生化分离《生物分离与纯化技术》实验题目

2009生化分离工程实验（闭卷考试）

2012生化工艺实验

简答题（23选6题，每个实验选一题）

1.在咖啡因的提取实验中，为什么加CaO？

2.索氏提取装置由哪几部分组成（画图）？工作原理？

3.咖啡因升华过程中用到了什么装置？咖啡因的升华结晶应注意哪些操作？

4.茶叶咖啡因的提取实验中，浓缩去除乙醇的过程中用到了哪些设备？

5.动物脏器DNA提取实验中，蛋白质是如何去除的？

6.动物脏器DNA提取实验中，如何鉴定DNA的纯度？

7.动物脏器DNA提取实验中，RNA是怎样去除的？

8.动物脏器DNA提取实验中，氯仿-异戊醇的作用是什么？离心后分哪几层？

9.动物脏器DNA提取实验中，为什么用0.1M NaCl-SSC间歇式的搅拌猪肝？

10.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（上半部），粗提过程中用哪种试剂去除杂蛋白？用哪种试剂沉淀得到粗黏蛋白？

11.鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中，所用树脂是哪种？树脂为什么预处理，如何预处理？

12.DEAE-纤维素是哪种类型离子交换剂，如何预处理DEAE-纤维素？

13.在鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中固定相、流动相分别是什么？

14.简要画出离子交换层析系统中所用设备组成图。

15.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（上），为什么提取液的pH在3.5左右？

16.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（下），pH6.5的用意何在？

17.简述反胶团萃取甘薯中淀粉酶的实验原理

18.栀子黄提取实验中，栀子苷是如何去除的？为什么用此方法去除？

19.栀子黄提取实验中，如何鉴定藏花红素中栀子苷的去除情况？

20.栀子黄提取实验中，吸附前为什么将滤液稀释至240mL乙醇？

21.栀子黄提取实验中，吸附前为什么将滤液pH调至3

22.大蒜SOD提取实验中，是如何去除杂蛋白的？PBS与丙酮的作用分别是什么？

23.大蒜SOD提取实验中，用哪种方法测定SOD活性？其原理是什么？

1. 在咖啡因的提取实验中，为什么加CaO?

答:吸取水分，防止咖啡因蒸汽溶于水；

中和鞣酸；

2. 索氏提取装置有哪几部分组成？（画图）

3. 咖啡因升华过程中用到了什么？咖啡因的升华结晶应注意哪些操作？

答：用升华装置包括：蒸发皿、电热套、漏斗（滤纸、牙签、棉花）

注意：1.要控制好温度，始终都需用小火间接加热，如温度太高，会使产物发黄。

2. 漏斗颈部棉花松紧适宜。

3.滤纸的孔数适宜，也不能将滤纸放反了。

4.若漏斗上有水蒸气应用滤纸擦干

4. 茶叶咖啡因的提取实验中，浓缩去除乙醇的过程中用到了哪些设备？

答：旋转蒸发器、水浴锅、循环水式真空泵等

5.动物脏器DNA提取实验中，蛋白质是如何去除的？

答：用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质，6.动物脏器DNA提取实验中,如何鉴定DNA的纯度？

答：DNA在紫外区有强吸收，最大吸收波长为260nm，而Pro在280nm处有强吸收，若其中含有Pro，则A260/A280小于1.6，若含有RNA，则大于2.0，纯的DNA溶

液为1.8左右，据此可判断DNA纯度。

7.动物脏器DNA提取实验中,RNA是怎样去除的？

答：在浓NaCl溶液（1～2mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解度很小；而在稀NaCl溶液（0.14mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核

蛋白的溶解度很大。将提取的细胞核物质先溶解与浓NaCl溶液中充分搅拌一定时

间后，加水稀释，降低DNA溶解度使DNA沉淀出来，倒去上清即除去RNA。

8.动物脏器DNA提取实验中,氯仿—异戊醇的作用是什么？离心后分哪几层？

答：氯仿—异戊醇的作用使核蛋白乳化变性

分三层：上层为DNA和DNA核蛋白的水层

中间层为变性蛋白凝胶

下层为氯仿-异戊醇的有机溶剂层

9.动物脏器DNA提取实验中,为什么用0.1MNacl—柠檬酸间歇式的搅拌猪肝？

答：与细胞等渗溶液，在搅碎时，保持细胞内外渗透压，防止细胞核破碎；间歇性搅拌

是为了避免搅碎细胞核（剪切力）

10.离子交换层析分离鸡卵粘蛋白实验（上半部），粗提过程中用哪种试剂去除杂蛋白？用哪种试剂沉淀得到粗黏蛋白？

答：10%TCA去除杂蛋白预冷丙酮沉淀黏蛋白以得粗提取物

鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中，所用的树脂是哪种？树脂为什么预处理？如何预处理？答：1.DEAE—纤维素树脂

2. ①去除交换剂中存在的杂离子

②使其充分溶胀

3. DEAE—纤维素→碱性溶液中浸泡一定时间→洗至中性→酸性溶液中浸泡一定

时间→水洗至中性→保存在缓冲溶液中备用

补充：对于OH型：先碱洗，再洗至中性，再酸洗，再洗至中性。

对于H型：先酸洗，再洗至中性，再碱洗，再洗至中性

12.DEAE—纤维素是哪种类型离子交换剂，如何预处理DEAE—纤维素（OH型）

答：是阴离子交换剂；对于OH型：先碱洗，再洗至中性，再酸洗，再洗至中性。

13.在鸡卵黏蛋白离子交换层析提取实验中保持系统pH值稳定6.5左右用意何在？

答：实验中用的离子层析柱，离子交换剂带正电荷，系统pH为6.5，能使目标蛋白带

负电，能与离子交换剂结合，使得杂蛋白带正电不能与离子交换剂结合，而使目标

蛋白与杂蛋白分离。

14.简要画出离子交换层析系统中所用设备组成图?

答：恒流泵-离子交换柱-紫外检测仪-级分收集器

15.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（上半部），为什么提取液的水在3.5左右？

答：黏性Pro在pH3.5不发生沉淀，能维持它的稳定性，而使杂蛋白带正电，TCA自

身带负电，能与正电的杂蛋白结合使其变性，若pH再减小，TCA变形能力降低，

而且黏蛋白稳定性破坏，即3.5pH减少了目标pro的变性，增加了杂蛋白变性。

16.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（下半部）PH6.5的用意何在？

答：洗脱杂蛋白质，使目标蛋白带负电，同时杂蛋白带正电（存在少量杂蛋白带负电）17.简述反胶团萃取甘薯中淀粉酶的实验原理?

答:表面活性剂在有机相中自发形成反胶团，其内部有稳的水池，蛋白质溶解于小水池

中，其周围有一层水膜及表面活性剂极性头的保护，使其避免与有机溶剂接触而失活。

改变pH、盐浓度等条件蛋白质又可回到水相(反萃)，实现了蛋白质的萃取分离、纯

化目的。

18.栀子黄色素提取实验中，栀子苷是如何去掉的？为什么用此方法去除?

答：D101是非极性吸附剂，在极性溶液中对溶质的吸附作用大，对栀子黄色素的吸附

能力强，改为70%乙醇时，溶液极性变小，非极性树脂吸附乙醇而洗脱出栀子黄色素，栀子苷因不能被吸附而被去除。

19.栀子黄色素提取实验中,如何鉴定藏花红素中栀子苷的去除情况?

答：分光光度法；栀子黄色素水溶液在A238/A440的比值情况，当比值小于0.2时，可

以避免绿变现象。

20.大蒜SOD提取实验中，是如何去除杂蛋白的?

答：大蒜滤液中加1～1.1倍体积去离子水，再分别缓慢加入0.25倍体积的预冷95%乙