实验室常用技术参数资料

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生物实验常用缓冲液和酶的配制

生物实验常用缓冲液和酶的配制

实验室常用技术参数资料一、核酸及蛋白质常用数据1.核苷三磷酸的物理常数2.常用核酸的长度与分子量3.常用核酸蛋白换算数据(1)重量换算1μg=10-6g1pg=10-12g1ng=10-9g 1fg=10-15g(2)分光光度换算:1A260双链DNA=50μg/ml1A260单链DNA=30μg/ml1A260单链RNA=40μg/ml(3)DNA摩尔换算:1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端1μg pBR322 DNA=0.36pmol1pmol 1000bp DNA=0.66μg1pmol pBR322=2.8μg1kb双链DNA(钠盐)=6.6×105道尔顿1kb单链DNA(钠盐)=3.3×105道尔顿1kb单链RNA(钠盐)=3.4×105道尔顿(4)蛋白摩尔换算:100pmol分子量100,000蛋白质=10μg100pmol分子量50,000蛋白质=5μg100pmol分子量10,000蛋白质=1μg氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿(5)蛋白质/DNA换算:1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质10,000MW蛋白质=270bp DNA30,000MW蛋白质=810bp DNA50,000MW蛋白质=1.35kb100,000MW蛋白质=2.7kb DNA4.常用蛋白质分子量标准参照物5.常用DNA分子量标准参照物续上表二、常用缓冲液1.分子克隆常用缓冲液2.磷酸缓冲液(1)25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※(2)25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml,根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH 值:pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])在此,pK’=6.86(25℃)。

3.电泳缓冲液测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺:许多批号的试剂级甲酰胺,其纯度符合使用要求,无须再进行处理。

实验室设备理化台技术参数

实验室设备理化台技术参数

技术需求明细该项目的范围:含实验室家具设备及安装、通风系统及安装,要求符合设计要求,质量达到相关国家标准。

一、钢木结构产品及附件材质说明一、边台、中央台、显微镜台、样品柜主框架:采纳40*60*2.0mm成型优质方钢管,表面经酸洗、磷化、化学防锈处置、均匀环氧树脂粉沫喷涂,耐酸碱侵蚀,繁重性能好,利用寿命长。

连接件:模具开发专用连接件,表面经酸洗、磷化、化学防锈处置、均匀环氧树脂粉沫喷涂,耐酸碱侵蚀。

台面:采纳威盛亚实验室专用耐侵蚀12.7mm实芯理化板台面,台面要求耐酸碱、耐磨、抗高温、抑菌、易清洁;操作面打磨滑腻,边缘双倍加厚。

上边缘经圆滑处置,美观且滑腻不伤手。

门板:采纳环保型E1级18mm厚优质三聚氰胺双饰面中纤板,所有断面经优质PVC 经高温熔胶防水封边处置,四边倒角圆滑处置。

防腐、防水、防火、防蛀等性能好。

柜身:采纳环保型E1级18mm厚优质双面灰白三聚氰胺板或中纤板,所有断面经优质PVC熔胶防水封边处置,所有板件采纳拆装式三合连续接,结构稳固,繁重性能好易于拆迁,利于在实验室那个特殊的工作环境利用。

抽屉:抽屉面板材质同门板,底板用18mm厚三聚氰胺板,其它材质同柜身;双侧设有三节静音滑轨。

活动背板:采纳18mm厚双面灰色三聚氰胺板,所有断面经优质PVC熔胶防水封边处置,活动可拆卸式,便于利用进程中检修水、电、气等管道。

材质同柜身活动层板:采纳18mm厚双面灰白三聚氰胺板,所有断面经优质PVC熔胶防水封边处置,活动可拆卸式,四边倒角圆滑处置。

材质同柜身。

铰链:自闭式铰链,与柜体面水平角度<15度时,柜门即可自行关闭。

利用进程中无噪音,耐酸蚀,利用寿命长。

滑轨:三节静音滑轨,可繁重40千克。

拉手:拉手为实验室专用一字型暗拉手,模具成型,外形美观,设计人性化,不凸出于门、屉面外,无因碰撞而损坏或伤人之虞,方便平安,美观耐用。

可调脚:采纳不锈钢与高强尼龙组合地脚,繁重、防潮、防滑、抑菌、耐侵蚀,可依照室内地坪适当调整柜体高度;外形美观,设计人性化,可调高度30~50mm。

中小学新课程探究实验室(课桌椅设备)项目设备技术参数(精)

中小学新课程探究实验室(课桌椅设备)项目设备技术参数(精)

附件:中小学新课程探究实验室(课桌椅设备)项目设备技术参数一、采购物品及数量1、标项一:初中新课程探究实验室课桌椅设备2、标项二:小学新课程探究实验室课桌椅设备二、技术指标1、教师演示桌规格:2400mm×700mm×760mm台面:25mm厚密度板芯板,墨绿色威盛亚弯曲防火板贴面,PVC封边和热弯后成型加工,防静电防火耐磨耐热耐烟熏抗污。

内部设置功能:桌体右边上部抽屉内设暗藏式视频展示台、下部门内设多媒体设备安装平台;背面开通风散热孔,左侧上部设抽屉式电源控制台,电源主控提供多路220V电源输出,教师能对实验室进行总体及分组控制,配有电源总开关、分组电源开关,漏电保护开关。

下部设教学用品存放柜。

讲台中间上部设新型翻板式钢制显示器箱,内设液晶显示器固定盘,键盘和鼠标盒,可自动升降,空闲时可上锁,保证电脑安全、下部设主机存放柜。

台身:采用16mm三聚氰胺贴面板(双贴面),优质PVC截面封边,能防湿、牢固、经久耐用。

配置4个5孔220V交流输出鸿雁插座。

主体桌架:φ50×1.5mm双壁加强型铝合金圆管,粉末静电喷塑,配进口高级ABS塑料脚垫,高低可调。

以上芯板均为E1级环保芯板。

参考图例如下:2、初中学生实验桌规格:1200mm×600mm×700mm 桌下净空高不小于570mm 。

台面:25mm厚密度板芯板,墨绿色威盛亚弯曲防火板贴面,优质PVC封边和热弯后成型加工,防静电防火耐磨耐热耐烟熏抗污。

台身:铝木结构,背板及吊板采用16mm三聚氰胺贴面板(双贴面),E1级环保芯板,优质PVC截面封边。

侧面配置2个5孔220V 交流输出鸿雁插座。

主体桌架:φ50×1.5mm双壁加强型铝合金圆管,粉末静电喷塑,配进口高级ABS塑料脚垫,高低可调。

以上芯板均为E1级环保芯板。

桌面挡条:采用12.7mm厚与桌面同色的抗倍特板,圆形修边加工,用优质五金件同桌面固定。

实验室设备招标技术参数

实验室设备招标技术参数

实验室设备招标技术参数一、不分光红外线一氧化碳气体分析仪(1台)(一)特点性能1、仪器符合GB/T18204.2—2014《公共场所卫生检验方法》和GB/T9801—88《空气质量一氧化碳的测定非分散红外法》的国家标准;符合JJG635—2011《一氧化碳、二氧化碳红外线气体分析器》的国家计量检定规程。

2、仪器的主要技术指标符合国家二级仪表的技术要求,可以取得中国计量科学研究院的二级检定证书。

3、仪器内置式调零过滤器、六通阀切换调零与测量,操作简便灵活。

4、仪器可以定制测量范围.(二)主要技术指标1、测量原理:不分光红外分析法/非分散红外法(NDIR)2、采样方式:内置泵吸式3、测量范围:0。

125mg/m3—62。

5 mg/m34、分辨率:0。

1×10—65、重复性:≤1% F·S6、零点漂移:≤±2%满量程/h7、跨度漂移:≤±2%满量程/3h8、线性偏差:≤±2%满量程9、响应时间:t0~t90≤45S10、预热时间:≤30min11、流量范围:(0。

5—2.0)L/min12、标准配置:主机、采样器、背带、充电电池、充电器、小螺丝刀、技术文件、便携箱。

13、供电电源:交直流两用,220AVC(±10%)或机内充电电池。

二、二氧化碳分析仪(1台)(一)特点性能1、仪器符合GB/T18204。

2—2014《公共场所卫生检验方法》和GB/T9801-88《空气质量一氧化碳的测定非分散红外法》的国家标准;符合JJG635—2011《一氧化碳、二氧化碳红外线气体分析器》的国家计量检定规程。

2、仪器的主要技术指标符合国家二级仪表的技术要求,可以取得中国计量科学研究院的二级检定证书.3、仪器内置式调零过滤器、专用双向阀切换调零与测量、操作简便灵活。

(二)主要技术指标1、测量原理:不分光红外分析法/非分散红外法(NDIR)2、采样方式:内置泵吸式3、测量范围:0~0.500%或0~1.000%4、分辨率:0.001%5、重复性:≤1% F·S6、零点漂移:≤±2% F·S/h7、跨度漂移:≤±2% F·S/3h8、温度附加误差:(在10℃~45℃)≤±2% F·S/10℃9、一氧化碳干扰:1250mg/m3CO≤±0。

生物学实验室仪器设备配备技术参数

生物学实验室仪器设备配备技术参数
0线将矩形分为左右二个正方形左右微粒计数区右边为长度测量区左边的正方形又在垂直方向等分为三份水平方向等分为二分形成六个小长方形便于在一定面积中技术粒子右边的正方形在水质方向亦等分为三份而在水平方向不得法那个分为若干份各有若干大小不等但上下对应的圆上方为空心元下方为实心圆各有标号n123??9可用来快速测定粉尘的直径301尺形目镜尺55001尺形目镜尺刻尺总长度为5mm分为50等分每一分度值为01mm玻片直径19mm4005尺形目镜尺5100005尺形目镜尺刻度总长为5mm分为100等分每一分度值为005mm玻片直径19mm5005尺形目镜尺5100005尺形目镜尺刻度总长为5mm分为100等分每一分度值为005mm玻片直径19mm602网形目镜尺52502网形目镜尺的刻划面积为55mm个分为25等分每一小方格面积为004mm玻片直径为19mm701坐标形目镜尺1010001坐标形目镜尺纵横坐标刻划长度为10mm个分为100等分每一分度值为01mm玻片直径为19mm旋转蒸发仪加热锅安全回路可调可单独使用可根据需要提供安全防护罩马达升降行程140mm具有安全停止功能电源中断时马达将蒸发瓶自动提升至加热锅以上位置可调升降终点识别功能可有效防止玻璃组件破裂转速范围20270rpm平稳启动100rpm转速数字显示可间断左转或右转适用于干燥过程电子定时功能水油浴加热锅带安全把手加热锅容积适中加热速度快冷凝面积1200cm?推手机械装置方便蒸馏瓶的拆卸加热温度数字显示红外接口用于加热锅和旋转马达间数据传输rs232接口用于连接电脑使用labworldsoft软件可实现远程控制使用实验室软件labworldsoft可实现自动操作内置真空控制器集中显示自动蒸馏及曲线内置溶剂数据库用户可自行增加数据可存储特定的蒸馏参数用于标准蒸馏一键即可自动传输测量及蒸馏类型等数据操作方便蒸馏容量可编程控制自动沸点识别大屏彩色图表显示控制安全舒适可显示蒸馏曲线实验结束后自动开启通气阀门设备名称规格技术参数树篱机额定功率065kw额定转速6500rmin最大功率09kw额定转速7500rmin最大切割直径28mm刀头长度750mm发动机动力型号1e32f动力类型单缸二冲程风冷汽油机排量225cc压缩比75

实验室通风系统--技术参数详解

实验室通风系统--技术参数详解

实验室通风系统--技术参数详解一、实验室通风的基本概念1、通风和通风柜的概念:所谓通风,就是把室内的污浊空气直接或经净化后排至室外把新鲜空气补充进来,从而保持室内的空气条件,以保持卫生标准和满足生产工艺的要求,我们把前者称为排风,后者称为送风。

而通风柜可以简单理解成一个箱体和一个风机,产生于箱体中的气体被风机排出并被安全的排放到大气中。

2、通风的分类:按照动力不同,通风系统可以分为自然通风和机械通风,机械通风又可以分为全面通风和局部通风,全面通风是指在房间内整体的进行通风换气的一种方式,局部通风是指通风的范围控制在有害物质形成比较集中的地方,或是工作人员经常活动的局部地区的通风方式,例如通风柜、万向排烟罩、原子吸收罩等。

3、实验室通风:实验室通风是研究控制实验室有害物质对室内外空气环境的影响和破坏的技术。

二、实验室通风系统的基本组成1、通风末端设备:主要包括通风柜、万向排烟罩、原子吸收罩、吹吸式排风罩等。

2、通风管路系统:主要有风机、风管、风阀、消声器、废气处理塔等。

三、实验室通风设备简介1、通风柜主要尺寸宽度为 1200mm、1500mm、1800mm,深度为 800mm,高度为 2350mm。

通风柜的主要结构为:①柜体:通风柜的柜体可根据使用要求做成钢制、木制、塑料、不锈钢等材料;②台面及衬板:耐腐蚀、耐酸碱、耐高温的各种材质,进行高温或强酸碱操作的内层板要用不锈钢除渣除油静电喷涂环氧树脂粉末;③活动拉门:装在柜体表面上的透明玻璃,使用户远离有害的化学物质和气体,同时使有害气体通向通风柜的内部管道;④导流板:控制气流流经通风柜时的形状,减少空气流入通风柜时产生的由于方式不定造成的回流或涡流,提高使用效率(会对噪声及静压产生影响);⑤集流环:位于通风柜的顶部,将通风柜的气体导向风排放(对通风柜的效率和噪声有着重要的影响);⑥调风阀:通风柜的附属部件,来调节通风柜的排气量以及最佳表面风速;⑦水龙、考克、水杯等配件。

第三章实验室设备清单和主要技术参数第一包实验室电脑及网络设备

第三章实验室设备清单和主要技术参数第一包实验室电脑及网络设备

第三章实验室设备清单和主要技术参数第二包施工虚拟仿真教学课程软件(房屋构造虚拟仿真课程、建筑施工技术虚拟仿真课程、工程测量虚拟仿真课程、综合虚拟工法楼实训系统)一、房屋构造虚拟仿真课程(数量:1套)(一)实训功能及清单1、包含任务目标、建筑构造、构造剖面、构造解析、题库、图纸。

2、任务目标:了解学习的重点。

3、建筑构造:介绍构件的构造,可放大与缩小,可360°自由旋转。

4、构造剖面:剖面动画展示内部结构。

5、构造解析:配备专业的文字解析,介绍相关知识。

6、题库:系统配备知识点考核,平台自动评分。

7、图纸:学习、了解其平面结构,通过二维图与三维模型对比显示。

(二)模块清单1基础含砖基础、毛石基础、灰土基础、混凝土基础、钢筋混凝土基础、独立基础、条形基础、筏形基础、箱形基础、桩基础、钢筋混凝土锥形基础、钢筋混凝土台阶梯形基础等构造做法的讲解与实操交互练习。

2.墙体含墙体各部分名称、砌块、墙体外保温、空心砌块的形式、砖墙组砌方式、砌缝处理、砌块的竖缝、砌块的排列设计、散水构造、明沟构造、踢脚线、钢筋砖过梁、钢筋混凝土过梁、窗台、附加圈梁、构造柱、砌块墙墙芯柱、加气混凝土砌块隔墙、轻钢龙骨纸面石膏板隔墙、墙面抹灰、外墙贴面砖、防水处理等构造的讲解与实操交互练习。

3.楼板层与地面含楼板层的构成、梁板式楼板、无梁楼板、压型钢板组合楼板、预制实心平板、槽型板、空心板、板缝的处理、叠合楼板、密肋填充块楼板、水泥砂浆楼地面、现浇水磨石楼地面、石板楼地面、空铺式木楼地面、楼地面的防水构造、顶棚构造、阳台的结构布置形式、金属栏杆的形式和构造、阳台排水构造、雨棚构造等构造的讲解与实操交互练习。

4.楼梯含楼梯平面形式、楼梯的组成、踏步细部尺寸、楼梯段、楼梯段及平台净高、楼梯和暗步楼梯、平台板布置方式、踏步面层及防滑处理、无障碍楼梯和台阶形式、栏杆与踏步的连接、梯段转折处扶手处理、台阶尺度、台阶构造示例、坡道的构造做法等构造的讲解与实操交互练习。

小学科学实验室成套设备技术参数 (3)

小学科学实验室成套设备技术参数 (3)

小学科学实验室设备序号设备名称技术参数单位数量1演示台规格型号:2400×700×850(长×宽×高)。

台面材料:采用厚度≥12.7威盛亚实芯理化板制作,边缘加厚25.40;符合/13520标准。

台体结构:组合式设计,铝、木框架。

立柱采用壁厚≥1.2、截面为50×50(长×宽)的专用铝合金制作。

横梁采用壁厚≥1.2、截面为32×32(长×宽)铝合金制作,棱角椭圆形。

连接件采用自锁式程塑料件,一次成型与铝合金紧紧扣牢;铝合金立柱和横梁与连接件张 1 配套使用。

台体材料:采用16三聚氰胺双饰面板制作,板材防潮符合/4897;甲醛释放量符合18580标准,执行标准/3326—1997,用边。

电源接口预留:台面中间下方装有交、直流控制电源预留口。

脚垫:采用硬质塑料加工而成;防水、防腐,延长使用寿命。

颜色:桌面水绿色,台体灰白色。

电源装置应在演示台内。

电源控制台的框架,采用专业铝木组成。

采用“[”型铝合金包边(材料为专用铝合金,其尺寸为25×25(长×宽),壁厚 1.2,槽宽和搁板厚度相匹配,板材嵌入铝合金部分≥24.0;使抽屉搁板嵌于铝槽后表层不易脱落和损毁;铝合金需进行喷塑处理。

采用触摸式按键控制,面板应安置在演示台面下方的抽屉内:该电源控制系统必须具有完成多媒体操作的各项功能。

2教师电源电源插座:采用弹起式多功能电源插座。

镶嵌在台面中间距离前端套150±2处;插座面板规格:(266×120×68(长×宽×厚))±2,用厚度2的不锈钢板制作,四角为直角,颜色为银灰色;插座盒体1规格:(224×110×65(长×宽×深))±2,用厚度1的冷轧钢板制作,盒体底部设有左右对称的直径不小于35±2的引线预留口,盒体后板设有散热孔和维修观察孔;盒体内部装有220250 电流在610“3+2”通用插座接口和至少一个通讯接口,采用“+”口的螺丝固定。

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实验室常用技术参数资料一、核酸及蛋白质常用数据1.核苷三磷酸的物理常数2.常用核酸的长度与分子量3.常用核酸蛋白换算数据(1)重量换算1μg=10-6g 1pg=10-12g1ng=10-9g 1fg=10-15g(2)分光光度换算:1A260双链DNA=50μg/ml1A260单链DNA=30μg/ml1A260单链RNA=40μg/ml(3)DNA摩尔换算:1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端1μg pBR322 DNA=0.36pmol1pmol 1000bp DNA=0.66μg1pmol pBR322=2.8μg1kb双链DNA(钠盐)=6.6×105道尔顿1kb单链DNA(钠盐)=3.3×105道尔顿1kb单链RNA(钠盐)=3.4×105道尔顿(4)蛋白摩尔换算:100pmol分子量100,000蛋白质=10μg100pmol分子量50,000蛋白质=5μg100pmol分子量10,000蛋白质=1μg氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿(5)蛋白质/DNA换算:1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质10,000MW蛋白质=270bp DNA30,000MW蛋白质=810bp DNA50,000MW蛋白质=1.35kb100,000MW蛋白质=2.7kb DNA4.常用蛋白质分子量标准参照物5.常用DNA分子量标准参照物续上表二、常用缓冲液1.分子克隆常用缓冲液2.磷酸缓冲液(1)25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※(2)25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml,根据Henderson-Hasselbalch方程计算其p H值:pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])在此,pK’=6.86(25℃)。

3.电泳缓冲液测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺:许多批号的试剂级甲酰胺,其纯度符合使用要求,无须再进行处理。

不过,一旦略呈黄色,则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理,并用Whatman 1号滤纸过滤2次,去离子甲酰胺分装成小份,充氮存于-70℃。

常用的电泳缓冲液说明:①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物,为避免这一问题,可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液,出现沉淀后则予以废弃。

以片都以1×TBE作为使用液(即1:5稀释浓贮液)进行琼脂糖凝胶电泳。

但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。

目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1:10稀释的贮存液作为使用液。

进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小,故通过缓冲液的电流量通常较大,需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。

②碱性电泳缓冲液应现用现配。

③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

2×SDS凝胶加样缓冲液:100mmol/L Tris·HCl(6.8)200mmol/L二硫苏糖醇(DTT)4%SDS(电泳级)0.2%溴酚蓝20%甘油不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温,应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。

4.凝胶加样缓冲液使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三:增大样品密度;以确保DNA均匀进入样品孔内;使样品呈现颜色,从而使加样操作更为便利,含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。

溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍,而与琼脂糖浓度无关。

以0.5×TBF作电泳液时,溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。

在琼脂糖浓度为0.5%~1.4%的范围内,这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。

选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。

但是,对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料,因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。

5.各种pH值的Tris缓冲液的配制某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制:将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积(单位:ml)的0.1ml/L HCl混合,加水将体积调至100ml(2)温度对50mmol/L Tris·HCl液pH值的影响(6)常用缓冲液的pKa值a:三羟甲基氨基甲烷;b:N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸;c:3-(N-吗啉代)丙磺酸;d:N,N’-双(2-乙磺酸)哌嗪;e:2-(N-吗啉代)乙磺酸。

7.温度对常用缓冲液pH的影响三、常用酶的配制1.溶菌酶用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液,分装成小份并保存于-20℃。

每一小份一经使用后便予丢弃。

2.蛋白水解酶类a:链霉蛋白酶是从链球菌(Streptomyces griseus)中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。

b:自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染,经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下:把该酶的粉末溶解于10mmol./l Tris·HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中,配成20mg/ml浓度,于37℃温育1h。

经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中,保存-20℃。

c:蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,从林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limb er)中纯化得到。

该酶有两个Ca2+结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。

然而,如果从该酶中除去Ca2+,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。

所以,蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA(以抑制依赖于M g2+的核酸酶的作用)。

但是,如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。

在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT(pH8.0)至终浓度为2 mmol/L,以鳌合Ca2+。

3.无DNA酶的RNA酶将胰RNA酶(RNA酶A)溶于10mmol/l Tris·HCl(pH7.5)、15mmol/l NaCl中,配成10mg/ml的浓度,于100℃加热15min,缓慢冷却至室温,分装成小份保存于-20℃。

四、常用抗生素溶液a:以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22μm滤器过滤除菌。

以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。

所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。

b:镁离子是四环素的拮抗剂,四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基(如LB培养基)。

五、常用贮存液的配制【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。

加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。

用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。

【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。

称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。

可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。

一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。

在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。

【配制方法】把380g丙烯酰胺(DNA测序级)和20g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。

继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。

【注意】见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。

3.放线菌素D溶液【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD440值。

放线菌素D(分子量为1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。

【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。

药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。

只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。

【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。

【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。

【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4,室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm 滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。

【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2·6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。

【注意】制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。

10.2.5mol/L CaCl2溶液【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2·6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。

11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。

【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。

12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液【配制方法】把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于-70℃。

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