生化分离《生物分离与纯化技术》实验题目
化学分离与纯化技术考核试卷
B.等电聚焦
C.亲和电泳
D.毛细管电泳
16.以下哪些方法可以用于去除溶液中的杂质？（）
A.吸附
B.萃取
C.离子交换
D.沉淀
17.以下哪些因素会影响离子交换树脂的交换能力？（）
A.树脂的交联度
B.树脂的离子交换容量
C.溶液的离子强度
D.溶液的pH值
18.以下哪些是结晶过程中可能遇到的问题？（）
7.冷冻干燥是一种在常温下进行的干燥方法。（）
8.吸附色谱是按照分子大小进行分离的一种色谱法。（）
9.气相色谱中，固定相通常为液体，而流动相为气体。（）
10.亲和电泳是一种基于蛋白质与配体之间特异性相互作用的电泳技术。（）
五、主观题（本题共4小题，每题10分，共40分）
1.请简述离子交换色谱的原理，并说明其在生物大分子纯化中的应用。
9.以下哪些因素会影响蒸馏的效率？（）
A.蒸馏塔的设计
B.蒸馏温度的控制
C.冷凝器的效率
D.混合物的沸点差异
10.以下哪些方法可以用于从天然产物中提取有效成分？（）
A.水提
B.醇提
C.超临界流体萃取
D.索氏提取
11.以下哪些是凝胶过滤色谱的特点？（）
A.按分子大小分离
B.不需要固定相
C.可以用于蛋白质的纯化
一、单项选择题
1. C
2. C
3. D
4. D
5. B
6. D
7. D
8. C
9. B
10. D
11. D
12. D
13. D
14. A
15. A
16. D
17. B
18. C
19. D
生物分离参考试题及答案
一、名词解释1.助滤剂：发酵工业生产中加入的能提高过滤速率的固体物质2.第二介稳区：加入晶种结晶会生长，同时有新晶核产生3.滤饼4.纳滤5.凝聚二、填空题1.有机溶剂破碎法2.Cohn 方程Cohn 经验公式S —蛋白质溶解度，mol/L;I —离子强度 c:离子浓度；Z ：离子化合价:盐析经验式 2.Ks 盐析3.细胞回收、细胞破碎、固液分离、初级分离、高级分离的常用方法三、简答题1.生物产品对产量和纯度的要求。
注重纯度的选择注重产量的选择即注重纯度又注重产量的选择2.发酵液的预处理方式。
加热法；调pH 值；凝集和絮凝；加水稀释法；加入助滤剂法；加吸附剂或加盐法；热处理法；离子交换和活性炭吸附法等。
3.助滤剂的使用方式。
221i i Z c I ∑=（1）在过滤器的滤布上预先涂上一层助滤剂，作为过滤介质使用，过滤结束后与滤布一起除去。
该法适用于对非常细小的或可压缩的低固形物含量（≤5%）的发酵液处理。
（2）a.将助滤剂按一定的比例均匀混入发酵液中，然后一起进入过滤器或离心机，使滤层形成疏松的滤饼，降低其可压缩性，使过滤顺畅。
b.将含助滤剂的发将夜通过压缩机，形成过滤介质层，然后在进行过滤。
该法适用于菌体细小，粘度较大的发酵液。
4.根据分离机理的不同固液分离可以分为哪两种。
过滤和离心5.结晶的前提和推动力？形成新相（固体）需要一定的表面自由能。
因此，溶液浓度达到饱和溶解度时，晶体尚不能析出，只有当溶质浓度超过饱和溶解度后，才可能有晶体析出。
溶液达到过饱和状态是结晶的前提；过饱和度是结晶的推动力。
四、综合题1.生物药物（抗生素）生物分离的选择依据。
生物分离方法的选择依据1.传统生物药物（抗生素）:根据具体条件，通过小实验决定，选择时应考虑两个因素。
（1）抗生素的理化性质：极性、酸碱性、溶解度等，了解其理化性质，通常利用纸层析和纸电泳的方法。
（2）抗生素的稳定性：要了解它在什么样的pH和温度范围易受破坏。
生物分离纯化习题 (1)
第一章绪论一、名词解释生物物质生化分离技术二、填空题1.生物物质的来源、、、、。
2.生物分离纯化工作按照生产规模可分为、、三个层次。
3.蛋白质保存方法、、。
三、选择题1.选择生物物质分离纯化技术和工艺的依据（）A、物理性质B、化学性质C、生物学性质D、生理性质2、生物活性越高的成分，一般它在物质中的含量越（）。
A、高B、低C、一般D、无法提取3分离纯化过程需要加入（）保持生物大分子的活性。
A、糖类B、缓冲溶液C、中性盐D、半胱氨酸四、简答题1.生物分离纯化的特点？2.生物分离纯化原材料的选择要注意哪些问题？3.影响生物产品保存的主要因素？第二章预处理技术一、名词解释凝聚作用絮凝作用凝聚值二、填空题1．组织与细胞的破碎方法有、、、。
2.降低发酵液黏度的方法、。
3.加入助滤剂的方法、。
4.除去杂蛋白的常用方法、、。
5.凝聚值越小，则凝聚剂的凝聚能力越。
6.检查细胞破碎效果的方法有、、。
三、选择题1.大多数蛋白质的等电点在（）范围。
A、酸性B、碱性C、中性D、不固定2.加入助滤剂可使滤液（）A、滤速增大B、滤速减小C、增加成本 D 、保持渗透性3.除去钙离子的试剂（）A、草酸B、草酸钙C、草酸钠D、铁离子4．分离DNA、RNA混合物（）A、速度区带离心法B、差分离心法C、等密度区带离心法D、平衡等密度区带离心法5．分离大小不同、密度不同的物质（）A、速度区带离心法B、差分离心法C、等密度区带离心法D、平衡等密度区带离心法6．分离大小相近、密度不同的物质（）A、速度区带离心法B、差分离心法C、等密度区带离心法D、平衡等密度区带离心法7．分离大小不同、密度相近的物质（）A、速度区带离心法B、差分离心法C、等密度区带离心法D、平衡等密度区带离心法四、简答题1.改变发酵液过滤特性的方法有哪些？2.影响絮凝效果的因素有哪些？3.超声波破碎法的特点？4.进行细胞破碎所使用的表面活性剂有哪些？5.影响离心效果的因素有那些？6.常用的离心设备有哪些？第三章固相析出分离法一、名词解释（每题2分）1．结晶2．盐析法二、填空（每空1分）1．常用的盐析用盐有、、2．盐析方法有两种类型，分别为、，其中用于提取的前期，用于提取的后期3．盐析用中性盐的浓度多用来表示，也就是把饱和时的浓度看作1或100%。
化学实验分离与纯化技术考核试卷
C.萃取时间
D.超临界流体的类型
15.以下哪些技术适用于细胞破碎？（)
A.高压均质机
B.超声破碎
C.液氮冷冻破碎
D.离心
16.以下哪些方法可用于检测纯化过程中的蛋白质浓度？（）
A.紫外-可见光谱
B. Bradford法
C. Lowry法
D.等电聚焦
17.下列哪些因素会影响沉淀法的分离效果？（）
C.过滤
D.萃取
2.下列哪种溶剂不适用于萃取实验？（）
A.乙醇
B.甲苯
C.二氯甲烷
D.乙醚
3.在色谱法中，哪种分离机制主要基于分子大小？（）
A.薄层色谱
B.气相色谱
C.凝胶渗透色谱
D.高效液相色谱
4.以下哪种方法不是纯化蛋白质的常用技术？（）
A.离子交换层析
B.盐析
C.超滤
D.色谱法
5.下列哪种化合物不适合用重结晶方法进行纯化？（）
C.柱温
D.洗脱剂的极性
16.下列哪种方法不适用于有机合成产物的纯化？（）
A.结晶
B.萃取
C.吸附
D.蒸馏
17.以下哪种溶剂通常用于实验室中的干燥？（）
A.水
B.无水硫酸钠
C.二氧化硫
D.氢氧化钠
18.在超临界流体萃取中，哪种物质常用作超临界流体？（）
A.二氧化碳
B.氮气
C.氢气
D.氧气
19.下列哪种方法不适用于实验室规模的蛋白质纯化？（)
A.真空干燥
B.冷冻干燥
C.索氏提取
D.热风干燥
2.以下哪些是常用的色谱技术？（）
A.薄层色谱
B.气相色谱
C.离子交换色谱
生物分离与纯化技术模拟试卷十二答案
生物分离与纯化技术模拟试卷十二答案装订 线一、名词解释（每小题3分，共15分）1．反渗透：在只有溶剂能通过的渗透膜的两侧，形成大于渗透压的压力差，就可以使溶剂发生倒流，使溶液达到浓缩的效果，这种操作成为反渗透。
2．树脂工作交换容量：单位质量干树脂或单位体积湿树脂所能吸附的一价离子的毫摩尔数称为树脂交换容量，在充填柱上操作达到漏出点时，树脂所吸附的量称为树脂工作交换容量。
3．两性树脂：同时含有酸、碱两种基团的树脂叫两性树脂4．流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体或租临界体等，都称为流动相。
5．离子交换平衡：当正反应、逆反应速率相等时，溶液中各种离子的浓度不再变化而达平衡状态，即称为离子交换平衡。
二、单选题（每小题1分，共15分）1．其他条件均相同时，优先选用那种固液分离手段（B ） A. 离心分离 B 过滤 C. 沉降 D.超滤2．人血清清蛋白的等电点为4.64，在PH 为7的溶液中将血清蛋白质溶液通电，清蛋白质分子向（A ） A ：正极移动；B ：负极移动；C ：不移动；D ：不确定。
3．影响电泳分离的主要因素（B ）A 光照B 待分离生物大分子的性质C 湿度D 电泳时间4．当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度 （ C ） A 、增大 B 、减小 C 、先增大，后减小 D 、先减小，后增大 5．关于用氢键形成来判断各类溶剂互溶规律，下列（A ）项是正确的叙述。
A 、氢键形成是能量释放的过程，若溶剂混合后形成的氢键增加或强度更大，则有利于互溶。
B 、氢键形成是能量吸收的过程，若溶剂混合后形成的氢键增加或强度更大，则有利于互溶。
C 、氢键形成是能量释放的过程，若溶剂混合后形成的氢键增加或强度更大，则不利于互溶。
D 、氢键形成是能量吸收的过程，若溶剂混合后形成的氢键增加或强度更大，则不利于互溶。
6．反渗透膜的孔径小于( C )A 0.02～10µmB 0.001～0.02µmC <2nmD < 1nm 7．凝胶层析中，有时溶质的Kd>1，其原因是（ B ）A 、凝胶排斥B 、凝胶吸附C 、柱床过长D 、流速过低 8．在选用凝胶层析柱时，为了提高分辨率，宜选用的层析柱是 （A ） A 、粗且长的 B 、粗且短的 C 、细且长的 D 、细且短的9．在萃取液用量相同的条件下， 下列哪种萃取方式的理论收率最高 （ C ） A.单级萃取 B.三级错流萃取 C.三级逆流萃取 D.二级逆流萃取 10．用大孔树脂分离苷类常用的洗脱剂是（B ） A 、水 B 、含水醇 C 、正丁醇 D 、乙醚 E 、氯仿 11．不能用于糖类提取后的分离纯化的方法是（B ） A 、活性炭柱色谱法 B 、酸碱溶剂法C 、凝胶色谱法D 、分级沉淀法E 、大孔树脂色谱法12．分离纯化早期，由于提取液中成分复杂，目的物浓度稀，因而易采用 （ A ） A 、分离量大分辨率低的方法 B 、分离量小分辨率低的方法C 、分离量小分辨率高的方法D 、各种方法都试验一下，根据试验结果确定 13．气相色谱柱主要有（C ）。
生物分离工程部分习题和答案
2 生物分离工程在生物技术中的地位？答：生物技术的主要目标产物是生物物质的高效生产，而分离纯化是生物产品工程的重要环节，而且分离工程的质量往往决定整个生物加工过程的成败，因此，生物分离纯化过程在生物技术中极为重要。
3 分离效率评价的主要标准有哪些？各有什么意义？（ppt）答：根据分离目的的不同，评价分离效率主要有3个标准：以浓缩为目的：目标产物浓缩程度（浓缩率m）以纯度为目的：目标产物最终纯度（分离因子a）以收率为目的：产品收得率（%）5 在设计下游分离过程前，必须考虑哪些问题方能确保我们所设计的工艺过程最为经济、可靠？(ppt)答：<1>、目标产物性质及其共存杂质的特性 <2>、充分考虑目标产物商业价值<3>、考虑生物加工过程自身规模 <4>、采用步骤次序相对合理<5>、尽可能采用最少步骤 <6>、产品稳定性与物性<7>、产品规格与型式 <8>、生产过程中废水等排放6 下游加工过程的发展趋势有哪些方面？（ppt）答：成本控制和质量控制第二章发酵液预处理一解释名词凝聚剂：让不稳定的胶体微粒（或者凝结过程中形成的微粒）聚合在一起形成集合体的过程中所投加的试剂的统称。
过滤：利用多孔介质（如滤布、微孔膜、致密膜）截流悬浮液中的固体粒子，进行液固分离的过程。
离心：在离心力作用下，利用固体和液体之间的密度差达到沉降分离目的。
细胞破碎：利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术包含体：指细胞或细菌中高表达的蛋白质(也可以汇同其他细胞成分)聚集而成的不溶性颗粒。
二简答题1 为什么要进行发酵液的预处理？常用处理方法有哪几种？答：提高过滤速度与过滤质量改变发酵液性质(黏度↓、颗粒 、颗粒稳定性↓) 去除部分杂质使产物转入到易处理的相中（通常是液相）方法：加热、调节、pH、凝聚、絮凝2 凝集与絮凝过程有何区别？如何将两者结合使用？常用的絮凝剂有哪些？答：凝集：在中性盐作用下，由于双电层排斥电位降低使胶体体系不稳定的现象。
生物分离与纯化技术模拟试卷三答案
生物分离与纯化技术模拟试卷三答案一、名词解释（每小题3分，共15分）1．CM-Sephadex C-50：羧甲基纤维素、弱酸性阳离子交换剂，吸水量为每克干胶吸水五克。
2．絮凝：指在某些高分子絮凝剂存在下，在悬浮粒子之间发生架桥作用而使胶粒形成粗大的絮凝团的过程3．离心过滤：使悬浮液在离心力场作用下产生的离心力压力，作用在过滤介质上，使液体通过过滤介质成为滤液，而固体颗粒被截留在过滤介质表面，从而实现固液分离，是离心与过滤单元操作的集成，分离效率更高4．膜分离：利用膜的选择性（孔径大小），以膜的两侧存在的能量差作为推动力，由于溶液中各组分透过膜的迁移率不同而实现分离的一种技术。
5．层析分离：是一种物理的分离方法，利用多组分混合物中各组分物理化学性质的差别，使各组分以不同的程度分布在两个相中。
二、单选题（每小题1分，共15分）1．适合于亲脂性物质的分离的吸附剂是（ B ）。
A．活性炭 B.氧化铝 C.硅胶 D.磷酸钙2．下列哪项酶的特性对利用酶作为亲和层析固定相的分析工具是必需的？（ B ）A.该酶的活力高B.对底物有高度特异亲合性C.酶能被抑制剂抑制D.最适温度高E.酶具有多个亚基3．盐析法沉淀蛋白质的原理是（ B ）A.降低蛋白质溶液的介电常数B.中和电荷，破坏水膜C.与蛋白质结合成不溶性蛋白D.调节蛋白质溶液pH到等电点4．凝胶色谱分离的依据是（B）。
A、固定相对各物质的吸附力不同B、各物质分子大小不同C、各物质在流动相和固定相中的分配系数不同D、各物质与专一分子的亲和力不同5．如果要将复杂原料中分子量大于5000的物质与5000分子量以下的物质分开选用（D）。
A、Sephadex G-200B、Sephadex G-150C、Sephadex G-100D、Sephadex G-506．工业上强酸型和强碱型离子交换树脂在使用时为了减少酸碱用量且避免设备腐蚀，一般先将其转变为（B）。
A、钠型和磺酸型B、钠型和氯型C、铵型和磺酸型D、铵型和氯型7．下面哪一种是根据酶分子专一性结合的纯化方法（ A ）。
生物分离与纯化技术模拟试卷五答案
生物分离与纯化技术模拟试卷五答案装订 线一、名词解释（每小题3分，共15分）1．离心沉降：利用悬浮液或乳浊液中密度不同的组分在离心力场中迅速沉降分层，实现固液分离2．固相析出技术：利用沉析剂使所需提取的生化物质或杂质在溶液中的溶解度降低而形成无定形固体沉淀的过程。
3．乳化液膜系统：乳化液膜系统由膜相、外相和内相三相组成，膜相由烷烃物质组成，最常见的外相是水相，内相一般是微水滴。
4．反相色谱：是指固定相的极性低于流动相的极性，在这种层析过程中，极性大的分子比极性小的分子移动的速度快而先从柱中流出。
5．等电点：是两性物质在其质点的净电荷为零时介质的pH 值,溶质净电荷为零，分子间排斥电位降低，吸引力增大，能相互聚集起来，沉淀析出，此时溶质的溶解度最低。
二、单选题（每小题1分，共15分）1．在蛋白质初步提取的过程中，不能使用的方法（C ）。
A 、双水相萃取B 、超临界流体萃取C 、有机溶剂萃取D 、反胶团萃取2．离子交换法是应用离子交换剂作为吸附剂，通过（A ）将溶液中带相反电荷的物质吸附在离子交换剂上。
A 、静电作用 B 、疏水作用 C 、氢键作用 D 、范德华力 3．丝状（团状）真菌适合采用（A ）破碎。
A 、珠磨法B 、高压匀浆法C 、A 与B 联合D 、A 与B 均不行 4．真空转鼓过滤机工作一个循环经过（A ）。
A 、过滤区、缓冲区、再生区、卸渣区B 、缓冲区、过滤区、再生区、卸渣区C 、过滤区、缓冲区、卸渣区、再生区D 、过滤区、再生区、缓冲区、卸渣区 5．阴离子交换剂（C ）。
A 、可交换的为阴、阳离子B 、可交换的为蛋白质C 、可交换的为阴离子D 、可交换的为阳离子 6．凝胶色谱分离的依据是（B ）。
A 、固定相对各物质的吸附力不同B 、各物质分子大小不同C 、各物质在流动相和固定相中的分配系数不同D 、各物质与专一分子的亲和力不同7．依离子价或水化半径不同，离子交换树脂对不同离子亲和能力不同。
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2009生化分离工程实验（闭卷考试）2012生化工艺实验简答题（23选6题，每个实验选一题）1.在咖啡因的提取实验中，为什么加CaO？2.索氏提取装置由哪几部分组成（画图）？工作原理？3.咖啡因升华过程中用到了什么装置？咖啡因的升华结晶应注意哪些操作？4.茶叶咖啡因的提取实验中，浓缩去除乙醇的过程中用到了哪些设备？5.动物脏器DNA提取实验中，蛋白质是如何去除的？6.动物脏器DNA提取实验中，如何鉴定DNA的纯度？7.动物脏器DNA提取实验中，RNA是怎样去除的？8.动物脏器DNA提取实验中，氯仿-异戊醇的作用是什么？离心后分哪几层？9.动物脏器DNA提取实验中，为什么用0.1M NaCl-SSC间歇式的搅拌猪肝？10.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（上半部），粗提过程中用哪种试剂去除杂蛋白？用哪种试剂沉淀得到粗黏蛋白？11.鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中，所用树脂是哪种？树脂为什么预处理，如何预处理？12.DEAE-纤维素是哪种类型离子交换剂，如何预处理DEAE-纤维素？13.在鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中固定相、流动相分别是什么？14.简要画出离子交换层析系统中所用设备组成图。
15.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（上），为什么提取液的pH在3.5左右？16.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（下），pH6.5的用意何在？17.简述反胶团萃取甘薯中淀粉酶的实验原理18.栀子黄提取实验中，栀子苷是如何去除的？为什么用此方法去除？19.栀子黄提取实验中，如何鉴定藏花红素中栀子苷的去除情况？20.栀子黄提取实验中，吸附前为什么将滤液稀释至240mL乙醇？21.栀子黄提取实验中，吸附前为什么将滤液pH调至322.大蒜SOD提取实验中，是如何去除杂蛋白的？PBS与丙酮的作用分别是什么？23.大蒜SOD提取实验中，用哪种方法测定SOD活性？其原理是什么？1. 在咖啡因的提取实验中，为什么加CaO?答:吸取水分，防止咖啡因蒸汽溶于水；中和鞣酸；2. 索氏提取装置有哪几部分组成？（画图）3. 咖啡因升华过程中用到了什么？咖啡因的升华结晶应注意哪些操作？答：用升华装置包括：蒸发皿、电热套、漏斗（滤纸、牙签、棉花）注意：1.要控制好温度，始终都需用小火间接加热，如温度太高，会使产物发黄。
2. 漏斗颈部棉花松紧适宜。
3.滤纸的孔数适宜，也不能将滤纸放反了。
4.若漏斗上有水蒸气应用滤纸擦干4. 茶叶咖啡因的提取实验中，浓缩去除乙醇的过程中用到了哪些设备？答：旋转蒸发器、水浴锅、循环水式真空泵等5.动物脏器DNA提取实验中，蛋白质是如何去除的？答：用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质，6.动物脏器DNA提取实验中,如何鉴定DNA的纯度？答：DNA在紫外区有强吸收，最大吸收波长为260nm，而Pro在280nm处有强吸收，若其中含有Pro，则A260/A280小于1.6，若含有RNA，则大于2.0，纯的DNA溶液为1.8左右，据此可判断DNA纯度。
7.动物脏器DNA提取实验中,RNA是怎样去除的？答：在浓NaCl溶液（1～2mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解度很小；而在稀NaCl溶液（0.14mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白的溶解度很大。
将提取的细胞核物质先溶解与浓NaCl溶液中充分搅拌一定时间后，加水稀释，降低DNA溶解度使DNA沉淀出来，倒去上清即除去RNA。
8.动物脏器DNA提取实验中,氯仿—异戊醇的作用是什么？离心后分哪几层？答：氯仿—异戊醇的作用使核蛋白乳化变性分三层：上层为DNA和DNA核蛋白的水层中间层为变性蛋白凝胶下层为氯仿-异戊醇的有机溶剂层9.动物脏器DNA提取实验中,为什么用0.1MNacl—柠檬酸间歇式的搅拌猪肝？答：与细胞等渗溶液，在搅碎时，保持细胞内外渗透压，防止细胞核破碎；间歇性搅拌是为了避免搅碎细胞核（剪切力）10.离子交换层析分离鸡卵粘蛋白实验（上半部），粗提过程中用哪种试剂去除杂蛋白？用哪种试剂沉淀得到粗黏蛋白？答：10%TCA去除杂蛋白预冷丙酮沉淀黏蛋白以得粗提取物鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中，所用的树脂是哪种？树脂为什么预处理？如何预处理？答：1.DEAE—纤维素树脂2. ①去除交换剂中存在的杂离子②使其充分溶胀3. DEAE—纤维素→碱性溶液中浸泡一定时间→洗至中性→酸性溶液中浸泡一定时间→水洗至中性→保存在缓冲溶液中备用补充：对于OH型：先碱洗，再洗至中性，再酸洗，再洗至中性。
对于H型：先酸洗，再洗至中性，再碱洗，再洗至中性12.DEAE—纤维素是哪种类型离子交换剂，如何预处理DEAE—纤维素（OH型）答：是阴离子交换剂；对于OH型：先碱洗，再洗至中性，再酸洗，再洗至中性。
13.在鸡卵黏蛋白离子交换层析提取实验中保持系统pH值稳定6.5左右用意何在？答：实验中用的离子层析柱，离子交换剂带正电荷，系统pH为6.5，能使目标蛋白带负电，能与离子交换剂结合，使得杂蛋白带正电不能与离子交换剂结合，而使目标蛋白与杂蛋白分离。
14.简要画出离子交换层析系统中所用设备组成图?答：恒流泵-离子交换柱-紫外检测仪-级分收集器15.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（上半部），为什么提取液的水在3.5左右？答：黏性Pro在pH3.5不发生沉淀，能维持它的稳定性，而使杂蛋白带正电，TCA自身带负电，能与正电的杂蛋白结合使其变性，若pH再减小，TCA变形能力降低，而且黏蛋白稳定性破坏，即3.5pH减少了目标pro的变性，增加了杂蛋白变性。
16.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（下半部）PH6.5的用意何在？答：洗脱杂蛋白质，使目标蛋白带负电，同时杂蛋白带正电（存在少量杂蛋白带负电）17.简述反胶团萃取甘薯中淀粉酶的实验原理?答:表面活性剂在有机相中自发形成反胶团，其内部有稳的水池，蛋白质溶解于小水池中，其周围有一层水膜及表面活性剂极性头的保护，使其避免与有机溶剂接触而失活。
改变pH、盐浓度等条件蛋白质又可回到水相(反萃)，实现了蛋白质的萃取分离、纯化目的。
18.栀子黄色素提取实验中，栀子苷是如何去掉的？为什么用此方法去除?答：D101是非极性吸附剂，在极性溶液中对溶质的吸附作用大，对栀子黄色素的吸附能力强，改为70%乙醇时，溶液极性变小，非极性树脂吸附乙醇而洗脱出栀子黄色素，栀子苷因不能被吸附而被去除。
19.栀子黄色素提取实验中,如何鉴定藏花红素中栀子苷的去除情况?答：分光光度法；栀子黄色素水溶液在A238/A440的比值情况，当比值小于0.2时，可以避免绿变现象。
20.大蒜SOD提取实验中，是如何去除杂蛋白的?答：大蒜滤液中加1～1.1倍体积去离子水，再分别缓慢加入0.25倍体积的预冷95%乙醇和0.15倍体积的预冷氯仿，剧烈搅拌15min左右，静置30min(4℃)，然后4000r/min离心20min（5000rpm离心15min）除去变性蛋白沉淀，收集滤液，过滤（记录体积，测酶活性核蛋白浓度）补充：向大蒜的提取液中加入体积比为3:5的氯仿-乙醇溶液，边加边搅拌，使杂蛋白变性，离心除去。
大题（四选一）21.大蒜SOD提取实验中,用哪种方法测定SOD活性？并简要说明活性测定的原理，基本操作，注意事项以及数据处理？答：①SOD抑制邻苯三酚的方法.②邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O2 -，生成带色的中间产物，反应开始后反应液先变成黄棕色，几分钟后转绿，几小时后又转变成黄色，这是因为生成的中间物不断氧化的结果。
当有SOD存在时，由于它能催化O2 -与H+结合生成O2和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，因此，通过计算即可求出SOD的酶活性。
反应方程式：③基本操作：取3支试管（1号空白管,2号自氧化管，3号样品管），分别加入等量Tris-HCl（pH8.2），保持相等溶液体积V1，以1号管为空白对照，在2号中加入邻苯三酚，3号中加入邻苯三酚与V2SOD，分别测出在波长325下的吸光值并作曲线求出斜率KA与KB④数据处理：酶活（U/ml）=KA−KBKA∗100%50%∗V1V2注意事项：液体配好后立即加入到比色皿中，等待1min开始测定吸光值加入的量要精确22. 设计实验从猪肝中提取RNA并鉴定其纯度。
（原理，步骤，结果处理及结论）原理：DNA在生物体内与蛋白质结合成核蛋白，因此提取出脱氧核糖核蛋白（DNP）后，必须将其中蛋白质除去。
在浓NaCl溶液（1～2mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解度很小；而在稀NaCl溶液（0.14mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白的溶解度很大。
因此，可利用不同浓度的NaCl溶液将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。
分离得到核蛋白后，需进一步将蛋白质等杂志除去（采用氯仿-异戊醇使其乳化变性）。
步骤：取猪肝，去结缔组织,加NaCl-柠檬酸钠间歇性搅拌，2层纱布过滤，离心，细胞核沉淀，在1.71NaCl充分搅拌，静置,用蒸馏水稀释（勿搅拌），静置（细胞核破碎），加NaCl 固体粉末（RNA沉淀），静置，3000r/min离心，倒上清，将沉淀用0.14MNaCl充分溶解，转入三角瓶加氯仿-异戊醇（充分振荡），3000r/min离心,取上清加95%乙醇，将RNA沉淀挑取溶解鉴定。
结果处理：以0.14MNaCl为空白对照记录260nm和280nm下的吸光值。
结论：A260A280=1.8为标准，小于1.6则含有蛋白质；大于2.0含有DNA。
23.设计实验利用CTAB/异辛烷反胶团溶液萃取与反萃取甘薯中淀粉酶，并测定前萃取率及总萃取率（原理，步骤，结果处理与结论）原理：利用阳离子型表面活性剂CTAB在有机溶剂中形成反胶团来萃取α-淀粉酶（pI=5.0）。
CTAB形成的反胶团内表面极性头带正电荷，当α-淀粉酶带净负电荷时，由于静电引力作用，使其被萃取进入反胶团内，反之则不能；另外高能度得盐离子可与蛋白质竞争进入反胶团内，因此造成萃取下降。
步骤：反胶团溶液制备→预处理→萃取→反萃取反胶团制备：正丁醇60℃溶解后加入异辛烷混合，加0.5%NaCL缓慢加入，剧烈搅拌，离心取上相备用（反胶团溶液）预处理：取甘薯匀浆溶液静置后过滤，离心，取上清，分为两份（1号中加3M KCl作为原液，2号中加入0.5%NaCl作为萃取酶提取液。
萃取：2号中加入反胶团溶液振荡离心取上相（有机相）反萃取：萃取后的上相加入到3M KCl（pH6.6），振荡离心取下相（试样）酶活测定：取4只试管，依次编号（1号原液对照，2号原液，3号试样对照，4号试样），在1号和4号中分别加入等量预热的原液和试样，再加入等量的预热淀粉，40℃精确保温，4只管种分别加入DNS终止反应，1号与3号中分别加入等量原液和试样，沸水浴显色后稀释，测在波长540下，以1号测出2号原液的吸光值A原，以3号测出4号试样的吸光值A样结果处理：总萃取率=A样A原×100%结论:若答案为负值,则在操作过程总溶剂加错试管;正确来说4只比色皿的颜色由深到浅顺序为214324.简要说明鸡卵黏蛋白离子交换层析提取实验（下半部）中，目标蛋白与杂质蛋白是如何分离的。