生物化学检验常用技术
生物化学检验常用技术(共66张PPT)
单色光 均匀介质 吸收物质无相 互作用
5、空白溶液的选择
在分光光度法中，为消除显色剂及样品中各种共存有色物质产生的干扰、抵消比色皿和 试剂对入射光的影响而用来调节仪器百分透光率为100%的溶液。
不
蒸 馏 水
试
样
含 待
剂
品
测
元
不
显 色
素
1、溶剂空白：不加样品和任何试剂，用纯溶剂（如蒸馏水或其他有机溶剂）作参比溶液。 选择原则：当显色剂及其它试剂均无色，被测试样中又无其他有色离子时，选用溶剂参比。
常用的固定化技术有：吸附、试剂交联、共价键合、
包埋法(酶与载体聚丙酰胺混合后直接包在电极 敏感部分形成酶凝胶层)。
几种酶电极的品种与性能
测定物质
酶
检测物 测定范围(mol/L)
葡萄糖 葡萄糖氧化酶
尿素(脲)
脲酶
胆固醇 胆固醇氧化酶
L－谷氨酸 谷氨酸脱氢酶 L－赖氨酸 赖氨酸脱羧酶
O2 NH3 H2O2 NH4+ CO2
单色器
滤光片
棱镜
光栅
吸收池
检测器
玻璃比色皿
石英比色皿
显示器
4
(一)、分光光度技术的基本原理
1、吸光度与透光度
当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部分光 被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透 光度，即：
入射光 I0
透射光 I
T = I/I0
10-4～2*10-2 10-5～10-2 10-5～10-2 10-4～10-1 10-4～10-1
离子选择性电极的分析方法
生物化学检验常用分析技术
待测管 2 待测管 1 标准管 试剂空白管
物质颜色和吸收光颜色的关系
物质颜色
黄绿 黄 橙 红
紫红 紫 蓝
绿蓝 蓝绿
吸
颜
色
紫 蓝 绿蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 绿 红
收 波
光 长(nm)
400 ~ 450 450 ~ 480 480 ~ 490 490 ~ 500 500 ~ 560 560 ~ 580 580 ~ 600 600 ~ 650 650 ~ 750
Lambert-Beer定律要求条件 • 1、入射光必须是单色光 • 2、被测样品必须是均匀介质 • 3、吸收过程中，吸收物质之间不发生相互作用
4、Lambert-Beer定律的偏离现象
• 1. 吸收定律本身的局限性 • L-B 定律是一个有限的定律，只有在稀溶液中才能成立。 • 2、仪器因素(非单色光的影响) • 3、化学因素 • 溶液中的溶质可因 c 的改变而有离解、缔合、配位以及与溶剂间的作用等原因而发
最大吸收波长
吸 光 度
波长范围
0.80
Ax 0.60
0.40
0.20
0.00
cx
0 1.0 2.0 3.0 4.0 c(mg/mL)
（二）原子吸收分光光度法 原子吸收分光光度法是基于元素所产生的原子蒸 气中待测元素的基态原子，对所发射的特征谱线的吸收作用进行定量分析的一种技术。 即在一定条件下，原子的吸光度同原子蒸气中待测元素基态原子的浓度成正比。 常用的定量方法有： 标准曲线法、标准加入法、内标法。
如果溶液浓度以质量体积比表示时，此常数称为比吸光系数（ ），它 表示当溶液浓度为1g/L、液层厚度为1cm时，在一定波长下测得的吸光度 值。摩尔吸光系数ε和比吸光系数 可相互换算。
临床生物化学检验技术笔记
临床生物化学检验技术笔记
临床生物化学检验技术是一种用于诊断和治疗疾病的重要技术。
它通过测量和分析体液中的生化指标，如血清中的蛋白质、酶、电解质等，来评估机体的生理状态，发现异常情况，并提供相关的诊断和治疗建议。
以下是一些临床生物化学检验技术的基本原理和常见应用：
1. 光度法：利用物质对特定波长的光的吸收特性进行分析。
常用于测量血清中的蛋白质、酶、代谢产物等。
2. 电化学法：利用电化学原理测量电流、电压等电学参数，用于测量电解质、血气、肾功能等。
3. 酶法：利用酶对底物的特异性催化作用，测量酶的活性或底物、产物的浓度。
常用于检测肝功能、心脏损伤等。
4. 免疫测定法：利用抗原与抗体的特异性结合关系进行分析，常用于检测激素、肿瘤标志物等。
5. 质谱法：通过测量样品中分子的质量-荷电比，分析样品的组成和结构。
常用于药物测定、代谢产物分析等。
6. 核酸分析技术：通过测量DNA或RNA的含量、序列和结构，用于疾病的遗传性检测、基因表达分析等。
临床生物化学检验技术在临床诊断和治疗中起到了重要的作用。
它不仅可以用于早期发现疾病、评估疾病的严重程度，还可以用于监测治疗效果、指导治疗方案的选择。
然而，需要注意的是，临床生物化学检验技术的结果需要结合临床病史和其他检查结果进行综合分
析和解释，以确保最终的诊断和治疗方案的准确性和有效性。
临床生物化学检验技术笔记(一)
临床生物化学检验技术笔记(一)临床生物化学检验技术什么是生物化学检验技术生物化学检验技术是一种研究生物分子的化学性质和结构的科学技术。
它主要通过对生物分子进行分离、纯化、鉴定、定量和结构分析等方法，从而了解生物体内分子的组成和功能。
生物化学检验技术在临床上的应用生物化学检验技术在临床上广泛应用于疾病的诊断、治疗和预防。
以下是一些常见的检验项目：•血糖：用于诊断和监测糖尿病•肝功：检测肝功能异常，如肝炎等•肾功：检测肾功能异常，如肾炎等•血脂：监测血脂异常，如高胆固醇等•血常规：检测贫血、白细胞异常等•电解质：检测血液中钠、钾、钙等电解质浓度生物化学检验技术的方法生物化学检验技术主要有以下几种方法：•毛细管电泳：用电场将荷电化合物分离，根据其不同的运动速度进行鉴定和定量•高效液相色谱：利用色谱柱对混合物分离，根据吸收峰的特点鉴定和定量物质•质谱：通过精确测量分子的质量和荷质比鉴定和定量物质•免疫学方法：利用抗体和抗原的特异性结合，鉴定和定量物质生物化学检验技术的注意事项生物化学检验技术需要严格掌握操作规程和标准化程序，同时还需要注意以下几点：•样本的采集、保存、运输应符合规范要求•仪器的日常维护和保养要得到重视，确保准确性和可重复性•熟悉并遵守相关法律法规，保护患者隐私和安全以上就是生物化学检验技术的相关内容。
作为教师，我们需要在教学过程中强调注意事项，帮助学生熟练掌握技术，提高检验结果的准确性和可靠性。
生物化学检验技术的发展与趋势随着生物技术的快速发展，生物化学检验技术也在不断创新和完善。
以下是几个趋势：•自动化：自动化分析系统可提高生物化学检验结果的效率和准确性•多参数检测：多参数生物化学分析可检测更多的生物标志物，提高检测精确度•个体化医疗：生物化学检验技术将更多应用于个体化的诊断和治疗•数据共享：生物化学检验技术的数据可共享，促进多学科协作生物化学检验技术的发展对社会的影响生物化学检验技术的发展对社会产生了积极的影响：•提高了医疗保障水平，帮助医生更准确地诊断和治疗疾病•对个体化医疗的发展提供了技术支持，为未来医疗事业的升级升级和发展奠定了基础•促进了生物技术的进一步发展，同时也推动了其他相关领域的研究和创新总之，生物化学检验技术在诊断、治疗和预防疾病方面的应用广泛，随着技术的不断创新和发展，其优势和作用将在医学领域中得到更广泛的应用和推广。
临床生物化学检验技术 pdf
临床生物化学检验技术
临床生物化学检验技术是医学检验技术专业的一门核心课程，它涉及到应用生物化学原理和技术来分析人体样本（如血液、尿液等），以诊断疾病、监测治疗效果、评估健康状况等。
这门课程的内容通常包括以下几个方面：
1.蛋白质和蛋白质组学：研究蛋白质的生理功能、结构性质以及在疾病状态下的变化，包括血浆蛋白如白蛋白、球蛋白等的检测。
2.酶学检测：酶在生物体内的代谢过程中扮演着关键角色，酶学检测可以用来诊断特定的疾病，如肝功能、心肌损伤等。
3.代谢物检测：分析血液或尿液中的代谢物，如葡萄糖、血脂、电解质等，以评估代谢异常。
4.酸碱平衡检测：通过测定血液pH来评估体内的酸碱平衡状态，这对诊断和监测某些疾病（如肾脏疾病、呼吸系统疾病）非常重要。
5.激素检测：检测血液中的激素水平，如甲状腺激素、胰岛素等，对于内分泌疾病的诊断和治疗至关重要。
6.血栓与止血检测：包括凝血因子活性、血小板功能等的检测，对于血栓性疾病和出血性疾病的诊断与治疗具有重要作用。
7.免疫学检测：利用免疫学技术检测血液中的抗体、抗原、细胞因子等，以诊断感染性疾病、自身免疫性疾病等。
8.遗传性疾病检测：通过分析DNA或RNA来诊断遗传性疾病，这在现代医学中越来越重要。
临床生物化学检验技术的目的是培养学生具有独立完成临床生
化检验项目的工作能力，包括理解检验的原理、操作技术、结果解释等。
此外，该课程还会涉及到实验室质量控制、临床应用评价等方面，以确保检验结果的准确性和临床有效性。
通过本课程的学习，学生将能够为未来的职业生涯做好准备，包括在医院、诊所、科研机构或体外诊断公司等领域的工作。
常用生物化学检验技术
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3、缓冲液
❖组成成分 pH
pH与pI比较，4.5-9.0,正极pH 负极
❖离子强度
离子强度越大，缓冲容量越大，pH越稳定，电 泳速度越慢，标本扩散，产热多，蒸发快； 0.05-0.1mol/L
常用生物化学检验技术
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4、支持物
❖吸附作用 ❖电渗作用
5、蒸发作用 6、样品
常用生物化学检验技术
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常用生物化学检验技术
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原理
COOH H C NH3+ pH<pI
R OH- H+
COOH C NH3+ pH = pI
R
H+ OH-
COO-
H C NH2 pH>pI
R
常用生物化学检验技术
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人血清蛋白的等电点和电泳迁移率
蛋白质 等电点 电泳迁移率cm2.s-1.v-1
白蛋白 球蛋白 球蛋白 球蛋白 球蛋白
常用生物化学检验技术
29
3、根据电泳媒介的不同分为 自由电泳 （溶液） 区带电泳 （支持介质）
4、根据电泳系统是否均一分为 连续电泳 不连续电泳
常用生物化学检验技术
30
影响电泳的因素
1、分子的形状和性质 2、电场强度
电场强度大，速度快，产热多，变性； 电场强度小，速度慢，产热少，区带模糊
常用生物化学检验技术
常用生物化学检验技术
※ 光谱分析技术 ※ 电化学技术 ※ 电泳技术 ※ 层析技术
※ 自动生化分析技术
常用生物化学检验技术
1
光谱分析
概念：利用物质具有吸收、发射或散 射光谱谱系的特点，对物质进行定性 或定量的分析方法
常用生物化学检验技术
临床生物化学检验-第5章 常用分析技术
(affinity chromatography)
19
离子交换层析 (ion exchange chromatography, IEC)：是依据各种离子或离子 化合物与固定相离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的方法。
色谱技术 ，发现了液-液即分配色谱法
固定相-
流动相-
20世纪60年代高效液相色谱，high performance liquid chromatography即HPLC
16
1. 按流动相种类分类
气相层析
液相层析
超临界流体 层析 电层析
气体
液体
超临界流体 缓冲溶液、 电场
挥发性有机物
可以溶于水或 有机溶剂中的 各种物资
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高效液相层析法 (high performance liquid chromatography，HPLC)： 是在经 典液相色谱和气相色谱的基础上发展起来的分析技术。 由于高效固定相填料颗粒小而 均匀（1.7~10μm） ，会引起高阻力（小颗粒具有高柱效），因此采用高压输液泵输送 流动相 ，可大大加快分析速度 ，故又称高压液相层析法。
临床应用：作为参考方法测定钙、镁定值或建立新常规方法作比较试验。 优点： 灵敏度高、选择性好、分析速度快。 缺点：需校准物、分析条件要求高、操作较复杂、测定每一种元素需特 定的空心阴极灯、有些反应的显色剂本身的颜色会影响测定的专一性。
8
1. 校准曲线法：以校准物浓度（系列浓度）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线 ，在相同条件 下测定待测样品 ，然后在标准曲线上查找待测物质浓度。影响因素较多 ，每次需绘制新标准曲线。
临床生物化学检验常规项目分析质量指标以及临床化学常用分析技术
临床生物化学检验常规项目分析质量指标以及临床化学常用分析技术临床生物化学检验是一种常规医学检验方法，通过检测人体血液、尿液、体液等样本中的化学成分，评估人体的生理功能和病理变化，为临床医生提供确诊、治疗和监测疾病的重要依据。
在临床生物化学检验中，常见的项目包括血糖、血脂、肝肾功能等指标。
本文将对临床生物化学检验常规项目的分析质量指标以及临床化学常用的分析技术进行探讨。
一、临床生物化学检验常规项目分析质量指标临床生物化学检验常规项目分析质量指标主要包括准确性、精确性和灵敏度。
准确性是指检验结果与实际值之间的接近程度。
为了保证准确性，临床生物化学检验常规项目需要使用准确可靠的检验方法和仪器，保证样品采集和保存的标准化，以及质量控制的有效性。
精确性是指同一样本在不同条件下重复检验的结果的一致性。
为了保证精确性，临床生物化学检验常规项目需要使用稳定可靠的试剂和仪器设备，并进行严格的质量控制和质量评价。
此外，操作人员的培训和技术水平也对结果的精确性有重要影响。
灵敏度是指检验方法能够检测样本中低浓度分析物的能力。
临床生物化学检验常规项目中，一些指标如甲状腺相关激素、肿瘤标志物等需要具备较高的灵敏度，能够提供更加精准的诊断和治疗。
二、临床化学常用分析技术临床化学常用的分析技术包括光度法、比色法、电化学法、质谱法等。
光度法基于分析物在特定波长的光线下吸收光的原理。
通过光度计测量样品吸光度的变化，可以计算出样品中分析物的浓度。
光度法广泛应用于临床生物化学检验中的各种项目，如血糖、血脂等。
比色法基于分析物在染色试剂作用下产生显色反应的原理。
通过比较比色试剂与样品显色的程度，可以确定样品中分析物的浓度。
比色法常用于临床生物化学检验中的糖化血红蛋白、尿液蛋白等项目。
电化学法基于分析物在电极上发生氧化还原反应产生电流的原理。
根据电流的大小可以计算出样品中分析物的浓度。
电化学法常用于临床生物化学检验中的血液电解质、血气分析等项目。
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生物化学检验常用技术
基 因 扩 增 技 术
电 泳 分 析 技 术
干 化 学 分 析 技 术
电 化 学 分 析 技 术
光 谱 分 析 技
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1
第一节 光谱分析技术
吸收光谱分析技术 发射光谱分析技术 散射光谱分析技术
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2
一、吸收光谱分析法
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3
0.575
光源
钨灯、卤钨灯 350～1000 氢灯、氘灯 180～360
Lambert-Beer定律适用于: 可见光、紫外光、红外光和均匀非散射 的液体以及分散均匀的固态或气态样品.
单色光
均匀介质
吸收物质无相 互作用
4、Lambert-Beer定律的偏离现 象
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5、空白溶液的选择
在分光光度法中，为消除显色剂及样品中各种共存有色物质产生的干扰、 抵消比色皿和试剂对入射光的影响而用来调节仪器百分透光率为100%的溶液。
FP640火焰光度计
火焰光度法分析示意图
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火焰光度法的特点
①快速
试样溶液于数分钟内可完成测定
②准确
火焰光源稳定性高，干扰少，误差为2％~5 ％，可用于微量分析和常量分析
③灵敏
分析碱金属与碱土金属，绝对灵敏度可达 0．1～10×10－6 g
④设备简单
被测试样易被火焰激发，产生的谱线较简单，且 均在可见光区，故使谱线分离和测量的设备简单
当化合物含量太少,一般分析方法灵pp敏t课度件不够时,使用荧光分析技术就能解决测定问18题。
透射光 I
T = I/I0
T×100%为T%称为百分透光度。透光度的负对数称为吸光 度即：
A = -lgT = -lgI/I0 = lgI0/I
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5
2、Lambert-Beer定律
当一束平行单色光通过均匀的非散射样品时，吸光度与溶液层 厚度和溶液浓度成正比。
A = KLC
A 为吸光度；
K 为比例常数，称为吸光系数；
1、对未知化合物进行定性分析
定性依据： 最大吸收波长λmax和摩尔吸光系数ε
2、对待测物质进行定量测定
标准曲线法和比较法
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(1).标准曲线法
方法：
根据Lambert-Beer定律，液体的浓度在一定范围内 与吸光度成正比关系。配制一系列浓度的标准品溶液 （浓度应包含高、中、低浓度范围），按标本处理方法 作相同处理，在特定波长下测定吸光度，以标准液浓度 为横座标，以吸光度为纵座标，将对应各点连成一条通 过原点的直线，这条直线称为标准曲线。待测溶液测定 吸光度后，从标准曲线上可查出其相应的浓度。
发射光谱是指样品本身产生的光谱被检 测器接收；吸收光谱是光源发射的光谱 被样品吸收了一部分，剩下的那部分光
谱被检测器接收。
火焰光度法
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荧光光度法
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（一）、火焰光度法
火焰光度法是以火焰为激发光源，用光电检测系统测量被测 元素所发射的辐射强度来进行定量分析的方法。 它是一种简化的发射光谱分析法
单色器
滤光片 棱镜 光栅
吸收池 检测器
玻璃比色皿 石英比色皿
显示器
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4
ห้องสมุดไป่ตู้
(一)、分光光度技术的基本原理
1、吸光度与透光度
当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一
部分光被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I， I和I0之比称为透光度，即：
入射光 I0
⑤应用范围窄 主要用于碱金属和部分碱土金属的测定
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影响火焰光度分析的因素
1、激发条件
火焰温度要适当，温度过低灵敏度下降，温度 太高则碱金属电离严重，影响测量的线性关系。
2、试样的种类和组成
3、试液中共存离子对测定有影响 4、仪器的质量
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（二）、荧光分光光度法
荧光的定义：
某些物质受紫外光或可见光照射 激发后能发射出比激发光波长较 长的光。
不
蒸
馏 水
试
样
剂
品
含 待 测 元
不
显 色
素
1、溶剂空白：不加样品和任何试剂，用纯溶剂（如蒸馏水或其他有机溶剂）作参比溶液。 选择原则：当显色剂及其它试剂均无色，被测试样中又无其他有色离子时，选用溶剂参比。
2、试剂空白：用不加样品，而显色剂和其他试剂都相同的溶液作参比溶液。 选择原则：当显色剂本身有颜色或其它试剂有颜色，被测试样中又无其他有色离子时，选用试剂参比。
荧光产生的原理：
化学物质能从外界吸收并储存能量 （如光能、化学能等）而进入激发态， 当其从激发态再回复到基态时，过剩 的能量可以电磁辐射的形式放射（即 发光）。
荧光分光光度法
利用物质吸收较短波长的光能后发 射较长波长特征光谱的性质，对物 质定性或定量分析的方法。
分析测定蛋白质、核酸、维生素等; 对某些激素及其代谢产物的测定;
3、样品空白：用不加显色剂的样品溶液作参比溶液。 选择原则：当试样溶液有颜色，而试剂、显色剂均无颜色时，选用样品空白。
4、平行操作空白：按样品分析完全相同的操作步骤，用不含待测元素的样品进行平行操作， 以消除操作过程中引入干扰杂质所带来的误差。
选择原则：当操作过程中由于试剂、器皿、水和气等因素引入了一定量的被测试样组分的干扰离子
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5.标准溶液设置的浓度范围足够大。
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2．比较法
己知浓度的标准品和标本作同样处理，使用相同的空白，同时测定 标准管和标本的吸光度，根据测定的吸光度及标准品浓度，可直接计 算出标本的浓度，计算公式为：
CR=(AR ×Cs)/As
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二、发射光谱分析法
处于激发态的待测元素，原子回到基态 时以辐射的形式释放出能量，由此而产生的 光谱称为发射光谱，对元素进行定性与定量 分析的方法。
L 为溶液层厚度，称为光径；
C 为溶液浓度
L
Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液 体
Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层
厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。
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3、Lambert-Beer定律的应用条 件
5、不显色空白：可将一份试样加入适当的掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，而显色剂 和其它试剂均按照操作手续加入，以此作为参比溶液，这样可以消除显色剂和一些共存组分的干扰。
选择原则：当显色剂和被测试样均有颜色时，可选用此法。
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(二)、分光光度法在生化检验中的应用
灵敏度高、操作简便、应用广泛