LAMP技术在病原微生物检测中的应用
基于LAMP技术的微生物病原诊断研究进展
立的 LAMP 检测结果，在检出率以及检测时限上，后者更加 具备优势［2］。在植物病毒的应用上，各大研究机构陆续建立 LAMP 检测。汤等通过建立辣椒黄脉病毒 ＲT － LAMP［3］，证 明其与 ＲT － PCＲ 相比，在使用成本、检出率上性能更优，操 作简便，更适应基 层 检 测 需 求，该 点 也 被 多 家 实 验 机 构 所 证 实。在细菌的检测方面，LAMP 技术在副溶血弧菌［4］，大肠埃 希菌，猪链球菌等多类菌种的检测应用上体现较好的发展潜 力，具备较高的研究价值。LAMP 技术在检测时间，人力耗费 以及相关准确度上，与 PCＲ，ＲT － PCＲ 相比表现出较好的效 果，对多菌种的三重 LAMP 技术构建实验，有结果显示检出率 可高达 PCＲ 检测的 1 000 倍。在虫媒螺旋体等地区病原大面 积普查上，LAMP 技术操作简单，却有着重要的指示价值。
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Industrial & Science Tribune 2018 （17） 1
产业与科技论坛 2018 年 第 17 卷 第 1 期
基于因子分析的河北省公共服务 均等化水平评价研究
一、引言 临 床 常 见 微 生 物 病 原 主 要 为 细 菌，病 毒 和 寄 生 虫 三 大 类。鉴于社会发展 过 程 中，各 类 病 原 变 异 株 的 出 现，现 代 医 学诊治技术已将诊疗目标延伸至分子诊疗层次。传统检测 技术多见 ELISA、PCＲ、ＲT － PCＲ。在实际的临床应用中，上 述三项技术表现出较多弊端： ELISA 的使用需基于单克隆抗 体，灵敏度较低，诊断误差较大； PCＲ 法，易因交叉感染而造 成假阳性，影响诊疗效果； 误差较小，灵敏度较为准确的 ＲT － PCＲ 则因为其较高的使用成本，难以适用于基层检测。相 较三者，LAMP 技术具有干扰性强，具有较高特异性，且突破 了传统技术在仪器昂贵等成本上的限制，适用于野外采样等 快速检测，其应用 普 及 在 疫 病 防 控，病 原 检 测 研 究 等 方 面 具 有重要意义。 二、技术简介 LAMP，全名为环介导等温扩增技术，是一项基于核酸扩 增原理的分子技术。目前除了原有 LAMP 技 术，还 有 双 重 LAMP，三重 LAMP，ＲT － LAMP 等应用，现易广泛应用于生命 科学的 DNA 与 ＲNA 领域。传统检测技术多见 ELISA、PCＲ 和 ＲT － PCＲ，但在实际的临床应用中，传统三项技术表现出 诸多弊端： ELISA 的使用需基于单克隆抗体，灵敏度较低，诊 断误差较大； PCＲ 法，易因交叉感染而造成假阳性，影响诊疗 效果； 误差较小，灵敏度较为准确的 ＲT － PCＲ 则因为其较高 的使用成本，难以适用于基层检测。相较三者，LAMP 技术具 有干扰性强，具有 较 高 特 异 性，且 突 破 了 传 统 技 术 在 仪 器 昂 贵成本上的限制，适 用 于 野 外 采 样 等 快 速 检 测，其 应 用 普 及 在疫病防控，病原检测研究等方面具有重要意义。 三、LAMP 技术在病毒，细菌检测中的应用 国内赵等应用 LAMP 技术，建立了肠道腺病毒的肉眼可 视化检测［1］，广西大学梁等比对家蚕 BmNPV 常规 PCＲ 与建
LAMP方法及其在病原微生物检测中的应用_吴禹熹
原料乳中金黄色葡萄球菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用
原料乳中金黄色葡萄球菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用李晓霞;贾淼;金君华;张红星;刘慧;谢远红【摘要】The loop-mediated isothermal amplification(LAMP) method was established and applied in the rapid de-tection of Staphylococcus aureus in raw milk according to the conserved sequence of the heat-tolerant nuclease gene(nuc). The genomic DNA of S. aureus could be detected using the four primers designed and synthesized, and the detection limit was 110. 0 fg per 25. 0μl reaction system. The method was S. aureus specific, with the detection limit of 67 CFU/ml in raw milk. This study provided a basis for further application of LAMP method in the safety detection of S.aureus in food.%为了建立原料乳中金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)在保守区域设计特异性引物,建立LAMP检测方法,并用于原料乳中金黄色葡萄球菌的快速检测.结果表明,针对金黄色葡萄球菌的基因组DNA,使用设计合成的4条引物和建立的LAMP方法能够有效检测金黄色葡萄球菌DNA,每25.0μl反应体系的灵敏度为110.0 fg,并且此方法针对金黄色葡萄球菌具有良好的特异性.针对原料乳中金黄色葡萄球菌的污染,建立的LAMP检测方法的检测限为67 CFU/ml.本研究结果为进一步将LAMP方法应用于食品中金黄色葡萄球菌的安全检测奠定了基础.【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2017(033)005【总页数】5页(P1171-1175)【关键词】环介导等温扩增(LAMP);金黄色葡萄球菌;耐热核酸酶基因(nuc);灵敏度;特异性【作者】李晓霞;贾淼;金君华;张红星;刘慧;谢远红【作者单位】北京农学院食品科学与工程学院,农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室/食品质量与安全北京实验室,北京 102206;北京农学院食品科学与工程学院,农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室/食品质量与安全北京实验室,北京 102206;北京农学院食品科学与工程学院,农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室/食品质量与安全北京实验室,北京 102206;北京农学院食品科学与工程学院,农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室/食品质量与安全北京实验室,北京 102206;北京农学院食品科学与工程学院,农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室/食品质量与安全北京实验室,北京 102206;北京农学院食品科学与工程学院,农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室/食品质量与安全北京实验室,北京102206【正文语种】中文【中图分类】TS207.4李晓霞，贾淼，金君华，等. 原料乳中金黄色葡萄球菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用[J].江苏农业学报，2017，33(5)：1171-1175.近年来，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒是食品卫生的主要问题之一[1]。
LAMP
LAMP（环介导等温扩增）技术2011-07-28 11:46 来源：北京蓝谱点击次数：1341 关键词：LAMP PCR技术环介导等温扩增分享到：收藏夹腾讯微博新浪微博开心网PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用，其灵敏度高、特异性好，是目前最精准的基因诊断方法。
然而PCR方法操作起来较复杂，对仪器和人员要求比较高，不适合基层或现场快速诊断，因此在国内的推广速度并不是很快。
2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Res杂志上公开了一种新的基因诊断技术，即LAMP (L oop-mediated isothermal amplification),中文名为“环介导等温扩增反应”，受到了世卫组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，在这次甲型H1N1流感事件中，日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。
通过荣研公司近十年的推广，LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，并得到了欧美国家的认同。
LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像PCR那样进行凝胶电泳，LAMP反应的结果通过肉眼观察白色浑浊或绿色荧光的生成来判断，简便快捷，适合基层快速诊断。
可以预见，在未来的基因诊断领域，LAMP方法将占据大壁江山。
目前，在万方数据库搜索LAMP文章500多篇。
详见：/paper.asp x?q=loop-mediated+isothermal+amplification&o=sortby+CitedCount+CoreRank+date+relevanc e%2fweight%3d5&f=top&n=10&p=11. 优缺点介绍：LAMP方法优点：灵敏度高（比传统的PCR方法高2～5个数量级）；反应时间短（30～60min就能完成反应）；临床使用不需要特殊的仪器（试剂盒研发阶段推荐用实时浑浊仪）；操作简单（不论是DNA还是RNA，检测步骤都是需将反应液、酶和模板混合于PCR管中，置于水浴锅或恒温箱中63℃左右保温30～60min，肉眼观察结果）。
LAMP技术研究进展及其在动物疫病检测中的应用
LAMP技术研究进展及其在动物疫病检测中的应用LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）技术是一种能够在恒温下快速、高效地进行核酸扩增的方法。
它通过特殊的引物和酶，在简单的实验条件下可以在短时间内扩增大量目标DNA序列，并且具有高度的特异性和灵敏性。
LAMP技术最早由日本学者Notomi等人于2000年首次提出，自此以后，LAMP技术在许多领域得到了广泛的应用，尤其在动物疫病检测中。
1.快速诊断：LAMP技术可以在一个小时内进行核酸扩增反应，比传统的PCR方法要快得多。
这对于迅速确定疫病的诊断结果非常重要，可以提高动物疫病的早期预警和防控能力。
2.高度特异性：LAMP技术使用多个特异性引物，在同一个反应体系中进行扩增，可以显著提高对目标序列的特异性识别能力。
这对于区分不同疫病病原体或者同一病原体的不同亚型具有重要意义，可以帮助鉴定传染病源和病原菌的变异。
3.高灵敏性：LAMP技术不仅在快速扩增速度上具有优势，还在扩增效果上具有高灵敏性。
在初始目标DNA浓度低至10个分子时，LAMP技术仍能够进行有效扩增，这对于低浓度病原体的检测非常关键。
4.操作简便性：LAMP技术不需要复杂的设备和特殊的实验条件，只需要一个简单的恒温器就可以进行核酸扩增反应。
这极大地降低了操作门槛，使得不同实验室和场所都可以进行动物疫病的检测工作。
5.物价低廉：LAMP技术所需的试剂和设备成本相对较低，特别是与PCR技术相比较，更加经济实惠。
这对于资源有限的地区和农村地区的疫病监测和防控工作尤为适用。
目前，LAMP技术已经在许多动物疫病的检测中得到了应用。
比如，它被成功用于禽流感、猪瘟、传染性胸膜炎、家禽新城疫等重大疫病的快速检测。
通过该技术，可以快速而准确地检测出病原体的存在，为疫病的早期检测和防控提供了有力的手段。
总之，LAMP技术在动物疫病检测中具有广阔的应用前景。
随着该技术的不断进步和完善，相信将能够更好地满足动物疫病检测的需求，为动物疫病的防控提供更加可靠、快速和经济实惠的手段。
LAMP技术在微生物检测中的应用
LAMP技术在微生物检测中的应用【摘要】本文以LAMP技术的优缺点为分析对象，并食源性致病徽生物和临床致病微生物检测行业的发展现状进行了阐述，结合实际情况，对LAMP技术在微生物检测中的应用进行了探讨。
【关键词】LAMP技术，微生物检测，应用一、前言LAMP技术是随着微生物检测技术发展而不断发展的，LAMP技术在微生物检测中的应用中越来越广泛。
经过几十年的迅速发展，目前LAMP技术已广泛应用于很多微生物检测当中，成为一门实用的技术。
二、LAMP技术的优缺点1、优点（一）、特异性强、灵敏度高4条引物可以严格识别靶核酸序列上的6个独立区域,反应过程不会受到反应混合物种非靶序列DNA的影响,保证了LAMP扩增的高度特异性。
在检测过程中可以根据是否扩增就能判断目标基因是否存在,可用于细菌或病毒的定性检测。
（二）、等温高效LAMP在等温条件下扩增,不会因温度改变而造成时间的损失,在1 h内可将靶序列扩增至109～1010倍。
而且受非靶序列的影响小,模板也不需要热变性。
（三）、整个扩增反应操作简便、快捷LAMP反应过程中会产生白色的焦磷酸镁沉淀,肉眼即可直接观察,是鉴定反应是否进行的最直接方法。
另外,LAMP扩增产物可以像PCR反应利用凝胶电泳结合成像系统进行鉴定,通过产生的不同梯型来区分特异性扩增和非特异性扩增。
（四）、实验装置简单,费用相对较低LAMP反应不需要进行模板的热变性、长时间的温度循环、繁琐的电泳和紫外观察等,在操作过程中,仅需要普通的水浴锅或其他可以得到稳定热源的设备即可。
2、缺点（一）、LAMP技术对试验设计的要求较高需要设计的引物数目相对较多、结构复杂,需要考虑到靶序列的片段及茎环结构等因素。
在检测高度变异的病原体时,实验设计相对比较困难（二）、LAMP技术在一次反应中只能检测一个病原体LAMP技术的阳性反应并不只呈现单条带,而出现拖尾和一些低分子质量的带,一旦产生非特异性扩增,则不易鉴别。
LAMP在阪崎克罗诺杆菌检测中研究进展
LAMP在阪崎克罗诺杆菌检测中的研究进展王彦人1，焦敬波1，张钧森1，康青1，李萍1，杜欣军1*(1.省部共建食品营养与安全国家重点实验室，天津科技大学食品科学与工程学院，天津，300457)摘要：阪崎克罗诺杆菌（Cronobacter sakazakii）是一类食源性致病菌，可引起新生儿脑膜炎、败血症等疾病。
环介导等温扩增（Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP）技术是一类新型的恒温核酸扩增技术，具有灵敏度高、耗时短、特异性强、对设备需求低等特点，可与多种检测方法结合应用于食源性致病微生物的检测。
本文旨在阐明LAMP的基本原理并归纳结合不同检测方法的LAMP技术在阪崎克罗诺杆菌快速检测中的研究进展。
关键词：阪崎克罗诺杆菌；环介导等温扩增；快速检测中图分类号：TS201.6Process of Loop-Mediated Isothermal Amplification for Detection inCronobacter sakazakiiWANG Yanren1，JIAO Jingbo1，ZHANG Junsen1，KANG Qing1，LI Ping1，DU Xinjun1*(1. State Key Laboratory of Food Nutrition and Safety, College of Food Science and Engineering, TianjinUniversity of Science and Technology, Tianjin 300457, China)Abastract:Cronobacter sakazakii is a kind of foodborne conditional pathogenic bacteria, which can cause neonatal meningitis, septicemia and other diseases. Loop-mediated isothermal amplification technique (LAMP) is a new type of isothermal nucleic acid amplification technique with high sensitivity, rapidity and low equipment requirements. It can be combined with a variety of detection methods for practical application and has been widely used in the detection of foodborne microorganisms. This paper aims to elucidate the phylogenetic taxonomy of C. sakazakii, the basic principles of LAMP, and to summarize the progress of LAMP technology combined with different detection methods in the detection of C. sakazakii.Keywords: Cronobacter sakazakii, loop-mediated isothermal amplification (LAMP), rapid detection阪崎克罗诺杆菌为克罗诺杆菌属（Cronobacter，主要种型如表1所示）中最为典型的一类食源性致病菌种，易感染全年龄段人群0，致死率高达40~80%0。
LAMP技术及其在微生物检测中的应用
１ Ｌ ＡＭ Ｐ技 术 简 介 １１ Ｌ ． ＡＭＰ技 术 原 理
Ｌ ＭＰ法 是 由 Ｎ ｔ 等 … Ａ ｏｏ ｍｉ １于 ２ ０ ０ ０年 开 发 出 来 的 一 种
同 样 认 为 Ｌ ＭＰ技 术 特 异 性 和 灵 敏 性 高 。 国 内刘 全 英 等¨】 Ａ
采 用 Ｌ Ｐ技 术 扩 增 了 大 肠 杆 菌 Ｏ１ ７特 异 性 基 因 ， 与 Ｍ Ａ ５ 并
《 海 畜牧兽 医通 讯》 ２ １ 上 ０ ０年 第 ５期
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Ｌ ＡＭＰ技 术 及其 在 微 生物 检 测 中 的应 用
鞠 慧 萍 宋 白薇 石 建 华 葛 睛 颖
（苏 州 出入境 检验 检疫 局 江 苏 苏 州 ２ ５ ０ ） １ １４
近年 来 ， 着 食 品 安 全 事 件 的 频 繁 发 生 ， 品安 全 问题 随 食
１ ２ Ｉ Ｍ Ｐ 技 术 的 优 缺 点 ． Ａ
１２ １ 优 点 ：１ 特 异 性 强 、 敏 度 高 。４条 引 物 可 以 严 格 识 ．． （） 灵 别 靶 核 酸 序 列 上 的 ６个 独 立 区 域 ， 应 过 程 不 会 受 到 反应 混 反 合 物 种 非 靶 序列 Ｄ Ａ 的 影 响 ， 证 了 Ｌ ＭＰ扩 增 的 高度 特 Ｎ 保 Ａ