菌饼法筛选不同活性物对棉花黄萎病菌抑制效果研究
棉花黄萎病生防菌筛选鉴定及根瘤菌DG3-1对棉花生长的影响
棉花黄萎病生防菌筛选鉴定及根瘤菌DG3-1对棉花生长的影响作者：代先兴闫成才祖丽胡玛尔·麦提喀迪尔王庆朋冯俊辉李猛王兰牛冬冬郝海婷来源：《山东农业科学》2024年第05期關键词：棉花：内生细菌：棉花黄萎病：拈抗：根瘤菌DG3-1：促生新疆是我国棉花的主要产区之一，也是我国棉花产量的重要来源，棉花作为最主要的经济作物已成为新疆经济发展不可缺少的一部分。
棉花黄萎病是由大丽轮枝菌（Verticillium dahliae Kleb）引起的土传真菌性病害，随着连作年限的延长，棉花黄萎病发生也在不断加剧，严重影响了棉花产量和品质，已成为限制新疆棉花产业发展的重要因素。
目前，轮作倒茬、抗病品种选育以及化学防治等是防治棉花黄萎病的主要措施。
但棉花黄萎病菌能产生微菌核，而轮作并不能减少土壤中微菌核的数量，且抗病品种不易获得，化学农药虽然在一定程度上可以减轻棉花黄萎病的危害，但其对生态的影响不容忽视。
利用内生细菌防治棉花黄萎病已成为当前研究的热点。
内生细菌广泛定殖于棉株各组织的细胞内或细胞间隙，并与植株建立了稳定的互利共生关系。
目前利用内生细菌防治棉花黄萎病已有较多报道，周京龙等从健康棉株中分离得到一株蜡样芽胞杆菌YUPP-10，能够有效抑制棉花黄萎病的发生；Zabihullah Sherzad等从棉花根系中分离得到一株解淀粉芽孢杆菌，利用其发酵液浸泡种子，对棉花黄萎病的防治效果达到54.99%：金利容等从棉花茎部分离筛选出一株内生细菌HB3S-20，对棉花黄萎病菌的平板抑制率达到47.30%，温室防控效果达到60%以上。
分离筛选新型、高效的拮抗菌株是生物防治的基础。
本研究以南疆本地种植的健康棉花为研究对象，从不同组织中分离筛选对棉花黄萎病菌有良好拮抗效果的棉花内生细菌，选取一株拮抗效果较好的根瘤菌DG3-1制备菌悬液，利用盆栽试验测定其对棉花生长的影响，以期为棉花内生菌的开发利用提供菌种资源，为微生物肥料以及微生物菌剂的研发和应用提供理论依据。
25种中草药提取物对棉花黄萎病菌的抑制作用
２０１９，４５（２）：２３４－２３７ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ收稿日期： ２０１８－０４－０８ 修订日期： ２０１８－０７－２４基金项目： 国家重点研发计划（２０１７ＹＦＤ０２０１９０７）；湖北省农业科学院青年科学基金（２０１６ＮＫＹＪＪ１３）＊通信作者Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｎｌｉｒｏｎｇ＿１９９９＠１６３．ｃｏｍ２５种中草药提取物对棉花黄萎病菌的抑制作用金利容＊， 尹海辰， 万 鹏， 黄 薇， 许 冬， 杨妮娜（农业部华中作物有害生物综合治理重点实验室，农作物重大病虫草害防控湖北省重点实验室，湖北省农业科学院植保土肥研究所，武汉 ４３００６４）摘要 以棉花黄萎病菌Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ为供试菌种，采用菌丝生长速率法测定了２５种中草药乙醇提取物的抑菌作用。
结果表明，２５种中草药乙醇提取物中，花椒、黄柏和木香的抑菌作用最好，抑制率分别为５９．３０％、４８．２９％和４５．５４％。
同时，这３种中草药的乙醇提取物抑菌活性均显著高于石油醚提取物的抑菌活性。
在室内毒力测定中，花椒、黄柏和木香的乙醇提取物对供试菌株的ＥＣ５０分别为３．７４，１３．９８和１７．０２ｍｇ／ｍＬ。
关键词 中草药提取物； 棉花； 棉花黄萎病菌； 抑制作用中图分类号： Ｓ ４３５．６２１．２ 文献标识码： Ｂ ＤＯＩ： １０．１６６８８／ｊ．ｚｗｂｈ．２０１８１５３Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ２５ ｋｉｎｄｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｅｘｔｒａｃｔａｇａｉｎｓｔ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅＪＩＮ Ｌｉｒｏｎｇ， ＹＩＮ Ｈａｉｃｈｅｎ， ＷＡＮ Ｐｅｎｇ， ＨＵＡＮＧ Ｗｅｉ， ＸＵ Ｄｏｎｇ， ＹＡＮＧ Ｎｉｎａ（Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｐｅｓｔ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｎ Ｃｒｏｐｓ ｉｎ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｃｈｉｎａ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｈｕｂｅｉ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｒｏｐ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｉｎｓｅｃｔ Ｐｅｓｔｓ ａｎｄ Ｗｅｅｄｓ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｓｏｉｌ ａｎｄ Ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒ，Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗｕｈａｎ ４３００６４，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ２５ ｋｉｎｄｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｅｘｔｒａｃｔ ａｇａｉｎｓｔ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｕｓｉｎｇｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｔｈｅ ｍｙｃｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｌｃｏｈｏｌ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ ｂｕｎｇｅａｎｕｍＭａｘｉｍ，Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ ａｍｕｒｅｎｓｅ ａｎｄ Ｒａｄｉｘ Ａｕｃｋｌａｎｄｉａｅ ｓｈｏｗｅｄ ｓｔｒｏｎｇ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎ－ｇｉ，ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｏｆ ５９．３０％，４８．２９％ａｎｄ ４５．５４％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｃｏｈｏｌｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｓ．Ｉｎｄｏｏｒ ｔｏｘｉｃｉｔｙｔｅｓｔ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＥＣ５０ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｌｃｏｈｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ３ ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ３．７４ ｍｇ／ｍＬ，１３．９８ ｍｇ／ｍＬ和１７．０２ｍｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｈｅｒｂａｌ ｅｘｔｒａｃｔ； ｃｏｔｔｏｎ； Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ； ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ 棉花是重要的经济作物，棉花黄萎病是棉花上的主要病害，严重影响棉花的品质和产量。
2 种微生物菌剂对棉花农艺性状和黄萎病防治效果的影响
示范点 处理 时间第 1 次施用药量 时间第 2 次施用药量 日 月 日 月 （ / ） （kg/667 m2） （ / ） （kg/667 m2）
四十四团 1 25/5
0.3
2
25/5
1.0
五十三团 1 25/7
0.3
2
25/7
1.0
1/6
0.31/6Fra bibliotek1.0
测 产 [3]。
2 结果与分析
2.1 不同处理对棉花农艺性状的影响
通过对 2 个试验点的棉花株高、 果枝数及单株
铃数等农艺性状调查，结果显示，棉田滴施微生物菌 剂对棉花具有较好的促生效果（表 2）。 四十四团调查 结果显示，与对照相比，处理 1 株高增加 3.0 cm，始节 高增加 2.5 cm， 始节位增加 0.9 节， 果枝数增加 1.3 台，单株结铃数增加 2.1 个；处理 2 株高增加 5.4 cm， 始节高增加 3.4 cm，始节位增加 1.2 节，果枝数增加 2.4 台，单株结铃数增加 2.4 个。
科学施肥 KEXUESHIFEI
2 种微生物菌剂对棉花农艺性状和黄萎病 防治效果的影响
王 凡，邵青龙，张栋海，姜明军 * （新疆生产建设兵团第三师农业科学研究所，新疆 图木舒克 843900）
摘要：为验证微生物菌剂在棉花上的应用效果，与常规 管理棉田进行对比试验，结果表明，较常规管理棉田滴施伊 尔睦微生物菌剂和枯芽春 2 种微生物菌剂的棉田，棉花果枝 台数和蕾铃数均有所增加。 滴施微生物菌剂能有效提高棉花 结铃数，对棉花枯萎病也有一定的防治效果，可以在棉花生 产中推广使用。
38
2020·11
KEXUESHIFEI 科学施肥
棉花黄萎病、枯萎病拮抗细菌的筛选及其生长特性的研究
研究 ｛ 告 厦
枉 扬栋 第３卷第６ ２０） ３ 期（ ７ ０
Ｐ ＡＮＴ ＲＯ Ｃ ＯＮ Ｖｏ ． ３ Ｎｏ ６ （ ０ ７ Ｌ Ｐ ＴＥ ＴＩ １３ ． ２ ０ ） ・ ３ ・ ９
棉花黄 萎病 、 枯萎 病拮 抗细 菌 的筛选 及 其 生长 特 性 的研 究
１ ２ 培 养基 ．
其 中黑 白轮枝 菌和 大丽轮枝 菌是 引起 世界 范 围 内广 泛寄 主产生 微 管性 黄 萎 病 的两 个 常 见 种Ⅲ ］ ２ 。枯萎 病是一 类植 物病 害 的总 称 ， 细 菌性 病 原 和 真 菌性 有 病原两 种 ， 菌性病 原 是 由镰 刀 菌属 （ ｕａ ｉｍ） 真 Ｆ ｓ ｒｕ 引 起 的世界 性 植 物 土传 病 害Ｌ 。在 黄萎 病 、 萎病 的 ４ 枯 防治过程 中 ， 传统 的防治方 法效果 并不 明显 ， 目前生
黄萎病 、 枯萎病 是世界 级 的植 物 病害 ， 它们 使 植
物 萎蔫致死 ， 且极 难 防治 ， 因此 有 “ 物癌 症 ” 植 之称 。
的 ５ 细菌 ， 株 挑选 其 中抗 性 最 强 的 １ 进 行 分子 生 株 物学 鉴定 ， 对其最 适生 长条件进 行 了摸 索 。 并
每年 由于黄 萎病 、 萎病 给 全 球 造成 的经 济 损 失平 枯 均数 十亿美元 。黄 萎病 、 萎 病 能感 染 １０多 种植 枯 ０
Ａｂ ｔａ ｔ Ｃ５，Ｃ６ ６，Ｓ ，Ｂ１ ｆ ｅｂ ｃ ｅ ｉ ｒ ｓ ｌ ｔ ｄ ｆｏ ｃ ｔｏ ａ ｄ ｒ ｉｏ ｐ ｅ ｅｓ ｉ ｉ ａ ｇ ｉ ｏ ｉ ｃ ｎ ｓ ｒ ｃ ，Ｓ １ ｉ ａ ｔ ｒ ｗｅ ｅ ｉｏ ａ ｅ ｒ ｍ ｏ ｔ ｎ ｌｎ ｈ ｚ ｓ ｈ ｒ ｏ ｌ ｎ Ｇｕ ｎ ｘ ｖ ｎ ｅ ａ ｄ ｖ ａ Ｐｒ ｔ ｅ Ｉ ｓ ｉｕ ｅ ｏ ａ ｔＰ ｏ ｅ ｔｏ ｈ ｎ ｔｔ ｔ ｆＰｌｎ ｒ ｔ ｃ ｉｎ，ＣＡＡＳ，ｗｈ ｃ ａ ｔ ｏ ｇ ｙ ｉｈ ｂｔ ｂ ｔ ａ ｈ ｇ ｎ ｆ ｃ ｔｏ ｅ ｔ ｉｌｕ ｗｉ ｎ ｉｈ ｃ ｎ ｓ ｒ ｎ ｌ ｎ ｉ ｉ ｏ ｈ ｐ ｔ ｏ ｅ ｓ ｏ ｏ ｔ ｎ Ｖ ｒ ｉ ｌｉ ｍ ｌ ａ ｄ ｃ ｔ
棉花抗黄萎病基因筛选及NBS-LRR类抗病基因GbaNA1功能研究
棉花抗黄萎病基因筛选及NBS-LRR类抗病基因GbaNA1功能研究棉花黄萎病是一种毁灭性土传维管束真菌病害,被称作棉花的“癌症”。
黄萎病病原菌侵染棉花后会引起叶片失绿变黄,萎蔫脱落,严重威胁棉花产量及纤维品质。
目前针对棉花抗黄萎病的分子机制及抗病基因功能研究,是棉花抗黄萎病研究的热点问题。
本研究对二倍体棉种雷蒙德氏棉(Gossypium raimondii)基因组数据进行分析,结合大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)侵染棉花转录组分析,筛选出棉花抗黄萎病候选位点。
对其中一个抗病位点Vd RL08编码基因进行了表达模式以及病毒诱导的基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)分析,确定了该位点中候选抗病基因,在此基础上克隆候选抗病基因并对基因功能进行了鉴定。
获得了以下主要研究结果:1.雷蒙德氏棉基因组共编码1004个抗性基因同源序列(Resistance gene analogues,RGAs),这些RGA基因之间具有很高的同源性。
近一半的RGA基因成簇分布,共形成26个基因簇(RGA-gene-rich clusters,Rgrcs)。
同源性分析表明Rgrcs基因在进化过程中可能发生了串联重复和序列交换,不同Rgrcs基因之间存在片段转移复制。
转录组数据分析发现,RGA基因在棉花应答大丽轮枝菌侵染过程中被诱导表达,接种大丽轮枝菌Vd991后从19个Rgrcs中共检测到26个黄萎病抗性位点(Verticillium dahliae response loci,VdRLs)。
12个Vd RLs与已知黄萎病抗性QTLs相邻,其中5个VdRLs富含具有NB-ARC结构域的NBS-LRR类抗病基因。
2.VdRL08是富含NBS-LRR类抗病基因的候选黄萎病抗性位点,该位点在雷蒙德氏棉中共编码21个基因,8个基因为NBS-LRR类抗病基因。
该位点的基因在抗病海岛棉和感病陆地棉中受到大丽轮枝菌侵染后具有不同的表达模式。
不同抗性棉花品种根系分泌物及酚酸类物质对黄萎病菌的影响
ｃｎｒｔ ｎ（ ０ ‘ ｐｏ ｔｄｍｙｅ ｕ ｇｏ ｈｅｒ ｎａ ｄｉ ｉｉ ｄｉｌ ｅ；ｎ ａｌ ｃ ｅｒ ｒｍｏｅ ｃｌ ｍ ｅｔ ｉ ｓ ａ ｏ ＜４ ０ｍｇ Ｌ ） ｒｍｏｅ ｃｌ ｍ ｒｗ ａｌ ｏ ｈｂｔ ｔｒａｄｇｌｃ ｉ ｃ ａｌｐｏ ｔ ｍｙｅｉ ｉ ｔ ｙ ｎ ｎ ｅ ｔａ ｉａ ｄ ｌ ｙ ｄ ｕ
的差异 ， 抗 病 品种 根 系分泌 物 对 土传病 原 菌 的 且 孢 子萌 发 和菌 丝生 长 具有 抑 制作 用 ， 感病 品种具
有促 进作 用［ 】 ｕ ｔｎ认 为抗 、 品种 的生化性 ６ 。Ｂ ｘｏ － “ 感 质 的差 异 在抗 病 中发 挥作 用 ， 且这 种差 异 可通 并 过 根系分 泌 物反 映【 酚 酸作 为植 物 根 系 分 泌 物 中普 遍 存 在 的化 感 物质 ， 对病 原菌 生长有 很 大 的影 响［ｌ。本试 验 １４ ３］ ＿ 通 过 对 不 同抗 性 棉 花 品种 根 系分 泌 物 及 其 对 黄 萎病 菌 生长 分析 ， 示 棉花 抗 黄萎 病性 与 根 系分 揭
ｈｇ ｅｆｒ ｎｅｌ ｕｄｃｒｍａ ｇａｈ （ Ｐ Ｃ ； ａｌ ｃ ， ｈｏｏ ｅｉ ａｉ， ａ ｉｉ ａｉ ｄ －ｏ ｍａｉ ａｉ ｗｅ ｅ ｃ ｄ ｉ ｐ ｒ ｍａｃ ｑ ｉ ｈｏ ｔ ｒ ｙＨ Ｌ ）ｇｌｃａｉ ｃｌｒｇ ｎ ｃｄ ｖｎｌｃ ｃ ａ ｃ ｕ ｒ ｃ ｒ ｄｔ ｔ ｈ ｏ ｉ ｏ ｐ ｉ ｄ ｃ ｌ ｄ ｎ ｐ ｃ ｄ ｅ ｅｅ
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江西棉区棉花黄萎病高效拮抗菌的筛选_鉴定和抗菌物质研究_聂太礼
江西棉区棉花黄萎病高效拮抗菌的筛选、鉴定和抗菌物质研究聂太礼1,王梦亮2＊,王 婷3,杨 军1(1.江西省棉花研究所,江西九江332000;2.山西大学应用化学研究所,太原030006;3.九江学院,江西九江332000)Screening and Identification of Antagonistic Bacteria Strains against V erticilliumdahliae and Study of the Antifungal Su bstance in Jiangxi Cotton RegionNIE Tai -li ,WANG Meng -liang＊,WA NG Ting ,YANG Jun摘要:从江西棉区3个主产棉县采集17份棉株根际土样,从中分离纯化细菌396株,经实验室平板筛选和盆栽防病实验筛选出棉花黄萎病高效拮抗细菌3株,分别编号为C -02,C -22和C -32,它们对棉花黄萎病的相对防效分别为85.4%,79.4%和75.1%。
其中菌株C -02经实验室生理生化特征测定和16S rDNA 序列分析被鉴定为枯草芽孢杆菌,其胞外分泌抗菌物质被证实为蛋白质类。
关键词:棉花黄萎病;拮抗细菌;筛选;鉴定;抗菌物质中图分类号:S435.621 文献标志码:A 文章编号:1000-632X (2011)08-0017-05收稿日期:2011-06-23 ＊通讯作者,m lw ang @sxu .edu .cn 基金项目:科技部创新方法专项(2010Z M 20700)16……(万少安,等)棉花回潮率与棉花质量关系建模的研究 从图7和图8可看出,棉花回潮率与棉结呈中度正相关,表明棉纤维回潮率越大,棉花在加工过程产生的棉结越多。
3结论与讨论棉花回潮率是棉花标准重要指标,是棉花交易各方结价的重要依据,同时在加工生产过程中对棉花其它物理性能指标也产生一定影响,其中影响较大的指标有上半部平均长度、束纤维断裂比强度、杂质和棉结等主要指标,而这些指标对棉花使用价值影响很大。
不同有机改良剂对棉花黄萎病的
不同有机改良剂对棉花黄萎病的防病作用及其机制李洪连袁虹霞黄俊丽王振跃邢小萍(河南农业大学植物保护系,郑州450002)摘要在盆栽和小区试验条件下研究了8种不同有机改良剂对棉花黄萎病的防治效果。
结果表明：盆栽试验中以几丁质对棉花黄萎病的防效较好,在现蕾期和收获期防效分别达80.39%和72.28%;豆秸粉和绿肥次之,两个生育期防效分别为65.19%、60.02%和62.90%、55.67%。
小区的试验结果与盆栽试验结果基本一致。
有机改良剂处理土壤后,根际微生物数量显著增加,而且对黄萎病菌具有抑制作用的根际真菌和放线菌的比率都明显高于对照.有机改良剂的浸出液对病原菌的微菌核萌发及菌丝生长都有不同程度的抑制作用。
关键词有机改良剂,棉花黄萎病,防治效果,防病机制棉花黃萎病Vertieillium dahliae Kleb是目前棉花生产上危害最严重的病害之一。
1993年我国棉花黄萎病暴发成灾,尤其是北方棉区更加严重,有些地区病株率高达70%以上。
1995和1996年棉花黄萎病又连续两年大发生,损失十分惨重［1］。
由于棉花黄萎病属于土传维管束病害,病原菌在土壤中可以长期存活,目前缺乏高抗品种和有效的化学药剂,防治十分困难,急需寻找新的防治方法。
利用有机改良剂防治植物病害已有一些成功事例［2~7］,但尚未见到在棉花黄萎病上应用的报道。
作者研究了不同有机改良剂对棉花黄萎病的防治效果,并初步探索其防病机制,以期为该病的防治提供理论依据。
1材料与方法1.1试验材料1.1.1有机改良剂:(1)几丁质(将蟹虾壳烘干粉碎后备用),(2)豆秸粉(从场边取回豆秸,干燥粉碎后备用),(3)绿肥(从地里摘取生长期为'个月的新鲜油菜叶,粉碎后掩青备用),(4)稻壳粉(从场边取回稻壳,干燥粉碎后备用),(5)酵素菌颗粒肥(河南磐龙酵素菌生物工程有限公司生产并提供),(6)腐熟粪肥(从动物养殖厂取回腐熟好的鸡粪,干燥粉碎后备用),(7)豆饼肥(从市场上购回花生饼,干燥粉碎腐熟后备用),(8)麦秸(从场边取回腐熟好的麦秸，干燥粉碎后备用)。
棉田土壤中拮抗枯黄萎病的细菌筛选
３． 新疆 乌鲁 木齐众 春花 卉苗木 有 限公 司 乌鲁木 齐 ８ ０ ０ ） ４ ０ ０
摘要 ： 集 １ 采 ９份 不 同棉 田土壤 样 品 ， 用稀 释 平皿 涂 布 法分 离得到 ９ 采 ９株 土壤 细 菌 ， 并对 分 离得 到 的 土壤 细菌进行 了对棉 花枯 黄萎 病 菌的皿 内拮 抗试验 ， 中筛选到 ２ 从 ８株拮 年 限土壤 中分 离得到 的土壤拮 抗 细 菌和 种类 有较 大差异 。 从
关键词 ： 花枯萎 病 菌 ； 棉 棉花 黄萎 病菌 ； 抗 细菌 ； 拮 筛选
棉 花是 新 疆 重 要 经 济 作 物 ， 植 面 积 、 产 、 种 单 总 物 农药 进 行 防治 ， 为枯 萎病 、 黄萎 病等 多 种病 害开 辟 产 均 占全 国各 省 、 区首 位 。 近 年 来 ，棉 花 枯 萎 病 了 防治途 径 ， 将会 产 生 巨大 的经 济效 益 和生态 效 益 。 （ｕａｉｍ ｗｌ 、 萎病 ｆ ｅｔ ｉｉｍ ｗｌ 日趋 严重 ， 土 壤 抑病 性 在 土 传 病 害 防 治 中是 一 个 重 要 的 内容 ， Ｆ ｓｒ ｉ ） 黄 ｕ ｔ Ｖ ｒ ｅ ｌ ｉ） ｉ ｌｕ ｔ 成 为影 响棉 花 可持 续发 展 的 主要 障碍 因素 之 一 。在 研 究 发现 抑病 土壤 中有一 些 土著 微生 物 对病 原 菌具 另外 土 壤 的非 生 物 因子 （ 土壤 质地 、 Ｈ、 ｐ 棉 花 生 长 的 中后 期 枯 黄 萎 病 混 合 发 生 ．轻 则 减 产 有 拮抗 作用 ， 钙 直接 影 响微 生 物 的数量 和 活性 以及 １％ ， Ｏ 重则 减 产 ３ ％～ ０ 且 棉 花 品 质显 著 下 降 ， Ｏ ５ ％， 给 水 分 、 含量 等 ）
新疆 的特色 农 业生 产带 来 极大 的威胁 ．所 以防治 棉 病原菌 的数 量和活 性 。目前 随着分 子生 物学 的发展 ，
棉花黄萎病拮抗菌的筛选及定殖效果初步研究
棉花黄萎病拮抗菌的筛选及定殖效果初步研究摘要:对120株棉花内生菌对棉花黄萎病菌(Verticillium dahilae)的抑制作用进行了研究,筛选出能够对病原菌产生抑制或拮抗作用的菌株｡发现15.8%的菌株对病原真菌有一定拮抗作用,具有强拮抗作用的菌株有3株,选取拮抗作用最强的S11菌株进行棉苗入侵定殖效果研究,结果显示,采用菌液浇灌的方式,能从棉苗的根､上胚轴､下胚轴和子叶中分离发现菌株,在4种接种方式中菌株定殖效果最好｡关键词:拮抗菌;棉花黄萎病;筛选;定殖Screening for Antagonistic Strains Against Verticillium dahilae and Preliminary Study on the Colonization EffectAbstract: Antagonistic bacterium were screened out of 120 entophyte strains from cotton. It was showed that 15.8% of these strains had antagonistic activity, among which three strains had good antagonistic activity. Antagonistic bacteria S11 with the best antagonistic activity was studied in cotton invasion and colonization. The results indicated that the method of bacteria liquid irrigation showed the best colonization effect in cotton. The isolates could be separated from roots, epicotyl, hypocotyl and cotyledon of cotton. Among the 4 inoculation mehtod, fix planting has bdst efficiency. Key words: antagonist; Verticillium dahilae; screening; colonization自1898年V ogl从黑麦草种子内分离出第一株内生真菌以来,植物内生菌作为一种新的微生物资源受到了广泛的关注,从内生菌中寻找和发现新的活性化合物已成为国内外研究的又一热点｡近年来,该领域的研究已取得一定进展,发现了一些有医用､农用价值的菌株和化合物[1]｡棉花黄萎病属于土传病害,防治极为困难｡目前防治棉花黄萎病的物理､化学方法的效果都不理想,采用生物防治棉花黄萎病逐步取得较好的效果,且对环境无污染｡利用生防菌的拮抗作用可以有效地抑制致病菌的生长,内生拮抗菌定殖于植物体内,作为生防菌有极大的优势[2]｡从棉花组织中分离筛选到一株具有强拮抗作用的菌株S11,用不同的方法将其接种到棉苗上,研究不同入侵途径的定殖效果,以期为棉花黄萎病的生物防治提供有效参考｡1材料与方法1.1材料1.1.1供试菌株供试内生菌菌株:采用表面消毒后稀释磨平板的方法从湖北荆州棉株样品中分离出120株内生菌株(表1)｡病原真菌:棉花黄萎病菌(Verticillium dahilae)菌株由南京农业大学实验室提供｡1.1.2仪器与药品仪器:千分尺,移液枪,打孔器,药匙,高压蒸汽灭菌锅,电热恒温鼓风干燥箱,水浴锅,隔水式恒温培养箱,生化培养箱,恒温摇床,离心机,育苗盘等;培养基:PDA培养基､PD液体培养基､NA培养基;灭菌无土育苗混配基质(专利号200710053583.4);棉花种子:鄂杂棉10号棉子｡1.2方法1.2.1平皿对峙法采用平皿对峙培养法进行内生菌和病原真菌间的皿内拮抗试验[3]｡在PDA平板上以原点为中心划垂直的十字,分别将病原真菌和内生菌沿一条直线等距离接种于平板两侧,以中央只接种病原真菌的平板为对照(CK)｡放于培养箱中28 ℃培养,2~7 d后观察菌落生长情况｡并测定抑菌带宽度｡将抑菌带宽度大于10 mm作为强抑菌作用菌株(+++),抑菌带宽度为5~10 mm作为中强抑菌作用菌株(++),抑菌带宽度小于5 mm作为弱抑菌作用菌株(+)｡1.2.2生长速率法将初选拮抗菌株接种于NA培养液中,25 ℃条件下置转速140 r/min的摇床上培养3~6 d,将培养液10 000 r/min离心30 min,取上清发酵液｡将发酵液以体积比1∶10加入PDA培养基中制成平板(直径90 mm),以加等量无菌水的平板为对照,用打孔器在平板中央接种病原菌菌饼,菌饼直径5 mm,25 ℃下培养4 d,测量各处理菌落直径,计算各菌株发酵液对病原菌的抑制率[4]｡内生菌对病原菌的生长抑制率=(对照菌落半径Rc-处理菌落半径Rp)/对照菌落半径Rc×100%1.2.3菌株的接种方法将筛选出的拮抗作用最强的菌株,移至NA培养液中,30 ℃下振荡培养2 d,用无菌水配成108 CFU/mL的菌体悬浮液,备用[5]｡①浸种接种:将棉花种子浸入30 ℃的菌体悬浮液中6 h,播种在灭菌的棉花无土育苗基质中;②浇灌接种:用菌体悬浮液按30 mL/株的量淋到苗根部和育苗基质中;③喷雾接种:棉种出苗后,用喷雾器将菌体悬浮液按2 mL/株的量均匀喷洒到棉苗叶面上;④针刺接种:分别用大头针将棉苗植株的茎和叶部刺伤,蘸上筛选出的菌体悬浮液｡按以上接种方法接种后均放置在温光培养箱内30 ℃环境中生长｡每处理3次重复,各试验均以灭菌水作为相应对照｡1.2.4接种菌的回收分别剪取以不同接种方法接种的棉苗植株4个部位各5 g,灭菌水冲洗干净,剪成5 mm × 5 mm的组织块,在体积分数为75%的酒精中浸泡1 min,然后用质量分数为0.1%的升汞消毒3 min,灭菌水冲洗3次,取消毒后最后一次冲洗液1 mL置于灭菌培养皿中,倒入45 ℃的NA培养基,充分摇匀｡28 ℃下培养3 d,观察有无菌落产生,验证消毒是否将供试材料表面的微生物全部杀死｡将供试材料于灭菌的研钵中研磨,用无菌水稀释成10-2､10-3和10-4的浓度,分别移取1 mL,倒入45 ℃含有200 μg/mL链霉素的NA培养基,充分摇匀后在28 ℃下培养3 d,经生理生化测定和棉花黄萎病的拮抗测定以确定其是否接种的目标菌株｡2结果与分析2.1棉花内生菌对病原菌的抑制效果通过对120株内生菌与病原菌的对峙培养,其中有19株内生菌表现出一定的抑制作用,占到供试菌株的15.8%｡其中抑菌带宽度最小的为 1.5mm,抑制作用最小;产生抑制作用的菌株中大多为中等抑菌强度;抑菌带宽度较大的菌株有S3､S11和R20,分别达到了11.5､10.5和10.0 mm,抑菌作用较强(表2)｡其他菌株因没有明显的抑菌带,故未列入表2中｡2.2内生菌对病原菌的抑制率对初选出的19个内生菌发酵液的抑菌活性测定结果表明,所有发酵液处理的病原菌菌落直径均小于空白对照,说明其对棉花黄萎病菌都有明显的抑制作用｡各菌株抑制率在21.1%~91.0%｡试验菌株L9发酵液抑菌率为21.1%,抑菌活性较差;菌株S3和R20抑菌活性较强,抑菌率分别达到89.6%和88.2%;菌株S11､R27抑菌活性都达到了90%以上,对病菌的抑制作用明显强于其他菌株,其中S11的抑菌活性最佳(表3)｡2.3菌株的定殖效果结果表明,S11菌株均可通过这4种接种方法入侵定殖于棉苗｡经浸种､浇灌和针刺处理的棉苗植株,其根部､上下胚轴均发现有S11菌株存在,其中,根部菌量较多,上胚轴和下胚轴菌量较少,叶片(包括子叶)没有发现S11菌株;喷雾处理的棉苗除了叶上存在少量菌株外,其他部位没有发现菌株的存在｡浇灌处理根部菌量较大,浸种处理的根部菌量中等,说明根部是容易被内生拮抗菌入侵定殖的部位｡试验结果表明,S11菌株可以通过浸种的方式定殖,也可以通过棉苗的根､上下胚轴､叶表皮进入植株内(表4)｡3结论与讨论3.1结论经过皿内拮抗试验,从棉株样品中所分离的120株菌株中有19株对棉花黄萎病菌有拮抗能力｡即有15.8%的菌株对病原真菌有一定拮抗作用,有强拮抗作用的菌株有3株,其中菌株S11对棉花黄萎病菌的抑制率达到91.0%｡对菌株S11进行入侵棉株定殖效果试验,发现用浸种､浇灌､喷雾､针刺等方法把菌株接种到棉苗,均能从棉苗的根､上胚轴､下胚轴和叶中发现菌株,其中浇灌的效果最佳,其次是浸种以及针刺效果｡用喷雾处理只在叶中有少量菌株,效果较差｡3.2讨论本研究只是初步在数量上测定了对棉花黄萎病有抑制作用的内生菌株,所分离出的内生菌生理生化特征未进行测定,且内生真菌对病原菌产生拮抗作用的化学物质也需进一步分离分析｡试验用浸种､浇灌处理的棉花植株,不但从根部分离到目标菌株,从棉苗植株的上下胚轴和叶部也分离到该菌;而用针刺接种的植株可以从根部分离到S11菌株,说明该菌能在棉苗植株的不同部位相互转移,但是转移的方式及原因有待进一步探讨;一般认为,内生菌只有在植株发生创伤时,才能入侵定殖[6],但本试验所用无土基质经过灭菌处理,排除了基质中病虫害造成的外伤所致内生菌入侵,棉花苗期取样时并未发现创伤,而检测结果却显示内生菌已入侵定殖,具体原因需进一步研究｡参考文献:[1]TJAMOS E C G, PAPA VIZAS RJC.Biological control of plant disease:Progressand challenges for the future[M]. New York:Plenum,1992.[2]石晶盈,陈维信,刘爱媛.植物内生菌及其防治植物病害的研究进展[J].生态学报,2006,26(7):2395-2401.[3]LEMANCEAU P,LANTOUR X.Effects of the plant on the soil-borne microflofta:Application tothe fluorescent pseudomonas[A]. The 7thInternational Congress of Plant Pathology(ICPP)2-47.[4]黎起秦,叶云峰,蒙显英,等.内生细菌B47菌株的鉴定及其对番茄青枯病的防效测定[J].中国生物防治,2005,21(3):178-182.[5]叶云峰,黎起秦,何洪鸿,等.芽孢杆菌B47菌株对番茄青枯病的防治作用[J].广西植保, 2005,18(3):1-4.[6] PETRINI O. Fungal endophytes of tree leaves [A]. ANDREWS J H, HIRANO S S. Microbial ecology of leaves[M]. New York: Springr-Verlag,1991.179-197.。