生物化学常用缓冲液
最全常用缓冲液配方及缓冲范围
最全常用缓冲液配方及缓冲范围缓冲液是一种能够维持溶液pH值相对稳定的溶液。
它可以减少酸碱反应的影响，使物质在酸碱环境中保持稳定。
在生命科学实验室和工业生产中，常用的缓冲液有许多种。
下面是最常用的一些缓冲液配方及其缓冲范围。
1. Phosphate缓冲液：Phosphate缓冲液通常由磷酸二氢盐和磷酸氢二盐组成。
它的pH范围为2.1-7.4，在生物化学和细胞生物学实验中得到广泛应用。
配方1：-0.1M磷酸二氢盐，pH2.0-2.8-0.2M磷酸氢二盐，pH5.8-7.4配方2：-0.1M磷酸二氢盐，pH2.1-3.1-0.2M磷酸氢二盐，pH5.6-7.42. Tris缓冲液：Tris缓冲液由三羟甲基氨基甲烷（Tris）和其酸盐组成。
它的pH范围为7-9，在分子生物学和生化实验中广泛使用。
配方：- 1 M Tris HCl，pH 7.4-9.0- 1 M Tris base，pH 7.0-9.23.MES缓冲液：MES缓冲液是一种针对中性pH值（5.5-6.7）的缓冲液，常用于细胞生物学和酶活性实验。
配方：-0.1MMES，pH5.5-6.74.HEPES缓冲液：HEPES缓冲液是一种适用于细胞培养和酶活性实验的缓冲液，其pH 范围为6.8-8.2配方：-0.1MHEPES，pH6.8-8.25.CAPS缓冲液：CAPS缓冲液是一种适用于生化实验的缓冲液，其pH范围为9.7-11.1配方：-0.1MCAPS，pH9.7-11.1这些是最常用的缓冲液配方及其缓冲范围，可以根据实验的需要选择合适的缓冲液。
需要注意的是，在配制缓冲液时应使用高纯度的化学品，并根据实验要求精确控制缓冲液的pH值。
此外，在实验过程中应注意缓冲液的保存和稳定性，以确保实验结果的准确性。
常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方缓冲液和培养基是生物学实验中常用的重要试剂，它们的配方的选择对实验结果有着重要的影响。
下面将介绍几种常用的缓冲液和培养基的配方及其用途。
一、缓冲液配方1.磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液常被用于细胞培养和生物化学实验中，它的使用范围很广。
常用的磷酸盐缓冲液有PBS（磷酸盐缓冲盐水），配方如下：-NaCl8g-KCl0.2g-Na2HPO41.42g-KH2PO40.24g将以上物质溶解在1L的去离子水中，pH值调到7.4，即可得到1×PBS缓冲液。
2. Tris缓冲液Tris缓冲液在分子生物学实验中常被用作DNA和RNA电泳的产物混合液。
常用的Tris缓冲液有Tris-HCl缓冲液和Tris-acetate缓冲液。
以下是Tris-HCl缓冲液的配方：- Tris 12.1 g-HCl(10M,pH7.6)10mL将Tris和HCl分别溶解在800 mL去离子水中，然后添加水调至1 L，pH值调节到目标值即可。
Tris-acetate缓冲液的配方与Tris-HCl相似，只是在Tris-HCl的基础上添加乙酸。
3. Glycine缓冲液Glycine缓冲液常被用于电泳实验中，用于电泳缓冲液和电泳媒介液的制备。
以下是Glycine缓冲液的配方：- Glycine 3 g- Tris 4.8 g-SDS0.207g-EDTA0.37g将以上物质溶解在1 L的去离子水中，pH值调至8.3，即可得到1×Glycine缓冲液。
1.LB培养基LB培养基是最常用的细菌培养基之一，用于培养大肠杆菌等革兰氏阴性菌。
以下是LB培养基的配方：- Tryptone 10 g- Yeast extract 5 g-NaCl10g将以上物质溶解在1L的去离子水中，加热至溶解，然后进行高压灭菌即可得到LB培养基。
2.M9培养基M9培养基是一种缺乏氮、氨基酸和碳的最小培养基，常被用于重组DNA的传输。
常用缓冲体系缓冲能力
缓冲体系的缓冲能力是指其抵抗pH变化的能力，即在加入酸或碱后，能够保持溶液pH相对稳定的性质。
缓冲体系的缓冲能力受到多种因素的影响，包括缓冲对的浓度、解离常数以及溶液的离子强度等。
在生物化学和分子生物学实验中，常用的缓冲体系包括磷酸盐缓冲液（PBS）、Tris-HCl缓冲液、HEPES缓冲液等。
这些缓冲体系具有不同的缓冲范围和缓冲能力，适用于不同的实验条件和需求。
磷酸盐缓冲液（PBS）是一种常用的缓冲体系，其缓冲范围在pH 6.8-7.8之间。
PBS的缓冲能力主要来自于其组分中的磷酸氢二钠和磷酸二氢钾，这两种物质在水中可以解离出氢离子和氢氧根离子，从而起到缓冲作用。
PBS的缓冲能力相对较强，适用于大多数生物化学和分子生物学实验。
Tris-HCl缓冲液的缓冲范围在pH 7.0-9.0之间，其缓冲能力主要来自于Tris 分子中的氨基和羧基。
Tris-HCl缓冲液的缓冲能力较强，且对温度和离子强度的变化不太敏感，因此在许多生物化学和分子生物学实验中也得到广泛应用。
HEPES缓冲液的缓冲范围在pH 6.8-8.2之间，其缓冲能力主要来自于HEPES分子中的磺酸基和氨基。
HEPES缓冲液具有较好的缓冲能力和稳定性，适用于需要较长时间保持pH稳定的实验，如细胞培养和酶学反应等。
总的来说，不同缓冲体系的缓冲能力因其组分和浓度不同而有所差异。
在选择缓冲体系时，需要根据实验条件和需求来选择具有适当缓冲范围和缓冲能力的缓冲液。
同时，还需要注意缓冲液的离子强度、温度敏感性等因素对实验结果的影响。
pbs原理
pbs原理PBS原理。
PBS（Phosphate Buffered Saline）是一种常用的生物化学缓冲液，广泛应用于生物学实验、细胞培养、免疫学实验等领域。
它的主要作用是维持生物样本在实验过程中的稳定性，避免PH值的波动对实验结果的影响。
本文将介绍PBS的原理及其在实验中的应用。
一、PBS的组成。
PBS主要由NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4四种化学物质组成，其中NaCl和KCl是用来维持PBS的渗透压，Na2HPO4和KH2PO4则用来调节PBS的PH值。
这些成分的比例和浓度都是经过严格计算和实验确定的，保证了PBS在不同实验条件下的稳定性和可靠性。
二、PBS的原理。
1. 缓冲作用。
PBS中的Na2HPO4和KH2PO4能够在一定范围内稳定PH值，使得PBS能够在不同实验条件下保持稳定的PH值。
这种缓冲作用对于需要保持生物样本在实验过程中的稳定性非常重要，避免PH值的变化对实验结果产生影响。
2. 渗透调节作用。
NaCl和KCl在PBS中起到维持渗透压的作用，保证了细胞在PBS中的正常生理状态。
在进行细胞培养或细胞实验时，PBS能够有效地保持细胞的形态和功能，避免渗透压的变化对细胞产生不良影响。
三、PBS在实验中的应用。
1. 细胞培养。
在细胞培养过程中，PBS常用于洗涤细胞，去除培养基中的残留物质，同时保持细胞的稳定性。
洗涤后的细胞可以用PBS悬浮，方便进行细胞计数、传代等操作。
2. 免疫学实验。
在免疫学实验中，PBS常用于洗涤细胞、稀释抗体、稀释细胞悬液等操作。
PBS的稳定性和渗透调节作用保证了实验结果的准确性和可靠性。
3. 蛋白质纯化。
在蛋白质纯化过程中，PBS常用于洗涤蛋白质，去除杂质和保持蛋白质的稳定性。
PBS的缓冲作用可以有效保护蛋白质的天然构象和功能。
四、总结。
PBS作为一种常用的生物化学缓冲液，在生物学实验、细胞培养、免疫学实验等领域发挥着重要作用。
它的原理主要包括缓冲作用和渗透调节作用，保证了生物样本在实验过程中的稳定性。
生物化学常用缓冲液
生物化学常用缓冲液（一）基本概念⑴ Bronsted-Lowry酸碱理论（酸碱质子理论）:1923年由丹麦化学家J.N.Brφnsted和英国化学家T.M.Lowry同时提出了酸碱质子学说，认为凡能释放质子的分子或离子（如：H2O，HCl，NH4+，HSO4- 等）称为酸，凡能接受质子的分子或离子（如：H2O，NH3，Cl-等）称为碱。
因此，一种酸释放质子后即成为碱，称为该酸的共轭碱，同样一种碱与质子结合后，形成对应的酸，称为该碱的共轭酸。
如盐酸在水中的解离：HCl Cl- ＋H+HCl是酸，Cl-是它的共轭碱。
pH = pKa+log{[质子受体]/[质子供体]}⑵缓冲体系的设计：1960年，N.E.Good和他的同事们提出，适合生命科学研究使用的缓冲体系应具有以下特性：① pKa值在6-8之间；②在水中的溶解度高；③不易穿透生物膜；④盐效应小；⑤离子浓度、溶液组成和温度对解离的影响小；⑥不与金属离子生成复合物或沉淀；⑦该缓冲剂化学稳定；⑧紫外和可见光波长范围内光吸收小；⑨易制得高纯度的盐。
（二）生物化学常用缓冲液⑴磷酸盐缓冲液：磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：NaH2PO4： pKa1＝2.12， pKa2＝7.21Na2HPO4： pKa1＝7.21， pKa2＝12.32配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH＝1-4，配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6-8，配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH＝10-12。
用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH范围宽；③pH受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的变化小于0.1。
生物化学实验常用缓冲液的配制方法
生物化学实验常用缓冲液的配制方法
一、TRIS-HCl缓冲液的配制
1、TRIS-HCl缓冲液的配制原理
TRIS-HCl缓冲液，也称为三胍盐缓冲液，是一种有机盐缓冲液。
其配制原理是将三胍钠(三胍氢氯化钠)和氢氯化钠混合在一起，以获得所需的pH值，使其达到缓冲效果。
缓冲效果可以使溶液保持稳定的pH值。
2、TRIS-HCl缓冲液的配制
（1）准备实验室试剂
三胍钠（TRIS），氢氯化钠（NaCl）和蒸馏水
（2）计算配制配方
根据欲得到的pH值和需要的量，计算配制配方。
（3）放置容器
将三胍钠和氢氯化钠分别放入容器中。
（4）添加蒸馏水
用蒸馏水将两种盐分别稀释至相等比例。
（5）搅拌混合
用搅拌器或磁力搅拌器将两种盐混合均匀。
（6）温度调节
将混合物加热至37℃，保持温度，节省时间。
（7）校准pH
用pH计校正混合物的pH值，确保其在正确的pH范围内，调节pH值。
（8）放入瓶中
将缓冲液放入容器中，容器密封后存放，防止受污染。
二、枸橼酸缓冲液的配制
1、枸橼酸缓冲液的配制原理
枸橼酸液是一种有机碱性液，其原理是将枸橼酸(Citric acid)和碳
酸钙(CaCO3)混合在一起，以获得所需的pH值，使其达到效果。
常用缓冲液配方及缓冲范围
常用缓冲液配方及缓冲范围缓冲液是一种水溶液，其中含有在酸性或碱性条件下能够保持pH稳定的化学物质。
缓冲液广泛应用于生物化学、分子生物学、生物技术和医学等领域的实验和研究中。
下面是一些常用的缓冲液配方及其应用范围。
1. Tris缓冲液Tris缓冲液是一种中性缓冲液，常用于生物化学和分子生物学实验。
它的配方通常为：- 10 mM Tris base-1mMEDTA-向溶剂中调整pH至7.4Tris缓冲液可用于DNA和RNA的电泳、酶反应、细胞培养等实验中。
2.PBS缓冲液PBS（磷酸盐缓冲液）是一种常用的生物学缓冲液，具有缓冲能力强和与生物体液成分相似的特点。
它的配方通常为：-137mMNaCl-2.7mMKCl-10mMNa2HPO4-2mMKH2PO4-向溶剂中调整pH至7.4PBS缓冲液可用于细胞培养、免疫荧光染色、蛋白质凝胶电泳等实验中。
3.TAE缓冲液TAE（三乙酸缓冲液）是一种常用的核酸电泳缓冲液，其配方为：- 40 mM Tris base-20mM醋酸-1mMEDTA-向溶剂中调整pH至8.0TAE缓冲液可用于DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳，如聚丙烯酰胺凝胶电泳（）和琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis）。
4. Tris-HCl缓冲液Tris-HCl缓冲液是一种常用的酸性或碱性缓冲液。
它的配方基于Tris缓冲液，在Tris缓冲液基础上调整pH的方法是在配方中加入稀盐酸或稀氢氧化钠。
例如，对于Tris-HCl缓冲液的配方为：- 50 mM Tris base-向溶剂中加入HCl调整pH至所需的值（通常为7.2至9.0）Tris-HCl缓冲液可用于酶反应、蛋白质组学研究、PCR等实验中。
这只是一些常用的缓冲液配方，根据不同实验需求和物质稀释要求，还有其他许多缓冲液的配方。
对于缓冲液的选择，关键在于根据实验要求选取适当的缓冲体系，并对缓冲液中所需的化学物质浓度、pH值等进行精确调整。
常用的三种标准缓冲溶液
常用的三种标准缓冲溶液
1. 磷酸盐缓冲溶液，磷酸盐缓冲溶液是一种常用的生物化学和
分子生物学实验中使用的缓冲溶液。
常见的磷酸盐缓冲溶液包括磷
酸盐缓冲液（PBS）、Tris-HCl缓冲液等。
磷酸盐缓冲溶液的pH范
围广，能够在不同的实验条件下稳定维持所需的pH值。
2. 乙酸/乙酸钠缓冲溶液，乙酸/乙酸钠缓冲溶液是另一种常用
的生物化学实验中使用的缓冲溶液。
它主要由乙酸和乙酸钠组成，
能够在酸性条件下有效地维持所需的pH值。
乙酸/乙酸钠缓冲溶液
在许多生化实验中被广泛应用，如蛋白质电泳、核酸电泳等。
3. 碳酸氢盐缓冲溶液，碳酸氢盐缓冲溶液是一种常用的生物化
学实验中使用的缓冲溶液，由碳酸氢盐和碳酸盐组成。
碳酸氢盐缓
冲溶液通常用于在生理pH范围内进行实验，如细胞培养、酶反应等，能够有效地维持稳定的pH值。
这三种标准缓冲溶液在生物化学、分子生物学和生物医学实验
中被广泛应用，能够提供稳定的pH环境，保证实验的准确性和可重
复性。
在实验设计和操作中，选择合适的缓冲溶液对于实验结果的
准确性和稳定性至关重要。
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生物化学常用缓冲液
⑴ 磷酸盐缓冲液
磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级解离，有二个pK
a
值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：
NaH
2PO
4
： pK
a1
＝2.12， pK
a2
＝7.21
Na
2HPO
4
： pK
a1
＝7.21， pK
a2
＝12.32
配酸性缓冲液：用 NaH
2PO
4
，pH＝1～4，
配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8，
配碱性缓冲液：用 Na
2HPO
4
，pH＝10～12。
用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸盐缓冲液的优点为：①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH 范围宽；③pH受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH
的变化小于0.1。
其缺点为：①易与常见的钙Ca++离子、镁Mg++离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。
⑵Tris（三羟甲基氨基甲烷，N-Tris(hydroxymethyl)aminomethane）缓
冲液
Tris缓冲液在生物化学研究中使用的越来越多，有超过磷酸盐缓冲液的趋势，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中已都使用Tris缓冲液，而很少再用磷酸盐。
Tris缓冲液的常用有效pH范围是在“中性”范围，例如：
Tris-HCl缓冲液： pH＝7.5～8.5
Tris-磷酸盐缓冲液： pH＝5.0～9.0
配制常用的缓冲液的方法有两种：①按书后附录中所列该缓冲液表中的方法，分别配制0.05mol/L Tris和0.05mol/L HCl溶液，然后按表中所列体积混合。
由于标准浓度的稀盐酸不易配制，所以常用另一种方法；②若配1L
0.1mol/L的Tris-HCl缓冲液：先称12.11g Tris碱溶于950mL～970mL 无离子水中，边搅拌边滴加4N HCl，用pH计测定溶液pH值至所需的pH值，然后再加水补足到1L。
Tris-HCl缓冲液的优点是：①因为Tris碱的碱性较强，所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液；②对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。
其缺点是：①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大，缓冲液稀释十倍，pH值的变化大于0.1；②温度效应大，温度变化对缓冲液pH值的影响很大，即：
△pK
a
／℃＝－0.031 ，例如：4℃时缓冲液的pH＝8.4，则37℃时的pH＝7.4，所以一定要在使用温度下进行配制，室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于
0℃～4℃。
③易吸收空气中的CO
2
，所以配制的缓冲液要盖严密封。
④此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用，所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。
⑶ 有机酸缓冲液
这一类缓冲液多数是用羧酸与它们的盐配制而成，pH范围为酸性，即pH
＝3.0～6.0，最常用的是甲酸、乙酸、柠檬酸和琥珀酸等。
甲酸～甲酸盐缓冲液很有用，因其挥发性强，使用后可以用减压法除之。
乙酸～乙酸钠和柠檬酸～柠檬酸钠缓冲体系也使用的较多，柠檬酸有三个pK
a
值：
pK
a1
＝3.10，
pK
a2＝4.75， pK
a3
＝6.40。
琥珀酸有二个pK
a
值：pK
a1
＝4.18， pK
a2
＝5.60。
有机酸缓冲液的缺点是：①所有这些羧酸都是天然的代谢产物，因而对
生化反应过程可能发生干扰作用；②柠檬酸盐和琥珀酸盐可以和过渡金属离子（Fe3+、Zn++、Mg++等）结合而使缓冲液受到干扰；③这类缓冲液易与Ca++离子结合，所以样品中有Ca++离子时，不能用这类缓冲液。
⑷ 硼酸盐缓冲液
常用的有效pH范围是：pH＝8.5～10.0，因而它是碱性范围内最常用的缓冲液，其优点是配制方便，只使用一种试剂，缺点是能与很多代谢产物形成络合物，尤其是能与糖类的羟基反应生成稳定的复合物而使缓冲液受到干扰。
⑸ 氨基酸缓冲液
此缓冲液使用的范围宽，可用于pH=2.0～11.0，例如最常用的有：
甘氨酸—HCl缓冲液：pH=2.0～5.0，
甘氨酸—NaOH缓冲液：pH=8.0～11.0，
甘氨酸—Tris缓冲液：pH=8.0～11.0，（此缓冲液用于广泛使用的SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳的电极缓冲液），
组氨酸缓冲液：pH=5.5～6.5，
甘氨酰胺（glycine amide）缓冲液：pH=7.8～8.8，
甘氨酰甘氨酸（glycylglycine）缓冲液：pH=8.0～9.0。
此类缓冲体系的优点是：为细胞组份和各种提取液提供更接近的天然环境。
其缺点是：①与羧酸盐和磷酸盐缓冲体系相似，也会干扰某些生物化学反应过程，如代谢过程等。
②试剂的价格较高。
⑹ 两性离子缓冲液（Zwitterionic buffers），又称Good’s缓冲液
1960年，N.E.Good和他的同事们总结了现有的各种缓冲试剂的优缺点后认为，必须用人为设计和人工合成的方法来找到专门用于生命科学研究的特定的缓冲体系，这些缓冲体系应具有前面所述的九条要求和特性。
他们合成的一系列Good’s缓冲液可查阅有关的资料。
Good’s缓冲液的主要优点是不参加和不干扰生物化学反应过程，对酶化学反应等无抑制作用，所以它们专门用于细胞器和极易变性的、对pH敏感的蛋白质和酶的研究工作。
其缺点是：①价格昂贵，②对测定蛋白质含量的双缩脲法和Lowry 法不适用，因为它们会使空白管的颜色加深。