活螨、大肠杆菌检查操作规程
大肠杆菌标准检测流程
大肠杆菌标准检测流程一、样品采集。
这可是检测的第一步呢，就像找宝藏得先知道宝藏大概在哪一样。
采集样品的时候得特别小心，要选对地方。
如果是检测食品里有没有大肠杆菌，那就要从食品的不同部位采集，像苹果的话，表面和果肉都得取点样，可不能只取一个地方就完事儿了。
要是检测水呢，那也得取有代表性的水样，比如说从水的表层、中层和底层都取一点混合起来，这样检测出来的结果才更靠谱。
采集样品的时候工具也要干净无菌，不然就把杂菌带进去了，那检测结果可就乱套了。
二、样品处理。
采集好样品就得处理啦。
对于固体的样品，像是食物之类的，得把它弄碎成均匀的小颗粒，就像把一块大蛋糕掰成好多小碎块一样。
然后加入一些特定的液体，这个液体能让大肠杆菌从食物颗粒里跑出来，进入到液体里，方便我们后续检测。
对于液体样品呢，要是比较浑浊的，可能还得过滤一下，把那些大的杂质去掉，留下清澈一点的液体，这样大肠杆菌在里面就更显眼啦。
三、增菌培养。
处理好的样品就可以进行增菌培养喽。
这就像是给大肠杆菌盖个小房子，还提供好多好吃的，让它们快快繁殖。
把样品放到专门的培养基里，这个培养基就像是为大肠杆菌特制的营养大餐，里面有它们生长需要的各种营养成分。
然后把这个放了样品的培养基放到合适的温度下，一般是37摄氏度左右，这个温度对大肠杆菌来说就像春天的阳光一样温暖舒适，它们就会在里面开心地繁殖起来啦。
这个过程可能得持续一段时间，几个小时到一天不等，就看大肠杆菌们的心情啦，哈哈，其实是看它们繁殖的速度啦。
四、分离培养。
等大肠杆菌繁殖得差不多了，就要把它们从一堆细菌里分离出来。
这时候就用到平板啦。
把增菌后的样品接种到平板培养基上，然后用一种特殊的方法把它们均匀地涂开，就像画画一样把细菌均匀地涂在平板上。
然后把平板放到培养箱里继续培养。
在平板上，大肠杆菌会长成一个个小菌落，每个菌落就像是一个小家庭一样，都是由一个大肠杆菌繁殖出来的。
而且大肠杆菌的菌落有它自己的特点，比如说颜色、形状、大小之类的，通过这些特点我们就能初步判断是不是大肠杆菌啦。
大肠菌群测试片操作流程
大肠菌群测试片检测操作流程1.样品的前处理:(建议使用蔬菜瓜果、河水及大肠菌群标准菌作为样品)（1）蔬菜瓜果：称取25g样品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min制成1:10的样品匀液。
（2）河水：以无菌吸管吸取25mL河水置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
（3）大肠杆菌标准菌：挑取平板上大肠杆菌标准菌的单菌落，于盛有5mL LB 液体培养基的试管中，37℃培养过夜，以此作为菌原液。
用1mL无菌吸管或微量移液器吸1mL菌原液于盛有9mL的稀释液的无菌试管中，制成1:10的样品匀液。
2.样本稀释倍数：用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL的稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸管尖端不要触及稀释液面），振荡试管或换用一只无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
按此操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释液需用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节pH至7.0~7.2。
（1）蔬菜样品的稀释倍数：取100、10-1两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（2）河水样品的稀释倍数：取10-1、10-2两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（3）大肠菌群标准菌的稀释倍数：取10-7、10-8两个进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（4）自来水的稀释倍数：直接取自来水接种进行验证。
3.接种一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液垂直加入到测试片中央，用手轻轻将上层盖下，使检测样品液覆盖整个检测圈（应尽量避免产生气泡），静置1 min使培养基凝固，最后用手轻轻将上层盖下。
大肠杆菌的检测：大肠菌群测定的操作细则(中英文对照版)
大肠杆菌的检测:大肠菌群测定的操作细则大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
1 设备和材料1.1 温箱:36±1℃。
1.2 冰箱:0~4℃。
1.3 恒温水浴:44.5±0.5℃。
1.4 天平。
1.5 显微镜。
1.6 均质器或乳钵。
1.7 平皿:直径为90mm。
1.8 试管。
1.9 吸管。
1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。
1.11 玻璃珠:直径约5mm。
1.12 载玻片。
1.13 酒精灯。
1.14 试管架。
2 培养基和试剂2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。
2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。
2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。
2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。
2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。
2.6 生理盐水。
2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。
3.1 检样稀释3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。
3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。
大肠菌群测定操作规程
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大肠菌群测定操作规程
适用范围：大肠菌群系指一群在 36℃条件下培养 48h 能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革 兰氏阴性无芽孢杆菌。通常用此法作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量。
二． 1.
操作内容： 检验程序： 检样→ 稀释 → LST 发酵管（36±1℃，24±2h）
↓→不产气 → 大肠菌群阴性 → 报告 产气 →BGLG（36±1℃，48±2h） → 不产气 → 大肠菌群阴性 → 报告 产气 → 大肠菌群阳性 → 报告 2. 操作方法：
2.1 以无菌操作，将检样 10ml 被测液放于含有 90ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶 内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成 1：10 的均匀稀释液。 2.2 用 1ml 灭菌吸管吸取 1：10 稀释液 1ml，沿管壁徐徐注入含有 9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的 试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液） ，振摇试管，混合均匀，做成 1：100 的稀释液。 （均 液的 PH 值应在 6.5～７.5 之间，必要时分别用 1mol/L 氢氧化钠（NaoH）或(1mol/L)盐酸（HCL） 调节。 2.3 另取 1ml 灭菌吸管，按上条操作顺序，做 10 倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用 1 支 1ml 灭菌吸管。 2.4 根据食品卫生标准要求或对检污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种 3 管。 2.5 初发酵试验：将待检样品接种于月桂基硫盐胰蛋白胨发酵管内，接种量在 1ml，每一稀释度接种 3 管， 36±1℃文箱内培养 24±2h， 置 观察倒管内是否有气泡产生， 如未产气则继续培养至 48h±2h. 记录在 24h 和 48h 内产气的 LST 肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。 2.6 复发酵试验 用按种环从所有 48h±2h 内发酵产气的 LST 肉汤管中分别取培养物 1 环， 移种于 BGLB 肉汤管中， 36±1℃培养 48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 2.8 报告： 根据证实为大肠菌群阳性的管数， MPN 检索表 查 （见 GB/T4789.3 附表 B） 报告每 100ml ， （g） 大肠菌群的 MPN 值。
大肠杆菌检验大体步骤
大肠杆菌的检验方法(大体步骤)
1、稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液。
2、对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。
每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤,每管接种1mL。
将接种管置于36±1℃培养48±2h。
3、将所有48±2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中，在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养48±2h。
4、取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板,36±1℃培养24±2h。
5、如有黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落用接种针从每个平板上至少挑取2个典型菌落移种到营养琼脂斜面上,36±1℃培养18～
24h。
6、将斜面培养物移种到色氨酸肉汤（24h±2）、MR-VP培养基(48±2h)、Koser氏枸椽酸盐肉汤(96h)、LST肉汤(48±2h)、革兰氏染色.观察判定是否是大肠杆菌。
简述大肠杆菌的鉴定流程
简述大肠杆菌的鉴定流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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在进行大肠杆菌鉴定之前，需要做好充分的准备。
活螨检查法标准
目的：规范活螨检查法标准操作规程。
适用范围：活螨检查法检验。
责任：化验员实施本操作规程，化验室主任负责监督本规程正确执行。
标准依据：《中华人民共和国药典》2005年版二部程序：活螨检查法1. 简述螨，属于节肢动物门，蛛形纲，蜱螨目。
种类多，分布广。
根据其生活习性，分为自由生活和寄生生活两种类型。
在土壤、池沼、江河和湖海里，动、植物体上，贮藏食品和药品中，都可能存在。
药品可因其原料、生产过程或包装、运输、贮存、销售等条件不良，受到螨的污染。
螨可蛀蚀损坏药品，使药品变质失效。
螨可引起皮炎及消化、泌尿、呼吸系统的疾病。
直接危害人体健康或传播疾病。
因此，药品特别是中成药，必须进行活螨检查。
2. 仪器及用具2.1 显微镜2.2 放大镜（5～10倍）、实体显微镜2.3 解剖针、发丝针、小毛笔解剖针（或用一段长约10cm、直径为0.1cm金属棒，将其一端磨尖：其尖端宜尖细且粗糙，否则不易挑取体表光滑的螨体。
发丝针：由一根长约10cm的小金属棒，将其一端磨成细尖，另取长约1.5cm 的头发一根，以其长度的一半紧贴在金属棒的尖端上，用细线将其缠紧，然后黏上加拿大树胶或油漆即得。
适用于挑取行走缓慢且体表刚毛较多的螨体。
小毛笔，即绘图毛笔。
适用于挑取活动快的螨类，笔锋宜尖细，以免螨体夹在毛笔中不易挑出。
2.4 载玻片、盖玻片2.5 酒精灯2.6 培养皿或小搪瓷盘（内衬黑色纸片）2.7 扁形称量瓶（高3cm、宽6cm）2.8 30%甘油溶液（简称甘油溶液）2.9 饱和食盐水：市售食盐（或氯化钠），配成约36%的水溶液，煮沸，过滤，备用2.10 封固液3.活螨的检查方法3.1 螨的形态特征3.1.1 螨的体形微小，多在1mm以下。
一般呈卵形或椭圆形，无头、胸、腹界限。
幼螨足三对，若螨足四对，成螨足多数为四对。
足通常由六节组成。
口器向前端突出，螯肢常呈螯钳状，有齿，由2～3节组成。
须肢节数因种类而异，由1～2节到5节组成。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程《微生物限度检查标准操作规程》一、目的微生物限度检查是药品、食品、化妆品等产品质量的重要指标之一，其目的是为了保障产品的安全性和稳定性。
本标准操作规程旨在规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、范围本标准操作规程适用于药品、食品、化妆品等产品的微生物限度检查，包括大肠菌群、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌等微生物指标的检查。
三、检查设备和试剂1. 培养基：根据不同的微生物指标选择适当的培养基，如大肠培养基、Mannitol盐琼脂、Sabouraud葡萄糖琼脂等。
2. 培养皿：使用符合规定的试验培养皿。
3. 培养箱：保证培养条件的恒温培养箱。
4. 其他常用实验用具：包括无菌采样容器、吸管、移液器、无菌培养皿等。
四、操作流程1. 样品采集：从产品中采集适量样品，保持无菌状态。
2. 制备稀释液：根据样品的特性，选择适当的稀释液将样品进行适当稀释。
3. 接种培养：将稀释后的样品接种在适当的培养基上，并在符合条件的培养箱中进行培养。
4. 观察和统计：观察培养皿中微生物的生长情况，统计出微生物的数量。
5. 结果判定：根据标准规定的微生物限度标准，判断检测结果是否符合规定。
五、质量控制1. 实验员必须进行严格的无菌操作训练，并使用正确的个人防护用具。
2. 培养基的质量必须符合规定，避免培养基带有细菌污染。
3. 检查设备必须经过定期的检查和校准，保持正常的工作状态。
4. 标本的采集、处理、保存和运送必须符合规定，避免外界的污染和干扰。
六、结果报告根据检测结果和规定的限度标准，出具检测报告，标明产品的微生物限度是否符合规定，以及具体的检测结果数据。
七、总结微生物限度检查是产品质量检验的重要环节，严格按照标准操作规程进行操作，可以保证检测结果的准确性和可靠性。
实验员在操作过程中也需严格遵守规程，做好个人防护措施，确保实验室的安全和卫生。
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4.1.3.2.1 有虫粉现象的片，可用直检法或漂浮法检查。同时注意检查药瓶口内壁与内盖有无活螨。
4.1.5.5.2.4 干燥：制成的玻片标本必须干燥，一般将玻片标本放在50~60℃的温箱内干燥约一周或放载玻璃干燥器中使之失水干燥。也可在室温下放置一个月左右，令其自然干燥。
4.1.5.5.2.5 封固：标本干燥后，在盖玻片周围用指甲油或加拿大树胶或油漆封固，以便长期保存。
4.2大肠杆菌检查法
4.2.1简述
4.内容：
4.1活螨检查法
4.1.1．简述
4.1.1.1螨，属于节肢动物门，蛛形钢，蜱螨目。种类繁多，分布甚广。其生活习性各异，分为自由生活和寄生生活两种类型。在土壤、池沼、江河和湖海里，动、植物体上，贮藏食品和药品中，都可能有它们的存在。
4.1.1.2药品可因其原料、生产过程或包装、运输、贮存、销售等条件不良，受到螨的污染。
4.1.2.8 30%甘油溶液（简称甘油溶液）
4.1.2.9 饱和食盐水：市售食盐（或氯化钠），配成约36%的水溶，煮沸，过滤，备用
4.1.2．10 封固液
4.1.3、活螨的检查方法
4.1.3.1 活螨的一般检查方法
4.1.3.1.1直检法 取供试品先用肉眼观察，有无疑似活螨的白点或其他颜色的点状物，再用5～10倍放大镜或实体显微镜检视。有螨者，用解剖针或发丝针或小毛笔挑取活螨放在滴有一滴甘油溶液的载玻片上，置显微镜下观察。
4.1.5.5.2 长期保存标本：
4.1.5.5.2.1 用具：先将载玻片、盖玻片洗净擦干备用。对于过大的盖玻片，亦可用小砂轮分割成四开小方块使用。
4.1.5.5.2.2 清洗螨体上的杂物：由于螨体上的许多刚毛和突出物，往往粘附着一些微粒状杂物。在制片时，宜用解剖针或发丝针或小毛笔，挑取螨体放在滴有一滴清水的载玻片上，轻轻搅动，洗去杂物。
4.1.1.3螨可蛀蚀损坏药品，使药品变质失效，并可直接危害人体健康或传播疾病。必须进行活螨检查。
4.1.2．仪器、设备及用具
4.1.2.1显微镜
4.1.2.2放大镜
4.1.2.3解剖针、发丝针、毛笔
4.1.2.4载玻片、盖玻片
4.1.2.5酒精灯
4.1.2.6培养皿或小搪瓷盘（内衬黑色纸片）
4.1.2.7 扁形称量瓶
4.1.5.4每次检查后的供试品、器皿和用具，特别是阳性供试品，应即时用焚烧、加热等法处理，杀灭活螨、以免污染操作环境及人体。
4.1.5.5为保留阳性结果备查，可将检出的活螨制成临时观察标本和长期保存标本。
4.1.5.5.1 临时观察标本：挑取检出的活螨，放在预先滴有1滴75%乳酸溶液的载玻片上，加盖玻片，置于酒精灯小火焰上，来回移动，缓缓加热片刻，使其适当透化，即可镜检。鉴定后的螨体，亦可放入50~70%的乙醇溶液中保存，或作适当处理。
4.1.5.2 活满多为略带白色，晶亮的囊状小体，以暗色背景相衬，十分明显，故检查时一定要注意与背景的反差，白色的背景常常掩盖螨的发现。
4.1.5.3漂浮法检螨用的称量瓶，以高3cm,口径6cm为宜，由于液面较宽，便于直接用放大镜或实体显微镜检查。用载玻片沾取检样时，接触面积大，检出率高。亦可用其他适当容器代替。
4.2.1.1大肠杆菌即大肠埃希菌，为肠杆菌科埃希菌属的模式种。埃希菌属除大肠埃希菌外，新近发现有非脱羧希菌等四个种。大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排出体外。在药品中检出大肠杆菌，表明该样品受到人和温血动物的粪便污染，即可能污染肠病原体。大肠埃希菌除普通大肠杆菌外尚有致病性大肠杆菌，可引起婴幼儿、成份爆发性腹泻。为保证人体健康，口服药品必须检查大肠杆菌。
4.1.5.5.2.3 螨体封存：取1~2滴螨类封固液放在载波片中央偏右的位置，挑取洗去杂物的螨体1~2只，放在螨类封固液中，在低倍显微镜下用发丝针拨正螨体的姿态、位置（背面、腹面）后，如封固液中出现气泡，可用烧热的解剖针插入气泡，即可消除。然后加上盖玻片。将载玻片置酒精灯的小火焰上来回移动，缓缓加热，促使螨体附肢伸展，切勿沸腾，以免产生气泡，甚至螨体爆裂。撤离火焰后，用红色的玻璃铅笔在载玻片的背面圈出螨栓的位置，便于镜检时寻找。然后在载玻片的左端贴上标签。
文件名：活螨、大肠杆菌检查操作规程
制定人：
制定日期：
分发份数：3
审核人：
审核日期：
颁发部门：GMP办
批准人：
批准日期：
生效日期：
分发至：质量保证部、质监科、质量检验中心
1.目的：规范活螨、大肠杆菌检查方法，以保证检验结果的准确性。
2.范围：活螨、大肠杆菌检查。
3.责任：质量保证部、质监科、质量检验中心、检验操作人员。
4.1.3.2.2 先用75%乙醇将药瓶的外盖螺口周围消毒后，小心
旋开外盖，用直接法，检查药瓶外盖的内侧及瓶口内外的周围与内盖有无活螨。
4.1.4．结果判断
凡供试品按上述有关剂型项下规定检查，发现活螨者，作检出活螨报告。
4.1.5、注意事项
4.1.5.1螨在春夏和秋冬相交季节，繁殖旺盛，爬行活跃，易于检出，在寒冬时则活动微弱甚至不动。鉴别时，可在灯下检查，光和热的刺激促使其活动，利于检查。
4.1.3.1.2漂浮法 取供试品放在盛有饱和食盐水搅拌均匀，置10倍放大镜或实体显微镜下检查，可继续加饱和食盐水至瓶口处（为防止盐水样品溢出污染桌面，宜将上述容器放在装有适量（甘油溶液的培养皿中）用洁净的载玻片盖在瓶口，使与液面接触，沾取液面上的漂浮物，迅即反转玻片，置显微镜下检查。
4.1.3.1.3分离法 也称烤螨法。取供试品放在附有孔径大小适宜的筛网的普通玻璃漏斗里，利用活螨避光、怕热的习性，在漏斗的广口上面放一个60～100W的灯泡，距离药品约6cm处，照射1～2h。活满可沿着漏斗内的底部细颈内壁向下爬，用小烧杯装半杯甘油溶液，放在漏斗的下口处，收集爬出的活满。
在上述三种方法中，以前两种方法操作简便、效果好、检出率高，故多采用。而后一种方法操作较繁琐、费时、效率低，较少采用。