光合细菌的分离、培养和鉴定
光合细菌菌种的分离、富集培养、纯化和菌种鉴定及净化水质的研究
１ ３ １ 光合 细菌 富集 富集 和分 离 不 同类 型 的光 合 ． ． 细菌 所用 培养 方 法 不完 全 相 同 。 首先 ， ５ １ ０ 生 取 ０ ０克 长 光合 细菌 的土壤 ， 灭菌 后装 入 玻璃 量筒 内 ， 再加 入采 集 的样 品水 。 根据 欲要 分 离 的不 同光合 细菌 选 用上 述相 同的培 养 基 １０～ ０ ０ ２ ０毫 升 ， 并与 土壤 搅 拌 均匀 ， 后加 流体 然 石蜡 隔绝 空气 ， 成 厌氧 的环 境 。 造 在 ２ ３ ℃ 温 度下 ，用 ５０ ０ １ ０ ５— ５ ０ ００ ０勒 克斯 的 光 照强度 进 行光 照 培养 ２—８周 （ 活在海 水 中的菌株 生 生 长较缓 慢 ， 要 培养 １—３ 月 ） 需 个 。这 时 ， 合 细菌在 光
配法 同富集 培养 基 ， 加 入 Ｎ Ｈ Ｏ 的量 为 ２克 ／ 但 ａＣ ａ
５ ０毫 升 ， ｐ 调 Ｈ值 到 ７ ０后 ， 入 Ｎ ９ ： ． ． 加 ａＳ・ Ｈ ０ １０克
５ ０毫 升水 ， １千克 ／ 米 灭菌 １ 钟 ， 厘 ５分 以便 降低 培养 基 的氧 化 还原 值 。酒 精 或戌 醇 或 ４ ％丙 氨 酸 的用 量 同 富 集培养 基 。
・
形 态基 本 一致 ， 纯化 工作 才 结束 。菌 株做 鉴 定备 用 。
１４ 光合 细菌 的 菌种鉴 定 ． 以 《 明第 八 版伯 杰 细菌 鉴定 》… 为 主要鉴 定 手 简
册 同时 ， 照 《 参 细菌 学 概论 》 ， … 进行 菌种 鉴定 。
１５ 净化 水质 技 术 的研 究 ． 按 污 水 体 积 １ 的量 加 人 人 工 培养 的光 合 ０ｘ１ ０ 细菌培 养液 （ ０， 毫升 以上 ） ３ ｆ Ｌ／ 。每 隔 １ 投放 １ ， ０天 次 共投 放 ４次 ， ４ 即 ０天 为一个 处 理 周期 。
西南大学崇德湖中光合细菌的分离及初步鉴定
西南大学崇德湖中紫色非硫光合细菌的分离及初步鉴定摘要：西南大学校园崇德湖水体污染较严重，而紫色非硫光合细菌可以净化水体，因此对该湖水样进行鉴定，鉴定其紫色非硫光合细菌数量的多少。
利用特异性培养基对西南大学校园崇德湖水样进行富集、分离和纯化, 得到了1株紫色非硫细菌( PNSB) , 依据细菌形态特征及群落形态特征及特性观察实验, 初步鉴定这些光合细菌属于红篓菌属细菌。
关键词：紫色非硫光合细菌；分离；鉴定；崇德湖正文：一般湖中生物在死亡后尸体堆积于湖中。
这些物质腐败后产生的氨氮、硫化氢等有害物质直接污染水体及池底, 这些有害物质除直接危害养殖对象外, 同时也是病原微生物的营养源, 使病菌大量繁殖. 紫色非硫细菌( PNSB) 是光合细菌( PSB) 中最重要的一大类, 是无氧光合细菌中种属最多、分布最广、形态生理生化特征最为多样、系统发育最为复杂的一群。
紫色非硫细菌代谢类型多样, 具光合、固碳、降解大分子有机物、固氮、脱氮、硝化、反硝化、硫化物氧化等多种功能, 且细胞富含蛋白质、氨基酸等多种生理活性物质, 因而成为具有净化养殖水体、增加动物营养、促进生长和增强防病抗病能力等功能的重要微生物资源。
本课题采集校园湖中水样, 对分离出的紫色非硫细菌进行了生物学特性的研究及初步鉴定。
一、材料和方法：（一）样品：西南大学崇德湖水样（二）培养基：1、富集培养基成分：KH2PO4 0.5g；CH3COONa 3g；MgSO4·7H2O 0.2g；CaCl2·6H2O 0.05g；酵母膏0.05g；CH3CH2COONa 0.3g；K2HPO4 0.3g；（NH4）2SO4 0.3g；NaCl0.1g；pH 7.2；蒸馏水100mL。
2、分离培养基成分：酵母膏3g；蛋白胨3g；琼脂5g；CaCl2·6H2O 0.3g；NaCl0.3gMgSO4·7H2O 0.5g；pH 6.8；蒸馏水100mL。
光合细菌菌种的分离_富集培养_纯化和菌种鉴定及净化水质的研究
对照不加菌液 - 毫升 ( 升菌液 #" 毫升 ( 升菌液 #- 毫升 ( 升菌液 !" 毫升 ( 升菌液
!* 1* +
球形红假单胞菌净化水质的能力见表 +
表+
加入量
!* #* ! 净化水质的光合细菌菌株的分离与纯化 采 用分离培养基，把生长良好的富集液适当稀释，在厌
形态基本一致， 纯化工作才结束。菌株做鉴定备用。
#) 5) # 光合细菌富集 富集和分离不同类型的光合 细菌所用培养方法不完全相同。 首先， 取 %" : #"" 克生
长光合细菌的土壤， 灭菌后装入玻璃量筒内， 再加入采 集的样品水。 根据欲要分离的不同光合细菌选用上述相同的培 并与土壤搅拌均匀， 然后加流体 养基 #"" : !"" 毫升， 石蜡隔绝空气， 造成厌氧的环境。 在 !% : 5%; 温度下，用 % """ : #" """ 勒克斯的 光照强度进行光照培养 ! : < 周 $ 生活在海水中的菌株 光合细菌在 生长较缓慢， 需要培养 # : 5 个月 & 。这时，
表.
组份
多菌种净化水质效果
%2+ / 毫克 3 升 0 !#, *" #*, "1 #-, -# 氨氮含量 / 毫克 3 升 0 #, #" ", -# ", .1 亚硝酸盐 / 毫克 3 升 0 ", -$ ", 1" ", )(
", #1 毫 克 3 升 ， 至 试 验 !" 天 后 升 至 ", (1 毫克 3 升，而试验池至 !" 天后氨
第一章光合细菌培养
• • •
第一节光合细菌生物学特征 第二节光合细菌的分离、 第二节光合细菌的分离、培养与保存 第三节光合细菌的应用
概念
• 光合细菌：又称光养细菌，是能进行光合作 光合细菌：又称光养细菌，是能进行光合作
用的一群原核生物。广义的光合细菌包括产 氧光养细菌和不产氧光养细菌。产氧光养细 菌，又叫蓝细菌，也称蓝藻；不产氧光养细 菌，即狭义的光合细菌。包括厌氧光合细菌 和最近发现好氧不产氧光合细菌。
光合细菌培养基）无机物：NaHCO3 无机物： • （2）有机物： CH3COONa 、 CH3CH2COONa 、葡萄糖、 有机物： 葡萄糖、 苹果酸、 苹果酸、CH3CH2OH 2、氮源 （1）无机物: NH4Cl 、 (NH4)2SO4 无机物: （2）有机物:蛋白胨 、氨基酸 、酵母膏 有机物: 3、生长因子： B族维生素和某些氨基酸或核酸 生长因子： 4、微量元素：铜、钾、镁、硫、磷、氯等 微量元素： 5、磷酸缓冲液： KH2PO4 、 K2HPO4 磷酸缓冲液： 6、还原剂：半胱氨酸、Na2S.9H2O 还原剂：半胱氨酸、
1000ml
pH
7.4
3、紫色非硫细菌的富集与分离培养基
• ④R培养基（刘军义，2003）：用于红假单胞菌属 培养基（刘军义，2003）： ）：用于红假单胞菌属
菌的培育。 菌的培育。
• • • • •
CH3CH2COONa NaHCO3 NH4Cl K2HPO4 pH
3.0g 1.0g 1.0g 0.5g
在自然界的碳、氮循环中起着重要的作用。同时，它 在自然界的碳、氮循环中起着重要的作用。同时， 们还能把下层水中残留的有机物经异养分解后产生有 们还能把下层水中残留的有机物经异养分解后产生有 机酸、硫化氢和氨等作为合成菌体的基础物质 作为合成菌体的基础物质， 机酸、硫化氢和氨等作为合成菌体的基础物质，起着 了净化水质的作用， 了净化水质的作用，有利于地球的水循环和水生生物 的生长繁殖。 的生长繁殖。 （二）光合细菌与其他生物的关系 光合细菌富含多种氨基酸和维生素，可用作为各种水 光合细菌富含多种氨基酸和维生素， 生动物的饵料和饲料添加剂， 生动物的饵料和饲料添加剂，构成了生物界食物链的 重要环节。而光合细菌和其他细菌、 重要环节。而光合细菌和其他细菌、浮游生物的共生 关系，使生物界更加和谐。 关系，使生物界更加和谐。
光合细菌不同属类的分离培养
光合细菌的分离培养光合细菌（Photosynthetic Bacteria，略作PSB）是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。
除蓝细菌外，都能在厌氧光照条件下进行不产氧的光合作用。
研究与应用的实践表明，光合细菌在高浓度有机废水处理与资源化、水产养殖的水质调控与促进健康生长、在农业生产中作为高效活性菌肥等方面，发挥着十分有益的和令人瞩目的作用。
关于光合细菌的类群、形态与生理特征、在生态系统中的地位和作用等内容，请参考有关文献与专著。
这里仅就光合细菌的分离、培养方法作一介绍。
1光合细菌的富集培养的一般方法①分离源光合细菌四个科-红螺菌科(Rhodospirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、绿菌科(Chlorobiaceae)、绿色丝状菌科(Chloroflexaceae)的各种菌，广泛分布于地球生物圈的各处。
作为光合细菌的分离源，一般可从富营养化的湖泊、池沼、海滩、以及水田、硫黄泉、灌水土壤、和污水厂活性污泥、畜牧场水沟等厌氧或缺氧环境采样。
在较深的水体，可使用采水器采取厌氧层的水。
在较浅的地方，可直接用吸管吸取带底泥的水。
采样的同时记录水温、pH、有无H2S气味等项内容。
将采集到的水样或泥样放在厌氧、低温条件下，带回实验室进行分离。
②光合细菌富集培养基用于光合细菌富集培养用的培养基有许多配方，这里仅介绍日本星野氏推荐的基本培养基I和基本培养基II。
前者适合于红螺菌科的光合细菌，后者适用于着色菌科和绿菌科的菌。
基本培养基I：KH2PO4 0.5g K2HPO4 0.6g (NH4)2SO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.2gNaCl 0.2g CaCl2·2H2O 0.05g酵母浸出汁 0.1g微量元素溶液（见后）1mL 生长因子溶液（见后）1mL蒸馏水1000ml以上配制成的培养基pH值约6.7根据需要，可在上述培养基中添加一些成分，如富集的是缺少同化型硫酸还原系的菌种，则可在基本培养基I中加入0.01%硫代硫酸钠；如是海洋性菌种，可加入3%NaCl等等。
光合细菌分离及培养条件研究报告
光合细菌M-01的分离及培养条件研究[摘要]从湛江市霞山区海滩表层污泥中富集分离出红假单胞菌属光合细菌M-01,对其培养条件进行了初步探讨,结果表明:菌株生长温度为30e时,最适培养光照度为3 000 lx。
培养基正交实验结果表明其最优培养基配方为:氯化铵2 g,磷酸氢二钾0.2 g,乙酸钠4 g,碳酸氢钠2 g,氯化钠1 g,酵母膏0.15 g,硫酸镁0.2 g,T.M储液少量,蒸馏水1 000 mL。
其中乙酸钠为最大影响因子。
[关键词]光合细菌(PSB>。
分离。
培养。
正交实验光合细菌(Photosynthetic bacteria>是一类光合自养型古老细菌,具有较强的分解有机物特性,光合细菌作为水质净化剂广泛应用于水产动物如一些经济鱼类、虾蟹、贝类的养殖和育苗中[1~4]。
在生产上有意义的红螺菌科包括红螺菌属、红假单胞菌属和红微菌属[4]。
现已有学者对红假单胞菌的分离、鉴定、培养特性及保藏做了研究[5~7],但还没有关于其营养条件优化的报道。
笔者从海洋环境中分离到了光合细菌M-01,采用正交实验方法进行了培养条件优化的研究。
现将结果报告如下。
1 材料与方法1.1 材料(1>待分离材料取广东省湛江市霞山区海滩表层污泥。
(2>培养基使用红螺菌科富集培养基作为富集分离基础培养基[8]。
1.2 方法(1>菌株的分离筛选方法取污泥10 g,装入500 mL细口无色玻璃瓶中,加入富集培养液至满,盖上瓶盖,隔绝空气,于30e, 3 000 lx光照下进行富集培养3~4 d,培养液呈绛红色后,取富集培养菌液1mL,转接入培养液中,重复以上操作2次,然后采用改良的Hungate厌氧培养技术>>>柱滚管法[9]进行分离纯化,用分离培养基的琼脂柱穿刺培养后保存。
(2>细胞色素光谱吸收峰值测定方法培养物离心后洗涤,将细胞悬浮于60%的蔗糖溶液中,采用722S分光光度计扫描,波长范围为340~1 000 nm。
一株光合细菌分离与初步鉴定
１ ．菌落及菌体形态观察 ．１ ５ 观察琼脂分离平板上生长 的菌落形态； 菌体 对 进行革兰氏染色 ， 显微镜下观察菌体形态并测定菌 体大 小 。 １ ． 细胞 吸收光谱 测定 ．２活 ５ 取 ５ Ｌ 体 培养 物经 ３０ ｒ ｎ 用 生理盐 水 洗 ｍ 液 ００／ ， ｍｉ 涤 两 次 ， 新 悬 浮 于 ６％的 蔗 糖 溶 液 中 ， 容 至 重 ０ 定 １ｍＬ 用 ６ ％的蔗 糖 溶 液作 为空 白对 照 ， 分 光 光 ０ ， ０ 用 度计 在波 长 ３０～８０ ｍ范 围测 定细 菌 的吸光值 ， ６ ４ｎ 绘 制吸 光度 曲线 。
２０ Ｌ ５ ｍ 三角瓶 中。加入液体富集培养基 ２０ Ｌ 与 ０ｍ ， 泥样振荡混匀 ， 液面注入０ ｅ 高灭菌液体石蜡 ， ．ｒ ５ａ 棉 塞 封 口 ， 成 厌 氧 环 境 。在 温 度 ２ ℃ 、 照 ５０１ 造 ８ 光 ００ ｘ 的生 化 培 养 箱 中培 养 至培 养 液 呈 红 棕 色 。移 取 红 棕 色光合 细菌 的富集 液 ｌ Ｌ至装有 富集 培养液 ５ ｍ ｍＬ 的试 管 中 ， 液面 注入 ０５ｍ高灭 菌液 体 石蜡 ， 持厌 ． ｃ 保 氧 条 件 。连 续 富集 ３ ， 欲要 分 离 的光 合 细 菌成 次 使
株光合细菌分离与初步鉴定水
董艳珍 ， 陈碧 华 ， 肖文 渊
（ 昌学 院 动 物科学 学 院 ， 西 四川 西 昌 ６５ １ ） １０ ３
【 摘 要 】 西 昌学院北校 区养 鱼池 的底泥 中富集分离得到 一株 光合细 菌， 从 该菌株 厌氧培养 物为红色， 兰氏染色呈 阴 革
性， 繁殖方式为二均分裂。通过形 态学观察及生理生化特性鉴定 ， 鉴定为该菌株属于红假 单胞 菌属 。
光合细菌PSB的分离与培养条件优化研究
光合细菌PSB-B4的分离与培养条件优化研究摘要:利用光合细菌处理有机污水是当前污水生物处理中的一种新方法。
通过筛选,从污水中分离得到一株生长较快、适应性较强的光合细菌菌株,标记为PSB-B4。
通过菌落形态、培养特征和菌体形态学观察,细胞吸收光谱及生理生化特性测定,初步鉴定为类球红细菌(Rhodohactersphaeroides)。
对这一光合细菌菌株的培养条件进行优化研究,最终确定菌株PSB-B4的最佳培养基配方及培养条件为:酵母膏2.0 g,乙酸钠4.0 g,氯化铵2.0 g,蛋白胨3.0 g,磷酸氢二钾0.2 g,硫酸镁0.2 g,氯化钠1.25 g,碳酸氢钠1.0 g,蒸馏水1 000 mL,pH=7.0,培养温度28e,光照强度4 000 Lux,其中酵母膏对其生长影响最大。
关键词:类球红细菌;分离鉴定;培养条件0 引言光合细菌(Photosynthetic bacteria, PSB)属于水圈微生物的一种,能充分利用光能和各种有机物作为营养源进行自身的营养繁殖。
菌体本身无毒,含有多种营养物质和生命活性物质,具有调节微生态平衡、促进动植物生长、增加产量和提高质量等独特的生理功能。
随着人们对光合细菌研究的不断深入,证明光合细菌在农业生产及有机污水处理方面均有很好的应用价值。
利用光合细菌处理有机污水,是当前污水生物处理中的一个新的发展方向[1-3]。
为了更有效地开发光合细菌这一尚未被充分的微生物资源,使之在有机污水生物处理中发挥更大的作用,本文从污水中分离得到一株适应性强、生长较快的光合细菌菌株,并对其进行了初步鉴定和培养条件优化研究。
1 材料与方法1.1 材料取沈阳北部地区某农场污水池浅层污泥。
1.2 方法1)培养基选择红螺菌培养基[5]作为富集分离基础培养基,培养温度选择28e[6]。
2)菌株的分离筛选方法取泥样10 g装入150 mL三角瓶中,加入富集培养液至满,并覆盖一层无菌液体石蜡,封口,在28e,3 000~5 000 Lux光照条件下培养7~10 d,至菌液颜色呈橙红色,取此富集培养液10 mL,继续富集培养,重复以上操作2~3次,采用试管稀释培养法和双层平板培养法[7-8]对光合细菌进行分离纯化,选取生长较快的菌株作为出发菌株。
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光合细菌的分离、培养和鉴定摘要：从南湾水库大坝下层水域取水样获得一株光合细菌。
采用多种培养基分离方法分离出纯培养物。
进行了菌落形态学观察和亚显微观察。
于不同条件下培养后分别测定光密度和生长曲线。
实验证实分离到的菌种为沼泽红假单胞菌。
关键词：生长曲线；沼泽红假单胞菌；光合细菌The separation and culture and identified of photosynthetic bacteria Abstract:A strain sample of photosynthetic bacteria was got from the lower water in South Bay Reservoir. using a variety of separation methods to get pure cultures. It was cultured with various medium to culture the pure strains. Transmission election micrographs and microscope were observed of the strain. The optical density (OD) and the growth curve were measured under different conditions. The results suggested that the strain was Rhodopseudomonas palustris.Keywords:Colony and cell; Growth curve; Rhodopseudomonas palustris; Photosynthetic bacteria引言光合细菌由于碳、氮代谢途径和光合作用机制的独特性和其生理类群的多样性, 而被大量关注。
多年来, 光合细菌一直被作为研究光合作用以及生物固氮作用机理的重要材料。
经过研究发现光合细菌在环保、农业、医药等方面均有较高的应用价值。
下面就光合细菌目前的开发应用研究近况作一概述。
光合细菌细胞营养价值极高。
首先，光合细菌细胞干物质中蛋白质含量高达60%以上, 比目前生产的单细胞蛋白酵母中蛋白质的含量还高。
而且其蛋白质氨基酸组成齐全, 是一种优质蛋白源。
其次，光合细菌细胞含有多种维生素, 特别是B族维生素, VB12、叶酸、泛酸、生物素的含量远远高于酵母菌。
另外, 光合细菌细胞还含有大量的类胡萝卜素、辅酶Q等活性物质。
因此, 光合细菌具有很高的营养价值。
在水产养殖中, 光合细菌可被用于饵料或饲料添加剂。
光合细菌促进鱼虾的生长, 无论是成活率或是产量的提高均可达10%-40%以上。
同时，光合细菌还具有防治鱼虾疾病,净化养殖场所水质等方面的功能。
使用光合细菌喂养的家禽, 成活率可提高5%-7%, 料肉比降低33%左右，肉鸡增重15%-17%, 产蛋率提高12.7%。
而且所产蛋的蛋黄颜色明显亮泽发红, 这是因为卵黄中维生素C、类胡萝卜素含量提高20%左右。
现在人们都大力提倡使用有机肥料和“生物农药”。
而光合细菌已被证明不但是一种优质的有机肥料同时可以增强植物的抗病能力。
光合细菌可作为底肥、或以叶面喷施、拌种等方式应用到作物。
利用光合细菌处理有机废水，在国外已得到初步应用。
小林正泰等在日本自六十年代起，首先开展了用使PSB处理有机废水的试验研究，先后成功地用光合细菌对粪尿、淀粉、食品、皮革、豆制品等废水进行处理，建并立了一批日处理几十吨、几百吨至几千吨高浓度有机废水的大中型净水系统, 运行多年证实效果良好。
近年来，美国、澳大利亚等也相继进行了这方面的研究工作。
我国对此也进行了一些研究。
上海交通大学生物技术研究所利用光合细菌对豆制品、洗毛、牛粪等废水进行处理，并在小林正泰的帮助下与南通发酵厂合作，用PSB法成功地进行日处理150吨柠檬酸废水的研究，取得了中试成果。
吴国庆等使用红螺菌对12种染料进行了初步脱色实验，在黑暗厌氧条件下红螺菌对其中的12种染料具有良好的脱色作用。
光合细菌法处理污水主要有以下优点:a、除氮效果好，耐盐能力强;b、不存在污泥的处置问题，处理后的污泥都是很好的有机肥料;c、有机负荷高，光合细菌可直接处理几千至几万COD的高浓度有机废水，并且无需稀释;d、投资费用低，占地面积小，消耗动力低，节省能源;e、便管理，在10-40℃内均可处理，受季节影响小。
总的来说，光合细菌还是一种废水处理的好方法。
光合细菌中如红螺菌属(Rhodospirillum)、红假单胞菌属(Rhodopseudomon- as)、红微菌属(Rhodomicrobium)等属细菌在新陈代谢过程中都会释放氢气。
生物制氢是利用微生物代谢过程生产分子氢的一项生物工程技术，是人们开发新能源的一个方向。
光合细菌利用有机废水产氢是一个重要的研究开发内容。
一方面有机废水可以为光合细菌提供大量廉价的有机基质，尤其是高浓度的有机废水，其溶解氧极易被好氧或兼性厌氧微生物消耗后造成厌氧环境，从而有利于光合细菌产氢。
另一方面产氢的同时还伴随有机物的降解和光合细菌菌体的生成，废水就可以得到净化。
如使用深红红螺菌(R.rubrum)分解有机物进行光合产氢，产量高达65mg/L，比蓝细菌产氢量高一倍多。
目前，我国国内有将光合细菌菌剂制成鱼虾宝、鸡鸭宝等产品各种。
国外公司利用光合细菌制成微生态制剂，如EM制剂等等。
此外光合细菌还被制作为保健食品，经动物实验表明光合细菌具有延缓衰老、抑制肿瘤、免疫调节的显著功效，这可能与光合细菌细胞中富含类胡萝卜素和B族维生素及活性物质等有关。
光合细菌也是提取天然药物的良好素材之一。
山西大学利用光合细菌提取抗癌药，中国科学院与山西安泰生物工程公司共同研制了“安泰369口服液”就是利用了光合细菌网，太原康强药业有限公司研制的康强胶囊就是光合细菌与中药组分结合用于治疗糖尿病。
此外，1992年，全美保健食品中有6.5%都加有光合细菌，最具代表性的当属新奥尔良·贝鲁斯潘有限公司投产的PGH浓缩液含维生素、微量元素、氨基酸。
可调节内分泌提高机体免疫能力，上市后至今畅销不衰。
还有一种叫“米格申”的含光合细菌菌液的饮料可以在健全中枢神经、预防老年痴呆上效果显著。
在日本，光合细菌饮料也因为具有延缓衰老的作用以及在防止心脏病、脑梗塞、癌症等方面的功效而倍受青睐。
因此对光合细菌的研究很有实用价值和现实意义。
本实验通过对本市南湾水库大坝下层水域和附近鱼塘底泥进行采样，经过分离和富集培养得到纯的培养物，再对纯菌株进行鉴定证实分离出了沼泽红假单胞菌，是一种非常有利用价值的光合细菌。
此实验对以后进一步研究和开发利用光合细菌很有意义。
1.采样和分离、培养的方法1.1样品的采集2009年10月从信阳市南湾水库大坝下层水域取水样及附近鱼塘底泥取样。
1.2培养基的配置富集培养基：NH4Cl 0.1 g, NaHCO3 0.2g(5%水溶液,过滤除菌取4ml加入),K2HPO4 0.02g, NaCH2CO3 0.1～0.5g(取0.3 g), MgSO4(H2O)7 0.02g,NaCl0.2g,酵母膏0.1g,蒸馏水96ml, pH 7.0。
半固体培养基：1％的比例在富集培养基中添加琼脂。
固体培养基：2％的比例在富集培养基中添加琼脂。
将样品用富集培养基富集分装至试管，每管加样品1克后再加灭菌液体石蜡，隔绝氧气培养。
当其培养液变色后, 重复进行富集培养2-3次后进行纯化分离:(1)取富集液划线于固体培养基表面，采用焦性没食子酸去氧法进行厌氧光照培养重复2-3次以获得纯培养物。
(2)采用双层平板法，下层平板为2%固体培养基，划线接种后上层倒1%半固体培养基。
(3)下层平板为2%固体培养基，接种后，倒入灭菌的液体石蜡覆盖3-4毫米。
培养条件:28-30℃;白炽灯光照,照度为2000-2500lx；好氧条件,培养时间为7-14d。
富集培养过程中发现部分试管变红色，少部分试管变绿色，获得纯培养物后，有红色菌落和绿色菌落，将菌落移至斜面培养基保存留作研究使用。
1.3 富集培养将红色菌落接种于富集培养基中，倒入灭菌的液体石蜡覆盖3-4毫米。
培养条件:28-30℃;白炽灯光照,照度为2000-2500lx;微好氧条件,培养时间为7-14d。
1.4 显微镜观察1.4.1 菌落及菌体形态学观察以琼脂平板上生长的菌落形态记述;菌体形态以光学显微镜与电子显微镜相结合;用电镜观察细菌鞭毛、繁殖方式及光合内膜结构类型。
1.4.2 电子显微镜制片用2.5％戊二醛和2％锇酸双重固定，丙酮系列脱水。
lxm812包埋，LKB超薄切片机切片，切片经醋酸双氧铀—柠檬酸铅双重染色后，于Hitachi600 A2型透射电镜下观察并拍照。
1.5 光合细菌光密度(OD)的测定生长曲线通常，光合细菌数量的多少可用光密度值来衡量。
细菌菌体是不透光的，光束通过细菌悬液将会由于被散射或被吸收而降低其透过率。
细菌悬液的浓度同光密度成正比，同透光度成反比，而光密度或透光度可以借光电池精确测出，所以可用光密度来表示细菌相对数目。
不同培养条件培养光合细菌，将分离到的菌株分别在光照好氧，光照厌氧，黑暗好氧，黑暗厌氧四种条件下培养7-14天，测其在波长663nm处的OD值,记录并比较其生长曲线。
2.结果2.1 光合细菌菌落和菌体形态学观察2.1.1 光合细菌的菌落形态分离到的光合细菌为二红色菌株，暂命名为PSB-1、PSB-2.其菌落特征见表2-1 表1分离菌株的菌落特征项目细胞形细胞大鞭毛革兰液体培增值方式菌落形态状小（μm）氏染色养PSB-1 杆状0.5×1.5 单根极生__ 红二等分裂深红色，边缘整齐，中间隆起，表面湿润，D=1-2mmPSB-2 弧状0.5×1.5 单根极生—红二等分裂深红色，边缘整齐，中间隆起，表面湿润，D=1-2mm2.1.2 PSB-1的菌体形态革兰氏染色结果见图2-1图2-1 PSB-1革兰氏染色(×1000)2.1.3 PSB-1的透射电镜照片PSB-1的透射电镜照片见图2-2图2 光合细菌的电镜照片Fig. 2 Transmission election micrographs (TEM) of the cell of the bacteria2.2 光合细菌生长曲线不同培养条件培养光合细菌分离到的菌株分别在光照好氧，光照厌氧，黑暗好氧，黑暗厌氧四种条件下培养7-14天，测其在波长663nm处的OD值,记录并比较其生长曲线。
PSB-1，2均在光照厌氧条件下生长最好。
见图2-3 PSB-1在不同条件下的生长曲线3.结果分析证实了分离到的菌种为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。