生物化学检验常用技术
生物化学检验常用技术(共66张PPT)
单色光 均匀介质 吸收物质无相 互作用
5、空白溶液的选择
在分光光度法中，为消除显色剂及样品中各种共存有色物质产生的干扰、抵消比色皿和 试剂对入射光的影响而用来调节仪器百分透光率为100%的溶液。
不
蒸 馏 水
试
样
含 待
剂
品
测
元
不
显 色
素
1、溶剂空白：不加样品和任何试剂，用纯溶剂（如蒸馏水或其他有机溶剂）作参比溶液。 选择原则：当显色剂及其它试剂均无色，被测试样中又无其他有色离子时，选用溶剂参比。
常用的固定化技术有：吸附、试剂交联、共价键合、
包埋法(酶与载体聚丙酰胺混合后直接包在电极 敏感部分形成酶凝胶层)。
几种酶电极的品种与性能
测定物质
酶
检测物 测定范围(mol/L)
葡萄糖 葡萄糖氧化酶
尿素(脲)
脲酶
胆固醇 胆固醇氧化酶
L－谷氨酸 谷氨酸脱氢酶 L－赖氨酸 赖氨酸脱羧酶
O2 NH3 H2O2 NH4+ CO2
单色器
滤光片
棱镜
光栅
吸收池
检测器
玻璃比色皿
石英比色皿
显示器
4
(一)、分光光度技术的基本原理
1、吸光度与透光度
当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部分光 被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透 光度，即：
入射光 I0
透射光 I
T = I/I0
10-4～2*10-2 10-5～10-2 10-5～10-2 10-4～10-1 10-4～10-1
离子选择性电极的分析方法
临床医学生物化学检验复习指导：第二章临床生物化学实验技术
第二章临床生物化学实验技术一、光谱检验技术利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征，以此来确定物质性质、结构或含量。
在临床生物化学检验中，光谱分析是一类十分重要的技术，应用极为广泛。
它既可以研究物质的结构分析，也可以对特定物质进行定性或定量的分析根据物质对光谱响应特征的不同，可把光谱检验技术分为发射光谱分析技术、吸收光谱分析技术和散射光谱分析技术三大类。
可见-紫外光分光光度法利用朗伯－比尔定律作为化学反应定量的基础，应重点掌握该定律的应用、使用条件和各个变量间的关系，从而根据已有的结果计算需要的变量。
吸光系数是表示物质特性的常数，是物质鉴定的基础，根据物质的吸光系数可以进行定量测定，但应注意其使用的条件。
在化学反应中尽量选择吸光系数大的物质，可以提高测定的灵敏度。
在分光光度法的建立中，应掌握波长的选择、双波长测定的原理和抗干扰的原理。
在可能的情况下应选择灵敏度高、选择性好的显色剂，同时需要应用适当的校准方式和计算方程式。
在定量分析中，大量使用分光光度计。
该类仪器属于比较精密的分析计器，使用要求比较严格。
其中单色光的纯度和波长的准确性直接影响到测定结果的准确性和精密度。
在使用前和使用过程中应进行光源的检查和波长的校正。
原子吸收分光光度法是基于光源辐射出具有待测元素特征谱线的光，通过原子化器，被其中待测元素的基态原子所吸收，根据吸收而导致辐射特征谱线光被减弱的程度来测定待测元素的含量。
与其它分析方法比较，它具有灵敏、准确、分析速度快、干扰少、无需化学反应和测量元素含量范围较广等优点。
由于其检测灵敏度较高，操作环节比较多，而且每种元素需要一种的光源灯，因此在临床实验室一般较少应用于常规分析。
荧光分析法是利用某些物质吸收了一定波长的光能后，分子从基态跃迁到激发态，此类电子经与同类分子或它种分子相互碰撞，消耗相当，而下降至第一电子激发态的最低振动能阶。
最低能阶下降到基态，同时发射出比原来所吸收的频率较低，波长较长的光能，称为荧光。
临床生物化学检验技术笔记
临床生物化学检验技术笔记
临床生物化学检验技术是一种用于诊断和治疗疾病的重要技术。
它通过测量和分析体液中的生化指标，如血清中的蛋白质、酶、电解质等，来评估机体的生理状态，发现异常情况，并提供相关的诊断和治疗建议。
以下是一些临床生物化学检验技术的基本原理和常见应用：
1. 光度法：利用物质对特定波长的光的吸收特性进行分析。
常用于测量血清中的蛋白质、酶、代谢产物等。
2. 电化学法：利用电化学原理测量电流、电压等电学参数，用于测量电解质、血气、肾功能等。
3. 酶法：利用酶对底物的特异性催化作用，测量酶的活性或底物、产物的浓度。
常用于检测肝功能、心脏损伤等。
4. 免疫测定法：利用抗原与抗体的特异性结合关系进行分析，常用于检测激素、肿瘤标志物等。
5. 质谱法：通过测量样品中分子的质量-荷电比，分析样品的组成和结构。
常用于药物测定、代谢产物分析等。
6. 核酸分析技术：通过测量DNA或RNA的含量、序列和结构，用于疾病的遗传性检测、基因表达分析等。
临床生物化学检验技术在临床诊断和治疗中起到了重要的作用。
它不仅可以用于早期发现疾病、评估疾病的严重程度，还可以用于监测治疗效果、指导治疗方案的选择。
然而，需要注意的是，临床生物化学检验技术的结果需要结合临床病史和其他检查结果进行综合分
析和解释，以确保最终的诊断和治疗方案的准确性和有效性。
临床生物化学检验技术笔记(一)
临床生物化学检验技术笔记(一)临床生物化学检验技术什么是生物化学检验技术生物化学检验技术是一种研究生物分子的化学性质和结构的科学技术。
它主要通过对生物分子进行分离、纯化、鉴定、定量和结构分析等方法，从而了解生物体内分子的组成和功能。
生物化学检验技术在临床上的应用生物化学检验技术在临床上广泛应用于疾病的诊断、治疗和预防。
以下是一些常见的检验项目：•血糖：用于诊断和监测糖尿病•肝功：检测肝功能异常，如肝炎等•肾功：检测肾功能异常，如肾炎等•血脂：监测血脂异常，如高胆固醇等•血常规：检测贫血、白细胞异常等•电解质：检测血液中钠、钾、钙等电解质浓度生物化学检验技术的方法生物化学检验技术主要有以下几种方法：•毛细管电泳：用电场将荷电化合物分离，根据其不同的运动速度进行鉴定和定量•高效液相色谱：利用色谱柱对混合物分离，根据吸收峰的特点鉴定和定量物质•质谱：通过精确测量分子的质量和荷质比鉴定和定量物质•免疫学方法：利用抗体和抗原的特异性结合，鉴定和定量物质生物化学检验技术的注意事项生物化学检验技术需要严格掌握操作规程和标准化程序，同时还需要注意以下几点：•样本的采集、保存、运输应符合规范要求•仪器的日常维护和保养要得到重视，确保准确性和可重复性•熟悉并遵守相关法律法规，保护患者隐私和安全以上就是生物化学检验技术的相关内容。
作为教师，我们需要在教学过程中强调注意事项，帮助学生熟练掌握技术，提高检验结果的准确性和可靠性。
生物化学检验技术的发展与趋势随着生物技术的快速发展，生物化学检验技术也在不断创新和完善。
以下是几个趋势：•自动化：自动化分析系统可提高生物化学检验结果的效率和准确性•多参数检测：多参数生物化学分析可检测更多的生物标志物，提高检测精确度•个体化医疗：生物化学检验技术将更多应用于个体化的诊断和治疗•数据共享：生物化学检验技术的数据可共享，促进多学科协作生物化学检验技术的发展对社会的影响生物化学检验技术的发展对社会产生了积极的影响：•提高了医疗保障水平，帮助医生更准确地诊断和治疗疾病•对个体化医疗的发展提供了技术支持，为未来医疗事业的升级升级和发展奠定了基础•促进了生物技术的进一步发展，同时也推动了其他相关领域的研究和创新总之，生物化学检验技术在诊断、治疗和预防疾病方面的应用广泛，随着技术的不断创新和发展，其优势和作用将在医学领域中得到更广泛的应用和推广。
常见的生物化学实验方法
常见的生物化学实验方法生物化学实验是研究生物分子结构、功能和相互作用的重要手段，广泛应用于生物医学研究、药物开发和环境保护等领域。
本文将介绍一些常见的生物化学实验方法。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析物质的方法，根据分子的化学性质和大小差异，将混合物分离成各个组分。
常见的色谱技术包括气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和薄层色谱（TLC）等。
在生物化学实验中，色谱技术常用于对生物样品中的分子进行纯化和分析。
例如，气相色谱可用于分析氨基酸和脂肪酸等小分子化合物，液相色谱则可以用于分离蛋白质、核酸和多糖等生物大分子。
二、电泳技术电泳技术是利用电场作用下物质的电荷和大小差异，将混合物分离成各个组分的方法。
常见的电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和凝胶过滤电泳等。
在生物化学实验中，电泳技术常用于分离和检测蛋白质和核酸等生物大分子。
例如，聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离和测定蛋白质分子量，SDS-PAGE则可以用于检测蛋白质的纯度。
三、质谱技术质谱技术是利用质量分析仪器对物质的质量和结构进行分析的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、飞行时间质谱（TOF-MS）和液相色谱质谱联用（LC-MS）等。
在生物化学实验中，质谱技术常用于鉴定和定量生物分子。
例如，利用质谱仪可以对蛋白质进行鉴定，通过测定样品中蛋白质的质量和碎片离子的质量谱图，确定蛋白质的氨基酸序列。
四、核酸杂交技术核酸杂交技术是利用互补的DNA或RNA序列进行结合，从而检测目标序列的方法。
常见的核酸杂交技术包括Southern blot、Northernblot和in situ hybridization等。
在生物化学实验中，核酸杂交技术常用于检测和定量特定DNA或RNA序列的存在。
例如，Southern blot可用于检测DNA片段在基因组中的分布和拷贝数，Northern blot则可用于检测特定mRNA的表达水平。
临床生物化学检验-第5章 常用分析技术
(affinity chromatography)
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离子交换层析 (ion exchange chromatography, IEC)：是依据各种离子或离子 化合物与固定相离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的方法。
色谱技术 ，发现了液-液即分配色谱法
固定相-
流动相-
20世纪60年代高效液相色谱，high performance liquid chromatography即HPLC
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1. 按流动相种类分类
气相层析
液相层析
超临界流体 层析 电层析
气体
液体
超临界流体 缓冲溶液、 电场
挥发性有机物
可以溶于水或 有机溶剂中的 各种物资
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高效液相层析法 (high performance liquid chromatography，HPLC)： 是在经 典液相色谱和气相色谱的基础上发展起来的分析技术。 由于高效固定相填料颗粒小而 均匀（1.7~10μm） ，会引起高阻力（小颗粒具有高柱效），因此采用高压输液泵输送 流动相 ，可大大加快分析速度 ，故又称高压液相层析法。
临床应用：作为参考方法测定钙、镁定值或建立新常规方法作比较试验。 优点： 灵敏度高、选择性好、分析速度快。 缺点：需校准物、分析条件要求高、操作较复杂、测定每一种元素需特 定的空心阴极灯、有些反应的显色剂本身的颜色会影响测定的专一性。
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1. 校准曲线法：以校准物浓度（系列浓度）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线 ，在相同条件 下测定待测样品 ，然后在标准曲线上查找待测物质浓度。影响因素较多 ，每次需绘制新标准曲线。
临床生物化学检验常规项目分析质量指标以及临床化学常用分析技术
临床生物化学检验常规项目分析质量指标以及临床化学常用分析技术临床生物化学检验是一种常规医学检验方法，通过检测人体血液、尿液、体液等样本中的化学成分，评估人体的生理功能和病理变化，为临床医生提供确诊、治疗和监测疾病的重要依据。
在临床生物化学检验中，常见的项目包括血糖、血脂、肝肾功能等指标。
本文将对临床生物化学检验常规项目的分析质量指标以及临床化学常用的分析技术进行探讨。
一、临床生物化学检验常规项目分析质量指标临床生物化学检验常规项目分析质量指标主要包括准确性、精确性和灵敏度。
准确性是指检验结果与实际值之间的接近程度。
为了保证准确性，临床生物化学检验常规项目需要使用准确可靠的检验方法和仪器，保证样品采集和保存的标准化，以及质量控制的有效性。
精确性是指同一样本在不同条件下重复检验的结果的一致性。
为了保证精确性，临床生物化学检验常规项目需要使用稳定可靠的试剂和仪器设备，并进行严格的质量控制和质量评价。
此外，操作人员的培训和技术水平也对结果的精确性有重要影响。
灵敏度是指检验方法能够检测样本中低浓度分析物的能力。
临床生物化学检验常规项目中，一些指标如甲状腺相关激素、肿瘤标志物等需要具备较高的灵敏度，能够提供更加精准的诊断和治疗。
二、临床化学常用分析技术临床化学常用的分析技术包括光度法、比色法、电化学法、质谱法等。
光度法基于分析物在特定波长的光线下吸收光的原理。
通过光度计测量样品吸光度的变化，可以计算出样品中分析物的浓度。
光度法广泛应用于临床生物化学检验中的各种项目，如血糖、血脂等。
比色法基于分析物在染色试剂作用下产生显色反应的原理。
通过比较比色试剂与样品显色的程度，可以确定样品中分析物的浓度。
比色法常用于临床生物化学检验中的糖化血红蛋白、尿液蛋白等项目。
电化学法基于分析物在电极上发生氧化还原反应产生电流的原理。
根据电流的大小可以计算出样品中分析物的浓度。
电化学法常用于临床生物化学检验中的血液电解质、血气分析等项目。
临床生物化学检验常规项目分析质量指标以及临床化学常用分析技术
临床生物化学检验常规项目分析质量指标以及临床化学常用分析技术临床生物化学检验是一种通过检测人体内生物化学物质的含量和特性，来帮助医生判断患者身体健康状况和诊断疾病的方法。
常规项目是临床生物化学检验中最常用的项目，包括血液中常见生化指标的检测，如血糖、肾功能指标、肝功能指标等。
在临床生物化学检验中，常规项目的分析质量指标主要有以下几个方面：准确性：即检测结果与真值之间的偏离程度。
准确性是检验结果是否与患者真实状况一致的重要指标。
为了保证准确性，需要严格控制实验操作的每一个环节，例如标本采集、样品储存、试剂的准确配比等。
精密度：即同一个样本的重复测定结果的离散程度。
精密度反映了方法的稳定性和可重复性，可以通过重复测定同一标准物浓度来评估。
精密度越高，结果的可靠性就越高。
灵敏度：即能够检测到的最低浓度。
灵敏度是指方法对低浓度其中一种物质的检出能力。
灵敏度高意味着方法可以检测到更低浓度的物质，对于血液中微量物质的检测很重要。
特异性：即方法对于目标物质的特异性。
特异性是指方法是否能够准确地检测目标物质，而不受其他物质的影响。
特异性高意味着方法可以准确地区分目标物质和其他干扰物质。
在临床化学常用分析技术方面，主要有以下几种方法：分光光度法：利用物质吸收或发射特定波长的光来测量物质的浓度。
根据不同物质的特性，可以选择紫外、可见或红外光谱范围进行检测。
电化学法：利用电极与溶液中的物质发生反应，测定物质浓度或电位变化。
常见的电化学方法有电解法、电导法、电位滴定法等。
酶法：利用特定酶与底物发生反应，通过测量反应产物的生成速率或光学信号变化来测定物质浓度。
酶法广泛应用于血糖、肝功能等项目的检测。
色谱法：根据物质在固定相和液相之间的分配系数差异，通过固定相或液相中分离物质，再测定物质浓度。
常见的色谱方法有气相色谱法和液相色谱法。
质谱法：结合色谱技术和质谱技术，将待测物质通过分离技术与质谱技术相结合分析。
质谱法具有高灵敏度、高选择性和高准确性的优点，广泛应用于生物化学分析中。
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5、不显色空白：可将一份试样加入适当的掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，而显色剂 和其它试剂均按照操作手续加入，以此作为参比溶液，这样可以消除显色剂和一些共存组分的干扰。
选择原则：当显色剂和被测试样均有颜色时，可选用此法。
第三章
生物化学检验常用技术
基 因 扩 增 技 术
电 泳 分 析 技 术
干 化 学 分 析 技 术
电 化 学 分 析 技 术
光 谱 分 析 技
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第一节 光谱分析技术
吸收光谱分析技术 发射光谱分析技术 散射光谱分析技术
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一、吸收光谱分析法
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火焰光度法是以火焰为激发光源，用光电检测系统测量被测 元素所发射的辐射强度来进行定量分析的方法。 它是一种简化的发射光谱分析法
FP640火焰光度计
火焰光度法分析示意图
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火焰光度法的特点
①快速
试样溶液于数分钟内可完成测定
②准确
火焰光源稳定性高，干扰少，误差为2％~5 ％，可用于微量分析和常量分析
A 为吸光度；
K 为比例常数，称为吸光系数；
L 为溶液层厚度，称为光径；
C 为溶液浓度
L
Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液 体
Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层
厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。
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2、试样的种类和组成
3、试液中共存离子对测定有影响 4、仪器的质量
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（二）、荧光分光光度法
荧光的定义：
某些物质受紫外光或可见光照射 激发后能发射出比激发光波长较 长的光。
荧光产生的原理：
化学物质能从外界吸收并储存能量 （如光能、化学能等）而进入激发态， 当其从激发态再回复到基态时，过剩 的能量可以电磁辐射的形式放射（即 发光）。
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5.标准溶液设置的浓度范围足够大。
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2．比较法
己知浓度的标准品和标本作同样处理，使用相同的空白，同时测定 标准管和标本的吸光度，根据测定的吸光度及标准品浓度，可直接计 算出标本的浓度，计算公式为：
CR=(AR ×Cs)/As
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二、发射光谱分析法
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(二)、分光光度法在生化检验中的应用
灵敏度高、操作简便、应用广泛
1、对未知化合物进行定性分析
定性依据： 最大吸收波长λmax和摩尔吸光系数ε
2、对待测物质进行定量测定
标准曲线法和比较法
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(1).标准曲线法
方法：
根据Lambert-Beer定律，液体的浓度在一定范围内 与吸光度成正比关系。配制一系列浓度的标准品溶液 （浓度应包含高、中、低浓度范围），按标本处理方法 作相同处理，在特定波长下测定吸光度，以标准液浓度 为横座标，以吸光度为纵座标，将对应各点连成一条通 过原点的直线，这条直线称为标准曲线。待测溶液测定 吸光度后，从标准曲线上可查出其相应的浓度。
2、试剂空白：用不加样品，而显色剂和其他试剂都相同的溶液作参比溶液。 选择原则：当显色剂本身有颜色或其它试剂有颜色，被测试样中又无其他有色离子时，选用试剂参比。
3、样品空白：用不加显色剂的样品溶液作参比溶液。 选择原则：当试样溶液有颜色，而试剂、显色剂均无颜色时，选用样品空白。
4、平行操作空白：按样品分析完全相同的操作步骤，用不含待测元素的样品进行平行操作， 以消除操作过程中引入干扰杂质所带来的误差。
③灵敏
分析碱金属与碱土金属，绝对灵敏度可达 0．1～10×10－6 g
④设备简单
被测试样易被火焰激发，产生的谱线较简单，且 均在可见光区，故使谱线分离和测量的设备简单
⑤应用范围窄 主要用于碱金属和部分碱土金属的测定
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影响火焰光度分析的因素
1、激发条件
火焰温度要适当，温度过低灵敏度下降，温度 太高则碱金属电离严重，影响测量的线性关系。
荧光分光光度法
利用物质吸收较短波长的光能后发 射较长波长特征光谱的性质，对物 质定性或定量分析的方法。
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5、空白溶液的选择
在分光光度法中，为消除显色剂及样品中各种共存有色物质产生的干扰、 抵消比色皿和试剂对入射光的影响而用来调节仪器百分透光率为100%的溶液。
不
蒸
馏 水
试
样
剂
品
含 待 测 元
不
显 色
素
1、溶剂空白：不加样品和任何试剂，用纯溶剂（如蒸馏水或其他有机溶剂）作参比溶液。 选择原则：当显色剂及其它试剂均无色，被测试样中又无其他有色离子时，选用溶剂参比。
光源
钨灯、卤钨灯 350～1000 氢灯、氘灯 180～池 检测器
玻璃比色皿 石英比色皿
显示器
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(一)、分光光度技术的基本原理
1、吸光度与透光度
当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部 分光被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I， I和I0之比称为透光度，即：
入射光 I0
透射光 I
T = I/I0
T×100%为T%称为百分透光度。透光度的负对数称为吸光 度即：
A = -lgT = -lgI/I0 = lgI0/I
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2、Lambert-Beer定律
当一束平行单色光通过均匀的非散射样品时，吸光度与溶液层 厚度和溶液浓度成正比。
A = KLC
处于激发态的待测元素，原子回到基态 时以辐射的形式释放出能量，由此而产生的 光谱称为发射光谱，对元素进行定性与定量 分析的方法。
发射光谱是指样品本身产生的光谱被检 测器接收；吸收光谱是光源发射的光谱 被样品吸收了一部分，剩下的那部分光
谱被检测器接收。
火焰光度法
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荧光光度法
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（一）、火焰光度法
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3、Lambert-Beer定律的应用条 件
Lambert-Beer定律适用于: 可见光、紫外光、红外光和均匀非散射 的液体以及分散均匀的固态或气态样品.
单色光
均匀介质
吸收物质无相
4、Lambert-Beer定律的偏离现
互作用
象
溶液：稀溶液、化学变化 光学; 非单色光、散射和折射 仪器; 光源、实验条件