发酵过程中谷氨酸含量的测定
高效液相色谱法测定酵母抽提物中谷氨酸的研究
安徽农学通报，Anhui Agri.Sci.Bull.2018，24（18）高效液相色谱法测定酵母抽提物中谷氨酸的研究李素媛喻玺刘恒余佳余术黄龙赵吉媛（湖北三峡食品药品检验检测中心，湖北宜昌443000）摘要：采用高效液相色谱柱前衍生法测定酵母抽提物中谷氨酸的含量，以苯异硫氰酸作为柱前衍生试剂，在C18柱上，弱碱性条件以保留时间定性、外标法定量。
结果表明，在0.2～1.0mg/mL线性范围内，线性相关系数为0.999816，相对标准偏差小于5%，回收率在95%～110%，样品检测结果良好。
该方法还可以用于其他氨基酸的检测。
关键词：高效液相色谱法；谷氨酸；柱前衍生中图分类号O657.72文献标识码A文章编号1007-7731（2018）18-0018-02 Determination of Glutamic Acid in Yeast Extract by HPLCLi Suyuan et al.（Three Gorges Product Quality Inspection and Testing Center，Yichang443000，China）Abstract：The content of glutamic acid in yeast extract was determined by high performance liquid chromatography column derivatization.Benzo thiocyanic acid was used as a pre column derivatization reagent.On the C18column，the retention time was qualitative and the external standard was quantified under the condition of weak alkali.The re⁃sults show that in the linear range of0.2～1.0mg/mL，the linear correlation coefficient is0.999816，the relative stan⁃dard deviation is less than5%，the recovery rate is between95%～110%，and the sample test results are good.This method can also be used for the detection of other amino acids.Key words：High performance liquid chromatography（HPLC）；Glutamic acid；Pre column derivatization氨基酸是构成蛋白质的基本单元，是动物体合成蛋白质的主要原料，是食品、饲料的营养成分，也是生物工程、生化制药、表面活性剂工业产品的化工原料，因此它们的分离分析引起了人们的关注［1-4］。
发酵饲料原料氨基酸测定方法
发酵饲料原料氨基酸测定方法发酵饲料是一种常用的饲料类型，通过微生物的发酵作用，将有机物质转化为更易被动物消化吸收的形式。
而发酵饲料中的氨基酸是一项重要的营养指标，对于动物的生长发育具有重要影响。
因此，准确测定发酵饲料中的氨基酸含量是非常关键的。
氨基酸是构成蛋白质的基本单位，是生命体内重要的营养成分。
对于动物来说，氨基酸是构建体内蛋白质的基石，对于生长发育和免疫功能的正常运作都至关重要。
而发酵饲料中的氨基酸含量直接影响到动物对蛋白质的摄入和利用效率。
为了准确测定发酵饲料中的氨基酸含量，科学家们发展了多种测定方法。
以下将介绍几种常见的氨基酸测定方法。
一、色氨酸测定方法色氨酸是一种重要的氨基酸，对于动物的生长和免疫功能具有重要作用。
常用的色氨酸测定方法有高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）。
这两种方法可以通过分离色氨酸与其他氨基酸的峰值，从而准确测定色氨酸的含量。
二、赖氨酸测定方法赖氨酸是一种必需氨基酸，对于动物的生长和肌肉发育至关重要。
常用的赖氨酸测定方法有离子交换色谱法（IEC）和高效液相色谱法（HPLC）。
这两种方法可以通过分离赖氨酸与其他氨基酸的峰值，从而准确测定赖氨酸的含量。
三、苏氨酸测定方法苏氨酸是一种重要的氨基酸，对于动物的生长和免疫功能具有重要作用。
常用的苏氨酸测定方法有高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）。
这两种方法可以通过分离苏氨酸与其他氨基酸的峰值，从而准确测定苏氨酸的含量。
四、缬氨酸测定方法缬氨酸是一种必需氨基酸，对于动物的生长和肌肉发育至关重要。
常用的缬氨酸测定方法有离子交换色谱法（IEC）和高效液相色谱法（HPLC）。
这两种方法可以通过分离缬氨酸与其他氨基酸的峰值，从而准确测定缬氨酸的含量。
以上介绍了几种常见的发酵饲料中氨基酸测定方法，这些方法可以帮助我们准确测定发酵饲料中氨基酸的含量，为合理配制饲料提供科学依据。
在实际应用中，我们可以根据不同的需求选择合适的方法，以确保动物获得足够的氨基酸营养，促进其生长和发育。
谷氨酸发酵 实验报告(1)
兰州大学生命科学学院发酵工程实验谷氨酸发酵实验摘要：谷氨酸棒杆菌在合适的培养基中经摇瓶培养能快速生长，为发酵实验准备菌种。
还原糖的消耗和谷氨酸的生成是衡量谷氨酸发酵是否正常的重要标志，所以在发酵过程中，要求每两个小时测定一次还原糖的含量，并据此作出发酵的糖耗曲线。
关键字：种子的制备、发酵罐、谷氨酸棒杆菌、PH的调节引言：了解发酵工业菌种制备工艺和质量控制，为发酵实验准备菌种。
了解发酵罐罐体构造和管道系统，掌握对发酵罐及其管道系统的灭菌方法。
了解发酵罐的操作，完成谷氨酸发酵的全过程。
还原糖的消耗和谷氨酸的生成是衡量谷氨酸发酵是否正常的重要标志，在发酵后期当还原糖降至1％以下时，表明谷氨酸发酵已经完成。
所以在发酵过程中，要定时测定还原糖的含量，要求每两个小时测定一次，并据此作出发酵的糖耗曲线。
掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
学习使用茚三酮比色法检测发酵液中谷氨酸浓度的方法。
谷氨酸棒杆菌通常在0-12小时为生长期，12小时后为产酸期，所以应该从12小时以后开始检测谷氨酸的含量，每两个小时取一次样。
原理:谷氨酸棒杆菌在合适的培养基中经摇瓶培养能快速生长，得到大量健壮的种子。
谷氨酸棒杆菌生长速度较快，接种量一般在1-2%。
谷氨酸发酵是有氧发酵，发酵罐由蒸汽管道、空气管道、加料出料管道等组成，在实验之前必须先对发酵罐进行空消。
谷氨酸产生菌是代谢异常化的菌种，对环境因素的变化很敏感，在适宜的培养条件下，谷氨酸产生菌能够将50％以上的糖转化成谷氨酸，而只有极少量的副产物。
如果培养条件不适宜，则几乎不产生谷氨酸，仅得到大量的菌体或者由发酵产生的乳酸、琥珀酸、а－酮戊二酸、丙氨酸、谷氨酰胺、乙酰谷氨酰胺等产物。
生产上的中间分析只测定一些主要数据，只能显示微生物代谢的一般概况而不能反映细微的生化变化。
因此，进一步完善生化分析项目，从生化角度对发酵进行控制，从而确定最适宜的工艺条件是提高发酵水平的重要课题之一。
高效液相色谱法测定酵母抽提物中谷氨酸的研究
高效液相色谱法测定酵母抽提物中谷氨酸的研究作者：李素媛喻玺刘恒余佳余术黄龙赵吉媛来源：《安徽农学通报》2018年第18期摘要：采用高效液相色谱柱前衍生法测定酵母抽提物中谷氨酸的含量，以苯异硫氰酸作为柱前衍生试剂，在C18柱上，弱碱性条件以保留时间定性、外标法定量。
结果表明，在0.2～1.0mg/mL线性范围内，线性相关系数为0.999816，相对标准偏差小于5%，回收率在95%～110%，样品检测结果良好。
该方法还可以用于其他氨基酸的检测。
关键词：高效液相色谱法；谷氨酸；柱前衍生中图分类号 O657.72 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2018）18-0018-02Determination of Glutamic Acid in Yeast Extract by HPLCLi Suyuan et al.（Three Gorges Product Quality Inspection and Testing Center，Yichang 443000，China）Abstract：The content of glutamic acid in yeast extract was determined by high performance liquid chromatography column derivatization. Benzo thiocyanic acid was used as a pre column derivatization reagent. On the C18 column，the retention time was qualitative and the external standard was quantified under the condition of weak alkali. The results show that in the linear range of 0.2～1.0mg/mL，the linear correlation coefficient is 0.999816，the relative standard deviation is less than 5%，the recovery rate is between 95%～110%，and the sample test results are good. This method can also be used for the detection of other amino acids.Key words：High performance liquid chromatography（HPLC）；Glutamic acid；Pre column derivatization氨基酸是構成蛋白质的基本单元，是动物体合成蛋白质的主要原料，是食品、饲料的营养成分，也是生物工程、生化制药、表面活性剂工业产品的化工原料，因此它们的分离分析引起了人们的关注[1-4]。
发酵法生产谷氨酸工艺试验
发酵法生产谷氨酸工艺实验指导书一、实验目的与意义：实验设置涉及生物产品谷氨酸生产过程的基本单元操作和方法，强调锻炼基本操作能力，掌握使用摇床对谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)的工业菌株进行谷氨酸发酵产酸验证的方法；学习控制发酵培养基的组成与摇床的转速、温度、浓缩糖流加、尿素补充等试验技术与手段；掌握发酵罐的使用方法与利用发酵罐发酵生产氨基酸的方法。
掌握各种发酵实验仪器的使用方法及注意事项；熟悉用浓缩连续等电法、离子交换法等从发酵液中提取谷氨酸的基本流程。
二、主要实验内容与要求：1.培养基的配制与菌种培养学会配制斜面培养基、种子培养基和摇瓶培养基并掌握各种培养基的灭菌方法。
培养基组成：活化斜面培养基：无水葡萄糖1，蛋白胨10，牛肉膏10，酵母膏5，NaCl 2.5，琼脂条20，pH7.0-7.2 0.1MPa 20min种子培养基：葡萄糖25 玉米浆30ml 豆浓20ml K2HPO4 1.5 MgSO4 0.4 尿素2 豆浓20ml 调pH值为7.0-7.2，121℃灭15min发酵培养基：葡萄糖150 Na2HPO4 1.0 KCl 1.2 MgSO4 0.8 MnSO4 2mg FeSO4 2mg VB1 0.2mg 豆浓20ml 调pH为7.0-7.2，115℃灭15min2.种子生长曲线的绘制种子质量的优劣不仅与培养基组成有关，还与种子的生理性状有关菌种接入种子瓶后，要经过延滞期、对数生长期、静止期和衰亡期。
种龄太短的种子转发酵，往往会出现前期生长缓慢、整个发酵周期延长、产物开始形成的时间推迟等现象，甚至造成异常发酵；种龄过长则会引起菌体过早自溶，导致产物生成能力下降。
摇瓶种子培养条件pH控制在7.0左右，温度32℃，220r/min摇床上培养，每2h取样测定菌体光密度OD620nm，做出生长曲线。
根据自己制作的种子生长曲线，能够说出菌种接入种子培养基后何时进入对数生长期，何时结束对数生长转入稳定期，因此选择何时作为接种时间。
发酵饲料原料氨基酸测定方法
发酵饲料原料氨基酸测定方法发酵饲料是一种常见的饲料形式，通过微生物的发酵作用，可以将一些廉价的原料转化为高质量的饲料。
而饲料中的氨基酸是动物生理功能的基本组成部分，也是评价饲料质量的重要指标之一。
因此，准确测定发酵饲料中氨基酸的含量对于饲料生产具有重要意义。
常用的发酵饲料原料氨基酸测定方法主要有以下几种：一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是一种常用的氨基酸测定方法。
该方法通过将样品溶解并进行适当的预处理后，将氨基酸分离并通过色谱柱进行定量分析。
这种方法具有准确度高、灵敏度高、分析速度快等优点，被广泛应用于发酵饲料中氨基酸的测定。
二、气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的氨基酸测定方法。
该方法将样品中的氨基酸通过酸水解等预处理方法转化为气体化合物，然后通过气相色谱仪进行分离和定量分析。
这种方法具有分离效果好、分析速度快等优点，但对于一些热稳定性较差的氨基酸，需要进行适当的保护处理。
三、生化分析法生化分析法是一种传统的氨基酸测定方法，主要通过酶促反应将样品中的氨基酸转化为其他化合物，并通过光度计等仪器进行测定。
这种方法操作简便，灵敏度较高，但对于一些特殊的氨基酸，可能存在反应不完全的情况，影响测定结果的准确性。
以上三种方法在发酵饲料中氨基酸测定中都有其独特的优势和适用范围。
在选择合适的方法时，需要考虑样品的特性、测定的准确度要求、设备的可用性等因素。
此外，为了提高测定结果的准确性，还需要注意样品的采集和保存，避免外界污染和氨基酸的降解。
总结起来，发酵饲料原料氨基酸测定方法包括高效液相色谱法、气相色谱法和生化分析法等。
选择合适的方法可以准确测定发酵饲料中氨基酸的含量，为饲料生产提供科学依据，提高饲料的质量和营养价值。
同时，为了保证测定结果的准确性，还需要注意样品的采集和保存等实验细节。
综上所述，发酵饲料原料氨基酸测定方法对于饲料生产具有重要意义。
食品发酵中谷氨酸酶活性的测定与影响因素研究
食品发酵中谷氨酸酶活性的测定与影响因素研究食品发酵是一种利用微生物代谢产生的酶催化作用，将食材进行转化、降解和提醒的过程。
在食品发酵过程中，谷氨酸酶是一个重要的酶类，它能够促进谷氨酸的转化，影响食品的口感和营养价值。
本文将探讨食品发酵中谷氨酸酶活性的测定方法和影响因素。
首先，测定谷氨酸酶活性的方法有很多种，其中常用的方法有色谱法、比色法和生物传感器法等。
色谱法是一种比较准确的测定方法，但操作较为复杂，需要专业的仪器设备和技术。
比色法是一种简便、快速的测定方法，通过比色剂与酶反应产生的产物发生颜色变化，可以直接测定酶活性。
而生物传感器法则是利用生物材料的特殊性质来测定酶活性，具有灵敏度高、反应时间短等特点。
根据不同实验需求和设备条件，选择适合的测定方法进行研究。
其次，影响食品发酵中谷氨酸酶活性的因素有多方面的因素，如pH值、温度、基质浓度和金属离子等。
pH值是影响酶活性的重要因素之一，不同酶对pH值的适应性不同。
例如，在发酵过程中产生的酸碱度变化会影响谷氨酸酶的活性，从而影响最终食品的品质。
另外，温度也是影响谷氨酸酶活性的因素之一，适宜的温度可以提高酶活性，加快发酵反应。
而过高或过低的温度则会导致酶的变性，丧失催化作用。
此外，基质浓度也是影响谷氨酸酶活性的重要因素。
基质是酶作用的底物，适宜的基质浓度可以提高反应速率，但过高的基质浓度则会抑制酶的活性。
最后，金属离子也可以影响谷氨酸酶活性。
一些金属离子可以作为辅因子或抑制剂参与酶活性的调节。
不同金属离子对谷氨酸酶的影响程度各异，需要具体实验来验证。
综上所述，食品发酵中谷氨酸酶活性的测定与影响因素是一个复杂而重要的课题。
科学准确的测定方法和清晰的影响因素研究可以为食品发酵行业提供理论指导和实践参考。
随着科学技术的发展，相信在未来的研究中，我们能够更全面地了解谷氨酸酶活性的测定与影响因素，为食品发酵工艺的优化和创新提供更好的支持和保障。
谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量测定试剂盒说明书
货号: QS1906 规格：50管/48样谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量测定试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：Gu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。
此外，Glu还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。
测定原理：利用专用提取液提取，然后用显色剂进行显色，显色后在570nm下进行测定。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和配制：试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL蒸馏水，充分混匀溶解，用不完的试剂仍4℃避光保存。
谷氨酸提取：1、细菌或培养细胞样品：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议1000万细菌或细胞加入2mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.2g组织，加入2mL试剂一），进行冰浴匀浆。
8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）或细胞培养液样品：按照血清（浆）或细胞培养液体积（mL）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.2mL血清（浆）或者细胞培养液加入2mL试剂一），进行冰浴匀浆。
8000g 常温离心10min，取上清，置冰上待测。
测定操作1、分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。
测定管-A对照管。
对照管只要做一管。
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发酵过程中谷氨酸含量的测定
发酵过程中谷氨酸含量的测定 [适用对象] 生物工程专业 [实验学时] 8学时
一、实验目的
了解华勃氏呼吸仪的使用方法，熟悉用华勃氏呼吸仪测定谷氨酸含量。
二、实验原理
发酵液中谷氨酸含量的测定，普遍使用华勃氏呼吸仪，利用专一性较高的大肠杆菌L-谷氨酸脱羧酶，在一定温度(37?)、一定pH值(4.8,5.0)和固定容积下，使L-谷氨酸脱羧生成二氧化碳。
通过测量反应系统中气体压力的升高，可计算出反应生成的二氧化碳的体积，然后换算成试样中谷氨酸的含量。
三、仪器设备
华氏呼吸仪，1毫升移液管，检压管，反应瓶。
四、相关知识点
大量形成谷氨酸是生产的目的，目前均采用华勃氏呼吸仪测定法。
一般从发酵12小时开始，每隔2-4小时测定一次。
五、实验步骤
(一)检压管及反应瓶的准备
将标定完反应瓶常数的检压管及反应瓶磨砂口上的高真空油脂用毛边纸擦试干净，再用棉花用少量二甲苯擦一次，用自来水清洗净后再用稀洗液浸泡约3小时，用自来水洗净，蒸馏水淋洗2次，去水后低温烘干。
在检压管下端按上一干净的短橡皮管，橡皮管末
端用玻璃珠塞住。
小心将检压管固定在金属板上，在橡皮管内注入检压液。
打开三通活塞，旋动螺旋压板，检压液应能上升到最高刻度处，液柱必须连续，不能有气泡，两边高度应一致。
(二)发酵液的稀释
本法要求试样含谷氨酸0.05,0.15,，否则反应生成二氧化碳太多，压力升高太大以致超过检压管刻度而无法读数。
一般发酵终了发酵液含谷氨酸6,8,，故应稀释50倍:吸取发酵液2mL，注入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀即可。
(三)加液
分别吸取上述发酵稀释液1mL，pH5.0醋酸-醋酸钠缓冲液0.2mL和蒸馏水
1.0mL，置入反应瓶主室，另吸取0.3mL 2,大肠杆菌谷氨酸脱羧酶液置于反应瓶侧室内，使总体积为2(5mL。
主侧二室瓶口均以活塞脂涂沫，旋紧瓶塞，将反应瓶用小弹簧紧固在检压管上，将检压计装在仪器的恒温水浴振荡上
(四)预热
将仪器的电源接通，调节水浴温度为37?，打开三通活塞，旋动螺旋压板，调节液面高度达250mm以上，开启振荡;使在37?水浴中平衡约10分钟。
(五)初读
关闭三通活塞，调节右侧管液面在150mm处，再振荡约5分钟，左侧管液面达到平衡后，记下读数Hl mm。
若H1变化较大，则需要重新平衡。
(六)反应
记下H1后，用左手指按紧左侧管口，立即取出检压计迅速将酶液倒入主室内(不要倒入中央小杯里)，稍加摇动后放回水浴中，放开左手指，继续振荡让其反应，20分钟后调节右侧管液面于150mm处，振荡3分钟开始读数，继续振荡3分钟后再读数，直至左侧管液柱不再上升为止。
记下反应完的左测管读数H2mm。
(七)空白试验
由于测压结果与环境温度、压力有关，故测定时需同时作一个空白对照。
空白对照瓶不将酶液倒入主室反应即可，或者在反应瓶内置入2.5mL蒸馏水代替，同样进行初读和终读，其差值即为空白数H。
空白读数之差可为正、负值。
(八)计算
谷氨酸含量(克/100毫升),(H2,H1,H)×K×N×100?1000
式中:K为常数， N 为稀释倍速，H2、H1、H 为检压管
反应后、反应前和空白管的读数
六、实验报告要求
实验报告书写统一格式，实验全部完成后，统一交阅，且要求写实验心得。
七、思考题
影响华氏呼吸仪测定精度的主要因素有哪些,
八、实验成绩评定办法
主要评分点:原理描述、实验流程、数据记录、解决问题的能力、
实验结果、等。
平时和实验报告各占1/2。