二电泳缓冲液、染料和凝胶加样液配置方案
凝胶电泳缓冲液的配制
2．测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与D owexXG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用What man 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
3．常用的电泳缓冲液说明：①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。
但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。
目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
4．2×SDS凝胶加样缓冲液100mmo l/L Tris·HCl(6.8)200mmo l/L二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2%溴酚蓝20%甘油不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
5．凝胶加样缓冲液使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。
溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2. 2倍，而与琼脂糖浓度无关。
凝胶电泳缓冲液的配制
2．测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
3．常用的电泳缓冲液说明：①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。
但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。
目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
4．2×SDS凝胶加样缓冲液100mmol/L Tris·HCl(6.8)200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2%溴酚蓝20%甘油不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
5．凝胶加样缓冲液使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。
溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2. 2倍，而与琼脂糖浓度无关。
以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。
在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
电泳缓冲液的配制和琼脂糖凝胶的配制
电泳缓冲液的配制和琼脂糖凝胶的配制常见的电泳缓冲液为TAE缓冲液（三乙酸-乙酰胺-乙酸缓冲液）和TBE缓冲液（硼酸-三乙酸-乙酰胺缓冲液）。
下面以TAE缓冲液为例，介绍一种常见的配制方法：所需试剂及材料：1.TAE缓冲液粉末2.蒸馏水3.磷酸氢二钠（NaH2PO4）4. 乙酸（Acetic acid）5. 乙酰胺（Amp-urea）6.称量器具7.搅拌器8.常温（25°C）高精度pH计配制步骤：1.根据实验需要，计算所需配制的缓冲液的体积。
2.准备用于配制的容器，并将其清洗干净。
3.称取相应质量的TAE缓冲液粉末，加入到容器中。
4.加入适量的蒸馏水，将粉末溶解均匀。
5.将NaH2PO4（磷酸氢二钠）溶解在蒸馏水中，搅拌至溶解均匀。
6.加入乙酸和乙酰胺，搅拌均匀。
7.使用pH计测量溶液的pH值。
8.如果pH值不在所需范围内（通常为8.0），可以加入适量的乙酸或乙酰胺进行调节，直到达到所需pH值。
9.最后，使用蒸馏水将溶液体积补足至所需配制的总体积。
琼脂糖凝胶的配制方法：琼脂糖凝胶是一种常用的电泳试剂，用于分离DNA、RNA或蛋白质等生物大分子。
它的主要成分是琼脂糖（Agarose），其配制方法如下：所需试剂及材料：1.琼脂糖粉末2.TAE或TBE缓冲液3.电泳仪4.中性漂洗液（例如盆子中洗涤剂）5.温度计6.凝胶模具7.干净容器配制步骤：1.准备用于配制琼脂糖凝胶的容器，并将其清洗干净。
2.根据实验需要，计算所需配制的琼脂糖凝胶的质量。
3.将琼脂糖粉末称取出来并加入容器中。
4.加入适量的TAE或TBE缓冲液，使其覆盖住琼脂糖粉末。
5.将容器密封，并放入微波炉中加热,或者可以使用传统的加热方法，将容器放进加热水浴中进行加热。
6.加热至琼脂糖完全溶解，通常需要3-5分钟。
7.轻轻摇晃或用棒子搅拌溶液，确保溶液均匀混合。
8.将溶液冷却至约55-60°C。
在冷却过程中，可以使用温度计不断监测温度。
常用缓冲液配置
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl , ,组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
PH值浓HCl约70ml约60ml约42ml4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
2)10×TE Buffer , ,组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
1M Tris－HCl Buffer（，，）100ml20ml 500mM EDTA2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
4)3 M 醋酸钠组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至3.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
双向电泳所需试剂配方及器材清单
双向电泳所需试剂配方及器材清单附录Ⅰ溶液配制1. 100 mmol/L PMSF母液PMSF 0.087g异丙醇5ml使用前配制，4℃保存。
2. 10%（w/v）TCA/丙酮提取液TCA 10 g丙酮100 mlPMSF 1mmol/L 1ml母液（用前现加）DDT 0.1%（w/v）0.1g （用前现加）TCA和丙酮使用前配制，棕色瓶中-20℃预冷至少2h。
3. 80%丙酮洗液丙酮80mlddH20 20mlPMSF 1mmol/L 1ml母液（用前现加）DDT 0.1%（w/v）0.1g （用前现加）丙酮和ddH20使用前配制，棕色瓶中-20℃预冷至少2h。
4.水化液尿素7mol/L硫脲2mol/LCHAPS 4%（w/v）DDT 65mmol/L （用前现加）Biolyte (pH3-10) 0.3%（v/v）（用前现加）用容量瓶定容后分装后在-20℃保存，用前室温溶解。
5.蛋白浓度测定（1）1mg/ml BSA配制在1ml水化液中加入0.01g BSA为10x浓缩液，再将其稀释10倍。
（2）考马斯亮蓝G-250溶液100mg G-250溶于50ml 95%乙醇，再加入120ml 85%磷酸，于容量瓶中定容至1L。
室温保存，用前过滤。
（3）标准曲线建立按下表中数值配制建立标准曲线所需的各个溶液对照 1 2 3 4 5 6 BSA水化液（μl）0 10 20 40 60 80 100 水化液（μl）100 90 80 60 40 20 0 BSA浓度（μg/μl）0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1 G-250染液（ml） 5 5 5 5 5 5 56. 1%溴酚蓝母液溴酚蓝1%Tris 50mmol/L用容量瓶定容后在4℃保存。
7. SDS-PAGE 12%分离胶的配制试剂体积（volume）（reagent）30%（w/v）丙烯酰胺（acrylamide）66.7ml和0.8%（w/v）甲叉双丙烯酰胺（bisacrylamide）1.5 mol/L Tris-HCl,pH8.8 40.0mL去离子水（ddH2O）50.1mL10%十二烷基磺酸钠（SDS） 1.6mL四甲基乙二胺（TEMED）35.0μL10%过硫酸氨（APS） 1.6mL共计(Total) 160.0mL8. 12.5% 丙烯酰胺凝胶配制ddH20 62.7ml30% 丙烯酰胺83.3ml1.5M Tris- HCl pH8.8 50ml10% SDS 2ml10% APS 2mlTEMED 35.6μl共计200ml其中APS在加入前配制成溶液后再加入到全部溶液中。
缓冲液的配制方法
核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。
4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA配制量 1 L配制方法l.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。
2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。
3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。
4.再向溶液中加入下列试剂。
5.用DEPC处理水将溶液定容至1 L。
6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。
7.室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭(10 mg/ml)组份浓度10 mg/ml溴乙锭配制量100 ml配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。
2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。
3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。
4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。
Agarose凝胶配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。
2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。
3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。
常见缓冲液的配方
一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
试验室常用缓冲液配置方案
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCI (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCI配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
4•将溶液定容至1 L。
5.咼温咼压火菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大, 温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10 开E Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3) 1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 咼温咼压火菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大, 温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4) 3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1•称量40.8g NaAc 3H2O (或者24.6g无水NaAc)置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2•加入冰醋酸调节pH值至5.23•加去离子水将溶液定容至100ml4咼温咼压火菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量：1 L配制方法：2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
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电泳缓冲液
50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱
1mol/L乙酸
100 mmol/L EDTA
水
242g
57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）
200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补5％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
15％聚蔗糖（400型）
水
1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.5g
补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）
小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。
凝胶上样液（gel loading solutions）
100ul 10％SDS
5ml
补足到10ml
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
4g
补足到10ml
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚蓝
0.2％二甲苯青FF
200 mmol/L EDTA
0.1％SDS
50％甘油
水
20mg
20mg
4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
50％甘油
水
1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
3ml
3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
40％聚蔗糖
水
1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.25％溴酚蓝
0.25％二甲苯青FF
15％聚蔗糖（400型）
水
2.5ml 1％溴酚蓝
2.5ml 1％二甲苯青FF
1.5g
补足到10ml
6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
成分及终浓度
配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L硼酸盐
10 mmol/L EDTA
水
54g
27.5g硼酸
20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L
染料
1％溴酚蓝（bromophenol blue）
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
6×碱性凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度
配制10ml溶液各成分用量
0.3 N氢氧化钠
6 mmol/L EDTA
18％聚蔗糖（400型）
0.15％溴甲酚绿
0.25％二甲苯青FF
水
300ul 10N氢氧化钠
120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.8g
15mg
25mg
补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）