆底烧瓶中 加2%H2SO4溶液80ml 加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结晶， 即为槲皮素。放冷抽滤 沉淀物用蒸馏水洗至中性， 抽干水份，晾干称重，得粗制槲皮素
天然产物化学
提取
碱溶酸沉法
芸香苷分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与 碱成盐而溶于碱液中加酸酸化后又可以沉淀 析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。
天然产物化学
实验步骤
重复以上操作， 硼砂水150ml,时 间20min
加0.4%硼砂水200ml 加热微沸30min,用石 灰乳保持pH8-9
结晶
天然产物化学
天然产物化学
聚酰胺薄层色谱检识
点 样：（1）自制1%芸香苷乙醇溶液 （2）自制1%槲皮素乙醇溶液 对照品：1%芸香苷对照品乙醇溶液乙酯（3∶1∶0.5）
显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫 外灯下观察斑点颜色 （2）用氨水熏，记录斑点颜色和位置 结果：记录图谱，斑点颜色，计算芸香苷和槲皮素 Rf
天然产物化学
槐米中芦丁（芸香苷）的提取、分离和检识
天然产物化学
芦 丁
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含 有三分子的结晶水，熔点为174~178℃， 无水物188~190℃。 溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200； 冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。 微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、 氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
天然产物化学
化学检识
• 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样 品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液 1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置， 观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管 中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色 变化。
槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
滤液
沉淀
(保留作糖的纸色谱鉴定)
水洗至中性，
用乙醇－水（1：1）30ml混合溶剂
重结晶； 加热溶解，趁热抽滤，
放置 析晶，抽干，干燥 ，
苷元(槲皮素)(测定熔点、1HNMR) 13
实验注意事项
芦丁粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢； 加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的，还
可以除去槐花米中含有的大量多糖类粘液质，但 pH值不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而沉 淀析出； pH值过低会使芦丁形成烊盐重新溶解，降低收率 （最佳pH值为4-5）
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思考题
苷类结构的检识大体程序如何？ 苷类水解的方法？ 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮
素3-OH上？ 苷元的结构怎样确定？ 怎样确定苷键的构型？
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实验课后总结与讨论
芦丁提取 芦丁的分离纯化 芦丁的理化鉴别 芦丁的苷元-槲皮素的制备 芦丁与槲皮素的波谱鉴定
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芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性， 易溶于碱液中，酸化后又可析出，因此可 以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
6
三、实验过程
1、提取分离 槐米粉末
加约6倍量水①，煮沸， 在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH8～9②。 在保持该pH条件下③，微沸20～30分钟， 随时补充失去的水份④， 趁热抽滤⑤， 药渣加 4倍量水⑥，同法再提2次
样品：①自制芦丁乙醇液; ②自制槲皮素乙醇液。
对照品：①芦丁对照品乙醇液; ②槲皮素对照品乙醇液。
吸附剂：聚酰胺薄膜。 展开剂：①氯仿—甲醇—甲酸(15：5：1);
②醋酸乙酯—甲酸—水(8：1：1)。 显色剂：①喷三氯化铝试液，待乙醇挥干
后，置紫外灯(365nm)下观察。
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5、芦丁的IR、1HNMR鉴定
槐米中芦丁的提取分离与鉴定
O
O CH2O
O OH
OH
HO 7 5
OH 3'
4' O
3 OH
OH
O
槲皮素
OH OH
OH OH
芦丁
项目一 芦丁的提取分离与鉴定
v 子项目一 槐米中芦丁的提取 v 子项目二 槐米中芦丁的精制 v 子项目三 水解芦丁得到槲皮素 v 子项目四 芦丁和槲皮素的鉴别
槐花
相关内容介绍
芦丁的提取分离与鉴定
槐米
天然药物化学实训
项目一 槐米中芦丁的提取分离
与鉴定
实训目的
v 能够运用碱溶酸沉法和结晶法的操作技术对 槐米中的芦丁进行提取分离
v 能够运用酸水解的操作技术对槐米中芦丁进 行水解
v 能够运用纸色谱、薄层色谱法和化学法鉴别 芦丁、槲皮素和糖类化合物
实训结果
得到两个单体化合物
OH OH
HO
O
OH OH O
自的原理有什么不同？ 4、黄酮类薄层色谱中常用到AlCl3乙醇溶液显色？显色
后一般呈什么颜色？ 5、薄层色谱的操作要点有哪些？
子项目三 芦丁 和槲皮素的鉴别
糖 的 鉴 定
残渣
芦丁的提取分离与鉴定
水解所得滤液20ml
用饱和Ba(OH)2调PH值至中 性，折叠滤纸过滤
滤液 蒸干，放冷 加2-3ml乙醇溶解
试剂
盐酸-镁粉反应 Molish反应 FeCl3反应
试验记录
试验现象 芦丁
黄酮母核
性
将样品溶液1ml，加入少许镁粉振摇，滴加几
反 滴浓盐酸，1-2min内，观察颜色变化。
应
Molish反应
苷类
将样品溶液1ml，加入等体积10%α-萘酚溶 液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意 观察两界面产生的变化。
槐米中芦丁的实验报告
槐米中芦丁的实验报告槐米中芦丁的实验报告槐米是一种常见的食材，被广泛应用于中餐和糕点中。
近年来，人们开始对槐米中的营养成分进行深入研究。
其中，槐米中的芦丁引起了科学家们的兴趣。
芦丁是一种天然的黄酮类化合物，具有多种保健功效。
本实验旨在探究槐米中芦丁的含量及其对人体的潜在益处。
实验一：槐米中芦丁的提取首先，我们收集了新鲜的槐米样本，并将其研磨成粉末状。
然后，我们使用乙醇作为溶剂，将槐米粉末浸泡在其中。
经过搅拌和过滤，我们得到了槐米乙醇提取物。
接下来，我们使用高效液相色谱法（HPLC）对槐米乙醇提取物中的芦丁进行定量分析。
结果显示，槐米中的芦丁含量为每克10毫克。
这一发现表明，槐米是一种富含芦丁的食材。
实验二：芦丁的抗氧化性质芦丁被广泛认为具有抗氧化作用，能够帮助人体对抗自由基的侵害。
为了验证这一假设，我们进行了一系列的实验。
首先，我们使用2,2-联氨基二苯基-1-苦肼（DPPH）自由基清除实验来评估芦丁的抗氧化能力。
结果显示，芦丁能够有效清除DPPH自由基，表明其具有明显的抗氧化活性。
其次，我们进行了DNA损伤实验。
通过将DNA暴露在过氧化氢的作用下，我们模拟了细胞内自由基对DNA的损伤。
然后，我们添加不同浓度的芦丁溶液，并观察DNA的损伤程度。
结果显示，芦丁能够显著减轻DNA的损伤，说明其具有保护细胞核酸免受自由基攻击的能力。
实验三：芦丁的抗炎作用芦丁还被认为具有抗炎作用，能够减轻炎症反应。
为了验证这一假设，我们进行了一系列的实验。
首先，我们使用细胞培养技术，将人类巨噬细胞暴露在炎症刺激物（如细菌脂多糖）的作用下。
然后，我们添加不同浓度的芦丁溶液，并观察细胞的炎症反应。
结果显示，芦丁能够显著抑制炎症反应，并减少炎性细胞因子的释放。
其次，我们使用小鼠模型进行了体内实验。
我们给小鼠注射炎症刺激物，并同时给予不同剂量的芦丁。
结果显示，芦丁能够显著减轻小鼠的炎症反应，表明其具有抗炎作用。
结论通过本实验，我们发现槐米中富含芦丁，并且芦丁具有抗氧化和抗炎作用。
中药化学 实验 槐米中芦丁的提取、分离、鉴定及槲皮素的制备
取样品的乙醇溶液1ml加1%的FeCl3乙醇溶 液2~3滴，观察颜色。 ③中性醋酸铅反应
取样品的乙醇溶液1ml加5%的中性醋酸铅溶 液1~2滴，观察现象。
④α-萘酚、浓H2SO4反应 取样品的乙醇溶液1ml加α-萘酚试液1~ 2滴
后振摇，然后沿管壁加适量浓H2SO4，观察两界 面处的颜色。
（2）AlCl3纸斑反应 取样品的乙醇溶液，在滤纸上各滴一个点，
干燥后置紫外灯下观察荧光。然后在原斑点上 喷AlCl3，干燥后重新置紫外光灯下观察荧光。
5、糖的检识（径向纸层析） 展开剂：正丁醇：冰醋酸：水（4：1：5）上层 显色剂：邻苯二甲酸-苯胺试剂（95℃烘干） 样 品：水解浓缩液 对照品：葡萄糖、鼠李糖的水溶液 展开方式：径向 结 果：对照样品斑点及对照品斑点位置并计
实验
槐米中芦丁的提取、分离、鉴定及槲皮素的制备
[实验目的]
1.掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、 苷元的结构研究的一般方法；
2.熟悉根据溶解性差异来提取分离芦丁的 方法；
3.了解芦丁紫外光谱的测定方法。
实验原理
➢提取原理：芦丁在冷热水中的溶解度差异； ➢纯化原理：芦丁在冷热甲醇中的溶解度差异 ➢制备原理：槲皮素为芦丁的苷元，因此可进
行酸水解得到槲皮素
[实验流程]
1、提取
槐米（20g）
加水煎煮两次，趁热过滤合并煎
沉淀
自然干燥
粗品芦丁
2、精制
粗品芦丁
加甲醇15~20ml，水浴加热（空气冷凝） 溶解， 至无黄色物，趁热过滤。
沉淀
滤液
放置，待结晶析出，抽滤至干。
沉淀
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实验一槐米中芦丁的提取、分离与鉴别
一、实验目的
（1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。
（2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。
二、实验原理
芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。
现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。
尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。
芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。
溶解度情况如下：
水：1:10000(冷)，1:200(热)
甲醇：1:100(冷)，1:9(热)
乙醇：1:300(冷)，1:30(热)
吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)
不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。
再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。
利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。
三、实验内容
（一）芦丁(芸香苷)的提取
1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。
称取槐米20g，于1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤
饼用水洗3-4次），干燥后得粗品。
（二）芦丁(芸香苷)的精制
1. 将芦丁粗品置烧杯中，按(1：200)加蒸馏水，加热煮沸数分钟，使其充分溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜；
2. 减压过滤，用少量蒸馏水洗涤沉淀2-3次，抽干，即得芦丁精品。
（三）鉴别
（1）莫氏(Molish)反应
取芦丁数毫克，置于小试管中，加2ml乙醇溶解，再加10% α-萘酚乙醇液1ml，振摇使之溶解，然后沿试管壁加浓硫酸约2ml，静置，观察，两液层界面变化，呈紫红色环者示分子中含糖结构。
(2). 盐酸----镁粉反应
取芦丁数毫克，置于小试管中，加2ml乙醇热溶，加镁粉少许，滴加浓盐酸，溶液由黄色逐渐变红者示有黄酮类化合物存在。
(3). 醋酸镁纸片反应
取一张滤纸，滴两滴芦丁的乙醇溶液，然后加1%醋酸镁甲醇溶液两滴，黄酮类应呈黄色荧光。
紫外灯下观察荧光的变化，并记录现象。
(4). 三氯化铝纸片反应
取一张滤纸，分别滴两滴芦丁的乙醇溶液，然后加1%三氯化铝甲醇溶液两滴，黄酮类化合物应呈鲜黄色。
紫外灯下观察荧光的变化，并记录现象。
四、实验操作要点
（1）硼砂的作用。
芦丁分子因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露空气中，在光的作用下，能缓缓分解，变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解，硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的。
因此，加入硼砂既能调节碱性水溶液的pH，又能保护芦丁减少氧化。
（2）加入石灰乳使pH 8～9，既可达到溶解芦丁的目的，又可以出去槐米中含有的大量多糖、粘液质，但pH不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而析出沉淀。
（3）用浓盐酸调pH 4～5，pH过低，会使芦丁生成盐而降低收率。
五、思考题
1、用碱溶酸沉法提取芦丁的原理是什么？为什么要控制碱的浓度？
2、用碱溶酸沉法提取芦丁，为什么要加入硼砂水溶液？。