紫外分光光度法检验标准操作规程
分光光度法检测标准操作规程
紫外分光光度法检测标准操作规程1 目的建立紫外分光光度法检测标准操作规程，保证正确操作。
2 范围适用本公司紫外分光光度法检测标准操作规程。
3 责任质量管理部4 内容4.1引用标准《中华人民共和国药典》（2015年版）四部4.2 概述4.2.1 紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
4.3 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
4.3.1对已知物质定性可用吸收峰波长或吸收度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
4.3.2 原理物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200-400nm）或可见光区（400-850nm）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190—900nm，因此又称紫外—可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯·比耳（lambert—Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为:A=lg 1=ECL T式中：A 为吸收度T 为透光率E 为吸收系数C 为溶液浓度L 为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E１％１ｃｍ表示。
若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。
4.4仪器：4.4.1紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
T6紫外可见分光光度计操作规程
T6紫外可见分光光度计操作规程T6紫外可见分光光度计操作规程⼀、开机⾃检：打开仪器主机电源，仪器开始初始化；约3分钟时间初始化完成。
初始化完成后，仪器进⼊主菜单界⾯。
⼆、进⼊光度测量状态：按键，进⼊光度测量界⾯。
三、进⼊测量界⾯：按键进⼊样品测定界⾯。
四、设置测量波长：按键，输⼊测量的波长，按键确认，仪器将⾃动调整波长。
五、进⼊设置参数：按键进⼊参数设定界⾯，按键使光标移动到“试样设定”，按键确认，进⼊设定界⾯。
六、设定使⽤样品池个数：按键使光标移动到“使⽤样池数”，按键循环选择需要使⽤的样品池个数。
七、样品测量：按键返回到参数设定界⾯，再按键返回到光度测量界⾯。
在1号样品池内放⼊空⽩溶液，2号池内放⼊待测样品。
关闭好样品池盖后按键进⾏空⽩校正，再按键进⾏样品测量。
如果需要测量下⼀个样品，取出⽐⾊⽫，更换为下⼀个测量的样品按键既可读数。
如果需要更换波长，可以直接按键，调整波长。
如果每次使⽤的⽐⾊⽫数量是固定个数，下⼀次使⽤仪器时可以跳过第五、六步骤直接进⼊样品测量。
注意：更换波长后必须重新按进⾏空⽩校正。
⼋、结束测量：测量完成后记录数据, 退出程序或关闭仪器后测量数据将消失。
确保已从样品池中取出所有⽐⾊⽫，清洗⼲净以便下⼀次使⽤。
按键直到返回到仪器主菜单界⾯后再关闭仪器电源.【引⼊】⽔杨酸（2-羟基苯甲酸；2-Hydroxybenzoic acid）：存在于⾃然界的柳树⽪、⽩珠树叶及甜桦树中，为⽩⾊结晶性粉末，⽆臭，味先微苦后转⾟。
熔点157-159℃。
⽔杨酸⽔溶液的pH值为2.4。
⽔杨酸与三氯化铁⽔溶液⽣成特殊的紫⾊。
紫外分光光度法测定⽔杨酸的含量1.仪器1.1紫外分光光度计（T6）1.2⽯英⽐⾊⽫（1cm）：2个1.3容量瓶（100mL）：7只1.4吸量管（1 mL、2 mL、5 mL、10mL）：各1只2.试剂2.1⽔杨酸标准溶液（1mg/mL）;2.2未知液：浓度约为50~55。
3.实验操作3.1吸收池配套性检查⽯英吸收池在220nm装蒸馏⽔，以⼀个吸收池为参⽐，调节为100%，测定另⼀吸收池的透射⽐，其偏差应⼩于0.5%，可配成⼀套使⽤，记录第⼆⽐⾊⽫的吸光度值作为校正值。
紫外分光光度法检测标准操作规程完整
1. 目的：建立用紫外分光光度法检测药品质量的标准操作规程，保证标准操作。
2. 引用标准：《中华人民国药典》（2015年版四部）通则。
3. 围：本标准适用于用紫外分光光度法进行的检测。
4. 责任人： QC检验员对本标准的实施负责，QC主管负责检查监督。
5. 容：5.1定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长围光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数计算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处该化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
5.2 原理：物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200~400nm）或可见光区（400~760nm）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长围为190~900nm，因此又称紫外-可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯·比耳（lambert-Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：A=lg 1=ECL T式中：A 为吸光度T 为透光率E 为吸收系数C 为溶液浓度L 为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E１％表示。
若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，１ｃｍ则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。
5.3. 仪器：5.3.1. 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
紫外分光光度计操作规程
（四）斜率方式测试 １．按动“测试模式”键，切换到透射比测试模式。 ２．调整测试波长。 ３．置入参比（空白）样品，按动“调１００％Ｔ／０Ａ”键，此时仪器显示“ＢＬＡＮＫ．．．”延迟 数秒便显示“１００％Ｔ”。 ４．按动“调０％Ｔ”键，显示屏上显示“ＺＥＲＯ．．．”，仪器进入自动调“０％Ｔ”状态，当 显示屏显示“１００．０％Ｔ”时，便完成调Ｔ零。 ５．确认１００．０％Ｔ是否正确。 ６．按动“测试模式”键，切换到浓度测试模式。 ７．按动“功能”键至“ＳＴＤ／ＦＡＣＴ＝１０００”功能。 ８．按动数字键，设置该样品斜率（可输入１～５位正数含小数点），并按动“确认”键（如显 示 Ｉｎｐｕｔ ｅｒｒｏｒ 表示输入出错）。 ９．置入待测样品，读取测试数据（如显示“ｘｘｘ．ｘｎｍ ｅｒｒｏｒＣ”表示待测样品浓度高）。 ＊此为标准系数法，即输入待测样品的标准系数值，建立过零线性方程，再测试一个或 几个待测样品的浓度值。
显示屏显示“０．０００Ａ”或“－０．０００Ａ”时，便完成调Ｔ零。 ５．确认０．０００Ａ是否正确。 ６．置入待测样品，读取测试数据。
（二）透射比测试 １．按动“测试模式”键，切换到透射比测试模式。 ２．调整测试波长。 ３．置入参比（空白）样品，按动“调１００％Ｔ／０Ａ”键此时仪器显示“ＢＬＡＮＫ．．．”延迟数 秒便显示“１００％Ｔ”。 ４．按动“调０％Ｔ”键，显示屏上显示“ＺＥＲＯ．．．”，仪器进入自动调“０％Ｔ”状态，当 显示屏显示“１００．０％Ｔ”时，便完成调Ｔ零。 ５．确认１００．０％Ｔ是否正确。 ６．置入待测样品，读取测试数据。
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紫外分光光度法检测标准操作规程
1. 目的：建立用紫外分光光度法检测药品质量的标准操作规程，保证标准操作。
2. 引用标准：《中华人民共和国药典》（2015年版四部）通则。
3. 范围：本标准适用于用紫外分光光度法进行的检测。
4. 责任人： QC检验员对本标准的实施负责，QC主管负责检查监督。
5. 内容：定义：紫外分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法，本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。
5.1.1. 定量分析通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸收度，然后用对照品或百分吸收系数计算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
5.1.2. 对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若化合物本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或在杂质的吸收峰处该化合物无吸收，则可用本法作杂质检查。
原理：物质对紫外辐射的吸收，是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生的，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电子光谱。
有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近紫外区（200~400nm）或可见光区（400~760nm）产生吸收。
通常使用的紫外分光光度计的工作波长范围为190~900nm，因此又称紫外-可见分光光度计。
紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。
朗伯·比耳（lambert-Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分析的依据，其数学表达式为：1式中：A 为吸光度T 为透光率E 为吸收系数C 为溶液浓度L 为光路长度若溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸收系数为百分吸收系数，以E表示。
若溶液的浓度（C）为摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应吸收系数为摩尔吸收系数，以ε来表示。
. 仪器：5.3.1. 紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。
紫外分光光度法及uv759s紫外可见分光光度计操作规程
紫外-分光光度法及UV759S紫外-可见分光光度计操作规程*****公司GMP文件一、紫外—可见分光光度法仪器的校正和检定1 波长由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所有的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。
常用汞灯中的较强谱线237.83nm,253.65nm, 275.28nm, 296.73nm, 313.16nm, 334.15nm, 365.02nm, 404.66nm, 435.83nm,546.07nm与576.9nm；或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正，钬玻璃在波长279.4nm, 287.5nm,333.7nm, 360.9nm,418.5nm,460.0nm,484.5nm, 536.2nm与637.5nm处有尖锐吸收锋，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化，使用时应注意。
近年来，常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器，以10％的高氯酸为溶剂，配制含4％氧化钬（Ho2O3）的溶液，该溶液的吸收峰波长为241.13nm，278.10nm，287.18nm，333.44nm，345.47nm，361.31nm，416.28nm，451.30nm，485.29nm，536.64nm 和640.52nm。
仪器波长的允许误差为：紫外区±1nm，500nm 处±2nm，700nm 处±4.8nm。
2 吸光度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。
取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表中的规定。
3 杂散光的检查可按下表所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。
对溶剂的要求含有杂原子的有机溶剂，通常均有很强的末端吸收。
紫外-可见分光光度法(2010药典一部)检验标准操作规程
1.目的：建立紫外-可见分光光度法(一部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。
2. 依据：2.1. 《中华人民共和国药典》2010年版一部。
3. 范围：适用于所有用紫外-可见分光光度法(一部)测定的供试品。
4. 责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。
5. 正文：5.1. 仪器的校正和检定。
5.1.1. 波长：由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。
常用汞灯中的较强谱线237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm与576.96nm，或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正；钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm与637.5nm波长处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化，使用时应注意；近年来，常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器，以10%高氯酸溶液为溶剂，配制含氧化钬（Ho2O3）4%的溶液，该溶液的吸收峰波长为241.13nm，278.10nm，287.18nm，333.44nm，345.47nm，361.31nm，416.28nm，451.30nm，485.29nm，536.64nm和640.52nm。
仪器波长的允许误差为：紫外光区±1nm，500nm附近±2nm。
5.1.2. 吸光度的准确度：可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。
取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定 ，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，应符合表中的规定。
紫外分光光度法操作规程
页数：1/5起草：日期：审核：日期：批准：日期：生效日期：签字：拷贝号：制定（变更）原因及目的：变更记载：修订号批准日期生效日期000102生产部[ ]份计划供应室[ ]份质量部QA [ ]份分发部门生产车间[ ]份仓储管理室[ ]份质量部QC [ ]份(档案存档1份)设备部[ ]份销售管理室[ ]份办公室[ ]份紫外分光光度法操作规程1.适用范围：适用于本厂品种紫外分光光度法检验。
2.职责QC检验员：严格按照操作规程进行检验。
QC主管：监督检查操作规程执行情况。
3.内容紫外分光光度法是通过被测物质在在紫外光区的特定波长处或一定波长范围内的吸收度，对该物质进行定性分析和定量分析的方法。
本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查、含量测定。
3.1 紫外分光光度计的检定3.1 波长准确度3.1.1 波长准确度的允差范围双光束光栅型紫外-可见分光光度计波长准确度允许误差为±0.5nm。
单光束棱镜型350nm处±0.7nm，500nm处±2.0nm，700处±4.8nm。
3.1.2 波长准确度检定方法用氧化钬玻璃检定将氧化钬玻璃放入样品光路,参比光路为空气，按测定吸收光谱图方法测定。
校正自动记录仪器时，应考虑记录仪的时间常数，测定样品与校正时取同一扫描速度。
氧化钬玻璃在279.4,287.5,333.7,360.9,418.7,460.0,484.5,536.2及637.5nm波长处有尖锐的吸收峰,可供波长检定用。
氧化钬玻璃因制造的原因，每片氧化钬的吸收峰波长有差异，应使用经计量部门校验过的。
3.2 吸收度准确度精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约600mg ，置1000ml 量瓶中，用硫酸液（0.005mol/L ）溶解并稀释至1000ml,用配对的1cm 石英池,以硫酸液(0.005mol/l)为空白,在235,257,313,350nm 分别测定吸收度,然后换算成，测得值应符合下表中%11cm E 规定的允差范围（±1%）。
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目的：建立紫外分光度法检验标准操作规程
范围：用于成品、原辅料鉴别、检查和含量测定
1．仪器：紫外分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显
示系统和数据处理系统等部分组成。
为了满足紫外可见光区全波长范围的测定，仪器备有二种光源，即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区
2．检定
2.1波长准确定
2.1.1波长准确度的允差范围：双光束光栅型紫外一可见分光光度计波长准确度允许误差为±0.5mm。
单元束棱镜型350mm处±0.7nm，500nm处±2.0nm，700nm±4.8nm
2.2吸收度准确度：精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，置1000ml量瓶中，用硫酸液（0.005mol/l）为空白，在235、257、313、350nm分别测定吸收度，然后换算成E1%1cm，测得值应符合下表中规定的允差范围（±1%），国际药典规定的允差亦为±1%。
分光光度法允差范围
波长（nm）吸收强度吸收系数（E1%/1cm）允差范围
235最小124.5123.3－125.7 257最大144.0142.6－145.4 313最小48.6248.3－49.11
350最大106.6105.5－107.7
分辨率、杂散光、基线平直度、稳定度、绝缘电阻等项检定，按中华人民共和国国家计量检定规程JJ6682～90(双光束紫外可见分光光度计检定规程)执行，并应符合有关项下的规定。
日常常规测定主要是对以上两项时常检查。
3．样品测定操作法
3.1 吸收系数测定(性状项下)按各该品种项下规定的方法配制供试品溶液，在规定的波长(参见
4.8项)测定其吸收度，并计算吸收系数，应符合规定的范围。
3,2鉴别及检查：按各该品种项下的规定，测定供试品溶液在有关波长处的最小及最大吸收，有的并须测定其各最大吸收峰值或最大吸收与最小吸收的比值，均应符合规定。
3.3 含量测定
3.3.1 对照品比较法：按各该品种项下规定的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成份的量应为供试品溶液中被测成分标示量的(100±10)%以内，用同一溶剂，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度。
3.3.2 吸收系数法：按各该品种项下配制供试品溶液，在规定的波长及波长±1nm处测定其吸收度，按各该品种在规定条件下给出的吸收系数计算含量。
采用吸收系数法应对仪器进行校正后测定，如为测定新品种的吸收系数，需按“吸收系数测定法”的规定进行。
4．注意事项
4.1 试验中所用的量瓶、移液管均应检定校正，洗净后使用。
4.2 使用的石英吸收池必须洁净。
用于盛装样品，参比及空白溶液的吸收池，当装入同一溶剂时，在规定测定吸收池的透光率，如透光率相差在O.3%以下者可配对使用，否则必须加以校正。
4.3取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。
装盛样品溶液以池体积的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留
溶剂，为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用醮有空白溶剂擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。
吸收池放入样品室时应注意每次放入的方向相同。
使用后用溶剂及水洗干净，晾干防尘保存，吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸(3：1L/L)混合液稍加浸泡后，洗净
备用。
如用铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。
4.4 测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求，可用lcm石英吸收池盛溶剂以空气为空白(即参比光路中不放置任何物质)测定其吸收度，应符合下表规定。
以空气为空白测定溶剂在不同波长处的吸收度的规定
波长范围(nm) 220～240 241—250 25l一300 300以上
吸收度 <0.4 <0.2 <0.1 <0.05
每次测定时应用同一厂牌批号，混合均匀的1批溶剂。
4.5称量应按药典规定要求。
配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时所取容积一般应不少于5ml。
含量测定供试品应称取2份，如为对照品比照法。
对照品一股也应称取2份。
吸收系数检查也应称取供试品2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。
作鉴别或或检查可取样品1份。
4.6供试品测试溶液浓度，除各该品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸收度以在0.3-0.7之间为宜，吸收度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸收度线性范围，配制合适的读烽浓度。
4.7选用仪器的狭缝谱宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减小狭缝宽度时供试品吸收度一再增加为准，对于中国药典紫外测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽，但对某些品种如表青霉素钾及钠的吸收度检查则需用1nm缝宽或更窄，否则其264nm的吸收度会偏低。
4.8测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm外，再测几点吸度，以核对供品的
吸收峰位置是否正确，并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规定
外吸收度最大波长应该品种项下规定的波长±1nm以内，否则应考虑试样的同一性，纯度以及傖仪器波长的准确度。
5．结果计算
5.1对照品比较法：或根据供试品溶液及对照品溶液的吸收度怀对照品溶液的浓度以正
比法算出供试品溶液的浓度，再计算含量
A样品：A对照=C样品：C对照
C样品=A样品×C对照/A对照
式中：A为吸收度值；C为测试液浓度(以mg/ml计)
5.2 吸收系数法：中国药典规定的吸收系数，系指E1%/lcm，即在指定波长时，光路长度为lcm，试样浓度换算为1%(g/mL)时的吸收度值，故应先求出被测样品的F1%/lcm值，再与规定的E1%/1cm值比较，可计算出供试品的含量。
A
E1/1cm(样品)＝—————
C×L
式中：A为供试品溶液测得的吸收度值；C为供试品溶液的百分浓度，即lOOml中含溶质的克数
(g/m1)：L为吸收池的光距长度(cm)
E1%/lcm(样品)
E1%/1cm(标准)
×100
E1%/lcm(样品)为根据前式计算出的供试品的百分吸收系数；
E1%/lcm(标准)为药典或药品标准中规定的百分吸收系数。