常见缓冲液的配方

一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合，NaOH的20g和2H2O?Na2EDTA的186.1g或称取的三钠盐。

EDTA后形成．并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml 水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2?6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml 水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的。

1L烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至．2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂（Denhardt's regent）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分V）水2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。

过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）水5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。

100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/L dNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP贮液2ul 100 mmol/L dATP 水．2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul20％PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20％聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水20g50ml 5 mol/L 氯化钠或14.6g 固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）3mol/L 氯化钠水88.2g175.3g补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC 于100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。

在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC 失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionized formamide）直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。

配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L 磷酸二氢钠（ml）1mol/L 磷酸氢二钠（ml）最终pH值877850815735685625565510450390330280 123 150185225265315375435490550610670720 6.06.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE（用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris－HCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）98.8mlTris缓冲液（Tris-HCl buffer）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积（ml）pH8.6142128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液溶液各成分的用量1L配制成分及终浓度．2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水242g57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）补足1L染料1％溴酚蓝（bromophenol blue）加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

）ethidium bromide的溴化乙锭（10mg/ml小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gel loading solutions）6×碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18％聚蔗糖（400型）0.15％溴甲酚绿0.25％二甲苯青FF水300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg补足到10ml6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA型）400％聚蔗糖（15．水 1.5ml 1％溴酚蓝1.5ml 1％二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.5g补足到10ml6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25％溴酚蓝0.25％二甲苯青FF15％聚蔗糖（400型）水 2.5ml 1％溴酚蓝2.5ml 1％二甲苯青FF1.5g补足到10ml6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50％甘油水 1.5ml 1％溴酚蓝FF％二甲苯青1.5ml 1．100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）3ml3.9ml6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15％溴酚蓝0.15％二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40％聚蔗糖水 1.5ml 1％溴酚蓝1.5ml 1％二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）4g补足到10ml10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2％溴酚蓝0.2％二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1％SDS50％甘油20mg水．20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10％SDS5ml补足到10ml三.常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。