一种溶高等担子菌细胞壁酶的制备1)
2022年云南大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年云南大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、能产芽孢的细菌较少，主要是属于革兰氏______性细菌的______属和______属，前者是好氧菌，其芽孢囊呈______状，后者是厌氧菌，其芽孢囊的外形常呈______状。
2、病毒在寄主体外，很易因外界环境如高温，射线等作用而______；带封套的病毒容易被______溶剂破坏，因而可用消毒剂如______来消毒。
3、呼吸链在传递氢或电子的过程中，通过与______反应相偶联，产生了生物的通用能源______，其形成机制可根据英国学者______的______ 学说来解释。
4、在液体培养基中，放线菌常以______的方式繁殖，工业上的______ 就是利用这一方式进行增殖的。
5、蕈菌的发育过程有______个明显的阶段，其中双核菌丝细胞的增殖方式十分特殊，称为______。
6、1347年的一场由______引起的瘟疫几乎摧毁了整个欧洲，有1/3的人（约2500万人）死于这场灾难。
7、由于升汞（HgCl2）有腐蚀作用，所以不能用于______消毒，特别是______制品。
8、微生物寄生于其他微生物的例子如______、______；微生物寄生于植物的例子如______；微生物寄生于动物的例子如______。
9、限制性酶的命名是根据分离出此酶的______而定的，即取______的第一个字母和______的头两个字母组成3个斜体字母加以表示，遇有株名，再加在后面。
如果同一菌株先后发现几个不同的酶，则用罗马数字加以表示。
10、T细胞在识别抗原的同时也识别自身______。
二、判断题11、任何芽孢都由孢外壁、芽孢衣、皮层和芽孢核心这几个层次组成。
（）12、只有营养物质的吸收涉及到物质的运输这个问题，而代谢产物的分泌则不涉及到物质的运输这个问题。
（）13、EMP途径主要存在于厌氧生活的细菌中。
（）14、E.coli T偶数噬菌体的核心是由线状双链DNA构成的。
担子菌(1)
鳞盖伞属[Pholotia (Fr.) Kummer]
Pholiota_squarrosa红网牛杆菌
Pholiota flammans黄鳞环锈伞
鬼伞科（Coprinaceae)
典型特征
• 菌盖常为圆锥形或钟形； • 菌褶离生至近延生或直生，初色浅，后变深，同 时溶解； • 菌柄中生，空心； • 孢子近球形至卵圆形或肾形至柠檬形，具顶生芽 孔，黄褐色、紫褐色至黑褐色。 可以产生厚垣孢子：被厚细胞壁包被的菌丝体 7属，764种（Kirk et al. 2001)
鬼伞属（Coprinus Piesii
Coprinus cinereus灰盖鬼伞
Coprinus comatus鸡腿菇 （药食）
丝膜菌科（Cortinariaceae)
典型特征
• 子实体小型至大型，颜色鲜艳； • 常有丝膜状菌幕； • 孢子小型至大型，球形，椭圆形，多具 纹饰； • 多为为外生菌根菌。
Tricholoma matsutake
松口蘑在世界上总贸易额达50亿美元（Hall et al.2003）
Tricholoma magnivelare美洲松茸
Tricholoma equestre
初生菌丝(primary mycelium)(n)
直接萌发，也称同核体(monokaryon)
间接萌发，先芽殖生成次生担孢子
多数担子菌的初生菌丝体具有无限生长的可能。
一般认为起源于子囊菌： 1. 担子菌的双核菌丝（次生菌丝）与子 囊菌的产囊丝来源相同，都是经过有性结合 后而产生的双核体。 2. 担子菌的锁状联合与子囊菌产囊丝的 子囊钩相似，说明子囊与担子的早期发育过 程相似，子囊菌的子囊钩形成后，顶端形成 子囊和子囊孢子，而担子菌经锁状联合后的 顶端细胞形成担子和担孢子。
真菌细胞溶壁酶的分离纯化及其酶学性质研究
真菌细胞溶壁酶的分离纯化及其酶学性质研究尹海滨;王婷;郑萍【摘要】采用长梗木霉(Trichoderma Longibrachiatum Rifai)958-11菌株,经过发酵,分离提纯出一种真菌细胞溶壁酶,并对其进行酶学性质研究.长梗木霉培养,利用:(NH4)2SO4沉淀,sartobind S离子交换层析和Sephacryl S-200柱层析对该发酵液进行分离纯化,用担子菌做为酶反应的底物研究该酶的酶学性质.经发酵获得的酶液,可在最佳反应条件下,1～2h内产出原生质体105～106个/毫升酶液.酶反应最适温度为30℃,最适pH为5.4,可以在0.6mol/L的氯化钾或0.6mol/L的硫酸镁为等渗液的条件下,溶解部分担子菌的细胞壁,得到高活力的原生质体.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2010(038)007【总页数】3页(P87-88,96)【关键词】溶壁酶;长梗木霉;原生质体【作者】尹海滨;王婷;郑萍【作者单位】广州市元通医药科技有限公司,广东,广州,510610;广州市元通医药科技有限公司,广东,广州,510610;广州市元通医药科技有限公司,广东,广州,510610【正文语种】中文Abstract:Trichoderma Longibrachiatum Rifai 958-11 was applied to produce Lywallzyme by submerged fer mentation.From the Sartobind S I on Exchange Chromatography and Sephacryl S-200 ColumnChromatography,lywallzymewas found,separated and purified.The relative molecularweights of the enzymeswas deter mined and theirmost suitable reaction temperatures and pH valueswere ascertained.The lywallzyme can degrade fungal c ellwalls to produce protoplasts at pH 5.4 and 30℃.Under the opt imum conditions,the protoplasts can be 105～106/mL enzyme.If in 0.6mol/L of potassium chloride or 0.6mol/L ofmagnesium sulfate as the isotonic solution,dissolved some cell walls of basidiomycets and got the protoplastswith high energy.Key words:lywallzyme;Trichoder ma Longibrachiatum;protoplasts真菌细胞原生质体融合是生物工程上常用的技术,而真菌细胞溶壁酶是制备真菌细胞原生质体的重要工具酶。
医学微生物学――第二十一章 真菌概述
医学微生物学――第二十一章真菌概述第二十一章真菌概述真菌(fungus)是一种真核细胞型微生物。
有典型的细胞核和完善的细胞器。
不含叶绿素、无根、茎、叶的分化。
真菌广泛分布于自然界，种类繁多，有10余万种。
大多对人无害，有的甚至有益。
如食用蕈类，有的真菌用于生产抗生素和酿酒等。
引起人类疾病的约300余种，包括致病、条件致病、产毒以及致癌的真菌。
近年来真菌感染明显上升。
这与滥用抗生素引起菌群失调和应用激素、抗癌药物导致免疫低下有关，应引起注意。
与医学有关的真菌有四个亚门：①接合亚门(Zygomycotina),绝大多数为无隔多核菌丝体，属条件致病性真菌,如毛霉、根霉等。
②子囊菌亚门(Ascomycotina)，具有子囊和子囊孢子，如芽生菌属、组织胞浆菌属、小孢子菌属及酵母菌属等。
③担子菌亚门(Basidiomycotina)，具有担子和担孢子，如食用菌蘑菇、灵芝以及致病性新生隐球菌等。
④半知菌亚门(Deutermycotina或fungusimperfecti)，对此类菌生活史了解不完全，未发现其有性阶段，故称之为半知菌。
在医学上有重要意义的真菌绝大部分在半知菌亚门中，如球孢子菌属和假丝酵母菌属。
最新的真菌分类是将真菌界分为4个门，即接合菌门(Zycomycota)、担子菌门(Basidomycota)、子囊菌门(Ascomycota)和壶菌门(Chytridiomycota),而将原半知菌亚门中的真菌划分到前3个门中。
第一节真菌的生物学性状真菌可分单细胞和多细胞两类。
单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称酵母菌(yeast)。
多细胞真菌大多长出菌丝和孢子，交织成团，称丝状菌(filamentousfungus)，又称霉菌(mold)。
有些真菌可因环境条件的改变，而两种形态发生互变，称为二相性(dimorphic),如球孢子菌、组织胞浆菌、芽生菌和孢子丝菌等。
这些真菌在体内或在含有动物蛋白的培养基上37℃培养时呈酵母菌型，在普通培养基上25℃培养时则呈丝状菌。
2022年湖南农业大学东方科技学院食品科学与工程专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年湖南农业大学东方科技学院食品科学与工程专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、细菌的鞭毛具有______功能，菌毛具有______功能，性菌毛具有______功能。
2、最大的病毒是直径为200nm的______；最小病毒之一是______，其直径仅为28nm。
3、硝酸盐在微生物生命活动中具有两种作用，其一是利用它作为氮源，这就是______；另一种是利用它作为呼吸链最终氢受体，这就是______，又称______或______。
这两个作用的共同点都需要一种含______的______酶将硝酸盐还原为亚硝酸盐。
4、放线菌为7.5～8.@5、酵母菌菌为3.8～6.@0、霉菌为4.0～5.@8、藻类为6.0～7.@0、原生动物为6.0～8.0。
@43、培养基按所含成分可分为______、______和______；按物理状态可分为______、______、______和______；按用途可分为______和______。
5、食用菌一般是指可食用的有大型______的高等真菌，分类上主要属于______，其次为______。
6、微生物学为现代生命科学提供的独特研究方法有：① ______，② ______，③ ______，④ ______，⑤ ______，⑥ ______，⑦ ______，⑧ ______和⑨ ______等。
7、利用加热和辐射的物理方法可以对______进行灭菌，______和______可用加热、辐射和过滤进行消毒和灭菌。
8、植物根际微生物对植物有害的方面有______和______等。
9、质粒通常以共价闭合环状的超螺旋双链DNA分子存在于细胞中，但从细胞中分离的质粒大多是3种构型，即______型、______型和______ 型。
10、当前已开发的新型疫苗有______、______、______、______、______和______等。
二、判断题11、菌落边缘细胞的菌龄比菌落中心的细胞菌龄长。
2021年河南师范大学微生物学专业《微生物学》期末试卷B(有答案)
2021年河南师范大学微生物学专业《微生物学》期末试卷B(有答案）一、填空题1、常见的球菌类细菌的代表属有______，______，______等。
2、病毒在寄主体外，很易因外界环境如高温，射线等作用而______；带封套的病毒容易被______溶剂破坏，因而可用消毒剂如______来消毒。
3、1966年，M.J.Dilworth和R.Scholhorn等人分别发表了既灵敏又简便的测定固氮酶活性的______，大大推动了固氮生化的研究。
4、PA培养基通常用来培养______，其pH值为______。
5、Ainsworth（1973）真菌分类系统将真菌门分成______亚门、______亚门、______亚门、______亚门和______亚门。
6、微生物代谢类型的多样性表现在：① ______，② ______，③ ______，④ ______，⑤______，⑥ ______，⑦ ______。
7、巴氏消毒法的具体方法很多，主要可分为两类，即______和______。
8、植物根际微生物对植物有害的方面有______和______等。
9、限制性酶的命名是根据分离出此酶的______而定的，即取______的第一个字母和______的头两个字母组成3个斜体字母加以表示，遇有株名，再加在后面。
如果同一菌株先后发现几个不同的酶，则用罗马数字加以表示。
10、抗原与抗体间有八类主要反应，例如______、______、______和______等。
二、判断题11、和动植物一样，细菌细胞也会经历由小长大的过程，因此，在相同情况下应选择成熟的细菌而非幼龄细菌进行显微镜观察，这样可以看得更清楚。
（）12、生物界所需的一切能源，都是直接或间接地来自太阳能。
（）13、微生物的次生代谢物是微生物主代谢不畅通时，由支代谢途径产生的。
（）14、病毒具有感染性，且核酸是病毒的遗传物质，故所有病毒的基因组核酸都是感染性核酸。
第三章真菌的细胞结构(普通真菌学)ppt课件
葡聚糖 纤维素 几丁质 聚氨基 葡糖 甘露聚 糖 蛋白质 脂类
16 — 58 — — 10 —
注：数字为细胞壁总干重的质量百分比
鲁氏毛霉生活史中细胞壁化学组成的差异
胞壁成分 几丁质 酵母形 8.4 菌丝形 9.4 32.7 孢子囊 18 20.6 孢囊孢子 2.1 9.5
脱乙酰几丁质 27.9
甘露糖
3、脂类 1）通常不超过细胞壁的8%，有一例外，三孢布拉霉 （Blakesleatrispora）总脂量30% 2）主要有饱和脂肪酸组成，普遍是磷脂。但是有些 酵母中存在糖脂和鞘氨醇如热带假丝酵母（Cadida tropicalis）存在甘露聚糖与脂肪酸 4、无机离子 其中磷含量较丰富，其次是钙、镁 总之，细胞壁成分随着菌类的不同而不同，而且每 种菌体的细胞壁在其生活周期过程中也存在着差异。
粗糙脉胞菌菌丝胞壁结构
四、酵母菌细胞壁
β－(1 3)葡聚糖，链状，含量高 葡聚糖
β－(1 6)葡聚糖，分支，含量低
甘露聚糖是甘露糖α－(1 6)相连的分支聚合物。 蛋白夹在两者之间，少数结构蛋白质，多数是多糖，如：葡聚 糖E、甘露聚糖E、蔗糖E、碱性磷酯E等。 • 酵母菌的细胞壁厚约25nm，结构似三明治——外层为甘露聚 糖，内层为葡聚糖，中间为蛋白质分子。 • 几丁质很少，在形成芽体时合成。 • 不同种属差异差异较大，如：裂殖酵母细胞壁含葡聚糖和较 多几丁质；点滴酵母细胞壁以葡聚糖为主，少量甘露聚糖。
第一节 细胞壁
一、细胞壁的主要成分
多糖、蛋白质、脂类、无机离子 1、多糖
1）大多数真菌细胞壁的主要成分为己糖或氨基己糖 构成的多糖链，如几丁质、脱乙酰几丁质、纤维 素、葡聚糖、甘露聚糖、半乳糖等，
2）一种真菌的细胞壁组分并不是固定的，在其不同 生长阶段，细胞壁的成分有明显不同。
微生物学复习资料-西北农林科技大学森保102班
一、名词解释微生物：是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称（<0.1mm)。
包括全部真细菌(细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体和蓝细菌)和古细菌，以及真核生物中的部分真菌（主要是霉菌和酵母菌）、单细胞藻类和原生动物，还包括非细胞生物（病毒;类病毒；拟病毒；朊病毒）。
自然发生说：认为微生物是由食品中的无生命物质转化而来的，无需空气中的“胚种”。
原生质体：指在认为条件下，用溶菌酶除尽有细胞壁或用青霉素抑制新生细胞壁合成后，所得到的仅有一层细胞膜包裹的圆球状渗透敏感细胞。
革兰氏阳性细菌最易形成原生质体。
蕈菌：又称伞菌，能形成大型肉质子实体的真菌，大多数担子菌类和极少数子囊菌类。
温和噬菌体：在短时间内能连续完成这五个阶段而实现其繁殖的噬菌体，称为烈性噬菌体；反之则称为温和噬菌体。
营养：生物体从外部环境摄取其生命活动所必需的能量和物质，以满足其生长和繁殖需要的一种生理功能。
营养物：有营养功能的物质（包括光能），提供生命活动的结构物质、能量、代谢调节物质和良好的生理环境。
生物氧化：在活细胞内的一系列产能性氧化反应的总称。
一系列酶在温和条件下按一定次序的催化，放能分阶段进行，释放的能量部分贮藏在能量载体中。
呼吸链：线粒体内膜上存在多种酶与辅酶组成的电子传递链，可使还原当量中的氢传递到氧生成水。
纯培养：从一个单细胞繁殖得到的后代称为纯培养。
次级代谢：某些微生物为了避免在初级代谢过程中某种中间产物积累所造成的不利作用而产生的一类有利于生存的代谢类型次生代谢物：某些微生物生长到稳定期前后，以结构简单、代谢途径明确、产量较大的初生代谢物作前体，通过复杂的次生代谢途径合成的各种结构复杂的化学物。
灭菌：采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施，分为杀菌和溶菌。
消毒：采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体或动物、植物有害的病原菌而对被消毒的对象基本无害的措施。
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蔗糠６， ０ 鼓硫酸镁 。 、 ． 琼脂 ２ ， ５ ０水 １０ 毫升， ００ 自然 ｐ 约 ６ ） Ｈ（ ． ０ ５ ２培养方法 ． 用接种环将菌种接种在试 管斜面上， ２℃ 恒温箱培养 ５ 天， 置 ８ －７ 待斜面 上长满绿色抱子或浅黄色厚垣抱子后，置冰箱 （℃左右） ４ 保存备用。 （ 四）三角瓶固体曲的培养 １培养基 ． 蔗糠 ７－８外、蘑菇（ ０ ０ 或草 菇） 菌柄细胞壁 ２－３ 多、 ０ ０ 硫酸按 ０ 外２ ． ）磷酸 ５ 二氢钾 ０ ５ ， ． ％２ 硫酸镁 ０ ２ ０ａ ０ ） ． ５ ，水 ２ －２ ０ ｆ） ｏ ． ． ２ ４
转／ ３ 分， 分钟） ，然后将糊状物倒人尼龙袋中， 用大量水多次冲洗，除掉可溶于水的细胞内含
物， 洗至挤出的水清亮为止， 其残渣即为用作诱・
导物的菌柄细胞壁。将残渣中的水挤干后置供 箱（０ ７℃左右） 烘干， 再用粉碎机粉碎， 并通过４ ０ 目筛孔， 保存备用。 （ 三）试管斜面菌种的培养
１培养基（ ． 克）
本文主要介绍溶壁酶 菌曲的培养及提酶方法。
菌
（ 一）菌种
曲
培
养
采用长梗木霉（ｒｈ ｅ ａ ｇｒｈｔ Ｔｉｏ ｒ ｌ ｉａ ｉｕ ｃ ｄ ｍ ｏ ｂｃａ ｍ ｎ Ｒｆ） ８１菌株。此菌株是本所原纤维素酶 ｉｉ ９ －１ ａ ５
组从土壤中分离、 并经诱发、 筛选获得的 Ｆ Ｐ高 ‘ 酶活菌株〔 ， （ 二）诱导物
（ 下转第 ２ 页） ４
针菇 （ｏｙｉｖｒｐ ） Ｃｌｂ ｅｔｅ 、光帽黄伞 （ｈｉａ ｌ ａ ｒ ｓ ｌｉ Ｐｏｏ ｌｔ
ｎｍ 熨）和云芝 （ ｏｏ ｓ ｓｏ ｒ 等菌丝 ａ ｅ。 Ｃｒｌ ｖ ｉｌ ） ｉｕ ｅ ｃｏ ｒ 时，获得了大量完整的原生质体。在酶解蘑菇
（ｇ ｉｓ ｐｕ 、香菇 （ｅｉ ｓ ｄ） Ａａｃ ｂ ｏ ｓ ｒｕ ｉ ｒ） ｓ Ｌｎｎ ｅ ｅ ｔｕ ｄ ｓ ｏ 鸡纵 （ｏｙｉａ ｕｉｓ 、灵芝 （ａｏ ｒａ Ｃｌｂ ｌ 二ｎ ａ ｌ ａ ｂ ｏ） Ｇｎ ｅ ｄｍ
倍３ ） Ｏ ２培养方 法 ． 先将试管斜面菌种制成 抱
广的绿色木霉 （ｒｈｄ ｍ ｓ ）作为产酶菌 Ｔｉｏｅ ａ ｃ ｒ ｐ ｐ
株， 并多方寻找诱导物， 设法诱导出与担子菌细 胞壁成分相应的酶系，同时借鉴纤维素酶的制
备方法【４］经过两年的试制 ， ２，， ，５ 现已制备 出可溶
解高等担子菌细胞壁的酶制剂（ 简称溶壁酶） 。
将培养好的三角瓶固体曲，每瓶加蒸馏水 １０ ２ １－１０毫升， 浸透菌曲， ３ ℃ 下浸泡二小 在 ０ 剂。酶制剂要置于低温干燥处保存。 若无冷冻干燥条件， 也可采用丙酮沉淀法。 预冷丙酮 ， 生成絮状沉淀后， 离心弃清液 ， 沉淀 部分再用冷丙酮洗 ２ －３次， 以除掉水分， 最后 将所得的酶蛋白置于真空干燥器中，将剩余的
遗传
Ｈ Ｒ ＤＴ Ｓ ｅｉ ） （） １－ １ １８ Ｅ Ｅ ＩＡ （ ｉ ｇ ４４ ： ３ ４ ２ Ｂｊ ｎ ９
一 溶高 担子 胞 酶的 备’ 种 等 菌细 壁 制 ‘
邱 芸 廖汉 吴月 景 泉 嫦
（ 东省微生 物研究所， 广 广州）
我们试图以高等担子菌（ 主要是食用菌） 为
材料进行原生质体融合，以期获得新型杂种菌 株。我们先后采用过制备植物原生质体的纤维 素酶 （ 上海东风生化试剂厂生产 和从 日本进 口） 制备酵母菌原生质体的蜗牛酶 （ 、 来源于中 国科学院生物物理研究所）和制备细菌原生质 、 体的溶菌酶（ 上海禽蛋二厂生产） 单独或混合酶 解担子菌菌丝， 均难以获得担子菌原生质体。 其 原因可能是它们的细胞壁的成分不 同所 致 Ｌ 习 。 据报道， 担子菌细胞壁的主要成分是葡聚糖（ 包 括 “葡聚糖和 ｆ葡聚糖） 一 ｌ － 和几丁质［１ ［ 。目前， ７ ， ９ 国内外市场尚无适合制备担子菌原生质体的商 品酶供应［１ 为此，我们从 １７ 年开始试制 １。 ７ ， ８ ９９ 溶担子菌细胞壁的酶。众所周知，多种微生物 都能产生溶菌酶，而要使产生溶菌酶的微生物 分泌某些特别的酶系时，则需要在生长培养基 中加人相应的诱导物【－。我们选用了应用最 ３９ ，７ ７
． ５ 时， 用尼龙袋挤出酶液， 酶液经冷冻离心（０ ０ Ｃ， 即在提纯酶液中缓慢加人 ２ 倍于酶液体积的
３０ 转／ ３ 分钟） 弃沉淀， ００ 分，０ 后， 将上清酶液用
Ｇ５ － 号细菌漏斗抽滤， 收集滤液即为粗酶液。 （ 二）沉淀粗酶蛋白 将粗酶液在冰浴 （ 一一１０） 一５ ０ 和搅拌条 Ｃ
水分抽干；或将酶蛋白置于用无水氯化钙作干
Ｑｕ ｎ ｙｎ ａ ： ｅａａ ｏ ｏ ａ Ｅ ｚｍｅ ｓ Ｊ ｇ ｕ ｅ ｌ Ｐ ｐ ｒ ｉｎ ｎ ｙ ｆｒ ： ｔ ｒ ． ｔ ｆ ｎ ｏ Ｌ ｓ ｇ ｅ ｌ Ｗａｌ Ｈ ｇ ｅ Ｂ ｓ ｉｍｙｅ ｓ ｙｉ ｔ Ｃ ｌ ｌ ｏ ｉｈｒ ｉ ｏ ｃｔ ｎ ｈ ｅ ｆ ａｄ ｅ
为诱导出与高等担子菌细胞壁成分相应的 葡聚糖酶、 几丁质酶等酶系， 并尽量减少核糖核
酸酶和蛋 白酶等对原生质膜有损害的酶系 ，选
定去掉细胞内含物的蘑菇（ 或草菇） 菌柄细胞壁 作诱导物加入木霉培养基中。 制备诱导物时， 将 开伞的蘑菇 （ 或草菇） 子实体的菌柄摘下， 洗净
后用高速组织捣碎机捣成糊状 （００ ０ ０ ８０－１， ０ ０
１ ）本实验在黄季芳同 志和 邓庄同志 指导 下进行 。 ２ ）对加水量之比。
３ ）对干料之 比。
１ ３
， 取沉淀即为粗酶蛋白。 子悬浮液 （ 每支斜面菌种制悬液约 １０毫升） ３ 分钟） 弃上清液， ０ ， ０ （ 三）提纯与千燥 然后接种到 １０ 毫升三角瓶培养基中（ ００ 每瓶装 用适量的洗脱液（ 洗脱液成分为：硝酸钾、 千料２ 克）每瓶接种 ５ ０ ， 毫升， 摇匀后置 ２℃恒 ８ 柠檬酸钠各 ２ 毫克溶于 １０ 毫升蒸馏 ００ 温箱培养３ 天， －４ 培养到长出大量菌丝并有少 氯化钙、 水） 将粗酶蛋白充分溶解后， 经冷冻离心 （０ ０ Ｃ， 量抱子时提酶为好。 ３０ 转／ ３ 分钟）弃沉淀， ００ 分，０ ， 所得上清液即为 提 酶 方 法 提纯酶液。 将提纯酶液倒人洁净培养皿中， 冷 冻干燥 （ 温度不超过 ２０）后即得灰白色酶制 ０ Ｃ （ 一）粗酶液的制备
种担子菌菌丝 ， 也得到了数量不等的原生质体。
１４
在酶 解侧耳 （ｌ ｒｕ ｓｏ ｃｕ， 黑木 耳 Ｐｅ ｏ ｓ ｊ－ｌ） ｕ ｔ ａｒａ 归ｕｉｌｉ ａｒｕ ） 毛 木 耳 （ｕｉ ｌｉ ｒｕ ｒ ｕｃｌ 、 ｃ ａａ ｉ ａ Ａ ｒｕ ｒ ｃ ａａ ｐｌ ｈ） ｏ ｔｃａ、近裸香菇 （ ｅｔｕ ｓ ｎｄｓ、金 ｙｉ ｒ Ｌｎ ｎｓ ｕｕ） ｉ ｕ ｂ
燥剂的密封器皿中将水吸干。
件下缓慢加人９多的预冷酒精（ ５ 化学纯）最终 ， 使酶液中的酒精浓度达６多， ５ 然后置冰箱（０ ４ Ｃ
左右） 中静置数小时 （－１ 小时均可）待絮状 ４ ６ ， 采用 １ ．％的溶壁酶浓度，．克分子浓 －１ ５ ０ ４ 酶蛋白充分下沉后， 轻轻倒掉（ 或虹吸） 上清液， 在 ４ ５ 剩下的沉淀部分经冷冻离心（０， ０ 分、 度的氯化钾作渗透压稳定剂， ３－３℃ 下酶 （ Ｃ ３０ 转／ ０ ０
溶壁酶的酶解效果
图 １ 草菇菌丝及其原生质体（ ０ ３ ｘ ０ ）
： 草菇菌丝 宝 ｂ 草菇原生质体和未完 全溶壁的菌丝； 。 草菇菌丝原生质体。 ． ． ．
解草菇 （ ｏ ａｏａ ｖ ｅ）菌丝 （５ Ｖｌ ｒｌ ｖｌｃ ｖ ｉｌ ｏａ ａ ３０ Ｃ下培 养 ４－５ 小时） １ 小时内即可释放出大量 ６ ０ ， －２ 有活力的原生质体（ １， 图 ）其数量可达 １５ ０ ０－１６ 个／ 毫升酶液以上（ ０ －１ 用 ． ． ５ ０克的鲜菌丝，置 ５ 毫升酶液酶解之平均数） 。制备的原 生质体 置４ ℃冰箱保存， 可存活 ３ 天（ －５ 原生质体的活 力用染色法鉴定） 。 在相似的酶解条件下， 先后酶解过以下 １ ２